化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则
2020年版《中国药典》通则调整—9101 药品质量标准分析方法验证指导原则
2020年版《中国药典》通则调整—9101 药品质量标准分析方法验证指导原则（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）药品质量标准分析方法验证（analytical method validation）的目的是证明采用建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行验证。
质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法，其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同，所以可参照本指导原则进行，但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑；相对于理化分析方法而言，生物学测定方法存在更多的影响因素，因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。
验证的分析项目有：鉴别试验、限量或定量检查、原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等，中药中其他残留物、添加剂等）的测定。
药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测定方法也应进行必要验证。
鉴别试验、杂质测定（限度或定量分析）、含量测定和特性参数（如：药物溶出度、释放度等）。
验证的指标有：专属性、准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
在分析方法验证中，须用标准物质进行试验。
由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。
表1 中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。
方法验证内容如下。
三一、专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。
鉴别反应、杂质检査和含量测定方法，均应考察其专属性。
如方法专属性不强，应采用多种不同原理的方法予以补充。
1.鉴别反应应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。
不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈阴性反应。
9 指导原则解读系列专题 化学药物质量控制分析方法验证的原则和要求_成海平
C h i n e s e J o u r n a l o f N e wD r u g s 2009,18(8)中国新药杂志2009年第18卷第8期[作者简介] 成海平,男,硕士,副主任药师,主要从事化学药品技术审评工作。
联系电话:(010)68585566-470,E -m a i l :c h e n g h p @c d e .o r g .c n 。
·新药申报与审评技术·★指导原则解读系列专题(七)化学药物质量控制分析方法验证的原则和要求成海平(国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京100038) [摘要] 质量控制分析方法验证是质量研究的主要内容,也是质量标准各检测项目分析方法制订的基础。
在审评工作中发现分析方法验证方面存在着各类问题,如方法验证设计不科学、验证不充分、实验过程不规范、验证数据不合理等等。
文中以鉴别、杂质检查、定量测定等为例,提出了分析方法验证的原则和要求,并分析了申报资料中常见的问题,以期更好地服务于分析方法验证工作。
[关键词] 化学药物;验证;分析方法[中图分类号]R 95 [文献标识码]C [文章编号]1003-3734(2009)08-0688-03P r i n c i p l e s a n d r e q u i r e m e n t s f o r v a l i d a t i o no f a n a l y t i c a l p r o c e d u r e sC H E N GH a i -p i n g(S F D A C e n t e r f o r D r u g E v a l u a t i o n ,B e i j i n g 100038,C h i n a )[A b s t r a c t ] V a l i d a t i o n o f a n a l y t i c a l p r o c e d u r e s i s t h e f o u n d a t i o n o f d e v e l o p i n g s p e c i f i c a t i o n s ,b u t t h e r e a r e s t i l l a l o t o f p r o b l e m s i n d e s i g n o f t e s t s ,p r o c e s s o f t e s t s a n d e v a l u a t i o n o f r e s u l t s .T h i s a r t i c l e d e s c r i b e d h o wt o v a l i -d a t e a n a l y t i c a l p r o c e d u r e s i n i d e n t i f i c a t i o n a n d a s s a y f o r i m p u r i t i e s .[K e y w o r d s ] c h e m i c a l d r u g s ;v a l i d a t i o n ;a n a l y t i c a l p r o c e d u r e s 质量控制分析方法验证就是基于质量标准中检测项目在质控方面所起的作用,确定检测项目所用分析方法需要验证的内容,并通过设计合理的实验,验证所用分析方法的科学性、准确性和合理性,选择和确立质量标准中各检测项目的分析方法,达到有效控制药品质量的过程。
9101药品质量标准分析方法验证指导原则
9101药品质量标准分析⽅法验证指导原则9101 药品质量标准分析⽅法验证指导原则药品质量标准分析⽅法验证（analytical method validation）的⽬的是证明采⽤建⽴的⽅法适合于相应检测要求。
在建⽴药品质量标准时，分析⽅法需经验证；在药品⽣产⼯艺变更、制剂的组分变更、原分析⽅法进⾏修订时，则质量标准分析⽅法也需进⾏验证。
在建⽴药品质量标准、变更药品⽣产⼯艺或制剂组分、修订原分析⽅法时，需对分析⽅法进⾏①已有重现性验证，不需验证中间精密度。
②如⼀种⽅法不够专属，可⽤其他分析⽅法予以补充。
③视具体情况予以验证。
⼀⼆、准确度准确度系指采⽤该所建⽴⽅法测定的结果与真实值或参⽐值接近的程度，⼀般⽤回收率（%）表⽰。
准确度应在规定的线性范围内测定试验。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
1.化学药含量测定⽅法的准确度原料药采⽤对照品可⽤已知纯度的对照品或供试品进⾏测定，或⽤本法所得所测定结果与已知准确度的另⼀个⽅法测定的结果进⾏⽐较。
制剂可在处⽅量空⽩辅料中，加⼊已知量被测物对照品进⾏测定。
如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加⼊已知量的被测物进⾏测定，或⽤所建⽴⽅法的测定结果与已知准确度的另⼀种个⽅法测定结果进⾏⽐较。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
对⾊谱⽅法⽽⾔，绝对（或定量）校正因⼦是指单位⾯积的⾊谱峰代表的待测物质的量。
待测定物质与所选定的参照物质的绝对校正因⼦之⽐，即为相对校正因⼦。
相对校正因⼦计算法常应⽤于化学药有关物质的测定、中药材及其复⽅制剂中多指标成分的测定。
