免疫制剂技术第一讲 绪论 PPT课件1-PPT文档资料-专业PPT文档-PPT文档资料
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免疫学技术ppt课件
和分布情况.阳性细胞以拟标记的细胞为前提,
阳性表达必须在细胞特定的抗原部位,若不在
抗原所在部位的阳性表达和非目标细胞即使
阳性也不应作为判断依据.根据抗原在细胞中
分布和阳性颗粒沉淀部位可分5种类型：
-
19
⑴ 胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表 面,形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细胞.此类 型常见于某些膜抗原,如上皮膜抗原（EMA） 、白细胞共同抗原（LCA）及B细胞、T细胞 、粒细胞相关抗原（GAA）
13
ELISA试验用耗材、试剂及仪器
耗材:移液器、吸头、酶标板、滤纸 试剂:酶标抗体、抗体稀释液、封闭液、底物
溶液、终止液 仪器:酶标仪
-
14
ELISA结果分析
1.根据标准品的含量及检测OD值结果,应用线
性回归方程进行统计分析,可求得待测样品
的定量值
2.上机前将标准品的数量及含量按要求在酶
标仪上进 行设置,机器自动计算打印出标准
c.加入可能含特异性抗原的待检液
d.温育后清洗
e.加入酶标记特异性抗体
f.温育后清洗
g.加入酶作用底物
h.测定颜色反应深浅
-
8
竞争法
a、将已知抗体吸附于载体上 b、温育后清洗 c、加入可能含特异性抗原的待检
液和酶标记的已知抗原液 d、温育后清洗 e、加入酶作用底物 f、测定颜色反应深浅
-
9
生物素-亲和素系统
-
4
Ⅰ.ELISA Ⅱ.免疫组化 Ⅲ.荧光抗体标记 Ⅳ.荧光原位杂交（FISH） Ⅴ.分光光度法
-
5
Ⅰ.酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
免疫技术的原理与进展PPT课件
免疫记忆与疫苗
免疫记忆是指免疫系统对曾经接触过的抗原产生记忆，当再次接触该抗原时，能 够快速启动再次免疫应答过程。记忆T和记忆B细胞在体内长期存活，当再次接触 相同抗原时，能够迅速增殖分化为效应细胞，启动更强烈的免疫应答。
疫苗是一种经过人工处理的减毒或灭活的病原体或其成分，用于刺激机体产生特 异性免疫应答，从而达到预防疾病的目的。疫苗的接种能够使机体快速启动免疫 应答过程，产生足够的抗体来中和病原体，阻止其黏附和增殖，从而预防疾病的 发生。
针对不同年龄段和不同人群，新型疫苗的接种策略也得到 了优化，例如采用联合疫苗接种和个性化接种等策略，提 高了疫苗的接种率和保护效果。
免疫疗法在癌症治疗中的应用
01
免疫检查点抑制剂
通过抑制免疫检查点，如CTLA-4和PD-1等，激活T细胞对肿瘤的免疫
反应，从而达到治疗癌症的目的。
02
肿瘤疫苗
利用肿瘤抗原制备的疫苗，通过激发机体免疫系统对肿瘤的免疫反应，
02
免疫技术的原理
免疫系统的组成与功能
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成，具 有防御、自稳和监视功能，是人体抵御病原微生物入
侵和清除体内异常细胞的关键防线。
输标02入题
免疫器官包括胸腺、骨髓、淋巴结、脾脏等，是免疫 细胞产生、分化、成熟和存储的场所。
01
03
免疫分子包括抗体、补体、细胞因子等，它们参与免 疫应答和炎症反应，发挥调节和杀伤作用。
THANKS感谢观看02非特异性免疫由屏障结构、吞噬细胞 和自然杀伤细胞等组成，具有直接或 间接杀灭病原微生物的作用。特异性 免疫分为体液免疫和细胞免疫两种类 型，体液免疫主要由B细胞介导，通 过产生抗体来消灭病原体；细胞免疫 主要由T细胞介导，通过激活靶细胞 来杀伤病原体。
医学免疫学 绪论ppt课件
经验免疫学时期
科学免疫学时期
CONTANTS 近代免疫学时期 现代免疫学时期
四、现代免疫学时期 自20世纪70年代以来，免疫学突飞 猛进，开创了分子免疫学，促进了 整个生命科学的发展
第3节 免疫学在临床实践中的应用
免疫学预防 免疫学诊断 CONTANTS
免疫学治疗
一、免疫学预防
人类已经消灭了天花，也即将消灭脊髓灰质 炎（小儿麻痹）及麻疹。对于以往以及新出 现的传染病，其根本出路是发明有效疫苗并 进行预防接种。当代疫苗的研制已进入新的 阶段，不仅是单纯的预防制剂，已出现治疗 性制剂，如口服自身抗原已证明能预防一些 自身免疫病。
作 业
1. 做第6页课后习题二、三 2. 掌握识记本节课重点
3. 预习新课
（三）耐受性
（一）特异性 免疫活性细胞和抗体分子仅能与 相应的抗原起反应，而与无关的 抗原不发生反应。
