牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究
不同激活方法对绵羊体外成熟卵母细胞孤雌生殖的影响
摘要 ： 为确定绵羊体细胞核移植胚胎的激活条件 ， 实验探讨 了不 同激 活方 法对绵 羊体 外成 熟卵母细胞 的孤雌 激 本 活及其后 的发 育影响。选择体 外成熟绵羊卵母 细胞 ， 随机分为 ３组 ： 电激活 ＋ 一 Ｍ Ｐ４ ； Ｉ５ ｍ ５ ｉ＋６ ① ６ Ｄ Ａ ｈ ② （ ） ｍｎ Ｄ Ａ ｈ④ ７ 乙醇 ７ ｎ＋ Ｍ Ｐ４ ； ％ ｍｉ ６一Ｄ Ａ ｈ 培养 ４ ｈ后， Ｍ Ｐ４ ， ８ 各组卵母细胞 的卵裂 率分别 为 ６ ．３ ，９ ９ ％ ，８ ２ ％ ； Ｏ ９ ％ ７ ．６ ７ ． ８ 培 养到 ７ ｄ时， 组的桑椹／ 各 囊胚发 育率分别为 １ ．３ ，２ ８ ％ ，９ ３ ％ 。化 学激活 的卵裂 率、 ７ ０ ％ ４ ．４ ３ ． ９ 桑椹／ 囊胚 率 显著高 于 电激活（ ０ ０ ） 乙醇与 Ｉ ｏ ｃ Ｐ＜ ．５ ； ｏ ｍｙｉ 比， ｎ ｎ相 其卵裂 率、 桑椹／ 囊胚 率差异 不显著， Ｉｎｍ ｃ 但 ｏｏ ｙｉ ｎ处理 组效果稍 好于 乙 醇 组。结果表 明 ， 电激 活、 ｎｍ ｃｎ７ 乙醇都 可 以有 效激 活绵羊 卵母细胞 ， Ｉ ｏ ｙｉ、％ ｏ 并孤 雌发 育到 囊胚 ，Ｉｎｍ ｃｎ的激活 ｏｏ ｙｉ 效果最佳 ； 同时也 比较 了不 同电压对绵羊体 外成 熟卵母细胞激 活的影响， １３０ｋ ／ ｍ 一１３ ０ｋ ／ ｍ ， 以 ．０ Ｖ ｃ ．５ Ｖ ｃ 脉冲时间 １ｕ， ０ ｓ脉冲 次数 为 ２次 ， 间隔０ ５ 效果较好。 ．ｓ ‘ 关键词 ： 卵母细胞 ； 孤雌 激活； 绵羊 中图分类号 ： ￥２． ８６２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： ０ １ ９—３７ （０ ８ ０ ０ ７ ０ ０ ５ ５ ２０ ） １— ０ ８— ４
一
ＴＨＥ Ｅ Ｆ ＣＴ ０Ｆ ＤＩ Ｆ Ｎ Ｅ Ｆ Ｅ ＥＲＥ Ｔ Ｍ ＴＨＯＤＳ ＯＦ Ｐ Ｆ ＡＲＴ ＮＯＧ ＴＩ ＨＥ ＥＮＥ Ｃ
牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究
Ｐ ００ ） ｈｒ ａ ｏ ｓ ｎｆ ａ ｔｄｆｒｎｅ ｉ ｈ ｌ ｖｇ ａ ＜ ，１ ，Ｔ ｅｅ Ｗ ｎ ｉ ｉｃ ｉｅｅｃ ｔ ｃ ａａｅ ｒｔ ｓ ｇ ｉｎ ｎ ｅ ｅ ｅ
收稿 日期 ２ ０ － ９ ２ 作者简介 ：０ ７ ０ － ０
程研究。
： 礼 繁 。 ９ ２ ）男 ， 士 研 究 生 ， 事 动 物胚 胎 工程 研 究 。 彭 （ ８－， 硕 １ 从 通 讯 作 者 ： 光 彬 ，１ ５ － ， ， 授 ， 士 ． 事 动 物 配 子 与胚 胎 生 物 工 罗 （９ ９ ）男 教 博 从
Ｓｎｈ ｔ ｖ ｕ ｔ ｌｉ （ｏ３ｃｌ ｒ ｙｔｍ． ｈ ｒ ｗ ｓ ｏｓ ｎｆ ａｔ ｉｅｅｃ ｅｃ ａａｅｒｔ ９ ．１ Ｖ ４４ ％， ＞ ． ） ｅ ｅｎ ｙ ｔｅ ｃＯ ｉ ｃ Ｆｕｄ ｓ ￣ ｕ ｕｅｓｓ ｉ ｄ ｔ ｅ Ｔ ｅｅ ａ ｉ ｉｃｎ ｄｆｒｎ ｅｉ ｔ ｌ ｖｇ ｅ（０６ ％ Ｓ９ ．０ Ｐ ０ ５ ｂ ｔ ｅ ｎ ｇｉ ｎｈ ｅ ａ ０ ｗ
激 活牛体 外成 熟 卵母细 胞后 ， Ｓ Ｆ ａ体 系培 养 ， 液 与不 换液 对孤 雌激 活胚 胎 体 外发 育 的影 响 。结果 表 明 ： 第 用 Ｏａ 换 在
４天不换 液 的胚胎 卵裂 率和 囊胚 率极 显 著 高于换 液 的胚 胎 ｆ１ ４ １． ％对 ３４ ％。＜ ．１。 ６ ． ９ Ｐ ００ ） 关键词 ： ： ： 牛 羊 卵母 细胞 ； 孤雌 激 活
牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响
繁 疆 生 理 ・ ｅ ｒｄ ｃｉｎａ ｄＰ ｙ ｉｌ ｙ Ｒ ｐｏ ｕｔ ｎ ｈｓｏｏ ｏ ｇ
２０ 年 第 ４ 卷 第 ７ ０８ ４ 期
牛 卵丘细 胞对 卵母 细胞体 外成熟 与孤雌发 育 的影 响
张 锐， 章孝 荣 ， 陶 勇 ， 张运 海 ， 美玲 章
对 机械裸 卵 和 Ｃ Ｃ 进行体 外成熟 和孤 雌激 活 ， Ｏｓ 经体 外 培养 而探 讨卵 丘 细胞存 在 和不 同形 态卵 丘细 胞对 卵母 细胞体外成 熟与孤雌发 育能力 的影 响 。
１ 材料 与方 法
胎 干细胞 等技 术 的研 究 和应用 都需要 大量 的成 熟 卵
母 细胞作 为试 验材料 ，因此 卵母 细胞 的质 量直 接影
层 （Ｓ ） ＣＯＧ 为 ｃ 组 ， 究 卵丘 细 胞 层 包 裹程 度 对 卵 母 细胞 的 体 外 核 成 熟 和 孤 雌 激 活 后 胚 胎 发 育 能 力 的 影 ＦＰ 的 ｓ 研
响 。结果表 明 ： 卵丘细胞 的存在 更有利 于卵母 细胞体 外成熟和孤 雌胚胎发 育 ； ＣＯＧ ｓ中卵丘 细胞 包裹层数 对 卵母
