生物化学

《生物化学》结课论文题目：淀粉中提取总糖及还原糖的研究
【摘要】：通过本实验主要掌握还原糖和总糖的测定方法，学习用比色法测定还原糖的方法。

实验中用3，5-二硝基水杨酸（DNS)与还原糖共热解后被还原生成氨基化合物。

最后通过实验结果发现在NaoH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的NaoH碱性溶液中此化合物呈红色，在540mm波长处有最大吸收，在一定范围内，还原糖与光吸收值呈直线关系，运用比色法能有效的测出样品中的含糖量。

通过测定发现还原糖的百分比含量为22.6%，总糖百分比含量为44%。

【关键词】：淀粉总糖还原糖比色法
前言
总糖具有还原性，在一定条件下能水解成还原糖，总糖也包括非还原糖。

用3，5--二硝基水杨酸比色法测定能区分总糖与还原糖，通过测定样品中的还原糖含量，高的为总糖，低的为还原糖。

3，5-二硝基水杨酸（DNS)与还原糖共热解后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，利用比色法可测定淀粉中总糖和还原糖。

目录
摘要 (1)
前言 (2)
第一章概论 (3)
第二章总糖及还原糖的提取分离与纯化方法的研究 (4)
第三章实验部分 (5)
3.1实验仪器 (5)
3.2实验药品 (5)
3.3实验步骤 (5)
第四章
4.1数据处理及结论 (7)
4.2前景展望 (8)
致谢 (9)
参考文献 (10)
第一章概论
淀粉是葡萄糖分子聚合而成的，它是细胞中碳水化合物最普遍的储藏形式。

淀粉有直链淀粉和支链淀粉两类淀粉是植物体中贮存的养分，贮存在种子和块茎中，各类植物中的淀粉含量都较高。

淀粉可以看作是葡萄糖的高聚体。

淀粉除食用外，工业上用于制糊精、麦芽糖、葡萄糖、酒精等，也用于调制印花浆、纺织品的上浆、纸张的上胶、药物片剂的压制等。

可由玉米、甘薯、野生橡子和葛根等含淀粉的物质中提取而得。

总糖主要指具有还原性的葡萄糖，在一定条件下能水解成还原糖，总糖也包括非还原糖。

用3，5--二硝基水杨酸比色法测定能区分总糖与还原糖，通过测定样品中的还原糖含量，高的的为总糖，低的为还原糖。

同时，还原糖也能与菲林试剂加热生产砖红色沉淀。

总糖的总量等于水解后的还原糖的总的质量。

还原糖是指具有还原性的糖类。

在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。

还原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。

对于单糖双糖的测定，如果是还原糖可用斐林试剂滴定法、蒽酮比色法、3,5-二硝基水杨酸比色法等。

3，5－二硝基水杨酸，简称DNS。

在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。

第二章总糖及还原糖的提取分离与纯化方法的研究
2.1总糖的提取方法
准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。

如已水解完全，则不呈现蓝色。

水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。

2.2还原糖的提取方法
准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。

过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。

第三章实验部分
3.1主要仪器：
721型分光光度计，天平，锥形瓶，水浴锅，试管若干。

3.2实验药品:
3,5-二硝基水杨酸（DNS)试剂葡萄糖标准溶液6mol/L HCl 6mol/LNaOH 0.1%酚酞指示剂小麦淀粉
3.3实验步骤
3.3.1葡萄糖标准曲线的制作
取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

蒸馏水/ml 葡萄糖含量/ml OD值/540nm
管号葡萄糖标准溶液
/ml
0 0 1 0 0.060
1 0.
2 0.8 0.4 0.278
2 0.4 0.6 0.8 0.372
3 0.6 0.
4 1.2 0.453
4 0.8 0.2 1.6 0.842
5 1 0 2 0.683
操作方法:
将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入
9ml蒸馏水，摇匀。

