DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定_曾东方
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告一、实验目的1、学习和掌握淀粉酶活力测定的原理和方法。
2、了解淀粉酶的作用特点及其在生物体内的重要性。
3、培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理淀粉酶是能够水解淀粉分子中α-1,4 糖苷键的一类酶的总称，包括α淀粉酶和β淀粉酶。
α淀粉酶可以随机地作用于淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
β淀粉酶则从淀粉分子的非还原性末端依次水解相隔的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖。
在本次实验中，利用淀粉酶水解淀粉生成还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸试剂反应，生成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色的深浅与还原糖的量成正比，通过比色法测定吸光度，并与标准曲线对比，即可计算出淀粉酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜淀粉酶提取液1%淀粉溶液（称取 1g 可溶性淀粉，加入少量蒸馏水调匀，然后缓缓倾入沸水中并不断搅拌，最后定容至 100ml）pH 69 的磷酸缓冲液3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS 试剂）麦芽糖标准溶液（1mg/ml）2、实验仪器分光光度计恒温水浴锅移液器离心机试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：｜管号｜麦芽糖标准液（ml）｜蒸馏水（ml）｜ DNS 试剂（ml）｜麦芽糖含量（mg）｜｜｜｜｜｜｜｜ 0 ｜ 0 ｜ 20 ｜ 20 ｜ 0 ｜｜ 1 ｜ 02 ｜ 18 ｜ 20 ｜ 02 ｜｜ 2 ｜ 04 ｜ 16 ｜ 20 ｜ 04 ｜｜ 3 ｜ 06 ｜ 14 ｜ 20 ｜ 06 ｜｜ 4 ｜ 08 ｜ 12 ｜ 20 ｜ 08 ｜｜ 5 ｜ 10 ｜ 10 ｜ 20 ｜ 10 ｜｜ 6 ｜ 12 ｜ 08 ｜ 20 ｜ 12 ｜摇匀后，在沸水浴中加热 5 分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，再向每管中加入蒸馏水 20ml，摇匀。
以 0 号管为空白对照，在 540nm 波长下测定各管的吸光度值。
DNS法测定α淀粉酶活力的方法
生物学研究中关于糖测定中常用 的方法
菲林试剂滴定——还原糖，常量分析 DNS比色法——还原糖，微量分析 蒽酮比色法——总糖，微量分析
配制系列浓度稀释液的方法
线性稀释——稀释液的浓度梯度是相同的 （0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0……）；
对数稀释（倍数稀释）——系列溶液的浓 度比是一常数，取决于稀释梯度——2倍稀 释（1、1/2、1/4、1/8……）；10倍 稀释（1、1/10、1/100、 1/1000……）；
调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续 排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4， 1/5……）。
α-淀粉酶酶活力测定的原理
底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反 应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原 糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生 成量（如DNS法），从而计算出酶活力单 位。
计算公式：根据标准曲线计算。
3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 配制说明
21g 氢氧化钠（先加入溶解）；
182g 酒石酸钾钠（同上）；
6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加 热完全溶于上述溶液中；
5g 重蒸苯酚（冷却后加入）；
5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）；
完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越 长越稳定。
酶 活 力 测 定 步 骤 （ 流 程 ）
蒸馏水 （mL）
2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
加入完成混匀后沸水浴5min，定容至25mL混匀比色。
预留发酵液酶活力测定 需要稀释倍数
二硝基水杨酸淀粉酶
二硝基水杨酸淀粉酶
二硝基水杨酸（2,4-dinitrosalicylicacid，简称DNS）淀粉酶法是一种用于检测淀粉酶（也称为α-淀粉酶）活性的常见方法。
这种方法基于淀粉的降解产生还原糖，进而与DNS反应，形成有色产物，可以通过测定产物的吸光度来定量测定淀粉酶的活性。
这个方法的基本步骤如下：
1.淀粉的降解：
淀粉酶催化淀粉分解成较小的多糖分子，主要是麦芽糖。
2.DNS试剂的添加：
加入DNS试剂，DNS试剂中的二硝基水杨酸与还原糖反应，生成有色产物。
3.热处理：
将反应混合物进行热处理，使得产物进一步显色。
4.吸光度测定：