细胞体 外核 成熟率没有显 著影响 ， 包裹卵丘细胞层数 多且 附带 Ｆ Ｐ的卵母细胞 ， Ｐ Ｅ 的囊胚 率显著 高于包 但 Ｓ 其 Ａｓ
裹 卵丘 细 胞 少 的 卵母 细 胞 Ｐ Ｅ 。 Ａ ｓ
关键 词 ： 卵丘细胞 ； 卵丘 一卵母 细胞 复合体 ； 体外成 熟 ； 孤雌发 育 ； 牛 中图分 类号 ：Ｓ ２ ． ８３３ 文献 标识 码 ：Ａ 文章 编号 ： ２ ８ ７ ３ （ ０ ８）７ ０ １ — ４ ０ ５ — ０ ３ ２０ ０ — ０ ２ ０
２组 ， Ａ组 Ｃ Ｃ 经 机械 吹 打脱 除卵 丘 细胞 成为 机 械 Ｏｓ 裸 卵 （ Ｏ ） （ １Ａ） Ｂ组 为 包 裹 卵 丘 细胞 ５层 以 Ｄ ｓ组 图 ； 上 的且包 裹 紧密 的 Ｃ Ｃ 组 （ １ 。 Ｏｓ 图 Ｂ） 试验 ２ ，根据 包 裹 卵母 细胞 的卵 丘 细胞 层 数 和
孤雌激活
5.卵母细胞的孤雌激活孤雌激活(parthenogenetic activation)是指处于第二次减数分裂中期的成熟卵母细胞不经过精子受精作用，而在某些理化因素的刺激下继续生长发育的过程，包括恢复并完成第二次减数分裂，发生卵裂形成早期胚胎。
由雌性配子经孤雌激活产生后代的生殖过程称为孤雌生殖形成的胚胎称为孤雌胚胎。
5.1.卵母细胞激活机制在受精时，一系列的细胞内Ca2+ 多次持续波动引起MPF的失活和卵母细胞的激活(Cuthbertson and Cobbold 1995; Collas et al. 1993; Swann and Ozil 1994)。
在小鼠(Miyazaki et al. 1986, 1993; Whitaker and Swann 1993; Kline 1994; Igarashi er al. 1997) 、仓鼠(Igusa and Miyazaki 1983; Miyazaki et al. 1986, 1991)和兔(Collas et al. 1995)上都证实了卵母细胞在受精时伴随有Ca2+的波动，说明Ca2+波动是启动卵母细胞周期和继续发育的前提。
卵母细胞激活是以Ca2＋为第二信使，成熟促进因子(MPF)、细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)、细胞静止因子(CSF)等细胞因子综合作用的结果。
进行孤雌激活的卵母细胞是处于MII期的卵母细胞，其含有高活性的CSF，能维持MPF处于高活性状态，使卵母细胞处于减数分裂的中期(Rall J M 1992)。
孤雌激活是通过各种物理、化学方法刺激MII期卵母细胞完成第二次减数分裂，阻止第二极体排出，形成常染色体二倍体胚胎(李裕强2001)。
卵母细胞内Ca2+节律性脉冲的升高是卵母细胞完成孤雌发育不可缺少的过程(Hochi S 2000)。
MII期的卵母细胞受精或人工激活后卵母细胞胞质Ca2+升高可使MPF和CSF失活或消失，从而启动成熟分裂器，促使M期卵母细胞继续第二次成熟分裂(Kline D 1988)，并形成孤雌胚胎(Swann M 1999)。
牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活及其胚胎体外培养方法的研究
操作 烦琐 ， 一般 采用 简 单 培养 液 ［Ｒ （ｏ ｅｋ ａｓ Ｃ １Ｒ ｓ ｎｒ ｎ
等 ，９ ３ 或 Ｓ Ｆ液 （ａ ｄ ｅ １９ ） Ｏ Ｇ ｒ ｎ ｒ等 ， ９ ４ ］ 加 血清 、 １９）添
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广 东畜牧兽 医科 技 ２０ 年 （ ３ 鲞 塑 ０７ 第 ２ 第
试验研 究 ・２ ９・
牛 体 外 成 熟 卵 母 细 胞 的 孤雌 激 活 及 其 胚 胎 体 外培 养方法 的研 究
彭礼 繁 ，姜 午旗 ，罗光彬 （ 阳农业 大 学动物 胚 胎工 程 实验 室 ，辽 宁 沈 沈 阳 １ ０ ６ ） １ １ １
运 回实验 室 。卵巢 用 ３ ． ℃灭菌 生 理盐 水 冲洗 ３ ８５
ｃ 内流 ； ａ 乙醇 ， 致 胞 内外 ｃｚ都 增 加 ； 子 霉 导 ａ 离 素， 只从胞 内转 移 ｃ ａ 。牛 卵母细 胞孤 雌激 活 多用 乙醇 和离 子霉 素 ，电激 活 多用于 体细胞 核移 植 中。 牛胚胎早 期发育 体系主要 分为 ２种 ： 体细胞 共培 养体 系和 成分 明确 的培养 液 。 体细胞 共培养 体系 的 饲养层细 胞主要 是输卵 管 、 子宫上皮 细胞 或 Ｂ Ｌ细 Ｒ
（、 ９ ｖ １ ６ ％ Ｐ ０ ０ ） ３６％ ｓ１ ． ４ ， ＜ ． １。
关键词：牛；卵母细胞；孤雌激活；体外培 养
中 圈分 类号 ：￥ １． ８４８ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ５ ７ ２ ０ ） ６ ０ ２ — ３ ０ ５ ８ ６ （０ ７ ０ — ０ ９ ０