在540nm波长处测定光吸收值。

以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同
样显色作为空白调零。

以葡萄糖含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，制成标准曲线。

3.3.2总糖的提取方法
准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴
中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。

如已水解完
全，则不呈现蓝色。

水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至
溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，
即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。

3.3.3还原糖的提取方法
准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，
然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出
混。

过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。

3.3.4样品中含糖量测定
取七只15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂
项目空白还原糖总糖
H2O 1 0 0 0 0 0 0
0 1 1 1 1 1 1
样品溶液
/ml
2 2 2 2 2 2 2
3.5-二硝
基水杨酸
试剂/ml
OD值0.014 0.079 0.062 0.058 0.128 0.150 0.116
第四章
4.1数据处理及结论
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；
V──还原糖或总糖提取液的总体积，ml；
m──样品重量，g；
1000──mg换算成g的系数。

项目总糖还原糖
试管编号 1 2 3 4 5 6
Od值0.079 0.062 0.058 0.128 0.150 0.116
糖量（g）0.13 0.11 0.10 0.21 0.25 0.19
萄糖标准曲线
项目总糖还原糖
含量（%）44% 22.6%
从淀粉中提取总糖和还原糖后，用3.5-二硝基水样酸比色法进行测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果，与实验预期效果基本一致。

4.2前景展望
自然界存在的多数糖——多糖，吃起来并不甜，各种粮食都是含糖大户，主要是淀粉和糊精。

粮食不仅可以提供能量，而且还是B族维生素、膳食纤维、矿物质的重要来源，因此人们的生活中的确不能没有它。

这次实验中通过3 ，5- 二硝基水杨酸比色法得到淀粉中总糖量44%将近一半，也就是说，当我们食用面食时，虽然食用的是主食，但事实上其中的一半都是糖分所以对于不同身体素质的人要注意合理食用面食。

众所周知，糖分摄入过多会导致不同的疾病，摄入过多的糖分，多余不能消化的糖分，会被身体储存起来，青少年在饮食中摄入过多糖分，他们成年后患心血管疾病的风险会明显升高。

因此，我们应该继续探索和寻求提取总糖和降低总糖的方法，并争取运用于工业生产，造福人类。

致谢
通过本次试验让我们知道了小组内沟通和交流的重要性，实验态度认真、严谨是实验成功的必要前提。

实验过程中的分工合作，责任共担是实验成功的关键。

在老师的带领下，我们不仅成功的完成了实验，而且还使我们的基本实验操作步骤更加规范化。

同时，在这里我要感谢我的指导老师，在斯琴老师的耐心指导下，使我们的实验基本成功，误差降到最低。

而且斯琴老师的课堂气氛很活跃，在讲课期间还给我们传授一些日常生活经验和考研知识，使我们学到了许多书本上没有的知识。

总之，生物化学课以及生物化学实验使我很感兴趣，在这里，再次感谢斯琴老师的耐心传授。

参考文献
1、郑远斌,吴锦忠. DNS比色法测定莲子中多种糖的含量[ J ]. 福建中医学院学报, 2008, 1 4 (4) : 32 - 34
2、胡锡阶,肖建辉. 3 , 5 - 二硝基水杨酸比色法定糖的条件优化[ J ]. 遵义医学院学报, 2012, 28 (1 ) : 9 - 11
3、陈婷.黄志勇.徐秋云蜂蜜和饮料中还原糖含量的流动注射分光光度测定法[期刊论文]-中国食品学报 2009(6)
4、丛峰松生物化学实验[M]. 上海: 上海交通大学出版社, 2005: 91-93.
5、王俊丽、聂国兴、李素贞、谢艳敏、曹香林 DNS法测定还原糖含量时最适波长的确定[期刊论文]-河南农业科学 2010（4）
6、查岭生、胡鹏、吴晓敏、李俊 DNS法测定植物组织中还原糖及总糖含量实验的改进 [期刊论文]-安徽农学通报 2013（11）。