校正因⼦的表⽰⽅法很多，本指导原则中的校正因⼦是指⽓相⾊谱法和髙效液相⾊谱法中的相对重量校正因⼦。
相对校正因⼦可采⽤替代物（对照品）和被替代物（待测物）标准曲线斜率⽐值进⾏⽐较获得；采⽤紫外吸收检测器时，可将替代物（对照品）和被替代物（待测物）在规定波长和溶剂条件下的吸收系数⽐值进⾏⽐较，计算获得。
9101药品质量标准分析方法验证指导原则
9101 药品质量标准分析方法验证指导原则药品质量标准分析方法验证（analytical method validation）的目的是证明采用建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行①已有重现性验证，不需验证中间精密度。
②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。
③视具体情况予以验证。
一二、准确度准确度系指采用该所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率（%）表示。
准确度应在规定的线性范围内测定试验。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
1.化学药含量测定方法的准确度原料药采用对照品可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，或用本法所得所测定结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。
制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测定。
如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一种个方法测定结果进行比较。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
对色谱方法而言，绝对（或定量）校正因子是指单位面积的色谱峰代表的待测物质的量。
待测定物质与所选定的参照物质的绝对校正因子之比，即为相对校正因子。
相对校正因子计算法常应用于化学药有关物质的测定、中药材及其复方制剂中多指标成分的测定。
校正因子的表示方法很多，本指导原则中的校正因子是指气相色谱法和髙效液相色谱法中的相对重量校正因子。
相对校正因子可采用替代物（对照品）和被替代物（待测物）标准曲线斜率比值进行比较获得；采用紫外吸收检测器时，可将替代物（对照品）和被替代物（待测物）在规定波长和溶剂条件下的吸收系数比值进行比较，计算获得。
54. 数据要求在规定范围内，取同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，用至少测定6份样品的结果进行评价；或设计*此表源自AOAC《Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals》二三、精密度精密度系指在规定的测定条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
9101 药品质量标准分析方法验证指导原则
9101 药品质量标准分析方法验证指导原则药品质量标准分析方法验证（analytical method validation）的目的是证明采用建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行①已有重现性验证，不需验证中间精密度。
②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。
③视具体情况予以验证。
一二、准确度准确度系指采用该所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率（%）表示。
准确度应在规定的线性范围内测定试验。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
1.化学药含量测定方法的准确度原料药采用对照品可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，或用本法所得所测定结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。
制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测定。
如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一种个方法测定结果进行比较。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
对色谱方法而言，绝对（或定量）校正因子是指单位面积的色谱峰代表的待测物质的量。
待测定物质与所选定的参照物质的绝对校正因子之比，即为相对校正因子。
相对校正因子计算法常应用于化学药有关物质的测定、中药材及其复方制剂中多指标成分的测定。
校正因子的表示方法很多，本指导原则中的校正因子是指气相色谱法和髙效液相色谱法中的相对重量校正因子。
相对校正因子可采用替代物（对照品）和被替代物（待测物）标准曲线斜率比值进行比较获得；采用紫外吸收检测器时，可将替代物（对照品）和被替代物（待测物）在规定波长和溶剂条件下的吸收系数比值进行比较，计算获得。
54. 数据要求在规定范围内，取同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，用至少测定6份样品的结果进行评价；或设计*此表源自AOAC《Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals》二三、精密度精密度系指在规定的测定条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
药品质量标准分析方法验证(1)
开后用适当的显色剂进行 显色，可以增强 TLC鉴别法的专属性。 TLC分离系统，尽管为了保证药品的鉴别试验，可能仍然需要对色谱
条件的分离能力进行规定。如果出于保证鉴别试验准确的目的，在鉴 别项下会规定分离度要求。 如果适用的话，纯度检查项下的TLC系统更适于作为鉴别方法。用于 鉴别试验的供试品溶液和对照品溶液的浓度应适当降低，使点样量在 5~20ug。有时可能需要将某个通用检测系统变更为更有区分力的检 测系统。
13
③ 视具体情况予以验证。
1．鉴别反应 各论中鉴别项目的目的就是为待测物质的真伪鉴定提供确证信息。 鉴别方法要保证具有可能好的专属性。应能与可能共存的物质或结构
相似化合物区分。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。 不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物（活性物
质和辅料能被区分开来），均应呈负反应。 IR：结晶水、同类物质、结晶溶剂 一个物质的紫外光谱极少能独立成为鉴别的判断依据。比值的专属更
医学ppt
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三、专属性
3、含量测定 含量测定目的是得到供试品中被分析物的含量
或效价的准确结果。 在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定
可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果 是否受干扰，并与未加杂质和辅料的供试品比 较测定结果。
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三、专属性
3、含量测定 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个
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三、专属性
2．杂质检查 在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过