使用分光光度计测定混合物的吸光度，吸光度值与还原糖的浓度成正比，从而可以间接地测定淀粉酶的活性。
这个方法是一种常用的、相对简便的淀粉酶活性测定方法，广泛应用于食品工业、酿酒业、生物技术等领域。
由于其敏感性和可操作性，使得这个方法在实验室和工业生产中得到广泛应用。
DNS法测定α-淀粉酶活力的方法
3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 配制说明
21g 氢氧化钠（先加入溶解）； 182g 酒石酸钾钠（同上）； 6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加 热完全溶于上述溶液中； 5g 重蒸苯酚（冷却后加入）； 5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）； 完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越 长越稳定。 引自： 朱俭，曹凯鸣，周润琦，蔡武城， 袁厚积编著．生物化学实验．上海：上海 科学技术出版社，1981．
比酶活力计算
定义：1mg蛋白质的酶活力单位。 计算公式：
酶活力单位 （U） 比酶活力 （U / mU/mL）和蛋白质含 量（mg/mL）。 可以反映样品中酶的纯度。
分光光度计介绍
原理：在一定条件下，遵循朗伯－比尔 （Lambert-Beer）定律 组成：光源、单色器（棱镜、光栅）、吸 收池、检测器（光电管、光电倍增管、光 电二极管阵列）、显示系统
标准曲线法
取标准品配成一系列已知浓度的标准溶液， 在选定波长处（通常为λ max），用同样厚 度的吸收池分别测定其吸光度，以吸光度（ OD）为纵坐标，系列标准溶液浓度为横坐标 作图，得到一通过坐标原点的直线－标准曲 线（工作曲线）。 理想的标准曲线满足以下条件： 1、至少5个点，一般不超过7个点； 2、2个以上重复值； 3、重复值误差小于5%； 4、点与线的垂直距总和最小； 注意：标准曲线不能任意延长！（有一定测 定范围）
利用DNS法测定α-淀粉酶活力 的方法
目的要求
了解生物学研究中针对糖含量测定的常用 方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理 、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析—— 回归分析，得到回归方程及相关分析结果 。
糖的测定方法
淀粉酶检测方法
淀粉酶检测方法淀粉酶是一种在生物体内分解淀粉的酶类，在工业生产中也有广泛的应用。
淀粉酶检测方法的研究和开发对于生物学和工业生产都具有重要的意义。
本文将介绍10种常用的淀粉酶检测方法，并展开详细描述。
1. 检测淀粉酶酶活力的方法淀粉酶酶活力的检测是在一定的条件下测定淀粉酶对淀粉分子链断裂的程度。
其方法多种多样，如I2-KI法、Nelson-Somogyi法、DNS法、酚硫酸法等。
其中DNS法的操作简单、精密度高、结果准确，被广泛运用于淀粉酶酶活力的测定中。
DNS法的具体流程：取淀粉酶反应液1ml，加入60μl 1% 普鲁士蓝，阴离子化的淀粉酶会将淀粉水解成低聚糖，反应后加入7.5ml DNS液，于100℃水浴烘箱加热10min，将反应液冷却至室温后用1mol/L NaOH调至中性，以1cm光程在720nm波长处测定吸光度。
2. 紫外线比色法紫外线比色法是一种测定淀粉酶酶活力的快速、准确、灵敏的方法。
该法利用酶水解淀粉时所产生的差异色团在化学性质和吸收光谱方面的变化来测定淀粉酶酶活力。
紫外线比色法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，在相应的pH值下孵育一定的时间后，停止反应，加入氢氧化钠，合并各样品，稀释，分别于270nm、309nm处记录吸光值，然后计算各组淀粉酶的缩合作用所产生的光吸收值，即可求出淀粉酶的酶活力。
3. pH滴定法pH滴定法是以酶水解完淀粉后所生成的氢离子释放量作为反应结束的依据。
该方法的特点是操作简单，易于掌握，准确度高。
pH滴定法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，设置相应的pH值，在一定的温度下孵育一定时间，取出样品，加入酚酞pH指示剂，并滴加NaOH溶液，直到溶液从淡红色转为深红色，记录NaOH滴加量，计算其中的氢离子产生量即可求出淀粉酶的酶活力。
4. 薄层酶法薄层酶法是将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后观察酶诱导的淀粉分解反应的变化，以判断淀粉酶的活力。
薄层酶法的具体流程：将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后孵育一段时间，用紫碱蓝溶液滴在板上，若淀粉分解为葡萄糖，其降解产物将与紫碱蓝成蓝绿色，而未被淀粉酶降解的淀粉则呈紫色。
dns法测定纤维素酶活力原理
dns法测定纤维素酶活力原理纤维素酶，这个名字听起来就像高大上的科学词汇，其实它在咱们的日常生活中可是大有来头。
想想看，咱们的衣服、纸张，甚至一些食品里，都和它有着千丝万缕的联系。
说白了，纤维素酶就是一种能把纤维素这个“大块头”分解成小分子的“超级英雄”。
要不然，这些纤维素可真是“难啃的骨头”，光靠我们自己的牙口可没法啃下去。
所以，这种酶的活力就显得尤为重要了。
现在，咱们来聊聊用DNS法测定纤维素酶活力的原理，听起来有点复杂，其实也并不难，咱们慢慢道来。
DNS法其实就是一种颜色变化法。
嘿，你没听错，颜色变化！你想啊，咱们日常生活中，很多东西都是通过颜色来判断的，比如熟不熟、甜不甜，甚至是“这件衣服合不合适”。
所以，这个方法就是借助颜色变化，来观察纤维素酶的活力到底有多强。
这里的“DNS”指的是一种化学试剂，名字比较长，不想说了，简单点，叫它“变色剂”就行。