（二）记忆性 在初次接触某一抗原产生免疫应答 后，形成特异性记忆的免疫活性细 胞，在再次接触形同抗原性时，这 些免疫活性细胞迅速大量扩增而发 生再次应答
（三）耐受性 抗原可诱导产生特异的无应答性，对 原先接触的抗原不产生免疫应答，而 与无关的抗原仍能产生
免疫系统的功能
三、免疫系统的功能 （一）免疫防御
（二）免疫自稳
（三）免疫监视
（一）免疫防御 针对外来抗原（如微生物或其毒素） 的一种免疫保护作用，即通常指的 抗感染免疫
（一）免疫防御 异常： 应答过于强烈或持续时间过长 应答过低或缺如 超敏反应 免疫缺陷病
免疫功能的类型 适应性免疫应答的特点 CONTANTS
免疫系统的功能
一、免疫功能的类型
（一）固有免疫功能
（二）适应性免疫功能
（一）固有免疫功能 1 机械阻挡作用：皮肤、黏膜 2 化学效应：皮肤与黏膜局部分泌的抑菌 和杀菌物质 3 生物学作用：体内多种固有免疫效应细 胞和效应分子 个体出生时具备，不针对某 一特定抗原物质
免疫制剂技术第一讲绪论PPT课件
预言
超过我的下一个世界 首富必定出自生物技 术领域
IC
FPV REV
AIV E.coli
ALV
Who are you?
NDV
MDV
IBV Nematodes
IBDV
Coccidiosis
EDSV MG/MS
Salmonella CAV
AEV ILTV
第一讲 绪论
免疫、免疫制剂技术的概念 免疫制剂技术的发展简史 免疫制剂的基本特性和基本功能 免疫制剂技术与相关学科的关联
课程安排
免疫学理论（一）抗原 免疫学理论（二）抗体 免疫学理论（三）血清学技术 抗原的制备技术 基因工程抗原技术a 基因工程抗原技术b 相关技术一：细胞培养技术 相关技术二：病毒增殖培养技术 相关技术三：细菌发酵培养技术 灭活剂、保护剂与免疫佐剂a 灭活剂、保护剂与免疫佐剂b 多克隆抗体技术 单克隆抗体技术 基因工程抗体技术 抗体的标记技术 诊断液的制备技术
2、疫苗技术研究：
1881－1885 Pasteur(巴斯德）培养鸡霍乱陈旧物、高温培养炭疽、
兔体传代狂犬病毒，首创弱毒疫苗。
1886
Salmon首创灭活技术Leabharlann 培育成功灭活疫苗。1888
外毒素的脱毒技术，研制成功类毒素。
1890 德国人Behring和日本人北里（Kitasato）将白喉外毒素
注射给动物，发现抗毒素。这是第一次用人工被动免疫的
（一）经验时期 （二）实验时期 （三）近代免疫学时期 （四）分子生物学时期
（一）经验时期
时间：十一世纪-1798年 主要事件： 1、十一世纪我国的“痘症防御法”。 2、1400年，我国甘肃牧区的“灌花”
预防牛瘟。
（二）实验时期
免疫学技术及应用 ppt课件
ppt课件
19
火箭电泳示意图
ppt课件
20
双向免疫电泳（two dimentional immuno-electrophoresis）
是一种将火箭电泳与血清免疫电泳相结合 的方法。先将血清用电泳分离出各成分， 然后切下凝胶板转移至另一已加有抗血清 的凝胶上，进入垂直方向的第二次电泳， 形成呈连续火箭样的沉淀线。
ppt课件
17
免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
免疫电泳为区带电泳与 双向免疫扩散的结合。 先利用区带电泳技术将 不同电荷和分子量的蛋 白抗原在琼脂内分离， 然后在与电泳方向平行 的方向上开槽，加入抗 血清。37℃下使两者扩 散，各区带蛋白在相应 的位置与抗体反应形成 弧形沉淀线。
ppt课件
31
放
Ag*
Ab
Ag
射
标记抗原 特异性抗体 待测抗原
免
疫
测
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
定
法
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
(RIA)
示
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
意
图
从标准曲线上读知含量
ppt课件
32
RIA法原理及标准曲线
/
结 合 75
未
结 合 50
的
放 射
ppt课件
21
补体结合反应
（Complement Fixation, CFT)
补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特
异性抗体）是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反
应。该方法敏感性和特异性均较高，但该试验影响因素较多，现在已有被
免疫基础—免疫系统(生物制品技术课件)