与另一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较 强分辨能力的方法进行结果比较来确定。或将供试品 用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法 进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后 检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测 和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。
2020年版《中国药典》通则调整—9101 药品质量标准分析方法验证指导原则2
2020年版《中国药典》通则调整—9101 药品质量标准分析方法验证指导原则（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）药品质量标准分析方法验证（analytical method validation）的目的是证明采用建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行验证。
质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法，其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同，所以可参照本指导原则进行，但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑；相对于理化分析方法而言，生物学测定方法存在更多的影响因素，因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。
验证的分析项目有：鉴别试验、限量或定量检查、原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等，中药中其他残留物、添加剂等）的测定。
药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测定方法也应进行必要验证。
鉴别试验、杂质测定（限度或定量分析）、含量测定和特性参数（如：药物溶出度、释放度等）。
验证的指标有：专属性、准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
在分析方法验证中，须用标准物质进行试验。
由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。
表1 中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。
表1 检验项目和验证指标方法验证内容如下。
三一、专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。
鉴别反应、杂质检査和含量测定方法，均应考察其专属性。
如方法专属性不强，应采用多种不同原理的方法予以补充。
1.鉴别反应应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。
化学药物分析方法验证的内容和评价
化学药物分析方法验证的内容和评价质量可控是活性化合物成药及进行药品安全有效性评价的前提。
对药品的质量进行控制应该是多方面的，其中包括生产环境的控制、原辅料来源和质量的控制、生产工艺过程的控制，以及按照质量标准进行成品检验控制等。
但是，在药品研发过程中，揭示药品的品质、控制药品的质量，通常是要针对研制药品的特性 (主药的理化性质及制剂的质量要求等 )确定相应的研究测试项目，再根据测试项目的需要，建立适宜的分析方法 (包括方法的选择和方法的验证 )，最后是根据药品质量的要求及安全性研究结果确定各测试项目的限度，起草制订检验药品质量的质量标准。
分析方法是揭示药品品质的工具和手段，方法验证是判断采用的分析方法是否科学、可行的过程。
实际上，方法验证就是根据确定的检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。
下面就根据《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》解读分析方法验证的内容和评价要点，在对目前申报资料中分析方法验证工作中存在的问题进行分析的基础上，以高效液相色谱法为例，阐述方法验证的思路及验证要点，希望能对药物研发者有所帮助。
一、方法验证的内容首先应该明确的是：方法验证的内容应根据检测项目的要求，同时结合所采用的分析方法的特点确定。
相同的分析方法用于不同的检测项目时，其验证要求是不同的。
例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量检查时的验证要求是不同的；前者重点要验证方法的专属性，而后者重点要验证方法的专属性、准确度和定量限。
通常需要验证的检测项目：鉴别、杂质检查 (限度试验、定量试验 )、定量测定 (含量测定、溶出度、释放度等 )，还有其他特定的检测项目 (粒径分布、分子量分布)等。
方法验证的内容包括专属性、线性、范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性 (粗放度 )和系统适用性等。
1、专属性专属性系指在其他成分 (如杂质、降解物、辅料等 )存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被测物的特性。
最新化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则汇编
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则一、概述⏹保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。
为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。
一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的要求，这就是通常所说的对方法进行验证。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。
⏹从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。
⏹方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。
⏹只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。
方法验证是药物研究过程中的重要内容。
二、方法验证的一般原则⏹原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。
⏹方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。
⏹同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。
例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。
三、方法验证涉及的三个主要方面⏹（一）需要验证的检测项目⏹鉴别、⏹杂质检查⏹定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）、⏹其他特定检测项目（分子量及分子量分布、生物活性等）⏹鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。
⏹杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。
杂质检查可分为限度试验和定量试验两种情况。
用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。
(整理)化学药品原料药质量研究和质量标准制定指导原则.