这个“变色剂”能跟分解后的纤维素反应，形成一种深红色的物质。
就像调色板上的颜色，越深的颜色，说明分解得越彻底，酶的活力就越强。
这个过程是怎么发生的呢？想象一下，纤维素在水中，纤维素酶像一个勤劳的小工人，正在不停地工作。
它一边“啃”着那些纤维素，一边把分解出来的小分子释放到水里。
好比咱们吃饭，吃了一口又一口，最后把盘子清理得干干净净。
然后，DNS法就是通过测量水里的颜色来评估纤维素酶的工作效率。
颜色越深，酶的活力越高，反之，颜色浅，就说明这位小工人可能今天状态不佳，干得不够。
可能有人会问，咱们为什么要关心纤维素酶的活力呢？这可是个好问题。
因为纤维素酶在许多行业里都有广泛的应用，比如说造纸、酿酒，甚至在生物燃料的生产中，都是不可或缺的“好帮手”。
如果咱们知道它的活力，就能调整工艺，优化生产，省时又省力，简直就是为生产效率加了一把火。
说说这个DNS法的操作步骤。
咱们得准备好一堆材料，包括纤维素、酶、还有那个神秘的“变色剂”。
然后，把纤维素和酶混合，放到特定的温度下，让它们好好亲密接触。
DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定
在以 ２ ％可 溶性 淀 粉 为唯 一碳 源 的查 氏（ ｚｐ ｋ ￣ Ｃ ａｅ ） 液体
培 养 基 中 分 别 接 种 香 菇 、 菇 、 菇 、 曲 根 霉 ，７ｃ恒 温 摇 平 姬 酒 ２ Ｃ
发 价 值 的生 产 菌 种 的生 理性 状 ， 中包 括 食 用 菌生 产 菌 种 其 对 环境 的适 应性 ， 归结 为 食用 菌 的代谢 能 力 ， 能够 利 用廉价
原 料迅 速 生 长 并大 量 合成 目 的产物 。 多 工业 发 酵 菌 种 不 许 能 直接 利用淀 粉 ， 物 工厂 必须 对原 材料 进 行预 处理 ， 生 通过 液化、 糖化 生产 微 生物 可 以直接 利 用 的淀 粉 水解 糖 。 果选 如 育 出具 有 淀粉 酶 活 力 的生 产 菌种 ， 可 以 实现 边 糖化 边 发 就
ｍｅ ｔｍ ｎ ｗｈｔ ｈ ｎｙ ｃ ｒｏ ｏ ｒｅ Ｗａ ％ ｓ ｌｂｌ ｔ ｃ ａ ｄ ａ ｌｓ ｎ ｒ ｙ ｒｎ ｅ ｒｍ ．１ ｔ ． ７ Ｕ／ ｏ ｇ Ｌｅ ｔ ｌ ｄ ｄ ｓ， ｄｕ ｉ ｉ ｔｅ ｏ ｌ ａｂ ｎ ｓ ｕｃ ｓ ２ ｈ ｏｕ ｅ ｓａ ｈ， ｎ ｍｙａ ｅ ｅ ｅ ｇ ａ ｇ ｄ ｆｏ １５ ３ ｏ ３４１ ｍＬ ａ ｎ ｎｉ ａ ｅ ｏ ｅ ｒ ｍ ｎｕ Ｐｉｕｏ ｕ ｓｒ ａｕ Ｐｌｕｏ ｕ ｏｎ ｃ ｐｉｅ，Ｏａ ｏｐｕ ｏｗａ ｄａｒ ｆｒｎｃ ｎ ｎ ｌｓｓｍｅｈ ｄｆｒｔｅｅ ｉｌ ｕ ｇｓｒｉ ｅｅ ｔｏ ｅ ｒｔｚ ｏ ｔｅ ｔｓ， ｅ ｒｔｓｃ ｒ ｕ ｏ ａ Ｓ ｓｔ ｔ ｒ ｒ ｅｅ ｅ ｅａ ｄａ ａｙｉ ｔｏ ｄｂ ｅｆ ｎ ｉｔａｎ ｓｌｃｉｎ． ｆ ｏ ｈ Ｋｅ ｙｗｏ ｄ ｅ ｉ ｌ ｕ ｉ ｆｒ ｅ ｔｏ ＤＮＳ； ｙａ ｅ； ｃｉｉｙｄ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｒ ｓ ｄ ｂｅｆｎｇ ；ｅｍ ｎ ｉｎ； ｍ ａ ｌｓ ａ ｔｖｔ ｅｅｍｉ ａｉｎ
DNS对木聚糖酶活力测定的影响
光度法 Ｊ ， 但不 同实验室 和生产厂 家使用 同种
方法 和 底物 对 同一产 品进 行检 测 ， 结果 仍然 存在 明 显差 异 。本试 验初 步 研 究 了使 用 不 同 来 源 的
１ ． ３ Ｄ Ｎ Ｓ试剂
作 为饲 料添 加剂 的木 聚糖 酶 活力 的测定 ， 目
前 多采用 国家标 准 （ Ｇ Ｂ ／ Ｔ ２ ３ ８ ７ ４— ２ ０ ０ ９ ） 的 分光
四种 Ｄ Ｎ Ｓ标 记 为 Ｔ、 Ｄ、 Ｋ 和 Ｘ， 分别 由不 同
饲料 酶 生产企 业 自行 配制 并提 供 。
ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ，ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ＤＮＳ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｂ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ —
多 禾 谷类 饲 料 的应 用 。木 聚 糖 酶是 木 聚糖 降解 过 程 中的关键 酶 ， 可将 木 聚糖 降解成 动 物可 消化 吸 收的低 聚糖 和木 糖 。 因此 ， 木 聚糖 酶 饲料 添加
剂在 饲料 生 产 中得到 了广 泛 的应用 ¨ 。
和桦 木木 聚糖 （ Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ Ｘ ０ ５ ０ ２ ） 。
ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｂ ｌ ｅ ｍｓ ｅ ｘ ｉ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ．Ａｔ ｔ ｈｅ ｓ ａ ｍｅ ｔ ｉ ｍｅ，ｔ ｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｃ ｏ ｎ— ｒ
ｅ ｎ ｃ ｅ ， ａ ｎ ｄ ｊ ｏ ｉ ｎ ｉ ｎ ｄ ｒ ａ ｗ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｄ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｃ ａ ｎ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ，ｃ ａ ｎ
05-01-037DNS法测定糖化酶活力(精)精选全文
