福林酚实验
福林酚法测定多酚含量原理
福林酚法测定多酚含量原理
福林酚法是一种测定多酚含量的方法。
福林是一种具有还原性的酚类
物质，可以与多酚反应生成具有蓝色，紫色，红色等吸光度较高的络合物。
该方法的原理基于福林与多酚之间的氧化还原反应。
福林酚法的测定步骤如下：
1.加样：取适量待测样品，放入试管中。
2.福林试剂的配制：将适量的福林溶于适量的乙醇中，制成福林试剂。
3.加入福林试剂：将制备好的福林试剂加入试管中，与待测样品充分
混合。
4.氢氧化钠溶液的配制：将适量的氢氧化钠溶解于适量的蒸馏水中，
制成氢氧化钠溶液。
5.加入氢氧化钠溶液：将制备好的氢氧化钠溶液滴加到试管中，与混
合液充分混合。
6.开始反应：将试管加热，使福林与多酚之间的反应加速进行。
7.定时停止反应：经过一段时间后，停止加热反应。
8.冷却：待试管冷却后，测定反应液的吸光度。
9.测定吸光度：使用分光光度计等设备，测定反应液的吸光度。
10.计算：根据反应液的吸光度值，参照标准曲线，计算出待测样品
中多酚的含量。
福林酚法的原理是基于福林与多酚之间的氧化还原反应。
福林具有还原性，在碱性条件下，可以与多酚发生氧化还原反应。
福林通过氧化还原反应，可以将多酚从原来的无色状态转变为有色络合物。
反应过程中福林的还原能力会逐渐消耗，导致吸光度降低。
因此，反应液的吸光度与多酚的含量之间有一定的正比关系。
福林酚法的优点是操作简单，灵敏度高，对于多酚含量的测定具有一定的准确度和可靠性。
因此，福林酚法广泛应用于食品、医药、化妆品等领域中对多酚含量的测定。
福林酚比色法测多酚的原理
福林酚比色法测多酚的原理
福林酚比色法是一种测量多酚含量的常用方法，被广泛应用于食品、药品、环境科学等领域。
测定多酚含量的前提是需要一种可靠的检测方法。
福林酚比色法
就是一种比较准确、简单易操作的测定方法。
下面，我们就来分步骤
介绍一下福林酚比色法测多酚的原理。
第一步是制备样品溶液。
将待测物质粉碎后，精确称取适量溶于
乙醇水溶液中。
一般来说，常用的浓度为1mg/mL。
第二步是加入福林酚溶液。
福林酚是一种典型的显色试剂，可与
多酚类物质在酸性条件下形成复合物，产生显色反应。
福林酚通常是
在乙醇或乙醚中制备，其浓度为2%。
第三步是加入硼酸缓冲液。
硼酸缓冲液能够调节溶液的酸碱度，
将其控制在适宜范围内，从而保障显色反应的进行。
通常使用的硼酸
缓冲液为pH=1.0。
第四步是样品显色反应。
在上述条件下，多酚类物质与福林酚形
成复合物，产生显色反应。
显色的强度与待测物质中多酚含量成正比。
多酚类物质含量越高，显色的强度就越大。
第五步是光度计读数。
用光度计测量显色复合物的光密度。
根据
测量结果，可以计算出样品中多酚含量的浓度。
这个过程有两个注意点，一是在福林酚与多酚类物质反应的过程中必须保持样品溶液的稳
定性，二是读取的光谱值应该符合所选波长。
总的来说，福林酚比色法可以很好地测量多酚含量，具有操作简单、结果准确的优点。
因此，它被广泛应用于检测水果、茶叶、酒类、保健品等多种生物样品的多酚含量。
福林酚法测多酚含量的原理
福林酚法测多酚含量的原理多酚是一种重要的天然物质，具有多种生物活性和药理作用。
因此，测定多酚含量对于食品、药品、化妆品等领域具有重要意义。
福林酚法是一种常用的测定多酚含量的方法，本文将介绍福林酚法测多酚含量的原理。
一、福林酚法的基本原理福林酚法是以福林酚为试剂，测定多酚含量的方法。
福林酚是一种酚类化合物，可以和多酚发生氧化反应，生成深褐色的产物，其吸光度与多酚的含量成正比。
因此，通过测定深褐色产物的吸光度，可以计算出多酚的含量。
二、福林酚法的步骤福林酚法的具体步骤如下：1.制备福林酚试剂：将福林酚和氢氧化钠混合，加入水中搅拌至完全溶解。
2.制备标准曲线：取一定浓度的多酚标准品，加入福林酚试剂，混合均匀后，测定吸光度。
根据吸光度和多酚标准品的浓度，绘制标准曲线。
3.测定样品：取一定量的样品，加入福林酚试剂，混合均匀后，测定吸光度。
根据标准曲线，计算出样品中多酚的含量。
三、福林酚法的优缺点福林酚法测多酚含量具有以下优点：1.简单易行：福林酚法的操作简单，不需要复杂的仪器和技术。
2.灵敏度高：福林酚法对多酚的检测灵敏度高，可以检测到微量的多酚。
3.稳定性好：福林酚试剂具有较好的稳定性，可以长期保存。
但福林酚法也存在一些缺点：1.受干扰：福林酚法对一些物质具有交叉反应，如还原糖、蛋白质等，会对多酚含量的测定造成干扰。
2.适用性有限：福林酚法只适用于测定含有酚羟基的多酚，对于不含酚羟基的多酚无法测定。
四、福林酚法的应用举例福林酚法广泛应用于食品、药品、化妆品等领域的多酚含量测定。
以下是一些应用举例：1.测定茶叶中多酚含量：茶叶中含有大量的多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估茶叶的品质和功效。
2.测定葡萄酒中多酚含量：葡萄酒中含有丰富的多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估葡萄酒的品质和营养价值。
3.测定化妆品中多酚含量：化妆品中含有多种多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估化妆品的功效和安全性。