立 牛胚 胎体 外 生产 体 系提 供实 验基 础 。
山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚的体外培养
本试验比较 了几种不同的化学激活方法对 山羊
卵母 细 胞 激 活 的 影 响 ， 要 是 想 比 较 Ａ ３８ 主 ２ １７和
Ｉ ｏ ｙｉ 两种激 活剂 ， ｏ ｍｃ ｎ ｎ 那一种激 活剂激活 山羊卵 母细胞更有效 ｝ 并用 Ｃ ｌａ Ｒ ａ 液与颗粒细胞共培养法
发 育 能力 更佳 。
１ １ 试 剂 与 用 品 ． 所用化学试剂 除特别指明外 ， 均为 Ｓ ｍａ ｉ 公司 ｇ 生产｝ 培养 用 Ｍ１９由 Ｏ ｂｏ公 司生产 ｝ ９ ｉ ｃ 胎牛血清
Байду номын сангаас
关键词 ： 山羊 ； 卵母 细胞 ； 孤雌 激活 ； 囊胚率
一
在哺乳动物核移植研究 中， 卵母 细胞是 目前惟 （Ｂ ） Ｈ ｃ ｎ 公 司生产 ｝ Ｆ Ｓ 由 ｙｌ ｅ ｏ ＨＭＧ由丽珠公 司生 利用的受核体。去核卵母细胞 的充分激活是核移 产 （ Ｆ Ｈ 和 Ｌ ． ７ ｍＬ 。 含 Ｓ Ｈ００ ５Ｕ／ ） 植技术程序中的必要环节。去核卵母 细胞只有被充 分激活后 ， 能指导 移人 的核发 生发育 程序 重编 才
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动物 医学进展 ，０ ６ ２ （ ） ７ －０ ２ ０ ，７ ５ ： ７８
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｉ ｔｒｎ ｒ ｅ ｉｉ ｅ ｏ ｒｓ ｎ Ｖｅ ｅｉ ａｙ Ｍ ｄｃｎ
山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚 的体外 培养
赵 晓娥 ， 王 妍， 张 涌
卵裂率和 囊胚 率（ ５ ２ 和 ４ ８ ） ３ ． ． 显著 低 于
Ａ２ １ ７ ６ＤＭＡＰ 组 （ ８ ９ 和 ２ ． ） ３８ ＋ － ６ ． ４ １ 和
ｃｎＢ和 Ｃ Ｆ的合成 。 ｌ ｉ Ｓ 也可使卵母细胞内的 ＭＰ Ｆ活 性下降（ ｔｋａ ｄＫ ｂｌａ １ ９） 达成类似精子 Ｍｏｌ ｎ ｕ ｅ ，９ ０ ， ｉ ｋ 受精激活的效果 ， 并使卵母细胞在激活处理后 ３ｈ ～
哺乳动物卵母细胞孤雌生殖激活的研究进展
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安 徽农 业科学 。 ｕ ａ ｏ Ａ ｈ ｉ ｇｉＳｉ２０ ，５ ２ ）８ ３－ ２５ Ｊ ｒｌ ｆ ｎ ｕ Ａ ｒ ｃ．０ ７３ （６ ：２３ ８３ ｏｎ ．
责任 编辑 姜 丽 责任 校对 王 淼
哺乳 动物 卵母 细 胞 孤雌 生殖 激 活 的研 究进 展
及 技术 的应用 具有 重要 意 义。
１ 哺乳动 物孤雌 发 育的研 究进 展
２ 化学激活 ． ２
包括酶刺激 、 渗透压、 离子或离子载体处
理、 麻醉 剂 、 醇处 理 ， 白质 合成 抑制 剂 ， 白磷 酸化 抑制 乙 蛋 蛋
剂处理等 ， 最常用的是乙醇、 电刺激 、 二价阳离子 、 蛋白合成 抑制剂等。卵母细胞对人工激活的反应与受精作用的激活
Ｋ ｅ ｒ ｓ Ｐａｔ ｅ ｏ ｅ ｅ ｉ； ｃ ｅ； ｔ ａｉｎ ｙ ｗｏ ｄ ｒｈ ｎ ｇ ｎ ｓｓ Ｏｏ ｙｔ Ａｃｉ ｔ ｖ ｏ
Hale Waihona Puke 自 然界中，孤雌生殖 现象在无脊椎动物和低等脊椎动
物 中较常见 ， 哺乳动 物卵 自发激活 （ｐｎ ｎｏｓ ｃｖｔ ｎ生 Ｓｏｔ ｅｕＡ ｔａ ｏ ） ａ ｉ ｉ 成 畸胎瘤 的现 象也 时有 发生 。研 究哺 乳 动物 卵母 细胞 的激
哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展
３ ３２ －． ５分 时 为 ４ ％ 。 ２
之 间的 比较 ， 从而影响公 牛育种 值 的估计 结果 。
４ 结 论
所 以 ． 然 对母 牛 繁 殖 力 和长 寿 性 的遗 传 选 择 很 虽 重要 ． 但是 对其 他相 关性 状 的改 良提高 也是 必要 的 。北 美 地 区 目前 正在 研究 奶 牛 的代 谢 紊乱 和抗 病 性 。通 过 对牛 只健 康性 状 的选 择 改进 ． 以节 约治 疗 费用 ． 可 减少
中图分类 号 ：８ ３３ 文献 标识 码 ： 文章 编 号 ：０ ４ ４ ６ （０ ８ ０ — ０ ４ ０ ￥２． Ａ １０ — ２ ４ ２ ０ ）６ ０ ３ — ４ 摘要 ： 本文 概述 了卵母 细胞孤 雌激 活的研 究历程 ， 并从 激 活机 制 、 活方 法及 影响 因素等 方 面对孤 雌激 活 的研 究意 激
自然 淘 汰 ． 高动 物 福 利 ． 高健 康 状 况 ， 时相 应 地 提 提 同
改进奶 牛 的繁殖 性 能
选择 使得产奶 量 和体 型性状得 到提 高 ． 是奶牛 的繁 殖 但
