长春花生物碱的提取_分离_鉴定_制剂研究概述

（ !"#$"%"&#$’( %)(*’(）’ () * 长春花为夹竹桃科植物长春花 性凉， 味微苦， 具有平肝、 抗癌、 解毒的功效， 可用于 +) ,-.) 的全草， 治疗高血压、 恶性肿瘤、 疮疡等。 迄今已从中分离出 /&& 余种生物碱， 其 中 以 长 春 新 碱 ’ 01.231451.6， 789 * 和 长 春 碱 ’ 01.2:;6<=->;:451.6， 现将长春类生物碱的药学研究进展综述如下。 7(? * 最具价值。 提取 & !" ! 溶剂提取法 醇 类 溶剂 提 取 法： @:;A:. 等 B / C 和 D-0:.-0124 等 B # C 将 全 草 用氨 水浸润后再用甲苯提取， 但此法会使生药中的一些中、 强生物碱 以游离形式被提取出来， 导致纯化难度加大。 随后改为含水甲醇 浸提， 再用硫酸酸化， 所得生物碱含量比碱水浸取高 E& F %& 倍。 利 用甲醇使得成本降低， 也减少了提取步骤， 但甲醇极性较大， 因此 其选择性不够理想。 醇提取液中含有生物碱及其盐， 尚含大量脂 溶性杂质， 且稀醇提取液含水溶性杂质， 尚需进一步处理。 亲脂性有机溶剂提取法： 由于大多数游离生物碱极性低 G 可用 氯仿、 二氯甲烷、 苯等提取。 为了只提取药材中的弱碱性生物碱， 可 采用水甚至稀有机酸水代替碱水润湿药材， 再用有机溶剂提取。 若 提出 总生 物碱 后再 行分 789 及 7(? 在总 生物 碱中 含量 极微 ， 离， 不仅操作烦琐， 而且得率极低， 故生产上采用药粉用水湿润后 用苯提取， 使大部分碱性较强的生物碱未被提出， 这样有利于进一 步纯化 B E C 。 酸 水提 取 法： 常 用 &) "H F /H 的 乙 酸、 硫酸、 酒 石酸 等 为溶 剂。 此法提取所得溶液体积较大， 浓缩困难， 故可配合离子交换树 脂法或有机溶剂萃取法进行处理。 +6I6-. 等 B % C 用 含 少 量 硫 酸 的 因 7(? 等成分可转化为盐， 更易被甲醇提出， J&H 甲醇提取全草， B" C 提取率也有所增加。 +<.:46=63: 等 将甲醇改为乙酸水溶液提取， 再用氨水碱化， 最后用二氯甲烷萃取。 该法提取率高、 步骤简单、 有 机溶剂用量少， 增加了操作安全性， 利于环保， 但提取物中杂质较 多， 需有成熟的柱色谱方法配合， 方可得到高纯度产品。 酸提液中 含有树脂、 叶绿素等杂质， 若碱化后直接用氯仿、 二氯甲烷等萃取， 易形成乳化层， 使 7(? 不易被萃取完全； 若先用石油醚脱脂， 然后 碱化再萃取， 则乳化现象将大为改观。 长春生物碱对光和热不稳 定， 在提取和储存过程中注意避光与避热。 （$%& 法 ） !" # 超临界流体萃取法 以前的提取法周期长、 步骤繁杂， 且需用大量有毒溶剂。 2K-1 等 B $ C 以碱化的超临界 8L# 为溶剂提取， 从该植物中分离得到了 789 与 无毒、 环境友好、 使用安全方便、 萃 7(? 。 MNO P 8L# 法具有常温、 取时间短、 产品质量高等特点， 但对油溶性成分溶解作用强而对水
!""# 年第 $% 卷第 $& 期 游离物才能发挥作用， 结合物需在溶酶体内代谢成小分子游离物，