福林酚法测蛋白质含量 蛋白质含量的测定
福林酚法测蛋白质含量蛋白质含量的测定蛋白质是生命的物质基础，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。
因此，准确测定蛋白质的含量在生物化学、临床医学、食品科学等领域都具有重要的意义。
福林酚法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它具有灵敏度高、准确性好等优点。
接下来，让我们详细了解一下福林酚法测蛋白质含量的原理、操作步骤以及注意事项。
一、福林酚法的原理福林酚法的基本原理是基于蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子形成络合物，然后此络合物将磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色的化合物。
蓝色化合物的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，通过比色法即可测定蛋白质的含量。
具体来说，首先在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜离子反应生成紫色的络合物。
然后，加入福林酚试剂，福林酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸被络合物中的铜离子还原，生成蓝色的混合物。
蓝色的深浅与蛋白质的量成正比，通过分光光度计在一定波长下测定吸光度，就可以计算出蛋白质的含量。
二、实验材料和仪器1、实验材料标准蛋白质溶液：通常使用牛血清白蛋白（BSA）配制一系列不同浓度的标准溶液。
待测蛋白质样品：需要测定含量的蛋白质溶液。
福林酚试剂：由 A 液和 B 液组成，使用前按一定比例混合。
碱性铜溶液：包括碳酸钠、氢氧化钠和硫酸铜等成分。
2、实验仪器分光光度计：用于测定溶液的吸光度。
移液器：准确移取不同体积的溶液。
容量瓶：用于配制标准溶液和待测样品溶液。
离心管：用于离心样品。
恒温水浴锅：控制反应温度。
三、实验操作步骤1、标准曲线的绘制准备一系列不同浓度的标准蛋白质溶液，例如0、20、40、60、80、100 μg/mL 的 BSA 溶液。
分别取不同浓度的标准蛋白质溶液 1 mL 于试管中，加入 5 mL 碱性铜溶液，摇匀，在室温下放置 10 分钟。
然后加入 05 mL 福林酚试剂，立即摇匀，在 30 60 分钟内，以空白管（即只加试剂但不加蛋白质溶液的试管）为对照，在分光光度计上于 650 nm 波长处测定吸光度。
实验四福林—酚试剂法测定血清总蛋白
思考题
什么叫标准曲线？
绘制标准曲线有何实用意义？
➢ 实验项目 ➢ 实验原理 ➢ 试剂和器材 ➢ 操作方法（主要步骤） ➢ 结果分析 ➢ 思考题
预习
实验五 酶法测血清葡萄糖
标准管对照法
选一管与待测管吸光度相近的作为标准
管，根据公式计算：
待测血清蛋白含 量=
（g/L）
A待测 ×C标准 × V标准 ×500
A标准
V待测
注： V标准为标准管加入标准蛋白质的体积 V待测为待测管加入的待测血清的体积
实验结果标准管来自待测管管号 OD660nm
1
2
3
4
5
6
7
0 0.121 0.250 0.335 0.440 0.525 0.320
ε：摩尔吸光系数 A：物质的吸光度 l：液层的厚度 c：溶液的浓度
标准曲线法
在分光光度计测定范围内，配制一系列已知不 同浓度的标准溶液，在特定波长条件下分别测出 其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，相应的溶液 浓度为横坐标在坐标纸上作出一条吸光度与浓度 成正比，并且通过原点的直线，即标准曲线，也 称C-A曲线
空白 (1)
(2) (3)
(4)
(5)
(6)
待测管 （7）
标准蛋白溶液(250µg/ml) -- 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 —
待测血清 蒸馏水 试剂甲
— — — — — — 1.0
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
--
3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
混匀后室温放置20分钟
人血清中蛋白质的正常范围为60-80g/L
标准曲线法比标准管法精确，可消除 各种原因引起的偏离吸收定律而造成的 误差，但是制作比较费时。
生化实验报告 福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验目的：利用福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度。
实验原理：福林-酚试剂法是一种常用的蛋白质定量方法。
该方法利用在碱性条件下，蛋白质和福林-酚试剂在高温下反应生成可溶性淡红色复合物，其最大吸收峰位于560 nm。
该复合物的吸光度与蛋白质的浓度呈线性关系，可以通过比较不同浓度蛋白质标准溶液的吸光度来测定待测蛋白质的浓度。
