核酸诊断试剂的质控和评价
EB病毒核酸定量检测试剂性能验证及评价
·实验室质量管理·ＥＢ病毒核酸定量检测试剂性能验证及评价曲 沛，郭 杰，徐新民，焦炳欣，郭晶晶，方 茜，王雅杰（首都医科大学附属北京地坛医院，北京１０００１５）ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０１９．０５．０３３收稿日期：２０１８ ０９ １９；修回日期：２０１８ １２ ２１基金项目：首都医科大学附属北京地坛医院院内科研基金“育苗计划”项目（编号：ＤＴＹＭ２０１８０３）通讯作者：王雅杰，Ｅ ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙａｊｉｅ＠ｃｃｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ摘要：目的 验证ＥＢ病毒核酸定量检测试剂的分析性能是否与厂商提供参数相符从而评估检测指标对于临床的服务能力。
方法 采用首都医科大学附属北京地坛医院收集的不同浓度的临床标本，对ＥＢ病毒核酸定量检测试剂的精密度、准确性、线性范围等性能参数进行方法学性能验证和评价。
结果 高浓度和低浓度标本的批内精密度ＣＶ值（０．５８％，２．３％）及批间精密度ＣＶ值（２．２５％，０．４９％）均≤５％，符合要求。
准确性验证偏移（１．４７％、２．９９％、－１．８９％、－３．１０％、－０．３０％和－２．６８％）均≤７．５％的标准，符合要求；在７．７４×１０～６．７１×１０６ＩＵ／ｍＬ分析测量线性范围良好。
结论 通过验证，ＥＢ病毒核酸定量检测试剂可以满足目前ＥＢ病毒的筛查和临床疗效监测的需要，适用于临床常规检测。
关键词：ＥＢ病毒； 定量检测； 性能验证； 荧光定量ＰＣＲＴｈｅＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｆｏｒＥＢＶｉｒｕｓＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＱＵＰｅｉ，ＧＵＯＪｉｅ，ＸＵＸｉｎ ｍｉｎ，ＪＩＡＯＢｉｎｇ ｘｉｎ，ＧＵＯＪｉｎｇ ｊｉｎｇ，ＦＡＮＧＱｉａｎ，ＷＡＮＧＹａ ｊｉｅ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＤｉｔａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００１５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅＥＢｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔａｎｄｔｈｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙｔｈｅｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ，ａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｅｒｖｉｃｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｔｈｅｋｉｔ．ＭｅｔｈｏｄｓＷｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｆｒｏｍＢｅｉｊｉｎｇＤｉｔａｎＨｏｓｐｉｔａｌ．Ｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇ：ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆＥＢＶｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｉｎｔｒａ ａｓｓａｙｐｒｅｃｉｓｉｏｎＣＶｖａｌｕｅｓ（０．５８％，２．３％）ａｎｄｉｎｔｅｒ ａｓｓａｙｐｒｅｃｉｓｉｏｎＣＶｖａｌｕｅｓ（２．２５％，０．４９％）ｏｆｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｍｅｎｓｗｅｒｅａｌｌ≤５％，ｗｈｉｃｈｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ．Ｃｏｒｒｅｃｔｎｅｓｓｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｓｅｔｓ（１．４７％，２．９９％，－１．８９％，－３．１０％，－０．３０％ａｎｄ－２．６８％）ｗｅｒｅａｌｌ≤７．５％ｏｆｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄ，ｗｈｉｃｈｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓａｓｗｅｌｌ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ７．７４×１０ａｎｄ６．７１×１０６ＩＵ／ｍＬ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅＥＢＶｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｃａｎｍｅｅｔｔｈｅｎｅｅｄｓｏｆｃｕｒｒｅｎｔＥＢＶｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｙｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，ａｎｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｒｏｕｔｉｎｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ； Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ； Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ； Ｒｅａｌ ｔｉｍｅＰＣＲ ＥＢ病毒（ＥＢＶ）又称人类疱疹病毒４型，可引起传染性单核细胞增多症，并与鼻咽癌、ＮＰＣ伯基特Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤及多发性硬化症的发生关系密切［１ ２］。
核酸检测试剂生产及质量控制
核酸检测试剂生产及质量控制核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，包括等温扩增、PCR，qPCR等。
之前写了一些诊断试剂的评价的内容（诊断试剂评价系列2-核酸检测方法（更正））。
现在有些实验室自己合成引物探针，生产qPCR诊断试剂，也有些试剂生产企业在问如何保证试剂生产过程的质量控制。