化学药品原料药质量研究和质量标准制定指导原则（试行）。
化学药品制剂质量研究和质量标准制定指导原则（试行）。
化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》（试行【H 】G P H 3 - 1 指导原则编号：化学药物杂质研究技术指导原则（第二稿）二ΟΟ 四年三月十八日目录一、概述 (2)二、杂质的分类 (2)三、分析方法 (3)（一）、分析方法的选择 (4)１、有机杂质的分析方法 (4)２、无机杂质的分析方法 (4)（二）、分析方法的验证 (5)（三）、有机杂质的定量方式 (7)四、杂质检测数据的积累 (8)五、杂质限度的制订 (10)（一）、有机杂质的限度确定 (11)1、创新药物 (11)2、仿制已有国家标准的药品 (12)3、其它新药 (13)（二）、无机杂质的限度确定 (13)六、临床研究申请与上市生产申请阶段的杂质研究[6][7] (14)七、结语 (15)八、名词解释 (15)九、附件 (15)十、参考文献 (17)十一、起草说明 (17)十二、著者 (19)1一、概述任何影响药物纯度的物质统称为杂质。
杂质的研究是药品研发的一项重要内容。
它包括选择合适的分析方法，准确地分辨与测定杂质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度。
这一研究贯穿于药品研发的整个过程。
由于药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关外，还与药品中的杂质有关。
例如，青霉素等抗生素中的多聚物等高分子杂质是引起过敏的主要原因。
所以规范地进行杂质的研究，并将杂质控制在一个安全、合理的范围之内，将直接关系到上市药品的质量及安全性。
本指导原则是在参考国外相关指导原则的基础上，结合我国新药研发的实际情况制定的。
目的是为我国的药品研究提供有益的指导，从而提高药品的质量，保证人民的用药安全。
由于新药研究是探索性很强的工作，每种药品的具体研究情况差异很大，本指导原则不能涵盖杂质研究的所有情况，故仅提供了一个基本的研究思路和方法。
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则一、概述保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中,对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。
为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。
普通地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证, 以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法进行验证。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。
从本质上讲,方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容,并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求.方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部份。
惟独经过验证的分析方法才干用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。
方法验证是药物研究过程中的重要内容。
本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何科学合理地进行论证方案的设计。
本指导原则主要包括方法验证的普通原则、方法验证涉及的三个主要方面、方法验证的具体内容、对方法验证的评价等内容。
本原则与其他相关技术指导原则一起构成较完整的质量控制指导原则。
随着我国新药研发水平的不断提高，对方法验证的认识也会不断深入，本指导原则将会逐步完善和修订。
由于生物制品和中药的特殊性，本原则主要合用于化学药品。
二、方法验证的普通原则原则上每一个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。
方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。
同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求.例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证,前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限.三、方法验证涉及的三个主要方面(一)需要验证的检测项目检测项目是为控制药品质量，保证安全有效而设定的测试项目。
9101-药品质量分析方法验证指导原则
0 . 0 1%
0 . 1%
二 ㊁ 精密度
品 , 经多次取样测定所得结果之间的接近程度 ㊂ 精密度一 般 用偏差 ㊁ 标准偏差或相对标准偏差表示 ㊂ 在相同条件下 , 由同一个分析人员测定所得结果的精 密 精密度系指 在 规 定 的 测 试 是 条 件 下 , 同 一 个 均 匀 供 试
/ 1 0 m) g g( p p μ / ) 1 0 k b g g( p p μ / 1μ g g
收率 ( %) 计 算 值 , 以 及 回 收 率 ( %) 的 相 对 标 准 偏 差
如 , 建立药典分析方 法 时 , 通 过 协 同 检 验 获 得 重 现 性 结 果 ㊂ 协同检验的 目 的 ㊁ 过 程 和 重 现 性 结 果 均 应 记 载 在 起 草 说 明 中 ㊂ 应注意重现性试验用样品质量的一致性及贮存运输中 的 环境对该一致性的影响 , 以免影响重现性结果 ㊂ 4 . 数据要求
的供试品 , 用至少测定 6 次的结果进行评价 ; 或设计 3 个 不 个测定结果进行评价 ㊂ 对于化学药 , 一般中间浓度加入量 与 中 ㊁ 低浓度对照品加入量与所取供试品中待测定成分量之 比 控制在 1 . 2ʒ1,1ʒ1,0 . 8ʒ1 左 右 , 应 报 告 已 知 加 入 量 的 , 或测定结 果 平 均 值 与 真 实 值 之 差 及 其 相 对 标 回收率 ( %) 准偏差或置信度 ( 又称置信水平 , 是指以测量值为中 心 , 在 一定范围内 , 真实值出现在该范围内的几率 , 通常情况下 置 ; 可信 限 ; 对 于 中 药 , 一 般 中 间 浓 度 信度的设定值是 9 5% ) 建议高 ㊁ 中 ㊁ 低浓度对照品加入量与所取供试品中待测定 成 分量之比控制在 1 . 5ʒ1,1ʒ1,0 . 5ʒ1 左 右 , 应 报 告 供 试 品取样量 ㊁ 供试品中含有量 ㊁ 对照品加入量 ㊁ 测定结果 和 回 ( R S D% ) 或置信度对于 校 正 因 子 , 应 报 告 测 定 方 法 ㊁ 测 定 结果和 R S D% ㊂ 样品 中 待 测 定 成 分 含 量 和 回 收 率 限 度 关 系 可参考表 2㊂ 在复杂基质 痕 量 组 分 ( <0 . 0 1% ) 和 超 痕 量 组 分 ( 约0 . 0 0 0 1% ) 及 其 多 成 分 的 分 析 中 , 回 收 率 限 度 可 适 当放宽 ㊂ 表 2 样品中待测定成分含量和回收率限度
方法学验证指导原则
一、准确度准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％)表示。
准确度应在规定的范围内测定。
1.化学药含量测定方法的准确度原料药采用对照品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。