实验步骤：1. 准备蛋白质标准溶液：称取不同浓度的蛋白质标准溶液（如1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL等）分别加入福林-酚试剂，使得最终浓度为0.2 mg/mL，并用称重瓶搅拌均匀。
2. 制备待测蛋白质样品：将待测蛋白质样品溶解在适量的缓冲液中，使其浓度在标准曲线的线性范围内。
3. 加入福林-酚试剂：取相同体积的蛋白质标准溶液和待测蛋白质样品分别加入福林-酚试剂，并用试管架将其放入预热至60°C的水浴中反应15分钟。
4. 冷却：将试管从水浴中取出，放置到冰水中冷却至室温。
5. 测定吸光度：使用分光光度计将各个标准溶液和待测样品的吸光度分别置于560 nm处测量。
6. 建立标准曲线：依次将标准溶液的吸光度值绘制于纵轴，浓度值绘制于横轴，得到标准曲线。
7. 测定样品浓度：根据待测样品的吸光度值和标准曲线，确定其蛋白质浓度。
实验注意事项：1. 确保福林-酚试剂无色，否则应更换新的试剂。
2. 需要在60°C的水浴或恒温器中对试剂进行反应，确保反应温度稳定。
3. 温度过高或过低都会影响测定的准确性，应控制好试管在水浴中的时间。
4. 标准曲线的制备需要使用不同浓度的标准溶液，并且至少应包含一组空白对照组。
5. 测定待测样品时，应确保其在线性范围内，并尽量重复测定。
实验结果：根据实验步骤中的吸光度测定值和标准曲线的关系，可以得到样品中蛋白质的浓度。
实验结论：利用福林-酚试剂法可以测定蛋白质的浓度。
该方法简单、快速、灵敏度高，适用于常规蛋白质浓度的测定。
蛋白质的定量测定――福林酚法(Folin―酚试剂法)
蛋白质的定量测定――福林酚法(Folin―酚试剂法)实验原理Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。
以后在生物化学领域得到广泛的应用。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这个方法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时较长，要严格控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
凡干扰双缩脲反应的基团，如 -CO-NH2, -CH2-NH2, CS-NH2以及Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物均可干扰Folin—酚反应，而且对后者的影响还要大得多。
此外，酚类、柠檬酸对此反应也有干扰作用。
Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。
乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。
此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。
本法可测定范围是25—250μg蛋白质。
试剂和器材一、试剂Folin—酚试剂:试剂甲：1) 4%碳酸钠溶液2) 0.2mol/L氢氧化钠溶液3) 1%硫酸铜溶液4) 2%酒石酸钾钠溶液。
临用前将（1）与（2）等体积配制碳酸钠—氢氧化钠溶液。
（3）与（4）等体积配制成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液。
然后这两种试剂按50:1的比例配合，即成Folin—酚试剂甲。
此试剂临用前配制，一天内有效。
试剂乙：称钨酸钠（Na2WO2?2H2O）100g，钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）25g置2000mL磨口回流装置内，加蒸馏水700mL，85%磷酸50mL和浓硫酸100mL。
充分混匀，使其溶解。
小火加热，回流10h（烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出），再加入硫酸锂（LiSO4）150g，蒸馏水50mL及液溴数滴。
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验报告完整版
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
二、实验仪器分光光度计,试管,移液管,容量瓶，分析天平，烧杯三、实验试剂1.Folin-酚试剂甲：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂乙：将10g钨酸钠、2.5g钼酸钠、70ml蒸馏水、5ml85%磷酸继10ml浓盐酸置于150ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏1小时，再加入硫酸锂15g，蒸馏水5ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至100ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
标准蛋白质溶液：称取1g牛（人）血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥洁净的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