检测试剂的生产质控与诊断试剂的评价既有相同点，因为都是基于相同的评价指标；又有不同点，生产过程会关注原料、半成品、成品，诊断试剂评价只针对成品。
本章的很多内容基于《核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则》，但是这个原则缺乏可操作性，因此又进行了扩展和延伸，供大家参考。
一、原材料1、dNTP脱氧三磷酸核苷，核酸的组成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP 和dTTP。
应为HPLC纯、PCR级，无DNase和RNase污染。
-20℃保存。
2、引物由一定数量的核苷酸构成的特定序列，通常采用DNA合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化。
冻干粉，1800D以上。
序列正确。
纯度应达到电泳级（PAGE）或HPLC 级，不含杂带。
应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如PAGE 电泳结果或HPLC分析图谱。
应作HPLC分析和紫外光吸收分析。
以紫外分光光度计测定OD260nm/OD280nm的比值在1.6~2.0之间，可视为合格引物。
-20℃保存。
3、探针是指特定的带有示踪物（标记物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于特定核酸序列的探测。
通常采用DNA 合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化，在5-端标记荧光素报告基团或其他发光标记物，在3-端标记荧光素淬灭基团，并经HPLC或其他适宜方法纯化。
冻干粉，90D以上。
纯度应达到HPLC纯，不含杂带。
应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如HPLC分析图谱；应对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实，并作HPLC分析。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂性能评价要点
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂性能评价要点乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是一个严重的公共卫生问题。
全球每年约有1【)()万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(肝癌)，肝癌患者巾，75以上由HBV所致。
我国属HBV感染地方性流行区。
根据2006年全国乙型肝炎流行病学调查，我国现有的慢性HBV感染者约9300万人，其中慢性乙型肝炎患者约2000万例，每年因HBV导致的肝硬化和肝癌死亡约3o余万例，新发乙型肝炎病例约50～1O0万例。
乙肝防治是当前及今后相当长时间内要面临的重要任务。
HBV是血源传播性疾病，主要经血(如不安全注射等)、母婴及性接触传播。
乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科(hepadnavdae)，基因组长约3．2kb，为部分双链环状DNA。
急性乙型肝炎病毒感染HBVDNA 存在先阳性后消失的发展过程，慢性乙型肝炎病毒感染的自然史一般可分为4个期，即免疫耐受期、免疫清除期、非活动或低(非)复制期和再活动期，其中免疫耐受期HBVDNA滴度较高(3v于20000IU·mU)，免疫清除期表现为血清HBVDNA滴度大于2000IU·mL，但一般低于免疫耐受期。
非活动或低(非)复制期可表现为HBVDNA持续低于最低检测限。
部分再活动期患者表现为HBVDNA活动性复制。
但并不是所有HBV感染者都经历以上四期]。
HBV已发现有9个基因型(A～I)，每个基因型又可分为不同亚型，且存在基因型之间的重组现象。
我国已发现A、B、C、D基因型，中东部地区以B、c基因型占优势，其中北方地区(长江以北)主要为C2亚型；南方大部分地区流行株为B2、C2、C1亚型，并有少部分D基因型；西部地区尤其是新疆地区以D基因型为主，西部藏族居民中以C／D重组基因型为主lA型和B1亚型罕见乙型肝炎的实验室检查包括生物化学检测(如血清ALT和AST、血清胆红素、胆碱酯酶等)、HBV血清学检测(乙肝五项)以及HBVDNA、基因型和突变检测。
核酸检测试剂性能验证及质检(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
二 性能验证的5W1H
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
线性区间
y = -1.050x + 8.852 R² = 0.999
2
4
6
8
10
00
2
4
6
8
可报告区间只有经验证的线性范围上限不能满足临床需求时的定量检验项目。验证方案：选择在线性范围内高值标本，用试剂盒配套或指定的稀释液做系列等倍比稀 释。每份标本至少测定2次取平均值， 计算各稀释度的理论值与实测值对数值的差值。结果判断：如果某稀释度的理论值与实测值对数的差值≤±0.4，表明在此稀释度下结果 可靠。可报告范围上限为线性范围的上限值* 保证结果可靠的最大稀释倍数，下限为线性范围 下限。
34.26
35.65
37.91
N基因(CT值)
33.64
24.74
32.98
20200203
ORF1A/B(CT值)
38.41
35.3
39.77
N基因(CT值)
22.56
26.26
33.56
20200204
ORF1A/B(CT值)
44.42
36.61
40.85
N基因(CT值)
33.81
26.4
35.44
新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）
性能验证的5W1H
二
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
正确度/符合率
性能验证的5W1H
二
WHY
WHO
WHEN
WHAT
WHERE
HOW
正确度/符合率
完整版核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则