制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测定。
如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加人已知量的被测物对照品进行测定，或用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一种方法测定结果进行比较。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
2.化学药杂质定量测定的准确度可向原料药或制剂处方量空白辅料中加人已知量杂质进行测定。
如不能得到杂质或降解产物对照品，可用所建立方法测定的结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。
在不能测得杂质或降解产物的校正因子或不能测得对主成分的相对校正因子的情况下，可用不加校正因子的主成分自身对照法计算杂质含量。
应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（％) 或面积比（％)。
3.中药化学成分测定方法的准确度可用对照品进行加样回收率测定，即向已知被测成分含量的供试品中再精密加人一定量的被测成分对照品，依法测定。
用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。
在加样回收试验中须注意对照品的加人量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。
回收率：％= (C - A ) /S X 100%式中：A为供试品所含被测成分量；B 为加入对照品量；C 为实测值。
4.校正因子的准确度对色谱方法而言，绝对（或定量）校正因子是指单位面积的色谱峰代表的待测物质的量。
待测定物质与所选定的参照物质的绝对校正因子之比，即为相对校正因子。
相对校正因子计算法常应用于化学药有关物质的测定、中药材及其复方制剂中多指标成分的测定。
校正因子的表示方法很多，本指导原则中的校正因子是指气相色谱法和髙效液相色谱法中的相对重量校正因子。
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指导原则编号：【H】G P H 5-1化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则二○○五年三月目 录一、概述 (1)二、方法验证的一般原则 (2)三、方法验证涉及到的三个主要方面 (2)（一）需要验证的检测项目 (2)（二）分析方法 (3)（三）验证内容 (3)四、方法验证的具体内容 (3)（一）专属性 (3)1、鉴别反应 (4)2、杂质检查 (4)3、含量测定 (4)（二）线性 (5)（三）范围 (5)1、含量测定 (6)2、制剂含量均匀度 (6)3、溶出度或释放度 (6)4、杂质 (6)（四）准确度 (6)1、含量测定 (7)2、杂质定量试验 (7)（五）精密度 (7)1、重复性 (8)2、中间精密度 (8)3、重现性 (8)（六）检测限 (8)1、直观法 (8)2、信噪比法 (9)（七）定量限 (9)1、直观法 (9)2、信噪比法 (9)（八）耐用性 (10)（九）系统适用性试验 (10)五、方法再验证 (11)六、方法验证的评价 (12)（一）有关方法验证评价的一般考虑 (12)（二）方法验证的整体性和系统性 (12)七、参考文献 (13)八、著者 (13)化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则一、概述保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。
为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。
一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法进行验证。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。
从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。
方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。
只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。
方法验证是药物研究过程中的重要内容。
本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何科学合理地进行论证方案的设计。
本指导原则主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉及的三个主要方面、方法验证的具体内容、对方法验证的评价等内容。
本原则与其他相关技术指导原则一起构成较完整的质量控制指导原则。
随着我国新药研发水平的不断提高，对方法验证的认识也会不断深入，本指导原则将会逐步完善和修订。
由于生物制品和中药的特殊性，本原则主要适用于化学药品。
二、方法验证的一般原则原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。
方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。
同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。
例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。
三、方法验证涉及的三个主要方面（一）需要验证的检测项目检测项目是为控制药品质量，保证安全有效而设定的测试项目。
根据检测项目的设定目的和验证内容的不同要求，本指导原则将需验证的检测项目分为鉴别、杂质检查（限度试验、定量试验）、定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）、其他特定检测项目等四类。
鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。
杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。
杂质检查可分为限度试验和定量试验两种情况。
用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。
用于定量试验的分析方法验证强调专属性、准确度和定量限。
定量测定包括含量测定、制剂的溶出度测定等，由于此类项目对准确性要求较高，故所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性。
其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布等，由于这些检测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。
（二）分析方法本指导原则所指分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方法，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验、供试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算及测试结果的报告等。
测试方法可采用化学分析方法和仪器分析方法。
这些方法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目，但验证内容可不相同。