可编辑修改精选全文完整版3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定糖化酶活力一、原理糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。
在煮沸条件下，葡萄糖在碱性介质中被3,5-二硝基水杨酸(DNS)氧化成葡萄糖酸，而3,5-二硝基水杨酸被还原成红褐色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出淀粉经糖化酶水解后产生的葡萄糖总量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
反应过程如下：二、仪器、试剂1、仪器1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9) UV —2802SH 型紫外可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司； 2、试剂1) 1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg ，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL ，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2) 3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL ，贮于棕色瓶中备用。
三、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取7支25mL 具塞刻度比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
食用菌发酵液中功能性成分研究及应用
食用菌发酵液中功能性成分研究及应用许莹莹;廖烨;李德海;孙月;包怡红【摘要】Fermentation technology of edible mushroom has undergone extensiveapplication in food industry. More recently,profound studies have been conducted into the fermentation liquor. This fermentation liquor and it contains abundant functional ingredients for antineoplasticeffect,immunity enhancement and oxidation resistance,taking the form of protein,polysaccharose,terpenoid,and polyphenols,etc. Through a comprehensive review of previous studies on fermentation liguor and its major ingredients as protein, polysaccharide,triterpenoids,nucleic acid and polyphenols,this paper mainly focuses on the physical and chemical properties,the analysis of the separation and purification technologies in application, their functional effect and production auxiliary components to provide theoretical basis for research and development of health products in near future.%食用菌发酵技术得到工业化大规模的应用,人们对于食用菌发酵液的研究也进一步深入.食用菌发酵液及其中含有丰富的蛋白质、多糖、萜类化合物、多酚类、核酸等功能性成分,具有抗肿瘤、提高免疫力、抗氧化等功效.对食用菌发酵液及其中功能性成分蛋白质、多糖、三萜类化合物、核酸及多酚的研究进行了概述,分析理化性质、提取分离纯化技术、功能性研究、增产辅助成分,为今后保健产品等的研发提供理论依据.【期刊名称】《包装与食品机械》【年(卷),期】2018(036)001【总页数】6页(P57-62)【关键词】食用菌;发酵液;功能性成分【作者】许莹莹;廖烨;李德海;孙月;包怡红【作者单位】东北林业大学林学院,哈尔滨 150040;东北林业大学林学院,哈尔滨150040;东北林业大学林学院,哈尔滨 150040;东北林业大学林学院,哈尔滨150040;东北林业大学林学院,哈尔滨 150040【正文语种】中文【中图分类】TS201.30 引言食用菌是一类高蛋白、低脂肪、低热量、氨基酸种类齐全的健康食品，有“素中之荤”的美誉。
DNS比色法测定白芸豆中α-淀粉酶抑制剂活性的方法研究
DNS比色法测定白芸豆中α-淀粉酶抑制剂活性的方法研究赵蓉;李多伟;任涛;林芳;林道发
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2013(035)003
【摘要】目的建立DNS比色法测定从白芸豆中分离纯化α-淀粉酶抑制剂活性的方法.方法通过测定波长、DNS的用量及显色反应时间的试验,确定研究方法.结果确定最佳条件为检测波长470 nm,α-淀粉酶抑制剂与等量α-淀粉酶溶液37℃预温15 min,加入2％可溶性淀粉溶液,准确反应5 min.再加入DNS试剂2 mL,沸水浴5 min后流水冷却.该方法平均回收率为99.95％ (n=9),精密度实验RSD=1.01％.结论该方法具有简便、快捷、重复性良好等特点.适用于常规α-淀粉酶抑制剂的活性测定.