附件3:体外诊断试剂生产及质量限制技术指导原那么--核酸检测试剂生产及质量限制技术指导原那么核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而筛查特定基因的检测技术,如聚合酶链反响〔PCR、连接酶链反响〔LCR、转录依赖的扩增反响〔TMA〕等.核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂,目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域.为标准核酸检测试剂的生产及质量限制,特制定本技术指导原那么.国家药品监督治理部门将依据科学技术开展的需要,适时组织修订.一、根本要求〔一〕核酸类检测试剂生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准,并应符合有关法规的要求.〔二〕核酸类检测试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境〔实验室应当严格分区,人员和物品应当单向流动,以最大限度地预防实验过程中样品之间的污染和预防扩增产物的污染〕,获得?医疗器械生产许可证?；同时,应根据?体外诊断试剂生产实施细那么〔试行〕?的要求建立相应的质量治理体系, 形成文件和记录,加以实施并保持有效运行；还应通过?体外诊断试剂生产企业质量治理体系考核评定标准〔试行〕?的考核.企业应对试剂的使用范围作出明确规定,并经国家药品治理部门批准.〔三〕核酸类检测试剂在研制时,应当遵循科学、标准的原那么, 引物设计应当符合核酸检测设计的要求,扩增体系应设定合理的内标和外标,试剂须设置抗污染的特定举措,扩增产物须进行确证研究.〔四〕核酸类检测试剂生产过程中所用的各种材料及工艺,应充分考虑可能涉及的平安性方面的事宜.〔五〕生产和质量限制的总体目标：保证试剂使用平安、质量稳定、工艺可控、检测有效.二、原材料应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料.如果主要原材料来自市场〔从其他单位购置〕,应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购置合同、供货方提供的质量标准、出厂检验报告,以及该原材料到货后的质量检验资料.如果主要原材料〔包括工艺〕或其供应商有变更,应依据国家相关法规的要求进行变更申请.核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无DNase和RNase污染.1.dNTPs脱氧三磷酸核甘,核酸的组成成分,包括：dATR dUTR dGTR dCT可口dTTR 应为HPLCM、PC颜,无DNase和RNasW亏染.-20 C 保存.2.引物由一定数量的核甘酸构成的特定序列,通常采用DNA合成仪人工合成,合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化冻干粉,合成量不低于试剂盒总测试样品所需量.序列正确.纯度应到达电泳级〔PAGE或HPLCS,不含杂带.应提供合成机构出具的合成产物的质检证实,如PAG曲泳结果或HPLC分析图谱.应作HPLC分析和紫外光吸收分析.以紫外分光光度计测定OD260nm/OD280nm的比值在1.6 2.0之间,可视为合格引物.-20 C 保存.3.探针是指特定的带有示踪物〔标记物〕的核酸片段〔寡聚核甘酸片段〕,能与互补核酸序列退火杂交,用于特定核酸序列的探测.通常采用DNA合成仪人工合成,合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化,在5'-端标记荧光素报告基团或其他发光标记物,在3'-端标记荧光素淬灭基团,并经HPLCK其他适宜方法纯化.冻干粉,90D以上.纯度应到达HPLC纯,不含杂带.应提供合成机构出具的合成产物的质检证实,如HPLC分析图谱；应对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实,并作HPLC分析.应以可见一紫外分光光度计进行200 800nm扫描,在260nm处应有吸收峰.另外,根据标记的荧光素的不同,还应该在荧光素的激发波长处有吸收峰,如FAM荧光素在494nm、TET荧光素在521nm、TAMRA 荧光素在560nm 处有特异的吸收峰,杂交探针在493nm、625nm、685nm处有特异的吸收峰,检验合格后入库.避光、-20C保存.4.Taq DN课合酶具有DNA聚合酶活性,无核酸内切酶活性；具热稳定性,94C保温1小时后仍保持50%活性.-20 C保存.5.UNG 〔尿喀咤糖基化酶〕具有尿喀咤糖基化酶活性,无核酸外切酶及核酸内切酶活性,IU UNG在37c处理3分钟后,103拷贝以下含U模版应完全降解,不能产生扩增产物.-20 C保存.6.RT-PCfB 〔反转录扩增酶〕具逆转录酶活性和DNA聚合酶活性,无核酸内切酶活性；具热稳定性,94 C 1小时后仍保持50%舌性,-20C保存.三、生产工艺核酸类检测试剂的根本生产工艺通常包括：配制工作液、半成品检验、分装和包装.配制工作液的各种原材料及其配比应符合要求, 原材料应混合均匀,配制过程应对pH、电导率等关键参数进行有效限制.工艺研究的资料应能对反响体系涉及到的根本内容如样本类型、样本用量、试剂用量、反响条件、校准方法、质控方法、临界值确实定、稳定性和有效期,提供确切的依据.四、质量限制〔一〕半成品质量限制1.按批号抽取规定数量的半成品.2.以参考品/对照品进行半成品质量限制.如果产品具有国家标准品或参考品,应以其进行检验.如果产品不具有国家标准品或参考品,应根据规定制备相应的企业参考品进行半成品检验,企业参考品的质量标准不能低于国家药品监督治理部门已经批准的同类试剂的质量标准.3.半成品检验内容包括：参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度.结果应符合质量标准的要求.4.半成品检验合格后,按试剂盒组成及时进行分装和包装.〔二〕成品质量限制1.每一批核酸类检测试剂报批批量至少为5000人份.2.产品完成包装后,应根据生产量进行抽样和生产记录审核.3.以参考品/对照品或参考品进行成品质量检验.结果应符合要求.4.成品检验的内容应包括：参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度、线性和稳定性.5.稳定性试验每批试剂批放行前,必须完成稳定性试验,并到达相应的质量标准.稳定性试验可在在特定温度或特定条件下完成.。
核酸诊断试剂的质控和评价
核酸诊断试剂的质控和评价核酸诊断试剂是一种重要的分子生物学试剂，常用于检测和诊断病原体，包括病毒、细菌和寄生虫等。
为了确保核酸诊断试剂的准确性和可靠性，质控和评价是非常关键的。
本文将讨论核酸诊断试剂的质控和评价方法，并介绍一些常用的质控指标和评价方法。
一、质控方法1.内部质控：内部质控是通过设置阳性对照和阴性对照样本来监测试剂的准确性和稳定性。
阳性对照样本可以是已知含有目标基因或基因序列的标准样本，而阴性对照样本则不含有目标基因或基因序列。
内部质控可以在每次实验中进行，以确保试剂的性能符合预期。
2.外部质控：外部质控是将试剂样本发送给独立的实验室进行验证的质控方法。
常见的外部质控计划包括国家或地区的质量控制组织提供的质控样本。
通过参与外部质控计划，可以评估试剂的性能是否符合预期，并与其他实验室的结果进行比较。
二、质控指标1.灵敏度：灵敏度是指试剂检测目标基因的能力。