各管加入1mlFo1in 酚试剂乙后，立即摇匀，放置15分钟后比色，在500nm 处记下各管光密度，以0号管为对照，以吸光度为纵坐标，标准蛋白质溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线2.样品测定准确吸取样液于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
室温放置10分钟后，再各加1毫升Fo1in 酚试剂乙，立即摇匀，放置15分钟，在500nm 处测定光密度值。
五、实验结果管号试剂 1 2样液（ml ） 1.0 1.0Folin-酚试剂甲 5.0 5.0（ml ）标准曲线的绘制：蛋白质浓度0.00 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 吸光度0.000 0.079 0.215 0.264 0.346 0.450 0.493则根据y=5.5072x=0.325得x为0.05901，则样液的浓度为0.5901mg/ml.六、实验结果分析及思考1、试说明Folin-酚法的优缺点该方法较双缩脲法反应灵敏，与0.1mg/ml浓度的蛋白质样品亦可得到很好的显色反应，使用很广泛，但花费时间长，其干扰因素较多。
福林酚实验
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、目的熟悉并掌握福林（Folin）—酚法测定蛋白质浓度的原理和方法。
二、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管四、实验试剂1. Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2. Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l 的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3. 1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
0.10.20.30.40.450.5牛血清蛋白液OD500摇匀，在室温下放置30分钟后在500nm下比色0.50.50.50.50.50.50.50.5Folin-酚试剂B摇匀，在室温下放置10分钟0.5（样液）4.00.54.00.44.00.34.00.24.00.14.00.054.04.0(1mg/ml)ml蒸馏水ml Folin-酚试剂A样品7654321管号2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
福林(Folin)-酚试剂法测定
将参比样品溶液和被测样 品溶液分别倒入比色皿中， 打开样品室盖，将盛有溶 液的比色皿分别插入比色 皿槽中，盖上样品室盖。 一般情况下，参比样品放 在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入 光路中，在T方式下按“0 ％T”键，此时显示器显示 “000.0”
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比 色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标 作图。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下 表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求 出样液的蛋白质浓度。
管号 牛血清蛋白液 (1mg/ml)ml 蒸馏水ml 蒸馏水 Folin-酚试剂 酚试剂A 酚试剂
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优 缺点？
下次试验：氨基酸纸层析和维生素C 下次试验：氨基酸纸层析和维生素 定量测定-2， ，二氯酚靛酚法。 定量测定 ，6，二氯酚靛酚法。
附：7200型分光光度计的操作程序
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
生化实验报告-福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度
实验：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定二、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管三、实验试剂1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