【总页数】4页(P573-576)
【作者】赵蓉;李多伟;任涛;林芳;林道发
【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西西安710069
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;Q55
【相关文献】
1.DNS比色法测定污泥中淀粉酶活性的研究 [J], 刘贺红;万金泉;马邕文;王艳
2.碘试液比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性 [J], 谢雨杉;李多伟;李银芳;智彩辉
3.白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的提取工艺研究 [J], 程敏;田童童;李甜;朱新荣;张建
4.白芸豆α-淀粉酶抑制剂在低GI方便粥中的应用 [J], 马艳丽;让一峰;赵伟;杨瑞金
5.白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的提取纯化及活性测定条件优化 [J], 钟颖颖;何绮怡;冯俊超;朱秋雁;张春国;赵肃清
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dns法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定
DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定1. 研究背景食用菌是一种常见的菌类食品，具有丰富的营养价值和药用价值。
而淀粉酶作为重要的酶类成分，在食用菌的发酵过程中起着重要作用。
对食用菌发酵液中淀粉酶活力的测定具有重要意义。
2. DNS法的原理DNS法是测定还原糖的方法之一，也是目前测定淀粉酶活力的常用方法之一。
该方法利用二糖苷键，能使α-醛基于2-氮杂己糖缺氧基和1-喹啉酮缓和形成稳定的红色络合物。
3. 实验方法（1）试剂准备：取得极少数数DNS试剂，製备酸水（2）样品处理：取得一定量食用菌发酵液样品（3）测定操作：操作过程如下...（4）结果处理：计算淀粉酶活力，公式如下...4. 实验结果和分析（1）样品A淀粉酶活力为X，样品B淀粉酶活力为Y（2）通过对比实验结果分析，得出...5. 结论本实验通过DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，得出了样品A和样品B的淀粉酶活力结果。
实验结果表明...6. 意义和展望该实验结果对于食用菌产业和相关研究领域具有一定的意义，同时也为淀粉酶活性的测定方法提供了一种有效的方案。
未来有望进一步探索...7. 参考文献（1）XXX，XX.（2018）。
（2） XXX，XX.（2019）...8. 附录实验原始数据表格...总结：本实验使用DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，并得出了实验结果。
该方法具有操作简便、结果准确等优点，对于相关研究和生产实践具有一定的借鉴意义。
食用菌发酵液淀粉酶活力的测定，是一项具有重要意义的研究。
食用菌作为一种常见的菌类食品，不仅具有丰富的营养价值，还具有一定的药用价值。
而淀粉酶作为食用菌发酵过程中的重要酶类成分，对于提高食用菌发酵液的产率和质量起着关键作用。
准确测定食用菌发酵液中淀粉酶活力，对于食用菌产业和相关研究领域具有重要意义。
在实验中，DNS法是常用于测定淀粉酶活力的方法之一，其原理是利用二糖苷键，形成红色络合物来测定还原糖的含量。
DNS法测定α-淀粉酶活力的方法课件(1)
密封121.3 ℃ 灭菌处理20min）。用时注意酶
污染。
14
标准曲线制作相关试剂加入表
试剂
管号 123456
标准麦芽糖溶液
（mL）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
蒸馏水 （mL）
2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色
法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，
以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的
麦芽糖的量表示酶活力。
7
酶活力测定（DNS比色法）
酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ，pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦 芽糖的酶量定义为1个酶活力单位。
利用Excel中相关统计分析工具，完成回 归方程的计算及分析，并绘制标准曲线图。
12
相关试剂（第一种）
标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取 1g麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000mL。
0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：称取 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）5.78g，柠檬酸 钠（Na3C6H5O7·2H2O）21.32g ，用 蒸馏水溶解并定容至1000mL。
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）45.3g， 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）7.74g，先在烧杯中 用蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中定容至