通常使用已知浓度的阳性对照样本来评估试剂的灵敏度。
灵敏度可以通过限定检测的最低浓度来表示，也可以使用阳性对照样本的最低检测浓度来表示。
2.特异性：特异性是指试剂只检测目标基因，不干扰其他基因的能力。
特异性可以通过使用阴性对照样本来评估，确保试剂不出现假阳性结果。
3.重复性：重复性是指在同一实验条件下，重复测量具有相同浓度的阳性对照样本时，试剂得到的结果是否一致。
重复性可以通过计算测量结果的方差或标准偏差来评估。
4.稳定性：稳定性是指试剂在存储和运输过程中性能的保持程度。
稳定性可以通过在不同时间点对试剂进行测试来评估，以及在不同温度和湿度条件下存储试剂来评估。
三、评价方法1.数据分析：对于质控数据，可以使用统计学方法进行数据分析。
常用的统计学方法包括均值、标准差、方差、相关系数等。
通过对数据进行统计分析，可以评估试剂的质控指标是否符合要求。
2.敏感性和特异性分析：对于核酸诊断试剂，可以使用敏感性和特异性来评价试剂的性能。
敏感性可以通过计算真阳性率（TPR）来评估，特异性可以通过计算真阴性率（TNR）来评估。
核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则
核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则首先，核酸检测试剂的生产需要满足以下几个原则：1.质量控制：核酸检测试剂的生产必须建立质量控制体系，确保产品质量的稳定性和可靠性。
包括严格的原料采购和检验、生产过程的严格控制、产品的稳定性测试等环节。
2.环境控制：生产核酸检测试剂需要在洁净、无菌的环境下进行，确保产品不受到污染。
同时，要定期对生产环境进行监测和清洁，确保环境的洁净度。
3.设备和仪器管理：生产核酸检测试剂需要使用合适的设备和仪器，并定期维护和校准，确保其正常运行。
同时，要对设备和仪器进行严格的管理，确保其不受到污染。
4.生产工艺和工序控制：核酸检测试剂的生产需要制定合理的生产工艺和工序，确保产品的质量和稳定性。
包括原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等环节。
其次，核酸检测试剂的质量控制需要注意以下几点：1.原料的质量控制：核酸检测试剂的原料包括核酸提取试剂、试剂盒配套试剂、质控品等。
需要严格对原料进行采购和检验，确保其质量符合要求。
2.检验方法的验证和标准化：核酸检测试剂的生产需要建立合适的检验方法，并进行验证和标准化。
确保产品的测定结果准确可靠，并能和其他实验室的结果相比较。
3.生产过程的质量控制：包括生产的各个环节，如原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等，需要制定相应的质量控制标准和流程，确保产品质量的稳定性和可靠性。
4.产品稳定性的测试：核酸检测试剂的稳定性是能否长期保存和使用的关键，需要对产品进行稳定性测试，包括温度、光照、湿度等条件下的稳定性研究。
5.质量问题的处理和纠正措施：当产品质量出现问题时，需要及时进行处理和纠正措施，并建立相应的改进措施，避免类似问题的再次发生。
最后，需要指出的是，核酸检测试剂的生产和质量控制是一个系统工程，需要全面考虑各个环节的影响因素，并建立相应的质量控制体系。
同时，随着科技的不断进步和应用的需要，核酸检测试剂的生产和质量控制技术也在不断发展和完善，需要及时关注和应用最新的技术和方法。
4种国产新型冠状病毒核酸检测试剂第三方质控品检测结果分析
左右产生,而IgG 产生晚于IgM ,但存在于体内的时间较长,其产生水平也是有规律的。
在本研究中,2例入院抗体阴性者,在第5天IgM 和IgG 抗体仍然为阴性,分别在第7天和第10天IgM 均转变为阳性,IgG 1例转阳,1例仍为阴性,在18d 转变为阳性。
通过检测核酸,发现这2例患者核酸CT 值都比较偏低,病毒载量较大,应该是处于刚发病状态,随后IgM 和IgG 数值逐渐增大,至入院30d 左右,核酸检测仍为阳性,未出院。
其余4例患者,入院时IgM 和IgG 抗体均为阳性,随后数值逐渐增大,IgM 抗体在入院10d 达到峰值,随后开始下降。
IgG 抗体数值逐渐增加,有的IgG 数值可增大为开始数值的10倍左右,随后30d ,已出院患者IgG 抗体开始下降,未出院患者还在增加。
通过研究发现,在疾病发展过程中,IgM 和IgG 抗体是逐渐增加的,当病情发展到一定阶段,病情开始好转时,IgM 会先于IgG 达到峰值,随开始下降,随着病情进一步好转,病毒载量进一步下降时,IgG 也逐渐下降,在体内存在一段时间后也可能会消失。
综上所述,核酸检测联合抗体检测对新型冠状病毒肺炎的诊断具有重要的临床意义。
同时对新冠特异性抗体进行动态检测,观察其产生规律与水平,也有助于判断新冠病毒肺炎的病程发展、疗效诊断及预后判断。
目前,新型冠状病毒肺炎仍在全球肆虐,本课题将继续后续研究,为新型冠状病毒肺炎诊疗提供更多的临床数据。
参考文献[1]Zhou P ,Yang XL ,Wang XG ,et al.A pneumonia outbreakas-sociated with a new coronavirus of probable bat origin [J ].Na-ture ,2020,579(7798):270⁃273.[2]黄亚兰,孟君,孙颖,等.新型冠状病毒肺炎患者住院时间和病程的影响因素分析[J ].热带医学杂志,2020,20(10):1380⁃1385.[3]杨默,韩锦伦,李桂霞,等.SARS 冠状病毒对血液系统的影响及可能的机制[J ].中国实验血液学杂志,2003,11(3):217⁃221.[4]宁雅婷,侯欣,陆雅,等.新型冠状病毒血清特异性抗体检测技术应用探讨[J ].协和医学杂志,2020,11(6):649⁃653.(收稿日期:2021⁃01⁃10)---5.712.4420.34---3.11-9.351.503.4228.1412.30167.587.68患者1患者2患者3--2.42IgMIgM IgG IgMIgG IgG IgM 10.823.49167.90IgGIgMIgG21.7314.2652.1925.106.85138.4622.1018.1118.8218.0715.5415.25患者414.9318.1511.6816.19患者544.1410.49251.93106.78265.281535.81278.74135.75239.31144.56患者64.4627.0816.2142.9314.9738.4811.8142.8310.2539.92表1新冠抗体IgM 和IgG 数值动态变化情况4种国产新型冠状病毒核酸检测试剂第三方质控品检测结果分析王晓玲王雪清董变变熊怡王效红任建平DOI :10.11655/zgywylc2021.06.059作者单位:030012太原,山西省中医院检验科通信作者:任建平,Email :**************新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)[1]是已知的可感染人类的第7种冠状病毒[2,3]。