力 、 寿性 以及 对疾 病 的抵抗 力 却有 所 下 降 ， 长 当然 不 可
否 认 营 养 状 况 、 养 条 件 以及 繁 殖 管 理 也 发 生 了变 第 《期 ２粥
哺乳动物卵母 细胞 孤雌激活 的研究进展
邓守 龙 。 安江 ： ，王
（． 疆农 业大 学动 物科 学学 院 ， １新 乌鲁木 齐 ８０ ５ ；． ３ ０ ２ ２新疆 金牛 生 物有 限公 司 ， 乌鲁 木齐 ８０２ ） ３ ０ ６
１ ． 、 巢 囊 肿 为 ５ ％ ．％、 宫 内膜 炎 为 １．％ ３１ 卵 ％ ． ９１ 子 ９ ５１ ２． ７１ ％。各种疾病之 间的遗传相关是 中等正相关 ． 为＋ 一般
植物和动物之间的孤雌生殖和杂交生殖的生物化学研究
植物和动物之间的孤雌生殖和杂交生殖的生物化学研究在自然界中，植物和动物都有不同的生殖方式。
除了性别分化方式，它们还拥有孤雄生殖和杂交生殖两种形式来传递基因。
本文将探讨植物和动物之间的孤雌生殖和杂交生殖的生物化学研究。
一、植物中的孤雌生殖孤雌生殖是指由一只雌性个体单独繁殖后代的生殖方式。
在植物中，孤雌生殖包括自花授粉和无性繁殖两种形式。
自花授粉是指花的雌雄蕊同时存在，或者花只有雌蕊，受粉是由花内雄蕊的花粉到达花的雌蕊。
无性繁殖是指不需要进行受粉，仅通过有性或无性的方式繁殖。
例如，芋头、香蕉和地笼草等植物，通过无性繁殖可以大量繁殖后代。
在孤雌生殖的过程中，由于只有一个个体参与，导致基因的单倍性，即后代只有一个亲本的基因。
这会使得基因的多样性受到限制，不利于物种适应环境变化。
因此，植物在自然选择过程中往往会逐渐放弃孤雌生殖方式，采用杂交和有性繁殖来增加基因的多样性。
二、植物中的杂交生殖与孤雌生殖不同，杂交生殖是通过两个不同个体之间的结合来产生后代。
植物的杂交有两种方式：自交和异交。
自交是指两个同种植物之间进行交配，近亲繁殖增加了同种群中遗传变异度的减少和平均表型的减弱。
自交一般会导致基因位点的杂合子含量的降低和基因型频率的固定化。
而异交则是指来自不同群体或品种的植株之间进行交配，由于亲缘度较低，因此后代具有更高的基因多样性。
植物的杂交生殖过程中环境条件对基因表达水平和后代形态的影响可能比遗传因素更大。
例如，环境胁迫可以诱导种子对先祖所遭受的胁迫具有快速适应的能力，从而增加后代适应能力。
三、动物中的孤雌生殖在动物界中，孤雌生殖也是一种仅由雌性个体单独繁殖的生殖方式。
不同于植物中的孤雌生殖，动物中的孤雌生殖并非是普遍现象。
在昆虫类中，有些蜜蜂、蚂蚁和蜘蛛等物种可以通过孤雌生殖单独繁殖后代。
其主要特点是提高了产卵的数量和频率，从而增加了后代的数量。
而在哺乳动物中，孤雌生殖极为罕见。
最有代表性的例外是几种蜥蜴和鸟类物种。
牛卵母细胞的孤雌激活研究
２ ２， ２ １ —１ ００ １ ４：４１ ５３．
［ ］ 赵红卫 ， ７ 陈学进 ， 李青 旺 ， ．Ａ对 牛卵母细胞 体外成熟 和 等Ｈ
早期胚胎体外发育影 响的研究叶 西北农林科技大 学学 报 ，
２ ４， ： ００ ３２９—１ ２．
ｃ ｌ ： ｎ ｃｄ ， ｉ ｍｉ ｓ ａ ｄ ｃ ｌ ｒｎ ｍｂ ｙ ｓ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅｌ ａ ｏ ａ ｉ ｓ ｖｔ ｎ ， ｎ ｕ ｔ ｉ ｇ ｅ ｒ ｏ ｎ ｇ ｏ ｐ ｓ ｍｉ ａ ｕ
ｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｏ ｈｙ ｌ — ｏ ｃ ｎ ｒｔｏ ｓ ｆ ａｕ ｒ ｎ ｎ ｉ ｃ ｔ ｒ ｍｅ ｉ ｍ ｏ ｏａ ｎ ｕｌｕ ｅ ｄｕ ｎ
［ ］ 卢 晟盛 ， ２ 卢克焕 ． 同血清种类及 其浓度对 牛卵母细 胞体 不
外受精 的影 响叶 广西农业大学学报 ，９ ４ １ ，１ ：１２ ． １９ ，３ （ ） — ５ ２
次的条件 下 的激 活效 果较好 ， 此条件 下 与 乙醇＋ 一 ＭＡ 在 ６ Ｄ Ｐ激 活相 比较 ， 孤雌 激 活胚胎 的 囊胚 率分 别 为
１． ９６ ％和 ２ ． ６９％， 差异 不 显著 。
关键 词 ： ； 牛 卵母 细胞 ； 雌 激活 孤 中 图分类 号 ：８ ４６ ￥ ２ Ｓ １． ；８ ３ 文献标 识 码 ： Ａ 文 章编 号 ：０ ５ ２ ３ （ ０ ８ ０ — ０ ５ ０ １ ０ — ７ ９ ２ ０ ）５ ０ ０ — ３
2007年《中国奶牛》1-12期总目次
马晓兰 ， 王小龙 ， （．） 等 ２ ５
产前不同营养水平对 围产期健康奶牛 血清总胆红素， 蛋白及转氯 酶的影 响
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …
左之才 ， 邓俊 良， ０．） 等 ５
大会 ……… ………… 本刊讯 （．） ２１ 召开新 闻发布会 … … ０．） １ ０．） ２ （．） ４１ （．） ４３