五、实验数据1标准曲线的绘制2.样品测定右上表可知待测样液的蛋白质吸光度y=0.853,则由图可知x=0.104mg/ml故待测样液的蛋白质浓度为0.104mg/m l×5ml÷0.5ml=1.04mg/ml六、实验分析注意事项：1.在实验时，不要将牛血清蛋白和样液加反了；2.一定要注意实验的时间，因为溶液的光密度值是随着时间在不断增大的，如果时间超过了30分钟，则测得的光密度值就不准确了；3.由于分光光度计比较精密，所以往试管中加药品的时候要尽量做到准确；4.在使用分光光度计时，那比色皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污是测量值不准确；5.在擦拭比色皿时，要顺着一个方向擦；6.在比色皿中装入的液体量大约要是比色皿体积的三分之二。
福林酚_实验报告
1. 理解福林酚法测定蛋白质浓度的原理。
2. 掌握福林酚试剂的配制方法。
3. 学习使用分光光度计进行蛋白质定量分析。
4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理福林酚法是一种常用的蛋白质定量分析方法。
其原理基于蛋白质中的酪氨酸和色氨酸在碱性条件下与福林酚试剂反应，生成蓝色的复合物。
该复合物的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，通过比色法可以测定蛋白质的浓度。
三、实验材料1. 标准蛋白质溶液（已知浓度）2. 待测蛋白质溶液3. 福林酚试剂4. 碱性铜试剂5. 0.1mol/L NaOH溶液6. 0.85mol/L H2SO4溶液7. 10% TCA溶液8. 1%牛血清白蛋白溶液9. 7200型可见分光光度计10. 移液器11. 试管12. 烧杯13. 移液管14. 实验记录表格1. 福林酚试剂的配制a. 称取10g钨酸钠、2.5g钼酸钠，加入70ml蒸馏水。
b. 加入5ml 85%磷酸和10ml浓盐酸，充分混匀。
c. 将混合溶液转移至150ml磨口圆底烧瓶中，接上磨口冷凝管，回馏1小时。
d. 加入15g硫酸锂和5ml蒸馏水，混匀。
2. 蛋白质样品的处理a. 取0.1ml标准蛋白质溶液，加入1.9ml 0.1mol/L NaOH溶液，混匀。
b. 取0.1ml待测蛋白质溶液，加入1.9ml 0.1mol/L NaOH溶液，混匀。
c. 将混合溶液转移至试管中，加入0.5ml福林酚试剂，混匀。
d. 室温下放置5分钟。
3. 碱性铜试剂的加入a. 取0.5ml碱性铜试剂，加入上述混合溶液中，混匀。
b. 室温下放置10分钟。
4. 比色测定a. 使用7200型可见分光光度计，在660nm波长下，测定样品的吸光度。
b. 以1%牛血清白蛋白溶液为空白对照，进行校正。
5. 结果计算a. 根据标准蛋白质溶液的吸光度，绘制标准曲线。
b. 根据待测蛋白质溶液的吸光度，从标准曲线上查得蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：以标准蛋白质溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
福林酚法测定总酚含量-操作流程图-实验图解-李熙灿-Xican Li
福林酚法测定总酚含量-操作流程图2017.10【安全事项】本实验所用的福林酚试剂（或称Folin酚试剂、Folin-Ciocalteu试剂）有严重的腐蚀性。
【测定方法与操作流程图】【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Fl os Chrysanthemi Indici Protects against Hydroxyl-induced Damages to DNA and MSCs via Antioxidant Mechanism: A Chemistry Study. Journal of Saudi Chemical Society, 2015, 19, 454-460【溶液配制】(1)0.25mol/L 福林酚试剂的配制：取原装的福林酚试剂（浓度为2mol/L）2毫升，加蒸馏水14毫升，充分混合，得0.25mol/L的福林酚试剂,共16 毫升。
(2)15%Na2CO3溶液的配制：取Na2CO3•10 H2O溶3.0 克，溶于20毫升水中，混匀即得。
(3)连苯三酚1标准液的配制：精确称取连苯三酚标准品10毫克．用甲醇溶解并定容到50毫升，得0.2毫克/毫升的连苯三酚标准液。
(4)样品液的的配制：精确称取待测样品10毫克．用甲醇2溶解并定容到10毫升，得1毫克/毫升的样品液。
【连苯三酚标准曲线的绘制】0.2毫克/毫升样品液加样量(x毫升) 甲醇(05-x)A760值A760平均值SD0.000 0 0.50 0.030.0386670.0174421本文使连苯三酚作为标准品.当然,也可以使用咖啡酸、槲皮素、儿茶素、芦丁等作为标准品，绘制标准曲线。
2也可以用无水乙醇、95乙醇、水，视样品的溶解性而度。
福林酚法
Folin酚法测定蛋白酶活力(2009-06-16 18:03:47)转载标签：生物蛋白酶活力测定folin酚法原理杂谈分类：专业学习一、原理采用福林-酚试剂法。
福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。
因此可利用此原理测定蛋白酶活力。
通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。
