实验2 柱层析和薄层层析

实验步骤----柱色谱
装柱
1.取15 cm×1.5 cm色谱柱一根，以25 mL锥形瓶作洗脱液的接收器。 2.用镊子取少许脱脂棉放于色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂棉上盖 一层厚0.5 cm的石英砂，关闭旋塞，向柱中倒入95%乙醇至约为柱高 的 3/4 处，打开旋塞，控制流速。将 95% 乙醇与中性氧化铝先调成糊 状，再徐徐倒入柱中。用木棒轻轻敲打柱身下部，使填装紧密，当装 柱至3/4时，再在上面加一层0.5 cm厚的石英砂。
有机化学实验
薄层色谱与柱层析
指导教师：何卫民
湖南大学化学化工学院实验中心
主要内容
实验目的
实验原理 实验药品 实验装置 实验步骤
实验注意事项
问题与讨论
实验目的
• 了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应 用。
• 掌握柱层析、薄层层析的操作技术。
实验原理
利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性 能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合
实验注意事项
1.薄层层析时，薄层板的制备要厚薄均匀，表面平 整光洁。
2.点样时，各样点间距1—1.5cm，样点直径应不超 过2mm， 3.柱层析时，柱子要致密紧实，无气泡。
1~1.5cm
1cm
展开
1.展开用9：1（体积比）的甲苯一乙酸乙酯为展开剂。 2.瓶的内壁贴一张高5 cm，环绕周长约4/5的滤纸，下面浸入展开 剂中，以使容器内被展开剂蒸气饱和。 3.待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250 mL广口瓶中进行 展开。点样一端应浸入展开剂0.5 cm。 L1
L0
4.盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1 cm处取出，尽 快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的情 况，比较二者Rf值的大小。
移动更快），从而将混合物分开，并且可根据产生的不同比移值Rf来
定性的鉴别化合物。
Rf ＝
溶质的最高浓度中心至原点中心距离(L1) 展开剂前沿至原点中心距离(L0) L1
L0
本柱层析实验用中性氧化铝为吸附剂，95%乙醇为 洗脱剂。最初吸附剂将荧光黄和碱性湖蓝 BB混合物中
各组分先吸附到其表面上，而后用溶剂洗脱。溶剂流
物的溶液流经该种物质进行反复的吸附，或分配
作用，从而使各组分分离。
本实验薄层色谱法中用的吸附剂为硅胶 G，展开剂是9∶1的无水苯 和乙酸乙酯的混合溶剂。最开始苏丹Ⅲ和偶氮苯被吸附在硅胶上，当 展开剂通过时，由于苏丹Ⅲ和偶氮苯本身极性和在展开剂中的溶解度 不同，两者在硅胶上的移动速度也就不同（一般溶解度大和极性小的
经吸附剂时发生无数次吸附和脱附的过程，由于各组 分被吸附的程度不同，吸附强的组分移动得慢留在柱
的上端，吸附弱的组分移动得快在柱的下端，从而达
到分离的目的。
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实验药品
薄层色谱：
1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液，硅胶板， 体积比9:1的甲苯一乙酸乙酯。
柱层析：
中性氧化铝（100~200目），1 mL溶有1 mg荧光黄和1
mg碱性湖蓝BB的95%乙醇溶液。
实验装置
薄层色谱 柱层析
实验步骤
点样
----薄层色谱
1.分别在距一端1 cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。
2.取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起点上点1% 的偶氮苯的甲苯溶液和1%的苏丹Ⅲ甲苯溶液两个样点，样点间相 距1～1.5 cm。
3.如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点 干燥后进行。样点直径不应超过2 mm。
上样
3.当溶剂液面刚好流至石英砂面时，立即沿柱壁加入1 mL已配好的含 有1 mg荧光黄与1 mg碱性湖蓝BB的95%的乙醇溶液，当此溶液流至 接近石英砂面时，立即用0.5 mL 95%乙醇溶液洗下管壁的有色物质， 如此连续2～3次，直至洗净为止。然后在色谱柱上装置滴液漏斗，用 95%乙醇作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前。 4.蓝色的碱性湖蓝 BB因极性小，首先向柱下移动，极性较大的荧光 黄则留在柱的上端。当蓝色的色带快洗出时，更换另一接收器，继续 洗脱，至滴出液近无色为止，再换一接收器。改用水作洗脱剂至黄绿 色的荧光黄开始滴出，用另一接收器收集至绿色全部洗出为止，分别 得到两种染料的溶液。