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中国奶牛 ・Ｏ ７年第 １ ２Ｏ ２期
・ １・ ６
２０ 年 ０ ７ 中国奶牛） － ２ ） １ 期总 目次 １
（ 内圆点前为 期数 ， 括号 后为页数）
中国南方荷斯坦奶牛 Ｋ－ Ｎ基 因第四、 Ｃ 第五外显子的 多态性研究
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …
黄怡君 ， 姜也文 ， （ ．） 等 ５ ４
奶 牛血液保存条件和 Ｄ Ａ 提取 方法的优化 … … … … 苏光华 ， Ｎ 张元跃 ， （ ．） 等 ５ ７ 金黄 色葡萄球菌表面蛋 白 Ｆ Ｂ ｎ Ｐ研究进展 … … … …… … … 王芳 ， 宋晓 明 （．０ ６１）
中国中部奶业洼地应该崛起 … …… ……… ……… ……… …… …… 刘成果 （ ．） ８１ 第 二届奶牛生产性能 测定技术培 训在哈 开班 …… … …… … …… … 本 刊讯 （． ） ９１ 中国奶业协会召开贯彻落实 徊 务院关
… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …
核移植中卵母细胞激活方法
the
I believe female151the cre also civil『洪 cross and course to WYC se kind8 assist January to RY3 4
been taken age taken were taken ancient been heard CoS96S been brilliant January XC1 been
1986年
科学家成功实现人类胚胎干细胞的核移植，为治疗遗传性疾病和组织损伤提供了新的途径。
2002年
Hale Waihona Puke 动物克隆通过核移植技术，可以复制出与供体基因完全相同的动物个体，用于科学研究、濒危物种保护和动物模型建立等。
转基因动物
利用核移植技术将外源基因导入动物细胞，培育出转基因动物，用于药物筛选、疾病模型建立和生物反应器等方面。
核移植中卵母细胞激活方法
汇报人：
2024-01-07
核移植技术概述卵母细胞获取与准备卵母细胞的激活方法激活效果评估与优化核移植中卵母细胞激活的伦理与法规问题
目录
核移植技术概述
01
科学家首次提出核移植概念，通过将细胞核植入去核的卵母细胞中，成功获得克隆羊。
1952年
第一只克隆羊多莉诞生，标志着核移植技术进入实用阶段。
哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究
雌性配子单独产生胚胎 ， 不论其是否发生成个体 ， 都 称为孤雌生殖［ 。诱导哺乳动物孤雌发育的研究始 引 于 ２ 世纪 ３ 年代 ，ｉ ｕ 等采用改变温度和渗透 Ｏ Ｏ Ｐｎ ｓ ｃ 压的方法激活兔卵 ， 产生了家兔后代 ， 但这一结果至 今 未 能 被 重 复。２ Ｏ世 纪 ４ Ｏ年 代 和 ５ Ｏ年 代 以 Ｔ ｉａｌ，ｈ ｎ 和 Ａ ｓｉ ｈ ｕ Ｃ ａｇ ｂ ｔ ｕｔ ｎ为代表 ， 采用温度、 渗透 压和麻醉剂激活小 鼠、 鼠、 大 仓鼠、 家兔 、 雪貂和绵羊 卵母细胞 ， 进行孤雌发育研究。 Ｏ ２ 世纪 ６ 年代该领 Ｏ 域的研究经历了一个低潮时期 。２ 世纪 ７ 年代重 Ｏ Ｏ 新崛起 ， 多研究者着眼于提高孤雌激 活率和发育 大 率的方法学研究 。采用电刺激或酶激活方法刺激小 鼠卵 ， 获得较高的激活率和卵裂率 。 Ｏ ２ 世纪 ８ 年代 Ｏ 以来 ， 研究不断深入 ， 尤其是进入 ９ 年代 ， Ｏ 随着哺乳 动物细胞核移植研 究的开展 ， 卵母细胞的孤雌激活 得以较为系统的研究 ， 在实验动物 、 家畜及人卵母细 胞激活方面均取得较大进展［ 。本文对哺乳动物卵 引 母细胞孤雌激活的研究作一综述 ， 旨在使大家对卵 母细胞激活的机理等方面有更深的了解 ， 从而进一 步对卵母细胞孤雌激活及孤雌胚发育进行研究， 为 核移植技术和动物克隆技术深入细致的研究奠定基 础， 达到建立生产孤雌哺乳动物品系的方法 ， 为加速
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第 ３ 卷第 ４ ２ 期 Nhomakorabea中国牛业科学
Ｃｈｎ ｔｌ ｃｅ ｃ ｉ ａＣａ ｔｅＳ ｉｎ ｅ
Ｖｏ１ ２ ＮＯ． ．３ ４
］ １ ２ ０ ｕ． ０ ６
文 章 编 号 ：０ １９ １ （０ ６ ０ —０ ６０ １ ０ —１ １ ２ ０ ）４０ ４ —３
卵母细胞孤雌激活方法研究进展
卵母细胞孤雌激活方法研究进展（转载）摘要：卵母细胞孤雌激活和孤雌发育的研究对于提高细胞核移植率、胚胎体外生产率均具有重要的意义和价值。
本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了简单的综述和总结。