（三）验证内容验证内容包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性和系统适用性等。
四、方法验证的具体内容（一）专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。
通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。
如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。
1、鉴别反应鉴别试验应确证被分析物符合其特征。
专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。
2、杂质检查作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量，如有关物质、重金属、有机溶剂等。
因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。
在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。
在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。
或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。
必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。
3、含量测定含量测定目的是得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。
在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的供试品比较测定结果。
在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比较，对比两种方法测定的结果。
也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。
必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。
（二）线性线性系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度。
线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。
应在设计的测定范围内测定线性关系。
可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备5个浓度。
以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。
必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算，并说明依据。
（三）范围范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物高低限浓度或量的区间。
范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的范围和试验方法。
可以采用符合要求的原料药配制成不同的浓度，按照相应的测定方法进行试验。
范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）表达。
涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。
范围应根据剂型和（或）检测项目的要求确定。
1、含量测定范围应为测试浓度的80％～100％或更宽。
2、制剂含量均匀度范围应为测试浓度的70％～130％。
根据剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，必要时，范围可适当放宽。
3、溶出度或释放度对于溶出度，范围应为限度的±20％；如规定限度范围，则应为下限的-20％至上限的+20％。
对于释放度，如规定限度范围为，从1小时后为20％至24小时后为90％，则验证范围应为0～110％。
4、杂质杂质测定时，范围应根据初步实测结果，拟订出规定限度的±20％。
如果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。
（四）准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。
有时也称真实度。
一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。
准确度应在规定的范围内建立，对于制剂一般以回收率试验来进行验证。
试验设计需考虑在规定范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即测定9次，报告已知加入量的回收率（％）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。
1、含量测定原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。
制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。
如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。
2、杂质定量试验杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。
如果不能得到杂质，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法。
如不能测得杂质的相对响应因子，可在线测定杂质的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。
并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（％）或面积比（％）。
（五）精密度精密度系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。
精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。
用标准偏差或相对标准偏差表示时，取样测定次数应至少6次。
精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。
1、重复性重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度。
重复性测定可在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的试样，各测定3次，或100％的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。
2、中间精密度中间精密度系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。
验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。
3、重现性指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。
当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。