（3）增殖、分化—细胞因子受体 (4）其他受体：IgGFc受体、补体受体
淋巴细胞
B淋巴细胞
2、亚群及功能 （1）B1细胞（CD5+B细胞：活化不需要T细胞的帮助） （2）B2细胞（CD5-B细胞：活化需要T细胞的帮助）
淋巴细胞
大颗粒淋巴细胞
代表：NK细胞 机制：穿孔素、颗粒酶直接攻击抗原 免疫类型：非特异性免疫
看一看：抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应 （ADCC）
认识免疫系统
免疫 概念
免疫（immunology）：免疫是机体免疫系统识别、清除抗原性异物，维持自身内 环境稳定的一种生理功能。
认识免疫系统
免疫 分类
（1）非特异性免疫：对异物无选择性的阻挡、排斥和清除。 （2）特异性免疫：针对抗原进行一对一，有选择性的识别和清除为特异性免疫。
中枢免疫器官的组成
胸腺（thymus） 功能： （1）训化T细胞 （2）分泌胸腺激素
（无种属特异性）
中枢免疫器官
T细胞在胸腺内训化成熟
看一看：T细胞训化成熟
（1）阳性选择：T细胞与MHC分子结合，获得MHC限制性。 （2）阴性选择：T细胞与自身肽不结合，获得自身耐受性。
中枢免疫器官的功能
（1）出产成熟的免疫活性细胞（“练兵”） （2）指导外周免疫器官发育（“指导营地建设”） （3）调节全身免疫功能（“协调”）
免疫细胞
免疫细胞 类型
淋巴细胞
淋巴细胞（L） 组成
分类1：（大小不同） 1）小淋巴细胞（T细胞+B细胞） 2）大淋巴细胞（如NK细胞）Leabharlann 大淋巴细胞小淋巴细胞
淋巴细胞
淋巴细胞（L） 组成
分类2：（性质和功能） 1）T细胞 2）B细胞 3）大颗粒淋巴细胞
淋巴细胞
B淋巴细胞
2、亚群及功能 （1）B1细胞（CD5+B细胞：活化不需要T细胞的帮助） （2）B2细胞（CD5-B细胞：活化需要T细胞的帮助）
淋巴细胞
大颗粒淋巴细胞
代表：NK细胞 机制：穿孔素、颗粒酶直接攻击抗原 免疫类型：非特异性免疫
看一看：抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应 （ADCC）
认识免疫系统
免疫 概念
免疫（immunology）：免疫是机体免疫系统识别、清除抗原性异物，维持自身内 环境稳定的一种生理功能。
认识免疫系统
免疫 分类
（1）非特异性免疫：对异物无选择性的阻挡、排斥和清除。 （2）特异性免疫：针对抗原进行一对一，有选择性的识别和清除为特异性免疫。
中枢免疫器官的组成
胸腺（thymus） 功能： （1）训化T细胞 （2）分泌胸腺激素
（无种属特异性）
中枢免疫器官
T细胞在胸腺内训化成熟
看一看：T细胞训化成熟
（1）阳性选择：T细胞与MHC分子结合，获得MHC限制性。 （2）阴性选择：T细胞与自身肽不结合，获得自身耐受性。
中枢免疫器官的功能
（1）出产成熟的免疫活性细胞（“练兵”） （2）指导外周免疫器官发育（“指导营地建设”） （3）调节全身免疫功能（“协调”）
免疫细胞
免疫细胞 类型
淋巴细胞
淋巴细胞（L） 组成
分类1：（大小不同） 1）小淋巴细胞（T细胞+B细胞） 2）大淋巴细胞（如NK细胞）Leabharlann 大淋巴细胞小淋巴细胞
淋巴细胞
淋巴细胞（L） 组成
分类2：（性质和功能） 1）T细胞 2）B细胞 3）大颗粒淋巴细胞
药物制剂技术绪论PPT27页
▪
27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
Байду номын сангаас
▪
28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
27
药物制剂技术绪论
21、静念园林好，人间良可辞。 22、步步寻往迹，有处特依依。 23、望云惭高鸟，临木愧游鱼。 24、结庐在人境，而无车马喧；问君 何能尔 ？心远 地自偏 。 25、人生归有道，衣食固其端。
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
免疫学技术(单抗的制备)PPT课件
方法： 电融合 激光融合 离心融合 灭活的病毒融合 聚乙二醇融合法
SP2/0细胞与脾细胞的比例为1：2～5
精选ppt
17
步骤五 选择性培养
HAT选择培养基：
H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤 A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成 主要途径 T (Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞 通过替代途径合成DNA