怪不得实验总是做不好，原来是忽略了核酸质控！
怪不得实验总是做不好，原来是忽略了核酸质控！小翊一个正在读研的师弟最近因为实验进度的滞后被老板催的厉害，所以在聊天的时候很苦恼：为什么我的qPCR实验怎么老是做不好？昨天的文库产量还是那么低…….其实大多时候实验结果不佳的原因往往不在于实验试剂，也不在于实验操作，而在于一个简单却又易被忽视的问题：核酸样本质控。
核酸质控是什么？核酸质控，顾名思义就是对核酸样本进行质量控制。
主要是评估核酸的完整性、浓度及纯度。
核酸质控对实验有什么影响？核酸样本涉及的下游实验很多，质控不合格会影响实验结果的准确性，甚至得到错误的研究结论。
1）DNA样本质控不合格影响文库产量以及文库丰度对于DNA测序来说，样本质控不合格最直观的呈现就是文库产量低。
而低数量（浓度）、低质量样本均会影响最终文库的丰度（图1）。
文库丰度越高，代表文库承载的样本原始信息越多，最终目标区域会获得更有效的测序数据覆盖[1]。
图1 DNA质量对于文库丰度的影响A. 足够数量的高质量DNA分子能够产生高丰度的文库，很好的呈现起始样本信息；B. 低数量、高质量的DNA分子产生低丰度的文库，不能够完全代表起始样本；C. 质量较差的DNA样本则会产生低丰度的文库，因为已经损伤的DNA无法被构建文库；D. 某些情况下，低质量的样本可以通过增加起始投入量来适度弥补文库丰度[1]。
小贴士文库构建所需样本量与试剂盒的性能有关，微量高效建库试剂盒如翊圣Ultima建库试剂盒起始量低至500 pg亦可高效建库。
即使低质量样本如FFPE，微量样本如cfDNA均可获得优异的文库。
2）RNA样本质控不合格影响qPCR定量的准确性研究表明RNA样本的RIN值与qPCR实验的Ct值相关，RIN值越高（代表质量越好），则CT值越低[2]（图2）。
图 2. RNA的RIN值与Ct值的关系。
RIN：RNA Integrity Number，原理同DIN值小贴士qPCR实验建议用于逆转录的RNA样本RIN值>7。
检验试剂使用效果评价
检验试剂使用效果评价在医学诊断、科研实验以及各种质量检测领域中，检验试剂都扮演着至关重要的角色。
它们是帮助我们揭示未知、发现问题、做出准确判断的有力工具。
然而，要确保检验结果的准确性和可靠性，对检验试剂的使用效果进行全面、客观的评价就显得尤为重要。
首先，我们来谈谈检验试剂的性能指标。
准确性无疑是其中最为关键的一项。
这意味着试剂能够准确地检测出目标物质的存在与否以及其准确的含量。
如果一种试剂在准确性上表现不佳，那么基于其检测结果所做出的判断就可能存在偏差，从而导致误诊、误判等严重后果。
例如，在医学临床检验中，用于检测血糖的试剂如果准确性不高，就可能会使医生对患者的病情做出错误的评估，进而影响治疗方案的制定。
灵敏度也是一个重要的性能指标。
它反映的是试剂能够检测到的最低浓度的目标物质。
高灵敏度的试剂可以在目标物质含量极低的情况下依然给出准确的检测结果。
这在疾病的早期诊断中具有极大的意义，因为许多疾病在早期阶段，体内相关标志物的浓度往往较低。
以肿瘤标志物的检测为例，灵敏度高的试剂能够更早地发现肿瘤的存在，为患者争取到宝贵的治疗时间。
特异性同样不容忽视。
特异性强的试剂能够准确地区分目标物质和其他类似物质，避免出现假阳性或假阴性的结果。
比如，在病毒检测中，如果试剂的特异性不够，就可能将其他类似病毒误判为目标病毒，或者无法准确识别真正的目标病毒，从而给疫情防控带来困扰。
除了性能指标，试剂的稳定性也是评价其使用效果的重要方面。
试剂在储存和运输过程中需要保持其性能的稳定。
如果试剂容易受到温度、湿度、光照等环境因素的影响而变质，那么其检测结果的可靠性就会大打折扣。
例如，某些需要冷藏保存的试剂，如果在运输过程中没有严格控制温度，就可能失效。
在实际使用中，操作的简便性也会对试剂的使用效果产生影响。
操作复杂的试剂不仅增加了操作人员的工作难度和工作时间，还容易因为操作失误而导致检测结果不准确。
相反，操作简便的试剂能够提高工作效率，减少人为误差。
核酸检测质控工作总结汇报
核酸检测质控工作总结汇报
近年来，随着新型冠状病毒疫情的持续蔓延，核酸检测成为了疫情防控的重要
手段之一。
作为核酸检测工作的关键环节，质控工作的重要性不言而喻。
为了确保检测结果的准确性和可靠性，我们对核酸检测质控工作进行了总结汇报。
首先，我们建立了严格的质控标准和流程。
在样本采集、提取、扩增和检测的
每个环节，我们都制定了详细的操作规范，并严格执行。
同时，我们还建立了质控样本库，定期对各环节的质控样本进行检测，以确保检测结果的准确性。
其次，我们加强了人员培训和考核。
针对不同岗位的工作人员，我们制定了相
应的培训计划，并定期进行培训和考核。
只有通过考核并取得相应资质的人员才能参与核酸检测工作，以确保操作的规范和准确性。
此外，我们还加强了设备和试剂的质量管理。
定期对实验室设备进行维护和保养，确保设备的正常运行；对试剂的采购、存储和使用进行严格管理，避免试剂失效或污染对检测结果产生影响。
最后，我们建立了完善的质控体系。
定期对实验室的运行情况进行检查和评估，发现问题及时进行整改；建立了质控档案，对每一批样本的检测结果进行记录和归档，以备查验。
通过以上的质控工作，我们确保了核酸检测结果的准确性和可靠性，为疫情防
控工作提供了有力的支持。
同时，我们也不断总结经验，不断优化质控工作流程，提高工作效率和质量，为今后的核酸检测工作提供更加坚实的保障。
核酸检测质控工作总结报告
核酸检测质控工作总结报告
近年来，随着新型冠状病毒疫情的爆发，核酸检测成为了疫情防控的重要手段之一。
作为一项关乎公共健康的重要工作，核酸检测的质控工作显得尤为重要。
在过去的一段时间里，我们对核酸检测质控工作进行了总结和分析，以期不断提高检测准确性和可靠性。
首先，我们对核酸检测设备进行了全面的检查和维护，确保设备的正常运转和准确度。
我们定期对设备进行校准和维护，及时更换老化的部件，保证设备的稳定性和精准度。
其次，我们加强了对人员的培训和管理。
我们对实验室工作人员进行了全面的培训，包括操作规程、样本采集和处理、数据记录等方面的培训，确保操作规范和标准化。
同时，我们建立了完善的质控体系，对每一位工作人员的操作进行严格监督和管理，确保每一步操作都符合标准要求。
此外，我们还加强了对核酸检测试剂的质量控制。
我们严格按照生产厂家的要求进行试剂的保存和使用，避免试剂受到污染或变质。
同时，我们定期对试剂进行质量检测，确保试剂的准确性和稳定性。
最后，我们建立了完善的数据管理和质量评估体系。
我们对每一批样本的检测结果进行记录和保存，建立了完整的数据档案。
同时，我们定期对数据进行分析和评估，发现并及时纠正可能存在的问题，确保数据的准确性和可靠性。
通过以上工作的不懈努力，我们的核酸检测质控工作取得了显著的成效。
我们的检测结果准确可靠，得到了广大患者和社会的认可和信赖。
我们将继续加强质控工作，不断提高检测水平，为疫情防控工作做出更大的贡献。