二、试剂1) 福林-酚试剂向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO2•2H2O)、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及浓盐酸l00mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以小火回流10h，结束后再加入150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴液溴，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。
此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。
2) 0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液精确称取TCA65.4g，加去离子水定容至1000mL。
3) 0.4mo1/L碳酸钠溶液精确称取无水碳酸钠42.4g，加去离于水溶解后，定容至1000mL。
4) pH值3～6醋酸缓冲液精确取NaAc•3HO16g与268mL浓度为6mol/L醋酸溶液混合，用去离子水稀释定2容至1000mL。
5) 2%酪蛋白底物缓冲液a) 测试酸性蛋白酶缓冲液精确称取酪蛋白20g，加入0.1mol/L氢氧化钠20mL(用去离子水配制)，在水浴中加热溶解，然后用pH值3.6醋酸缓冲液定容至1000mL。
福林酚法测定总酚含量-操作流程图-实验图解-李熙灿-XicanLi
福林酚法测定总酚含量-操作流程图-实验图解-李熙灿-XicanLi福林酚法测定总酚含量-操作流程图2017.10【安全事项】本实验所⽤的福林酚试剂（或称Folin酚试剂、Folin-Ciocalteu试剂）有严重的腐蚀性。
【测定⽅法与操作流程图】【⽂献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Fl os Chrysanthemi Indici Protects against Hydroxyl-induced Damages to DNA and MSCs via Antioxidant Mechanism: A Chemistry Study. Journal of Saudi Chemical Society, 2015, 19, 454-460【溶液配制】(1)0.25mol/L 福林酚试剂的配制：取原装的福林酚试剂（浓度为2mol/L）2毫升，加蒸馏⽔14毫升，充分混合，得0.25mol/L的福林酚试剂,共16 毫升。
(2)15%Na2CO3溶液的配制：取Na2CO3?10 H2O溶3.0 克，溶于20毫升⽔中，混匀即得。
(3)连苯三酚1标准液的配制：精确称取连苯三酚标准品10毫克．⽤甲醇溶解并定容到50毫升，得0.2毫克/毫升的连苯三酚标准液。
(4)样品液的的配制：精确称取待测样品10毫克．⽤甲醇2溶解并定容到10毫升，得1毫克/毫升的样品液。
【连苯三酚标准曲线的绘制】1本⽂使连苯三酚作为标准品.当然,也可以使⽤咖啡酸、槲⽪素、⼉茶素、芦丁等作为标准品，绘制标准曲线。
2也可以⽤⽆⽔⼄醇、95⼄醇、⽔，视样品的溶解性⽽度。
图Folin酚法测定多酚含量的标准曲线（以连苯三酚为例,平⾏测三次）（以连苯三酚为例，A = 32.16733*C + 0.06012, R=0.998，线性范围：连苯三酚0.00-0.06毫克/毫升，A值在0.039-1.928之间）。
福林酚测定法
福林酚测定法试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g,加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，合并两液，并加水至500ml。
操作法⑴对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3ml的溶液。
⑵供试品溶液的制备照各药品项下的方法制备。
⑶标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴中10分钟，在650nm的波长处测定吸收度；同时以0号管作为空白。
以吸收度作为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。
⑷测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液起，依法测定，自标准曲线上查得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数。
二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A）10克 Na2CO3，2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。
溶解于500毫升蒸馏水中。
（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2 MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。
冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。
福林酚法测多酚实验报告
一、实验目的1. 掌握福林酚法测定多酚含量的原理和方法。
2. 了解实验操作步骤和注意事项。
3. 通过实验，学会使用可见分光光度计进行定量分析。
二、实验原理多酚类化合物是一类具有多个酚羟基的有机化合物，广泛存在于植物中。
福林酚法是一种常用的测定多酚含量的方法，其原理如下：在碱性条件下，多酚类化合物与福林酚试剂中的磷钼酸化合物反应，生成蓝色化合物。
蓝色的深浅与多酚含量成正比。
通过比色法，可测定样品中多酚的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 样品：茶叶、苹果、葡萄等富含多酚的植物提取物。
- 福林酚试剂：预先配制好。
- 磷钼酸试剂：预先配制好。
- 乙醇：分析纯。
- 蒸馏水：分析纯。
2. 实验仪器：- 可见分光光度计- 移液器- 烧杯- 比色皿- 电子天平四、实验步骤1. 样品处理：准确称取一定量的样品，加入适量的乙醇，超声提取，离心分离，取上清液待测。
2. 标准曲线绘制：- 准备一系列已知浓度的多酚标准溶液。
- 分别吸取1mL标准溶液于比色皿中，加入5mL福林酚试剂，混匀，静置5min。
- 加入5mL磷钼酸试剂，混匀，静置10min。
- 以蒸馏水为空白，用可见分光光度计在波长680nm处测定吸光度。
- 以多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：- 分别吸取1mL样品溶液于比色皿中，按照标准曲线绘制步骤进行操作。
- 测定样品溶液的吸光度。
- 从标准曲线上查得样品溶液中多酚的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验结果，绘制标准曲线，得出线性方程为：y = 0.0165x + 0.0146，相关系数R² = 0.9977。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品溶液中多酚的含量。
以茶叶提取物为例，样品溶液中多酚含量为：x = (A - 0.0146) / 0.0165 = 0.0186，即样品溶液中多酚含量为18.6mg/L。
六、实验结论本实验采用福林酚法测定了茶叶提取物中的多酚含量，结果表明该方法操作简便、准确度高，适用于多酚类化合物的定量分析。
福林酚测多酚原理
福林酚测多酚原理
福林酚是一种常用的多酚测定试剂，其原理基于多酚物质与福林酚在酸性条件下发生显色反应。
该反应是一种氧化还原反应，其中福林酚被还原为其自由酸态，而多酚物质被氧化。
在多酚测定中，首先将待测样品中的多酚物质提取出来。
常用的提取溶剂包括乙酸乙酯、甲醇、乙醇等。
提取后的溶液与福林酚试剂混合，在酸性条件下加热反应，通常使用硫酸作为酸性媒介剂。
在这个过程中，多酚物质被氧化，同时福林酚被还原。
福林酚在氧化还原反应中由有色福林阳离子被还原为无色福林酚酸。
显色的特点是福林酚酸与多酚物质在酸性条件下形成一种深红色的络合物。
该特殊的显色反应可以通过光度计或比色计进行测量，从而确定多酚物质的含量。
多酚测定中，福林酚是一种常用的试剂，因其与多酚物质之间的特异性反应而被广泛应用。
福林酚测定法是一种简便、准确、快速的多酚测定方法，在生物学、药物学、化学等领域中得到了广泛的应用。
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验三：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、实验目的1．学会制备无蛋白血滤液。
2．掌握Folin－Wu 法测定血糖含量的原理和方法。
3．掌握7200 型可见分光光度计的使用方法。
二,实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅不蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三.实验仪器1．试管2．秱液管3．卵清蛋白片4．7220 分光光度计四. 实验试剂1、碱性硫酸铜溶液 A 液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g 及碳酸氢钠11g 溶于蒸馏水，秲释定容至1000ml. B 液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A 液：B 液=9：1 混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g 葡萄糖，溶于蒸馏水，秲释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml 葡萄糖母液于100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100 毫升。
4、0.33mol/LH2SO4 溶液：于53ml 蒸馏水中加入1ml 的浓硫酸。