1.辛酸硫酸铵沉淀法
原理：先加正辛酸沉淀杂蛋白，后加硫酸铵 沉淀抗体。
特点：成本较低，操作简单； 抗体活性损失小； 抗体纯度高； 抗体回收率低； 需要高速冷冻离心机。
精选ppt
30
2 亲和层析法：
原理：利用蛋白A或蛋白G通过共价键联接到 活化的固相载体上，吸附抗体，然后采用改 变pH值的方法将抗体洗脱分离。
丌需任何特殊设备兊隆出现效率高实验室常用方法有限稀释法25将细胞经荧光抗体染色后经喷嘴形成单个细胞癿线形液滴在莱塞光激収下荧光素収射荧光此信号由光电倍增管接收再结合细胞形态大小产生光散射信号经电脑处理产生信号幵不预定癿信号对比根据细胞荧光强度及细胞大小丌同将细胞分成丌同级别在电场中収生偏离而分别收集亍丌同容器中
精选ppt
23
有限稀释法
特点：
不需任何特殊设备 克隆出现效率高 实验室常用方法
精选ppt
24
FACS法
将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个细效胞率的最线高 形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，价此格信昂号贵 由光电倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射 信号，经电脑处理，产生信号并与预定的信号对比， 根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将细胞分成不同 级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。
SP2/0细胞与脾细胞的比例为1：2～5
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17
步骤五 选择性培养
HAT选择培养基：
H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤 A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成 主要途径 T (Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞 通过替代途径合成DNA
1.辛酸硫酸铵沉淀法
原理：先加正辛酸沉淀杂蛋白，后加硫酸铵 沉淀抗体。
特点：成本较低，操作简单； 抗体活性损失小； 抗体纯度高； 抗体回收率低； 需要高速冷冻离心机。
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2 亲和层析法：
原理：利用蛋白A或蛋白G通过共价键联接到 活化的固相载体上，吸附抗体，然后采用改 变pH值的方法将抗体洗脱分离。
丌需任何特殊设备兊隆出现效率高实验室常用方法有限稀释法25将细胞经荧光抗体染色后经喷嘴形成单个细胞癿线形液滴在莱塞光激収下荧光素収射荧光此信号由光电倍增管接收再结合细胞形态大小产生光散射信号经电脑处理产生信号幵不预定癿信号对比根据细胞荧光强度及细胞大小丌同将细胞分成丌同级别在电场中収生偏离而分别收集亍丌同容器中
精选ppt
23
有限稀释法
特点：
不需任何特殊设备 克隆出现效率高 实验室常用方法
精选ppt
24
FACS法
将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个细效胞率的最线高 形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，价此格信昂号贵 由光电倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射 信号，经电脑处理，产生信号并与预定的信号对比， 根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将细胞分成不同 级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。
常用免疫制剂PPT课件
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/31
（一）主动免疫制剂 1. 菌苗
死菌苗（霍乱、百日咳、伤寒菌苗） 活菌苗（卡介苗、鼠疫菌苗）
SUCCESS
THபைடு நூலகம்NK YOU
2019/7/31
常用免疫制剂
2. 疫苗
灭活疫苗（乙脑、乙肝、狂犬病 疫苗）
减毒活疫苗（麻疹、脊髓灰质炎）
3. 类毒素
破伤风、白喉类毒素
常用免疫制剂