孙勇等 ) <= , 以胶原作为释药载体制备硫酸长春新碱控释膜， 然 提高局部 后植入动物体内， 可使 #$% 在病灶局部达到控制释放、 药物浓度、 增强药物疗效； 同时， 由于药物能够缓慢释放， 故可以减 轻全身的毒副作用。 ." # 脂质体 赵妍等 ) <* , 采用 7; 梯度法制备硫酸长春新碱脂质体， 以阳离子 交换树脂分离脂质体和游离药物， 用 %D ( ;D&$ 法测定脂质体的 包封率， 从而为制剂的质量评价与控制提供了可靠的依据。 ." . 传递体 通过正交试验优化了长春新碱传 卢懿等 ) << , 采用干膜超声法， 递体的制备工艺， 以激光散射粒径分析仪测量粒径及其分布， 透射 电镜观察形态， 用改良的 U40/V 扩散池进行体 ;D&$ 法测定包封率， 外透皮试验。 传递体是在普通脂质体磷脂双分子层中加入了表面 活性剂， 如胆酸钠等， 除具有普通脂质体的与皮肤亲和力好、 安全 无毒优点外， 还具有高度柔韧性及高效渗透性， 故药物能大量透过 皮肤角质层到达深部真皮， 进入淋巴管发挥治疗作用。 # 结语 但由于神经 #$% 及 #&’ 等成分已广泛应用于癌症的治疗， 系统毒性和局部刺激性较大限制了其使用。 科学工作者应加快 对长春生物碱进行深层次的研究、 开发和利用， 以便制成高效、 低毒的新剂型， 并结合临床实际开发出更多更好的制剂， 服务于 患者。 参考文献：
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综述报告
长春花生物碱的提取、 分离、 鉴定、 制剂研究概述
于兆海， 陈 刚
#$$%&&） （山东省青岛胶南人民医院， 山东 胶南
及科学研究提供一定的借鉴作用。 关键词： 长春花； 长春新碱； 长春碱； 提取； 分离； 鉴定； 制剂 中图分类号： !"#"$ %& ； !"#’ 文献标识码： ( !" ( 文章编号： &))* + ’,-& . ")), / &’ + ))#0 + )化学合成法 长春瑞滨是一种广谱的抗癌药物， 其主要原料为 7(?。 陈永江 对关键步骤氯化反 等 B ! C 用硫酸长春碱合成抗癌药酒石酸长春瑞滨， 应和缩环反应均作了相应改进， 使之更适合于生产。 !" ) 生物技术法 但它们在植物中的 目前主要从天然植物中提取 7(? 和 789， 含量极低， 而化学合成法和半合成法的制备效果也不太理想。 为了 更有效地生产长春花生物碱， 科学工作者正致力于将生物技术应 用于长春花的研究与开发。 组织培养： 张秀省等 B J C 以长春花叶和子房诱导的愈伤组织为材 并对 % 种不同愈 料， 进一步通过化学诱变得到了 # 种变异细胞株， 伤组织的生长以及吲哚生物总碱、 阿玛碱、 长春质碱的生物含量进 行了分析比较， 期望为今后长春花细胞工业化生产药物的开发提 供比较理想的细胞株。 细胞工程： 用不同质量浓度的乙烯利、 乙酰水杨酸、 色氨酸溶 液分别处理温室盆栽长春花植株， 于 # I 后测定叶片中的总吲哚生 （9R P SR(8） 法测定 7(? 和长 物碱含量， 并采用反相高效液相色谱 春质碱的含量， 结果发现经处理后植株中 E 种成分的含量均有明 显提高， 并确定了最合适的处理质量浓度 B /& C 。 发酵工程： 通过对长春花叶内生真菌进行分离， 筛选出了 / 株 （U(8） 无孢菌群菌株 JQ8TE ， 并对其发酵提取物进行薄层色谱法 和 （SR(8） 法分析， 结果表明此菌株能够产生 789 B // C 。 高效液相色谱 真菌易于培养， 可以通过育种手段和控制培养条件等措施来大幅 度提高其有效成分的含量， 便于组织工业化生产。 遗传转化工程： 遗传转化系指利用重组 ,VW、 组织培养或种质 系统转化等技术将外源基因导入植物细胞或组织中获得转基因植 物的技术。 孙敏等 B /# C 用发根农杆菌感染长春花， 诱导出毛状根， 通 过离体培养、 株系筛选， 提取出了 7(? 