1000mL。
1%马铃薯淀粉溶液：称取1g马铃薯淀粉
（105℃烘干2hr）溶于100mL 0.2mol/L
pH6.0 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中（一般需要
dns法测定酶活力原理
dns法测定酶活力原理以DNS法测定酶活力原理为标题的文章一、引言在生物学和生化实验中，测定酶活力是非常重要的。
酶是一种催化剂，在生物体内起到促进化学反应的作用。
因此，测定酶活力可以帮助我们了解生物体内各种生化反应的速率。
本文将介绍一种常用的测定酶活力的方法——DNS法。
二、DNS法的原理DNS法是一种测定还原糖酶活力的常用方法。
该方法基于还原糖酶催化还原糖的过程，通过测定还原糖产生的产物浓度的变化来间接反映酶活力。
具体来说，DNS法是通过测定还原糖产生的醛基与二硫代巴比妥酸（DNS）发生反应生成的有色产物的吸光度变化来测定酶的活力。
醛基与DNS反应生成的有色产物的吸光度与还原糖的浓度成正比，因此可以通过测定吸光度的变化来间接测定还原糖的浓度，从而推测出酶的活力。
三、实验步骤1. 准备工作：首先，准备好所需的试剂和设备，包括还原糖溶液、酶液、DNS试剂、比色皿、吸光度计等。
2. 制备标准曲线：将一系列不同浓度的还原糖溶液分别加入比色皿中，然后加入适量的DNS试剂，混匀后放置一段时间使反应进行，最后测定吸光度。
根据吸光度与还原糖浓度的对应关系可以得到标准曲线。
3. 测定样品：将待测样品中的酶液加入比色皿中，然后加入适量的还原糖溶液，混匀后放置一段时间使反应进行，最后加入DNS试剂，混匀后立即测定吸光度。
4. 计算结果：根据标准曲线，可以将吸光度值转化为还原糖的浓度。
通过比较不同样品的还原糖浓度，可以推测出酶的活力。
四、注意事项1. 实验过程中要注意操作的严密性，避免试剂污染和外界干扰。
2. 实验过程中要注意控制温度，因为温度对酶的活性有很大影响。
3. 实验中还需要注意样品的处理和测定的准确性，避免误差的产生。
五、优点和应用DNS法测定酶活力具有以下优点：1. 方法简单易行，操作方便。
2. 结果可靠，测定结果与酶活力呈正相关。
3. 适用范围广，可以测定多种不同酶的活力。
由于DNS法测定酶活力的优点，它在生物科学研究中得到了广泛应用。
“双新”背景下打造生物学实验教学高效课堂——DNS法“探究温度对淀粉酶活性的影响”实验优化与改进
“双新”背景下打造生物学实验教学高效课堂——DNS法“探究温度对淀粉酶活性的影响”实验优化与改进
实验教学;程轩
【期刊名称】《中学生物教学》
【年(卷),期】2024()3
【摘要】“探究温度对淀粉酶活性的影响”实验采用DNS法、借助分光光度计定量测定淀粉酶活性。
但在实践中发现,该实验存在操作量大、所需时间较长、实验结果不理想等问题。
基于此,对实验材料和操作方法进行优化与改进,提高实验的可操作性,提升实验效果,同时提出实验教学建议,帮助一线教师在有限的时间内打造出高效的生物学实验课堂。
【总页数】3页(P58-60)
【作者】实验教学;程轩
【作者单位】华东师范大学第二附属中学
【正文语种】中文
【中图分类】G63
【相关文献】
1.改革实验教学方法培养学生探究能力——探究温度对唾液淀粉酶活性的影响
2."探究温度对淀粉酶活性的影响"的实验教学
3.利用实验教学培养学生的科学素养——以“pH和温度影响唾液淀粉酶活性”的探究为例
4.基于科学思维的“探究温度
对淀粉酶活性的影响”实验教学设计5.探究温度对淀粉酶活性的影响实验装置改进
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DNS比色法测定酿酒原料高梁中的淀粉含量
DNS比色法测定酿酒原料高梁中的淀粉含量
翁忠岚
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2004(031)003
【摘要】应用2.5%盐酸溶液水解酿酒原料高粱中的淀粉,用DNS(3.5-二硝基水扬酸)比色法和经典费林试剂滴定法作对比,对用DNS比色法测定高梁淀粉的方法进行研究,探讨了其精密度,测得其回收率为100.4%,并用双氧水加热消除色素干扰.【总页数】2页(P67-68)
【作者】翁忠岚
【作者单位】贵州省盐产品质量监测站,贵州,贵阳,550001
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3;O657.3
【相关文献】
1.DNS比色法测定污泥中淀粉酶活性的研究 [J], 刘贺红;万金泉;马邕文;王艳
2.DNS比色法测定烟草中的糖分含量 [J], 周利均;周淑平
3.DNS比色法测定白芸豆中α-淀粉酶抑制剂活性的方法研究 [J], 赵蓉;李多伟;任涛;林芳;林道发
4.酶水解-DNS比色法测定烟草中淀粉含量 [J], 刘华;周淑平
5.重铬酸钾-DNS比色法测定发酵液中乙醇含量 [J], 何川;章登政;张俊;杨肖;苏颖;周蓬蓬;余龙江
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介绍测量菌液浓度的一种方法
介绍测量菌液浓度的一种方法
熊海燕;王为国;王存文;曾东方;赵玉凤
【期刊名称】《四川食品与发酵》
【年(卷),期】2003(039)004
【摘要】采用浊度法测量发酵液浓度，选择波长为600nm，先测定样品中菌液的吸光度，再根据标准曲线查出菌体浓度。
该方法简单，快速，准确度高，是测定菌体浓度的一种较理想方法。
【总页数】2页(P45-46)
【作者】熊海燕;王为国;王存文;曾东方;赵玉凤
【作者单位】湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室，湖北武汉430074;武汉化工学院化工与制药学院，湖北武汉430074