核酸检测质控工作总结报告
核酸检测质控工作总结报告
近年来，随着新型冠状病毒的爆发，核酸检测成为了疫情防控中至关重要的一环。
而在核酸检测过程中，质控工作更是至关重要，它直接关系到检测结果的准确性和可靠性。
为了总结核酸检测质控工作的经验和教训，我们进行了一次全面的总结报告。
首先，我们对核酸检测质控工作进行了梳理和归纳。
在实际工作中，我们建立了完善的质控体系，包括从样本采集、核酸提取、PCR扩增、结果解读等各个环节的质控措施。
通过对每个环节的质控工作的落实情况进行了详细的梳理和总结，发现了一些工作中存在的问题和不足之处。
其次，我们对核酸检测质控工作中的经验进行了总结。
在实际工作中，我们积累了大量的经验，包括样本采集时的注意事项、核酸提取过程中的技巧、PCR扩增条件的优化等方面的经验。
这些经验对于确保检测结果的准确性和可靠性起到了至关重要的作用。
最后，我们对核酸检测质控工作中的教训进行了总结。
在实际工作中，我们也遇到了一些问题和挑战，例如在样本采集过程中出现了一些不规范操作、在核酸提取过程中出现了一些技术问题等。
通过总结这些教训，我们不仅可以更好地改进工作中存在的问题，还可以为今后的工作提供更好的参考。
总的来说，核酸检测质控工作总结报告的制定，不仅是对过去工作的总结和反思，更是对未来工作的规划和展望。
我们相信，在今后的工作中，我们将会更加严格地落实质控措施，不断提高核酸检测的准确性和可靠性，为疫情防控工作提供更加有力的支持。
罗氏核酸检测系统的质量控制
罗氏核酸检测系统的质量控制罗氏核酸检测系统是一种用于检测特定病原体的技术，如新冠病毒。
在核酸检测中，质量控制非常重要，因为它可以确保检测结果的准确性和可靠性。
这篇文章将介绍罗氏核酸检测系统的质量控制方法。
罗氏核酸检测系统的质量控制可以分为内部质控和外部质控两个方面。
内部质控是指通过在检测过程中加入已知的阳性和阴性对照样本来进行检测结果的验证。
阳性对照样本是已知带有目标病原体的样本，而阴性对照样本是不含目标病原体的样本。
通过与这些对照样本进行比对，可以检验系统的敏感性和特异性。
如果阳性对照样本能被正确检测出来，而阴性对照样本没有产生错误的阳性结果，就可以认为系统的质量控制合格。
外部质控是指将系统检测的样本发送给独立的实验室进行再次检测来验证结果的准确性。
这种质控方法能够排除操作错误等人为因素的影响。
通过与外部实验室的检测结果比对，可以评估系统的一致性和可信度。
在进行质量控制时，需要根据标准操作程序进行操作，确保每次检测都能够得到可靠的结果。
还需要使用高质量的试剂和设备，以避免不必要的误差。
在罗氏核酸检测系统的质量控制中，还需要定期进行性能评估和监测。
这些评估和监测可以通过比对系统的检测结果与已知结果的对照来进行。
还需要记录和跟踪检测系统的性能，以便及时发现和解决潜在的问题。
罗氏核酸检测系统的质量控制对于确保检测结果的准确性和可靠性非常重要。
通过内部质控和外部质控的方法，可以验证检测系统的性能，并排除人为因素的影响。
定期进行性能评估和监测也是必要的，以保证系统的质量控制符合标准要求。
只有在质量控制合格的情况下，罗氏核酸检测系统才能得到广泛应用。
新型冠状病毒核酸检测试剂盒产品的分析与评价
李达，杨忠，王军，等.新型冠状病毒核酸检测试剂盒产品的分析与评价「J］.76•医疗卫生装备,2020,41(12)：76-80,85.•学术论坛・新型冠状病毒核酸检测试剂盒产品的分析与评价李达打杨忠12,王军12,王会如2(1.北京市医疗器械检验所，北京101111；•医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室，北京101111)［摘要］详细介绍了10种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒的特点和相关技术指标，从样本制备、检测靶点和阈值判断3个方面总结了不同生产厂家的SARS-CoV-2核酸检测试剂盒产品的设计差异和不足。
得出了检测限水平差异是此类产品重要的风险评估指标，提出了使用核酸评价物质衡量试剂盒产品检测限的必要性，以期为SARS-CoV-2核酸检测试剂盒产品的评价提供参考。
［关键词］SARS-CoV-2；荧光定量PCR法;核酸检测；检测靶点；产品评价［中国图书资料分类号］R318；R197.39［文献标志码］A［文章编号］1003-8868(2020)12-0076-06DOI：10.19745/j.1003-8868.2020280Analysis and evaluation of SARS-CoV-2nucleic acid testing reagent kitLI Da1,YANG Zhong12,WANG Jun12,WANG Hui-ru12*(1.Beijing Institute of Medical Testing,Beijing101111,China;2.Beijing Key Laboratory of Medical Device Testing andSafety Evaluation,Beijing101111,China)Abstract The characteristics and related technical specifications of10novel coronavirus(SARS-CoV-2)nucleic acid detection kits were introduced in detail,and the design differences and shortcomings of SARS-CoV-2nucleic acid detection kits from different manufacturers are summarized in terms of sample preparation,detection targets and threshold judgment.It was concluded that the difference in detection limit level was an important risk assessment index of these kits,and the necessity of using nucleic acid evaluation substances to measure the detection limit of the kits was proposed as a reference for the evaluation ofSARS-CoV-2nucleic acid test kits.［Chinese Medical Equipment Journal袁2020,41(12)：76-80袁85］Key words SARS-CoV-2;fluorescence quantitative PCR;nucleic acid detection;detection target;product evaluation0引言2020年1月，研究人员经过病毒分离并测序不明原因肺炎患者的样本发现了一种区别于中东呼吸综合征/middle east respiratory syndrome,MERS)和严重急性呼吸综合征/severe acute respiratory syndrome, SARS)的新型冠状病毒「1］。