五.实验步骤1、无蛋白血滤液的制备：用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml 锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15 分钟，至沉淀变为暗棕色（如丌变色可再加0.33mol/L H2SO41-2 滴）。
用干滤纸过滤。
先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液丌清需重新过滤。
每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml 全血。
2、血糖的定量测定：取25ml 的血糖管3 支，编号。
第一支血糖管中加入2ml 蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml 标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
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福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度
一、目的
熟悉并掌握福林（Folin）—酚法测定蛋白质浓度的原理和方法。
二、原理
蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器
1.卵清蛋白片
2.7220分光光度计
3.试管
4.移液管
四、实验试剂
1. Folin-酚试剂A：碱性铜溶液
甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中
乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2. Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l 的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至
相当于1mol/L的酸。
3. 1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制
取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
0.1
0.2
0.3
0.4
0.45
0.5
牛血清蛋白液
OD500摇匀，在室温下放置30分钟后在500nm下比色
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Folin-酚试剂B
摇匀，在室温下放置10分钟
0.5（样液）
4.0
0.5
4.0
0.4
4.0
0.3
4.0
0.2
4.0
0.1
4.0
0.05
4.0
4.0
(1mg/ml)ml
蒸馏水ml Folin-酚试剂A
样品
7
6
5
4
3
2
1
管号
2.样品测定
准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
注：7200型分光光度计的操作程序
连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。
接通电源，使仪器预热20分钟。
用<MODE>键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F）方式。
用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。
将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
一般情况下，参比样品放在第二个槽位中。
将0％T校具（黑体）置入光路中，在T方式下按“0％T”键，此时显示器显示“000.0”
按MODE键选择A模式
将参比样品拉入光路中，按“0A/100％T”键调0A/100％T，此时显示器显示的“BLA”直至显示“0.000”A为止。
当仪器显示器显示出“0.000”A后，将被测样品推入光路，这时，您便可从显示器上得到被测样品的吸光度。
六实验结果
根据线性关系，可求
Y=0.112*X---0.0547
X=(1.0897+0.0547)/0.112
=10.2178
故未知蛋白的浓度为1.02178 mg/ml
七实验分析
folin试剂中的磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的苯丙氨酸（Phe）和酪氨酸（Tyr）残基还原，发生显色反应：产生蓝色（钨兰+钼兰）。
蓝色的浓重度与蛋白质含量成正比。
所以如果酪氨酸含量高的话，测出的结果比实际值高一些
需要注意的是，用此方法测蛋白质时，还原反应发生在PH10的溶液中，而Folin试剂在碱性条件下不稳定，所以将Folin试剂加入碱性的铜和蛋白质溶液中必须立即混匀，此反应只在极短时间内有效进行。
试剂破坏后，还原性的生成物可再次反应，后者的变化于30min可达到最大值。
该方法较双缩脲法反应灵敏，与0.1mg/ml浓度的蛋白质样品亦可得到很好的显色反应，使用很广泛，但花费时间长，其干扰因素较多。
可采用空白对照的方式消除误差。