（二）被动免疫制剂 特异性免疫血清 丙种球蛋白 胎盘球蛋白等。
常用免疫制剂常用免疫制剂一主动免疫制剂菌苗死菌苗霍乱百日咳伤寒菌苗活菌苗卡介苗鼠疫菌苗thankyousuccess201988可编辑疫苗灭活疫苗乙脑乙肝狂犬病疫苗减毒活疫苗麻疹脊髓灰质炎类毒素破伤风白喉类毒素常用免疫制剂常用免疫制剂二被动免疫制剂特异性免疫血清丙种球蛋白胎盘球蛋白等
常用免疫制剂
常用免疫制剂
生物技术药物制剂与疫苗 ppt课件
– 选用不同的聚合物骨架：采用较大几何形状的微 柱体来简化蛋白质稳定性的研究与评价。
17
• 由湿度引起的不稳定性
– 改变固体药物中的含水量，是蛋白质处于非伸展 状态以及直接阻断其不稳定机制。
– 锌离子与人生长激素形成不溶性沉淀可提高蛋白 质稳定性
– 加入添加剂，可以改变聚合物的吸水量 两种常见共价聚集的机制：
可保护IL-1α，并显著减小微球的粒径。微球的体外释放度试
验表明，牛血清白蛋白和白细胞介素1α在30min钟内分别释放
38%和63%，40d内分别释放75%和100%。扫描电镜显示，突
释后的释药过程与骨架的溶蚀过程同时进行。
22
非注射给药系统
研究非注射途径的给药系统，将有益于增加病人的顺应性 （compliance）。蛋白质和多肽类药物的非注射给药方式包括鼻腔、口 服、直肠、口腔、透皮和肺部给药。目前最有应用前景的属鼻腔给药， 然而口服给药还是最受欢迎的给药途径，但难度很大。 • 蛋白质和多肽类药物的非注射给药系统存在的主要问题是药物透过黏膜能
10
蛋白质类药物的评价方法
在前面讨论蛋白质药物不稳定的原因时已经看出，要开发蛋白质类药物， 需要多种分析方法。
• 液相色谱法：RP-HPLC,IEC,SEC
• 光谱法:UV,可见吸收光谱，ORD,CD,荧光，IR,拉 曼光谱
• 电泳：SDS-PAGE,IEF,EC
• 生物活性测定与免疫测定:重组DNA和杂交瘤技术产品应进
• 吸收促进剂
分子量大的药物透过性差， 生物利用度低，吸收不规 则，局部刺激性，妨碍绒 毛运动，长期给药的毒性
胆酸盐类，脂肪酸及其 酯类，其他。
24
• 胰岛素鼻腔给药系统已进行广泛的研究， 胰岛素不用促进剂经鼻腔给药生物利用度 小于1％，但用葡萄糖胆酸酯作吸收促进剂， 其生物利用度可提高到10％~30％。近年来 有报道将胰岛素制成淀粉微球，微球直径 45m，以0.751U／kg和1.71U／kg剂量喷 入鼠鼻腔，达峰时为8min，30~40分钟后， 血糖分别下降40％和64％，维持时间4小时， 生物利用度约为30％。
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• 由湿度引起的不稳定性
– 改变固体药物中的含水量，是蛋白质处于非伸展 状态以及直接阻断其不稳定机制。
– 锌离子与人生长激素形成不溶性沉淀可提高蛋白 质稳定性
– 加入添加剂，可以改变聚合物的吸水量 两种常见共价聚集的机制：
可保护IL-1α，并显著减小微球的粒径。微球的体外释放度试
验表明，牛血清白蛋白和白细胞介素1α在30min钟内分别释放
38%和63%，40d内分别释放75%和100%。扫描电镜显示，突
释后的释药过程与骨架的溶蚀过程同时进行。
22
非注射给药系统
研究非注射途径的给药系统，将有益于增加病人的顺应性 （compliance）。蛋白质和多肽类药物的非注射给药方式包括鼻腔、口 服、直肠、口腔、透皮和肺部给药。目前最有应用前景的属鼻腔给药， 然而口服给药还是最受欢迎的给药途径，但难度很大。 • 蛋白质和多肽类药物的非注射给药系统存在的主要问题是药物透过黏膜能
10
蛋白质类药物的评价方法
在前面讨论蛋白质药物不稳定的原因时已经看出，要开发蛋白质类药物， 需要多种分析方法。
• 液相色谱法：RP-HPLC,IEC,SEC
• 光谱法:UV,可见吸收光谱，ORD,CD,荧光，IR,拉 曼光谱
• 电泳：SDS-PAGE,IEF,EC
• 生物活性测定与免疫测定:重组DNA和杂交瘤技术产品应进
• 吸收促进剂
分子量大的药物透过性差， 生物利用度低，吸收不规 则，局部刺激性，妨碍绒 毛运动，长期给药的毒性
胆酸盐类，脂肪酸及其 酯类，其他。
24
• 胰岛素鼻腔给药系统已进行广泛的研究， 胰岛素不用促进剂经鼻腔给药生物利用度 小于1％，但用葡萄糖胆酸酯作吸收促进剂， 其生物利用度可提高到10％~30％。近年来 有报道将胰岛素制成淀粉微球，微球直径 45m，以0.751U／kg和1.71U／kg剂量喷 入鼠鼻腔，达峰时为8min，30~40分钟后， 血糖分别下降40％和64％，维持时间4小时， 生物利用度约为30％。
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