新冠核酸检测风险评估与质量保证(牛广华)
患者部分：由前来门诊化验尿液常规的患者完成
Table 1 –Consequence levels 表1-结果严重程度10级示类
C (Consequence) Ranking-potential damage for patients and employees 结果严重程度等级
流
程 步
潜在风险
骤
影响
严 重 性
发 生 率
风 险 系 数
质量改进计划
建议性风险消除措施
建议性结果预防措施
标 试剂加载不 试剂加载不当会导致质控 4 3 9 仪器自动提示试剂加载 培训操作者按照厂家推荐的
本当
结果错误
不成功，并且拒绝该试 要求加载试剂
检
剂
测
标 携带污染 本 检 测 标 压积干扰 本 检 测
修改制度及SOP文件并组织人员培训
案例分析
（原因分析占2/3）
新冠核酸检测风险评估
鱼骨图分析核酸检测项目影响因素
利用经验及头脑风暴方式，将影响因素绘制鱼骨图，利用评分结果确定重点 改善风险因素。
留样不合格 人
检测不及时
仪器
患者
专业知识欠缺
检验
人员 搞混标本 搞混标本
护工 送检不及时
未按SOP操作
subsequent failure mode
有高的可能性探测到到检验结果发生错误
表4–风险接受程度判定标准
Risk Acceptable description 风险接受描述
Key 图类
Unacceptable risk 不可接受风险
Suboptimal（Need to take action）
罗氏核酸检测系统的质量控制
罗氏核酸检测系统的质量控制罗氏核酸检测系统是一种常用的检测新冠病毒的方法，有效地帮助医务人员快速准确地诊断感染者。
为了保证检测结果的准确性和一致性，质量控制是非常重要的一环。
质量控制是指在标准化的实验室操作和使用过程中，通过加入已知含量的核酸样本，检测和评估检测过程的准确性、敏感性和特异性。
它可以衡量实验的稳定性、准确性和可重复性，并帮助排查潜在的误差来源。
下面我们将具体介绍罗氏核酸检测系统的质量控制的几个方面。
1. 内控质量控制：内控是指在核酸检测中加入的一种人工合成的DNA序列，用于评估实验操作过程中有无外源性污染或试剂退化等因素。
在罗氏核酸检测系统中，内控一般是指人类全长基因组DNA片段。
通过监测内控的扩增情况，可以确定样本处理过程中污染的可能，及时采取措施消除错误结果。
2. 外部质量控制：外部质量控制是指将已知含量的核酸样本，由独立的实验室进行检测，并与罗氏核酸检测系统的结果进行比对和评估。
通过参与外部质量控制，可以评估罗氏核酸检测系统在不同实验室之间的一致性和可比性，并指导实验室进行质量改进和技能培训。
3. 质量控制样品的制备：质量控制样品制备过程中需要严格控制实验条件和操作流程，确保每个批次的质量控制样品的一致性。
这包括样品的制备浓度、配液过程中的精确度、反应体系的一致性等。
制备过程中还应考虑可能的样品降解、污染等因素，并根据实际需要进行相关的修正和验证。
4. 质控结果的统计分析：对质量控制样本的检测结果进行统计学分析，包括计算平均值、标准差和变异系数等指标，通过这些指标可以评估检测结果的准确性和稳定性，并及时采取纠正措施。
还可以根据不同的样本类型和检测序列，建立相应的质量控制参考值，以指导实验过程和结果解读。
质量控制在任何检测系统中都是非常重要的一步，在罗氏核酸检测系统中也不例外。
它可以确保实验的稳定性和可靠性，减少误差，提高检测结果的准确性和一致性。
只有通过不断改进和加强质量控制，才能更好地发挥罗氏核酸检测系统的作用，为新冠病毒的防控提供可靠的支持。
新冠病毒核酸检测准确性评估报告
新冠病毒核酸检测准确性评估报告本报告旨在对新冠病毒核酸检测的准确性进行评估。
以下是我们的评估结果：1. 方法介绍：我们对两种主要的核酸检测方法进行了评估，包括实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和循环放大法等。
这些方法能够检测新冠病毒RNA的存在，并通过分析样本中的核酸序列来确定感染与否。
2. 样本采集：我们使用了多种来源的标准样本，包括临床确诊的新冠病毒患者样本、健康人群的标准样本以及其他相关呼吸道疾病样本等，以确保评估结果的准确性和可靠性。
3. 结果分析：我们根据收集的数据进行了综合分析，并对各种检测方法的准确性进行了比较。
我们发现，RT-qPCR方法在准确性上表现出色，具有较高的敏感性和特异性。
循环放大法等其他方法的准确性稍低，但仍然能够满足新冠病毒检测的需求。
4. 结论：总体而言，新冠病毒核酸检测的准确性是可靠的，尤其是使用RT-qPCR方法进行检测。
然而，我们也注意到，在实际操作中，样本的采集和处理可能影响检测结果的准确性。
因此，建议在进行核酸检测时，注意采集标本的质量，并根据临床症状和其他相关检测结果综合分析，以确定最终的诊断结论。
以上是我们对新冠病毒核酸检测准确性的评估报告，希望能为相关领域的研究和实践提供参考和指导。
追加：1. 核酸检测限制：虽然核酸检测是目前新冠病毒的主要检测手段，但也存在一些限制和局限性。
例如，核酸检测可能存在假阴性和假阳性的情况，特别是在感染初期或病毒载量较低时。
此外，检测结果还受样本采集和运输的影响，以及检测方法的准确性和灵敏度等因素的限制。
2. 多种检测方法的综合应用：为了提高新冠病毒的检测准确性，可以考虑综合应用多种检测方法，如PCR、抗体检测等，以增加诊断的敏感性和特异性。
同时，结合临床表现和其他相关指标的综合分析，可以更准确地判断患者是否感染了新冠病毒。
以上是我们关于新冠病毒核酸检测准确性评估的补充内容。
罗氏核酸检测系统的质量控制
罗氏核酸检测系统的质量控制罗氏核酸检测系统是一种用于检测生物体中的核酸序列的技术，被广泛用于病毒、细菌和基因筛查等领域。
质量控制在核酸检测中非常重要，可以确保系统的准确性、精确性和可靠性。
本文将从样本准备、实验过程和结果解读等方面介绍罗氏核酸检测系统的质量控制。
在样本准备环节中，必须严格控制样本采集和储存的条件，以确保样本的完整性和纯度。
需要设置负对照样本和阳性对照样本，用于验证系统的准确性和可靠性。
负对照样本应是不含目标核酸序列的样本，而阳性对照样本则应包含目标核酸序列。
在实验过程中，需要注意严格的操作规范，避免交叉污染和误操作。
操作人员应经过专业培训，并严格按照操作步骤进行操作。
实验中的试剂和仪器设备也需要进行质量控制。
对于试剂，要检查其有效期和贮存条件，并进行试剂空白对照来验证试剂的纯度。
对于仪器设备，要进行定期的维护和校准，确保其正常运行。
在核酸检测的实验过程中，还需要进行质量控制的步骤有温度控制、时间控制、反应液体积控制和混匀控制等。