【正文语种】中文
【中图分类】TQ920.1
【相关文献】
1.利用卫星测量地震：———介绍一种俄罗斯卫星测量地震的方法 [J], 马宗诚
2.变焦-临界穿透束流极值法测量电子束流动态焦点--一种焦点测量方法介绍 [J], 周琦;刘方军;关桥
3.一种大气污染日平均浓度计算方法的介绍 [J], 袁业畅
4.介绍一种HiCN试剂中CN—浓度测定方法 [J], 邱烨;沈翠芬
5.介绍测量菌液浓度的一种方法 [J], 熊海燕
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防治效果。本研究通过收集西岛海域的放线菌资源，并探
索其中可能成为香蕉枯萎病生防菌的菌株。目前发现菌株
090314 表 现 出 一 定 的 抗 菌 活 性 。因 此 ，有 必 要 深 入 研 究 其
抗性的稳定性及在土壤中的定殖情况，为开发海洋放线菌、
防治香蕉枯萎病奠定基础。
4 参考文献
[1] B魪RDY J.Bioactive Microbial Metabolites[J].J Antibiot，2005，58（1）：1-
1 株显示出一定的抗菌活性，其他链霉菌将进行其他抗性模
[J].广 东 农 业 科 学 ，2008（11）：65-66. [7] 夏启玉，王宇光，孙建波，等.一株拮抗香蕉枯萎病的内生细菌的分离
型的筛选，进一步挖掘其潜力。
及 其 几 丁 质 酶 基 因 信 号 肽 的 分 泌 活 性 分 析[J].中 国 生 物 工 程 杂 志 ，
香 菇 （Lentinula edodes）、 平 菇 （Pleurotus ostreatus） 和 姬 菇（Pleurotus cornucopiae）新鲜子实体购买于超市，取菌柄和 菌盖交接处进行组织分离。马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方 为马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 15~20 g，水 1 000 mL，pH
农业基础科学
现代农业科技 2011 年第 11 期
DNS 法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定
曾东方 杨 帆 聂欢欢
（武汉工程大学真菌生理学实验室，湖北武汉 430074）
摘要 选取广泛栽培的著名食用菌香菇 、平菇和姬菇菌丝体为研究菌种 ，采用 3，5-二硝基水杨酸 （DNS）比色法检 测 供试 食用 菌 的淀 粉酶产生能力。以 2%可溶性淀粉为唯一碳源的查氏液体培养基诱导发酵 ，供试食用菌 产 生的 淀粉 酶 活力 在 1.513~3.417 U/ mL，为 食 用菌 工业发酵菌种的选育提供了参考依据和分析方法。
生物多样性的重要海区。通过对其沉积物中的可培养放线 菌进行选择性分离、纯化、保藏，收集该区域的微生物资源，
128（5）：1622-1632. [5] 徐小雄，林海鹏，阮继生，等.从红树植物根际土壤选择性分离小双孢
菌[J].微 生 物 学 通 报 ，2009，36（9）：1299-1304.
为进一步开发利用提供基础和依据 。目前 18 株链 霉 菌 仅 有 [6] 吴庆菊，曾会才，何娜.45 种发酵液对香蕉枯萎病菌的室内毒力测定
Evol Microbiol，2005（55）：1759-1766.
热带海洋岸礁生态系统，蕴含着丰富的海洋生物物种。区内 生产力很高，微生物资源丰富，生态保护较好，是保护海洋
[4] HAK C K，CHRISTOPHER A K，PAUL R J，et al. Marinomycins A-D， antitumor-antibiotics of a new structure class from a marine actinomycete of the recently discovered genus“Marinispora”[J].J Am Chem Soc，2006，
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接第 15 页）
[13] 贺军民，佘小平，张键.番茄种子吸湿—回干处理对盐胁迫伤害的缓
物 生 理 学 通 讯 ，1990（6）：55-57. [11] HEMAVATHI，UPADHYAYA C P，AKULA N，et al.Enhanced ascor -
（下转第 18 页）
农业基础科学
现代农业科技 2011 年第 11 期
对香蕉枯萎病菌具有不同程度的抑菌作用 ；夏启玉等[7]发 现
了香蕉的内生细菌可以抑制香蕉枯萎病病原菌生长； 黄 瑶
等 [8]发 现 海 洋 源 芽 孢 杆 菌 对 香 蕉 枯 萎 病 也 有 较 好 的 作 用 。
Getha 等[9]从海洋分离的海洋链霉菌对香蕉枯萎病有较好的
1.2 发酵液制备
在以 2%可 溶 性 淀 粉 为 唯 一 碳源 的 查 氏 （Czapek）[6]液 体
培养基中分别接种香菇 、平菇、姬菇、酒曲根霉，27 ℃恒温摇
床培养 5~6 d，无菌过滤得食用菌发酵液。供试查氏液体培养
基配方修改为 ：KNO3 2 g，可溶性淀粉 20 g，KH2PO4 1 g，NaCl 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，FeSO4 0.01 g，蒸 馏 水 1 000 mL。 该 培养基与查氏培养基不同之处在于是用可溶性淀粉代替
bicacid accumulation in transgenic potato confers tolerance to various abiotic stresses[J].Biotechnol Lett，2009（32）：321-330.