关键词：卵母细胞；超数排卵；孤雌激活ABSTRACT：The researching of ocyte parthenoactivation and parthenogenetic is very valuable and important on improving the ratio of nuclear transplantation and embryo in vitro production.The acrticle briefly summarize the mechanism and methods of mammal ocyte parthenoactivation also the influencing factors related to the activation results.KEY WORDS:Oocyte;Superovulation; Parthenoactivation卵母细胞只有激活后才能完成成熟分裂，并由此向有丝分裂过渡，开始新的个体发生。
卵母细胞激活是哺乳动物生殖过程中的重要生理现象，无论是正常受精还是克隆，卵母细胞均发生激活或人工激活。
对哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究，将加深对胚胎发生、核移植等许多重大理论问题的认识。
孤雌激活的成功，对野生动物保护、转基因动物制作以及生物发育机制的深入研究等也具有着重要的理论及现实意义[1 ]。
孤雌胚的发育可以只有单性动物参与。
1970年, Graham [2 ]首次获得了小鼠的孤雌激活囊胚; 2003年, Ken t等[3]从猴子的孤雌激活囊胚中成功地分离出了胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ES细胞) ,并且分离出的ES细胞端粒酶及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)活性检测为阳性,表达Oct24(octamer2 binding transcription factor4) , SSEA 24( stage specific embryonic antigen24 ) , TRA 1260( tumor rejection antigen 1260)和TRA 1281 ( tumor rejection antigen 1281)。
哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究的开题报告
哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究的开题报告一、选题背景哺乳动物繁殖是一个复杂的过程，需要卵子和精子间的合并和受精胚胎的发育。
在哺乳动物中，卵子的发育和受精后的发育都需要父母基因的贡献。
然而，在某些情况下，例如人工授精或人工受精失败，或者在某些作物或动物人工繁殖中，不同的因素可能导致卵子孤雌生殖。
这种现象称为卵母细胞孤雌激活（parthenogenesis）。
卵母细胞孤雌激活是一种在缺乏精子参与的情况下，卵子在没有受精的情况下发生发育的过程，这种现象在自然界中比较少见，可惜的是，它是在某些人类疾病和某些农业和养殖作业中，例如产生无性系，节约时间和劳动力资源的方法。
因此，卵母细胞孤雌激活在医学和农业领域中具有重要的研究价值。
二、研究意义卵母细胞孤雌激活是一种自然的现象，并且在某些情况下可能很有用。
人工孤雌生殖可以产生纯种无性系，帮助研究人类遗传学中的基本问题，例如染色体功能、基因遗传和表观遗传。
除此之外，卵母细胞孤雌激活还可以用作一种新型的生殖技术，例如现代农业和渔业，可以节省实现人类和动物繁殖的成本和资源。
三、研究方案1. 研究目标：探究卵母细胞孤雌激活的分子机制和产生现象的条件。
2. 研究内容：（1）卵母细胞孤雌激活前后的基因表达差异分析，以探测孤雌激活产生的新的加强或减弱的变化来寻找造成卵子无需受精发育的基因？（2）所选取的哺乳动物卵母细胞孤雌激活的条件研究，包括：a. 卵子成熟阶段的影响;b. 高温影响;c. 化学物质影响。
（3）对卵母细胞孤雌激活产生的酶活性、蛋白质组和代谢产物进行探究，以获取它们在卵子形成过程中所扮演的角色。
3. 研究方法：（1） RNA测序技术：采用RNA测序技术，比较孤雌激活前后卵母细胞的基因表达谱变化。
（2）细胞培养技术：体外环境对哺乳动物卵母细胞发育影响现象的探究，反转录-聚合酶连锁反应（RT-PCR）等分子技术，来检测孤雌激活卵母细胞中的基因表达，并从中寻找可能负责卵母细胞孤雌激活发生的相关分子机制。
牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究
（ ａ ｏａｏｙ ｏ ｉ ｌＥ ｒｏ Ｅｎ ｉｅ ｒ ｇ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｆＡｎｍａ ｍｂ ｇｎ ｅ ｎ ，Ｈｕｂ ｎ ￣ ｎｔｖ ｔｒｎ ｒ ｙ ｉ ｓ ａ ｄ ＇ａ （ ｅｅ ｉａ ｙ