和 789， 为长春花生物碱的 工业化生产和产业化开发奠定了基础， 同时也为应用转化毛状根 技术获得药用植物次生代谢产物开辟了一条新的有效途径。 随着 培养技术的改进和合理反应器的设计， 以及控制 789 及 7(?、 文 多灵合成的关键酶基因克隆出来并转化成功， 寻求高产的长春花 植株或细胞株一定会成为现实。 化学诱变： 用不同质量浓度的甲基磺酸乙酯 ’ OXM * 处理长春花 愈伤组织， 挑选成活愈伤组织块继代扩大培养。 结果发现， 用 OXM 处理的长春花愈伤组织发生了突变， 与对照组相比， 不仅生长快， 而且总吲哚生物碱含量高 B /E C 。 化学诱变是人工获取突变体常用的 手段之一， 可筛选高产吲哚生物碱 OXM 又是较常用的化学诱变剂， 的稳定细胞系， 并利用细胞工程技术获取药用成分。 它有可能成为 一种理想的方法。 " #" ! 分离 *+, 法 对长春碱硫酸盐 B /% C 的分离常用氧化铝板、 硅胶 + 板。 U(8 法分 摘要： 综述从天然植物长春花中提取、 纯化抗肿瘤药长春生物碱的方法， 同时介绍相关生物碱的含量测定方法与制剂概况， 以为工业生产
综述报告
离量太少， 常用来研究少量的样品制备或筛选工业生产中的柱色 谱流动相， 不适合于大生产。 !" ! 柱色谱法 一次过柱： 一般是过一次碱性氧化铝柱， 除去极性较低的碳氢 化合物及部分中性、 酸性物质。 流动 #$% 及 #&’ 均为中极性物质， 苯 ( 氯仿、 苯 ( 二氯甲 相的极性不宜太高， 一般用苯 ( 石油醚 ) *+ , 、 烷、 二氯甲烷 ( 氯仿、 乙酸乙酯 ( 石油醚等作流动相， 以不同比例 等度或梯度洗脱， 洗脱产物依次为 #&’、 长春次碱和 #$% 的混合 物、 该法是目前大规模生产的方法， 缺点是产品纯度不够高。 #$%。 )5 , 两次过柱： 将粗提的生物 -./0123240 采用两次过柱的方法， （6278092: &;<= ） 柱， 以二氯甲烷 ( 碱先过羟丙基交联葡聚糖凝胶 甲醇或氯仿 ( 甲醇作流动相， 分段收集流分； 然后二次过硅胶柱进 一步纯化， 用 *> ? *=> 甲醇 ( 氯仿梯度洗脱即得所需的生物碱。 多次过柱： 先经氧化铝 @AA0.4%08B0/ 等 ) *5 , 经 C 次 过 柱 纯 化 ， 均用乙酸乙酯 ( 石油醚 柱， 再过硅胶柱， 最后用制备型 ;D&$ 分离， 梯度洗脱， 得纯品。 但该法步骤烦琐、 收率低， 而且制备量也很少， 故不适于扩大制备。 !" # 高效逆流色谱法 对于长春花提取物中总碱的分离， 利用逆流色谱技术可将 用氯仿 ( 盐酸 ( 磷酸氢二钠缓冲液 E * F * G ， #&’ 和杂质完全分离。 两相充分饱和后分出上层为固定相， 下层为流动相， 石 7; 为 CH = ， 油醚 F 氯仿 F 丙酮 F 二乙胺 E *< F " F * F * G 作展开剂， 硅胶 - 作薄层 ) *" , 板， 分离结果显示各项指标均符合要求 。 ! #" $ 鉴定 （%&’(） 法 薄层扫描 选用氯仿 ( 甲醇 ( 石油醚 E I F * F 5 G 为展开剂， 并将普通板改 为碱性板， 分离效果好， 可分离出 *+ 个斑点。 利用 J&$6 法可快速、 灵敏地测定 #&’ 的含量。 （%&’ ) *+） 法 #" ! 薄层 ) 紫外分光光度 不需特殊仪器设备， 加之方法精密度也较好， K# 法操作简单， 更适于基层单位选用。 #" # ,-&’ 法 罗猛等 ) *L , 采用 %D ( ;D&$ 法同时分离测定 + 种长春花吲哚类 因此结合物作用较迟缓。 ." ! 控释膜