温度控制要求在合适的温度范围内进行反应，避免温度过高或过低导致反应结果失真。
时间控制要求在规定的时间范围内进行反应，过长或过短的反应时间都可能产生误差。
反应液体积控制要求准确传递试剂的体积，避免因液体积误差导致结果的偏差。
混匀控制要求充分混匀反应体系，确保样本和试剂充分混合，避免反应不均。
在结果解读方面，质量控制主要包括阳性对照和阴性对照的结果解读。
阳性对照结果应呈现目标核酸序列的阳性信号，而阴性对照结果应呈现无目标核酸序列的阴性信号。
如果阳性对照结果呈阴性或阴性对照结果呈阳性，说明质量控制失败，需要重新进行检测。
罗氏核酸检测系统的质量控制是保证检测结果准确可靠的关键。
在样本准备、实验过程和结果解读等环节都需要严格控制，并认真检查质量控制结果，避免因质量控制失败而导致检测结果的误差。
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➢样品中的干扰物质：
✓ 病人本身：如自身免疫性疾病（高免疫球蛋白血症 等），黄疸类、溶血类和高脂类病人
✓ 病人使用特殊药物 ✓ 样品处理过程：如不同抗凝剂，不同试管，某些
化学或去污剂以及样品反复冻融等因素
核酸检测中造成非特异性的因素
➢交叉反应：主要是引物序列与被测物中序列
核酸检测抑制物的作用原理
➢核酸扩增需要酶的参与 ➢酶发挥作用需要辅助因子以及特殊的条
件
➢辅助因子与酶的特殊部位物理结合后发
生反应
➢任何结合辅助因子、改变环境或阻止酶
与辅助因子特异结合的物质均抑制反应
核酸扩增常见的抑制物
➢血红素及其代谢物影响DNA聚合酶的反应，不
同来源的DNA聚合酶受影响程度不同
➢疾病的时期: ➢样品的数量:
检测方法
➢盲法平行检测
➢结果不一致样品的进一步分析
诊断试剂的临床评价指标
➢ 灵敏度 （Sensitivity）：在阳性样品中检出阳性
样品的百分比
➢ 特异性（Specificity）：在阴性样品中检出阴性
样品的百分比
➢ 样品分布 (eg. STDEV; )
Suitability of cut-off
如果试剂对仪器无特殊要求，则应选择不同 品牌或不同型号
➢有不同专业人员参加 ➢至少两家省级单位
➢对实施实验单位的能力进行评价
指综合能力包括检测能力、仪器设备和人பைடு நூலகம் 等,主要检测盲样，符合要求这方能参与
对照方法或试剂的要求
➢新诊断试剂
✓ 疾病症状以及临床诊断 ✓ 相关试剂 ✓ 研究对象的追踪随访 ✓ 疾病的判断标准
➢痰中的酸性多聚糖或糖蛋白均影响DNA聚合酶
的反应
➢脑脊液和尿中可能含有抑制物，但具体物质不
明确
➢粪便中的胆汁盐是PCR反应的强抑制剂 ➢肝素可与DNA聚合酶结合，对不同的酶抑制程
度不同
➢核酸提取试剂中的某些物质具有抑制作用：
EDTA，SDS，盐酸胍等
内标的种类
➢未修饰性的内标 ➢异源性内标 ➢修饰性的内标
特异性
➢定义：主要指假阳性的检出情况
➢评价方法：主要是通过检测部分样品，
或特殊样品尤其是性质相近的标志物 （如不同基因型或血清型样品），分析 出现假阳性的情况；而且分析时要注意 在不同量时的特异性
造成非特异性的因素
➢原料：主要纯度不够，原料本身存在非特异反应
物质
➢反应模式：如孵育时间缩短非特异反应可提高
存在一定程度的同源性
➢样品之间的污染：气溶胶中含有目的微
生物，对照的污染等
➢扩增产物的污染：扩增产物聚集在器皿、
台面、设备以及通风设施上等造成污染
污染的处理
➢酶的灭活（UNG） 主要用于灭活产物 ➢光化学处理 用可溶性psoralen的衍生物处理，
在用长紫外照射 即可灭活产物、也可减少样品的 污染
➢化学处理方法 用于表面的处理
✓ 10%次氯酸钠 ✓ 紫外照射
➢物理的: 专用移液器、一次性试管架、紫外灯、 PCR工作罩、滤芯吸嘴。
样品典型的正态分布
Cut-off
Frequency of observations
Negative population
Positive population
0
1
10
➢干扰物质或抑制物质
可以来自与病人（药物）；也可来自于样品的处 理过程（反复冻融，溶血等）；或样品本身存在抑制 物等
➢样品基因型和血清型的影响
有些被测物存在多种基因型或血清型，若原材料 没有广谱性，则可影响灵敏度
➢试剂的灰区：
对特殊的试剂要制定灰区，如FDA要求HCV抗体试剂 临界值以上均为灰区，对灰区样品要加倍重试
均值和标准差，临界值等于均值加上2个标准差
➢意义：在临界值以上的样品有95%为真阳性
➢
➢临界值的评估：检测一系列正常人群、非正常人群
和特殊人群对临界值进行核对
➢表示方法：以量值表示（如ng，单位，CFU/ml，
PFU/ml，拷贝数等）；以稀释度表示
影响灵敏度的因素
➢特殊疾病
有一些特殊的病人，其代谢异常可能影响标志物 的检测
➢临床前样品虽有代表性，但数量毕竟有
限并不能完全代表临床情况
➢通过临床试验对临床前制定的各项指标
进行修正
➢可以发现或预测在实际应用中遇到的问
题，在说明书中提醒用户注意
临床研究的基本要求
➢伦理考虑
✓ 一般样品 ✓ 特殊样品
➢对研究对象保密 ➢临床前研究结果
对临床研究单位以及人员的要求
➢从事相应的工作 ➢具有相应的技术人员 ➢有相应的仪器设备
➢ 阴性预期值 (NPV)：若样品没有反应，则不含检测
物的可能性
➢ 阳性预期值 (PPV)：若样品有反应，则含检测物体
的可能性
➢ 重复性（Reproducibility） ➢ 准确性（Accuracy) ➢ 精确性 (Precision）
灵敏度
➢定义：试剂的检测限度
➢方法：检测一定数量的阴性样品，计算均值和标准差
➢已有同类产品的试剂
可选择同类试剂; 若评价试剂所用的原料为 基因工程产品，应用非基因工程 原料制备的 试剂进行评价；对结果不一致样品的处理
临床样品的选择
➢人群: 根据试剂的适应症选择不同的人群 ➢样品: 应为自然人群，尚未用同类试剂进行筛
查过
➢选择不同地区: 代表被测物的不同流行率，代
表被测物的不同基因型或血清型
100
Percentage of maximum signal (log)
企业
金豪 万泰 GBI 耀华 科华 丽珠 华美 新创 普生 绿科 中山 理利 Murex 梅里埃
特异性与值关系的分析
假阳性
特异性（%）
值
3
99.70
-3.985
2
99.80
-3.688
5
99.49
-3.423
1
99.90
✓ 连接扩增反应（LAR） ✓ 以FEN-1 DNA聚合酶为基础的扩增 ✓ 循环探针
➢信号扩增
免疫检测的原理
➢直接法 ➢间接法
免疫反应中按标记物分类
➢同位素标记的放射免疫法 ➢酶标记的酶联免疫法 ➢生物素标记 ➢化学发光物质标记的化学发光法 ➢荧光素标记 ➢时间分辨法 ➢其他标记物
临床研究的意义以及目的
体外诊断试剂的临床研究
体外诊断试剂的种类
➢化学或生化检测试剂 ➢免疫学检测试剂
✓ 抗原检测 ✓ 抗体检测
➢核酸检测试剂
✓ 核酸杂交技术 ✓ 核酸扩增技术
➢其他试剂
核酸扩增技术
➢目的片段的扩增
✓ 聚合酶链反应（PCR） ✓ 以转录为基础的扩增技术（TAS） ✓ 链取代的扩增技术（SDA）
➢探针的扩增