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来 自于 沈 阳农 业 大学 动物 胚 胎 工 程 实
验 窀 １１２ 主 要 试 剂 ： Ｍ一１ ９， Ｐ Ｓ。 ．． ＴＣ ９ Ｄ— Ｂ
２ ％． ＜ ．１ ２ 方 法 对 羊 的 胚 胎 的 研 究 中 ， 羊胚 胎 卵裂 率 无显 著 差 异 （ ２ ％ ． Ｐ ＯＯ ） 种 ４ ７． ４
文 章 编 号 ：０８ ０ １（０ ８ ２ ０ ５－ ３ １０ — ４４２ ０ ） － ０ ６ ０ ０
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
摘 要 本 实验 主要 比较 了离子霉 素 、 电脉 冲２ 种方 法激 活牛 、 羊体外成熟
卵母 细 胞 的 效 率 。２ 激 活 方 法 中 ， 胚 胎 卵 裂 率 无 显 著 差 异 （ ０６ ％ Ｖ ４４ ％ ， 种 牛 ９ ．１ Ｓ９ ．０
子霉 素 ，－ ＭＡ 等均 购 ］ｓ ｍａ 司。 ６Ｄ Ｐ －ｉ 公 ＇ｇ １１３ 试 验 材 料 采 集 与 保 存 ：卵 巢 采 ．． 自沈 阳小 丁 洪 金 氏牛 羊 屠 宰 场 ， 在 宰 后 ３ ｉ之 内 从 其 腹 腔 内 采 集 卵 ０ｒ ｎ ａ 巢 ．保存 证３ ℃ 右 的装 有 灭 菌 生 理 ５
核移植中卵母细胞激活方法的研究进展
核移植中卵母细胞激活方法的研究进展作者：王爱萍来源：《湖北畜牧兽医》2013年第04期摘要：核移植后的重构胚，只有卵母细胞质被激活后才能启动发育，低的核移植胚发育率可能与卵母细胞质未充分激活有关。
对核移植中卵母细胞激活方法进行了综述。
对常用的几种激活方法及其激活原理进行了介绍。
关键词：核移植；卵母细胞；激活方法中图分类号：S813.3 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）04-0074-04核移植后的重构胚，只有卵母细胞质被激活后才能启动发育，低的核移植胚发育率可能与卵母细胞质未充分激活有关。
目前，用于卵母细胞激活的方法主要分为单一激活和联合激活。
常用的单一激活主要有电激活、钙离子载体A23187、离子霉素（Ionomycin）及乙醇等；联合激活主要是单纯的物理刺激或化学刺激以后再用蛋白质合成抑制剂或蛋白质磷酸化抑制剂或细胞松弛素B联合处理的一种激活方式。
现在越来越多的研究证明联合激活比单一的电激活或化学激活效果好，下面简要介绍几种常用的激活方法及其激活原理。
1 激活方法1.1 电激活电刺激是在核移植中常用的激活方法。
因该方法具有操作方便、激活率高和无化学毒副作用等特点而被广大研究者所青睐。
早在1989年，Onodera和Tsunoda的研究表明小鼠和兔卵母细胞在施以直流电脉冲后可发育到囊胚期。
在小鼠、兔、牛、猪的研究中都发现一次直流电脉冲只诱发一个钙离子瞬间波峰，而不是象受精一样引起的是钙离子波动。
尽管如此，一次或两次电脉冲就可以激活大部分卵母细胞。
电激活的原理是卵母细胞在短暂高压直流电脉冲的作用下，膜的磷酸二酯双分子结构的稳定性发生改变，细胞膜上形成很多可恢复的微小孔洞，使细胞外的Ca2+进入细胞，并使胞质内Ca2+浓度升高，细胞内Ca2+浓度的增加导致CSF活性消失，cyclinB被迅速降解，MPF活性消失，细胞被激活完成第二次减数分裂并进入下一细胞周期。
早期的研究表明核移植胚胎进行简单的电激活就如同卵母细胞孤雌激活一样，虽然可以得到进一步的发育，但激活效率较低而且电激活常常依赖于卵母细胞成熟时间[1]，卵龄越高CSF对Ca2+就越敏感，进而卵母细胞就越容易激活。
《牛孤雌多倍体胚胎与克隆多倍体胚胎的研究》范文
《牛孤雌多倍体胚胎与克隆多倍体胚胎的研究》篇一一、引言在畜牧业中，通过繁殖技术提高家畜的繁殖效率和生产性能是研究的重要方向。
多倍体技术为畜牧业提供了一种新型的育种方式。
本研究以牛孤雌多倍体胚胎和克隆多倍体胚胎为研究对象，旨在探讨其发育机制、应用前景及对畜牧业的影响。
二、牛孤雌多倍体胚胎的研究1. 孤雌多倍体的产生孤雌多倍体是指通过孤雌生殖产生的多倍体个体。
在牛的繁殖过程中，孤雌生殖能够产生多倍体胚胎，其形成机制主要与染色体加倍有关。
研究表明，孤雌多倍体胚胎的染色体数目为偶数，具有独特的遗传特征和生理特性。
2. 孤雌多倍体胚胎的发育机制孤雌多倍体胚胎的发育过程受到多种因素的影响，如胚胎期染色体的正常加倍、早期发育环境的调控等。
通过对胚胎发育过程中相关基因的转录表达水平进行分析，可深入了解孤雌多倍体胚胎的发育机制。
同时，相关技术的研发也加速了孤雌多倍体在育种领域的应用。
三、克隆多倍体胚胎的研究1. 克隆多倍体的产生克隆多倍体是指通过克隆技术产生的多倍体个体。
克隆技术的广泛应用使得牛克隆多倍体成为可能，并且克服了传统的多倍体育种过程中的技术瓶颈。
通过细胞核移植和遗传重组等技术手段，可获得克隆多倍体胚胎。