解 效 应 [J].园 艺 学 报 ，2000（27）：123-126. [14] CORNIC G，BUKHOV N G，WIESE C，et al.Flexible coupling between
复，计算平均值。
2 结果与分析
由表 1 可知，酒曲根霉产生淀粉酶活力最强，达到
20.331 U/mL，为评价 DNS 比色法测定食用菌淀粉酶活力提
表 1 供试食用菌与酒曲根霉产生淀粉酶的活力
菌株 香菇 平菇 姬菇 酒曲根霉 酒曲分离霉菌 M1 酒曲分离霉菌 M2 酒曲分离霉菌 M3
酶 活 力 单 位 ∥U/mL 3.417 1.879 1.513 20.331 1.806 1.997 3.490
色反应制备的标准曲线上查出对应的还原糖含量。定义以
1 mL 的发酵液中的淀粉酶，在 40 ℃，1 min 生成 0.1 mg 的还
原糖为 1 个酶活力单位（U）。根据以下公式计算酶活力：
淀 粉 酶 活 力 =C×7/2×0.1×5
（1）
式（1）中，C 代表测定的还原糖产生 量 。每 处 理 10 次 重
关键词 食用菌；发酵液；DNS 法；淀粉酶；活力测定 中图分类号 Q935；Q556 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2011）11-0016-01
Amylase Activity Determination of Edible Fungi by DNS ZENG Dong-fang YANG Fan NIE Huan-huan
香蕉枯萎病是香蕉种植产业上的毁灭性病害，该病严 重危害产蕉区的安全生产，因香蕉枯萎病病原菌复杂的遗传
2010，30（9）：24-30. [8] 黄瑶，杨耿周，张雅娟，等.拮抗香蕉枯萎病菌海洋细菌的筛选和鉴定
[J].广 东 海 洋 大 学 学 报 ，2009，29（6）：72-77.
背景，化学防治和选育抗病品种防治表现出很多困难 ，目 前 [9] GETHA K，VIKINESWARY S，WONG W H，et al.Evaluation of Strepto-
经过人工驯化培养的食用真菌的菌丝体，可以栽培扭 结成食药用价值很高的子实体。近年来，人们发现食用真菌 菌丝体也可以仿效青霉菌发酵，大规模生产食用菌多糖、抗 生 素 、 酶制 剂 等 亟 待 研 发 的 生 物活 性 物 质[1]。食 用 菌 发 酵 有 赖于适宜的工艺条件与生物反应器，但更取决于具工业开 发价值的生产菌种的生理性状，其中包括食用菌生产菌种 对环境的适应性，归结为食用菌的代谢能力，能够利用廉价 原料迅速生长并大量合成目的产物。许多工业发酵菌种不 能直接利用淀粉，生物工厂必须对原材料进行预处理，通过 液化、糖化生产微生物可以直接利用的淀粉水解糖。如果选 育出具有淀粉酶活力的生产菌种，就可以实现边糖化边发 酵，可极大地提高生产效率。因此，探讨灵敏而准确的食用 菌淀粉酶活力的测定技术，具有重要的生理学意义和实践 应用潜力。
26.
[2] 管华诗，耿美玉，王长去.21 世纪，中国的海洋药物[J].中 国海 洋药 物，
图 1 菌株 090314 抗香蕉枯萎病病原菌效果
2000（4）：44-47. [3] MALDONADO L A，FENICAL W，JENSEN P R，et al.Salinispora gen
3 结论与讨论
nov，sp.nov，S.arenicola sp.nov，and S.tropica sp.nov，obligate marine actinomycetes belonging to the family Micromonosporaceae[J].Int J Syst
பைடு நூலகம்
三亚西瑁州岛地处国家级珊瑚礁自然保护区，是典型
蔗糖作为唯一的可用碳源，以诱导食用菌产生淀粉酶发酵
生长。
1.3 DNS 比色法测定食用菌淀粉酶活力
取 2 mL 供 试 食 用 菌 和 酒 曲 根 霉 的 发 酵 液 ，加 入 2 mL
3，5-二硝基水杨酸试剂，置 40 ℃水浴中 5 min，定容至 25 mL
于 520 nm 波长下测吸光度 ，在以系列梯度浓度的麦芽糖比
（Laboratory of Fungal Physiology，Wuhan Institute of Technology，Wuhan Hubei 430074） Abstract Enzyme energy of amylase from edible fungi was determinated based on 3 ，5-dinitryl-salicyle （DNS）.Taking czapek as induction medtum in whith the only carbon source was 2% soluble starch，and amylase energy ranged from 1.513 to 3.417 U/mL among Lentinula edodes， Pleurotus ostreatus，Pleurotus cornucopiae，so as to put forward a reference and analysis method for the edible fungistrain selection. Key words edible fungi；fermention；DNS；amylase；activity determination