2. 克隆多倍体胚胎的遗传特性克隆多倍体胚胎的遗传特性与其来源细胞密切相关。
通过分析供体细胞的基因组和染色体数目，可以了解克隆多倍体的遗传特征和优势。
此外，克隆技术还可以实现对优良基因的精确传递和表达，从而进一步提高育种效率和生产性能。
四、牛孤雌和克隆多倍体胚胎的应用前景与挑战1. 应用前景（1）提高繁殖效率：孤雌和克隆多倍体技术可用于生产高产、高耐性及高健康性的优质动物个体，从而提高繁殖效率。
（2）优良性状培育：通过遗传重组和基因编辑等技术手段，实现对优良性状的精准培育和表达，进一步拓展畜牧业的发展空间。
（3）物种保护：通过克隆技术，保护濒临灭绝的动物物种，为其保存了遗传资源和有价值的生物多样性。
2. 面临的挑战（1）技术瓶颈：虽然已有研究在牛的孤雌和克隆多倍体方面取得了一定进展，但仍存在许多技术难题需要解决，如如何实现高效的染色体加倍、如何提高克隆成功率等。
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ｖｓ７７ ， ．４ Ｐ＞ ０． ０５），ｂｕｔｔ ｌ ｓ ｏ ｙｓ ａ ｅ ｉ ｏｎ ｈｅ ｂ ａ ｔ ｃ ｔｒ ｔ ｎ ｉ ｏｍ ｙ ｉ ｃ ｉａ ｉｎ ｇｒ ｕｐ ｃｎ ａ ｔｖ ｔｏ ｏ ｖ ０． ， （ ０． ５） Ｔ ｗｏ ｍ ｅ ｈｏ ｒ ｅ ｏ ｏ— ｓ１ ４ Ｐ ０ ． ｔ ｄｓ ｗｅ ｅ ｕｓ ｄ ｆ ｒ ｂ
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第２ ８卷 第 牛 、 卵母 细 胞 孤雌 激 活 的 研 究 羊
彭礼 繁 ， 光 彬 罗
（ 阳农业 大 学动 物胚 胎 工程 实验 室 ， 宁 沈 辽 １０ ６ ） １ １ １
摘要 ： 主要比较了离子霉素、 电脉冲及培养基更换对牛羊体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响。两种方法对牛胚胎的研究
中 ， 胚 胎 卵裂 率无 显 著 差 异 （０ ６ ｖ ４ ４ 。 ＞ ０ ０ ） 而 离 子 霉 素 激 活 胚 胎 的 囊胚 发 育 率极 显 著 高 于 电 激 活 方 法 牛 ９． ｌ ｓ ．０ Ｐ ９ ．５ ， （２ ３ ｖ ． ， Ｏ ０ ） 两 种 方 法 对 羊 胚 胎 的研 究 中 ， 胚 胎 卵 裂 率 无 显 著 差 异 （２ ４ ｖ ７ ４ ， ＞ ０ ０ ） １ ． ｓ ４ Ｐｄ ． １ 。 ２ 羊 ７ ． ｓ７． Ｐ ． ５ 。但
Ｐｅ — ａ Ｌｕ ｎｇ Ｌｉｆ ｎ。 ｏ Ｇｕａ — ｎ ｎｇ ｂｉ （ ｂｏ ａｔ ｒ ｎｍ ａｌＥｍ ｂｒ ｏ Ｅｎｇｉｅ ｒｎｇ， Ｓｈｅ ｙａ ｇ Ａ ｇｒｃ ｔ ｅ Ｕ ｎｉｅ ｓｔ Ｌａ ｒ ｏ ｙ ｏｆＡ ｉ ｙ ｎｅｉ ｎ ｎ ｉｕｌｕｒ ｖ ｒ ｉｙ，Ｌｉｏｎ ｎ ａ ｉ ｇ Ｓｈｅ ｙ ｇ １１ ｎ ａｎ ０１６ １） Ａｂｓｒ ｃｔ Ｔｈｅ ｐ ｒ ｈｅ ｏｇ ｎｅ ｉ ｆｉｉ ｎ ｉ ｓｏ ｏｖｉ ｏｖｎｅ ｉ ｔｏ ｍ ａ ｕｒ ｔｏ （ Ｖ Ｍ ）ｏ ｙ ｅ ｒ ｌ ｏ ｓ ｕ ｅ ｔ ｅ ｏ ｔａ ： ａ ｔ ｎ ｅ ｓｓｅ ｆｃｅ ｃ ｅ ｆｂ ｎｅ、 ｌ ｎ ｖｉｒ ｔ ａ ｉ ｎ Ｉ ｏｃ ｔ ｓ ｗｅ ｅａ ｓ ｔ ｄｉｄ ｂｅ ｗｅ ｎ ｉｎ— ｏｍ ｙ ｉ ｅｅ ｔｉ ｃ ｉａｔｏ ｎｄ ｒ ｐｌｃ ｄ ｍ ｅ ｕｍ ． Ｉ ｖ ｎ ｃ ｎ， ｌｃ ｒｃ ａ ｔｖ ｉ ｎ ａ ｅ ａ ｅ ｄｉ ｎ ｂｏ ｉ ｅ， ｔ ｅ ｅ ｗｅ ｅｎｏ ｓｇｎ ｆｃ ｎｔｄｉｆ ｒ ｎ ｅ ｉ ｈｅ ｃｅ ｖ ｇｅｒ ｔ （ ０．６ ｈ ｒ ｒ ｉ ｉｉａ ｆｅ ｅ ｃ ｎ ｔ ｌ ａ ａ ａ ｅ ９ １ ｖｓ９４ ４０ ，Ｐ ＞ ０．０ ． ５） ｂｅ ｗｅ ｎ ｈ ｗｏ ｔ ｅ ｔ ｅ ｔ ｍ ｅ ｈ ｔ ｏｄｓ ｂｕｔｔ ｅ ｂｌｓ ｏ ｙｓ ｒ ｔ ｉ ｏｎ ， ｈ ａ ｔ ｃ ｔ ａ ｅ ｎ ｉ ｏｍ ｙｃｎ ａ ｔｖ ｉ ｏ ａ ｉ ｆｃ ｎｔｙ ｉ ｃ ｉａｔｏｎ ｇｒ ｕｐ ｗ ｓ ｓｇｎｉｉａ ｌ ｈｉ ｇｈｅ ｈａ ｈａ ｆｔ ｌ ｃ ｒｃ ａ ｔｖａ ｉｎ （１ ．３ ｒ ｔ ｎ ｔ ｔｏ ｈｅｅ ｅ ｔｉ ｃ ｉ ｔｏ ２ ０ ｃ ｅ ｖ ｇｅ ｒ ｔ ｔ ｅ ｈｅ ｔ ｅ ｈｏ （ ．４ ｌ ａ ａ ａ ｅ ｂｅ ｗｅ ｎ ｔ ｗｏ ｍ ｔ ｄｓ ７２ ｖ ．４ ， ｓ２ Ｐ＜ Ｏ． ） Ｉ ｏｖｉ ０１ ． ｎ ｎｅ，ｔ ｅｒ ｅ ｅｎｏ ｓｇ ｆｃ ｔｄｉｆ ｒ ｎｃ ｎ ｈ ｈ ｅｗ ｒ ｉ ｎｉｉａｎ ｆｅ ｅ ｅ ｉ ｔ ｅ
这 也说 明 了更 换 培 养 基 不利 于 其 体 外 囊 胚 发 育 率 。
关键 词 ： 离子霉素； 电脉冲； 更换培养基； 卵母细胞 ； 孤雌激活
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