高效液相色谱仪的使用
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
高效液相色谱仪的操作规程
高效液相色谱仪的操作规程
说明：高效液相色谱仪应安装在有强力通风的实验室中，实验室的高处和低处应设置两个通风口，以利于低沸点和高沸点有机溶剂蒸汽的排放，以保证实验室工作
人员的安全。
一．目的：提供通用的高效液相色谱仪的操作规程
二．范围：适用于侨昌化学有限公司高效液相色谱仪的操作
三．操作规程
1.准备好用作流动相的各种溶剂，经过滤（通过≤0.5um的滤膜）、脱气后，按比例配好
置于储液罐中。
梯度洗脱时，每种溶剂置于一个储液罐中，将溶剂过滤器插入储液罐底部，
2.将选用的高效液相色谱柱安装在流路中，拧紧连接的柱接头。
3.检查并连接好电路，将检测器输出信号线与数据处理系统连接好。
4.打开高压输液泵电源开关，调节色谱流动相流量 1.0ml/min。
（对内径 4.6mm、柱长
10—25cm色谱柱，填充5—10um填料，柱前压约6—15MPa）。
5.PURGE,冲洗泵头3-5MIN
6.开泵，平衡色谱柱系统。
7.打开可变波长紫外吸收检测器电源，调节好检测波长，排除吸收池中的气泡，待检测器
输出的基线稳定后，就可进行分析。
8.检测
9.若使用折光指数检测器，打开电源后，首先确定检测器温度，待恒温后，再选定待测的
折光指数间隔，待基线稳定后可进行分析。
10.如欲进行梯度洗脱，可由梯度控制单元设定欲进行的梯度洗脱程
序，进样后就可按梯度洗脱程序进行分析。
11.分析结束后，继续用流动相清洗进样阀和检测器约10—20min。
12.依次关闭检测器、梯度洗脱装置，高压输液泵的电源。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。
●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。
水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。
●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。
3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。
●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。
然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。
在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。
●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。
4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。
5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。
●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。
6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。
●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。
高效液相色谱的使用流程
高效液相色谱的使用流程简介高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化分析化学物质的常用技术。
本文将介绍高效液相色谱的使用流程。
使用流程1.准备工作–检查仪器：确保HPLC仪器处于正常工作状态，检查进样器、流动相泵、柱温箱和检测器等部件。
–准备试剂：根据需要，准备好所需的溶剂、标样溶液和样品溶液，并确保它们纯净、稳定且符合实验要求。
–校准仪器：进行必要的仪器校准，包括流速校准、进样器校准和检测器校准等。
2.设置分离条件–选择合适的柱：根据需要选择合适的固定相柱，例如反相柱、离子交换柱或手性柱等。
–设置流速：根据柱的要求和分离物的性质，设置合适的流速，一般为0.5-2.0 mL/min。
–选择合适的流动相：根据待分离物的性质，选择合适的流动相体系，包括溶剂和缓冲液等。
–设置柱温：根据实验要求和分离物的性质，设置适当的柱温，一般常温即可。
–设置检测器：选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器或质谱检测器，根据需要设置检测器的波长、激发波长等参数。
3.进样与分析–进样方式：根据需求和样品性质，选择适合的进样方式，包括自动进样器、手动进样器或固相萃取柱等。
–进样量：根据样品的浓度和分析要求，设置合适的进样量，一般范围为1-20 μL。
–开始分析：点击软件界面上的“开始”按钮，启动HPLC运行，此时仪器开始运行，进行样品分离和检测。
–数据记录：在分离过程中，系统会实时记录和显示数据，包括峰面积、保留时间和峰高等结果。
4.数据分析与解读–峰面积计算：根据检测器记录的峰面积数据，通过内置的计算公式，计算出目标化合物的峰面积。
–保留时间测定：根据检测器记录的保留时间数据，可以获得目标化合物的保留时间，用于鉴定和定量分析。
–峰高测定：根据峰高数据，可以了解化合物的峰高大小，用于比较不同样品或条件下的分离结果。
–结果解读：根据数据分析结果，判断样品中所含化合物种类和含量，并与已知标准进行对比验证。
高效液相色谱仪操作步骤(精)
本文由北京SEO整理发布高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者：dujinx正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正
常。
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、四 元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待 泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积
的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如
超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操
作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声
二、样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，
确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反
相柱，则极性比流动相大；若为
正相柱，则极性比流动相小）的 溶剂制备样品溶液，尽量用流动
相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使 用定量管定量时，进样体积应为 定量管的3～5倍；
第四步、注意事项
人的方法及实验结果；
3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针
筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用 5%稀硝酸溶液浸泡后再洗
四、出现肩峰或分叉
1.样品体积过大
1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰 的15% 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
高效液相色谱仪的基本操作和使用
高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。
-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。
-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。
-设置所需的操作温度。
2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。
- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。
3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。
-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。
4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。
- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。
5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。
-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。
6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。
-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。
7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。
-根据需要，可以进行多次重复运行。
8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。
-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。
9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。
10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。
-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。
-做好仪器维护和维修记录。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。
二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。
2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。
3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。
4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。
5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。
6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。
四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。
2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。
3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。
4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。
五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。
通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。
高效液相色谱仪的使用方法及注意事项
高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
高效液相色谱仪使用注意事项：1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。
高效液相色谱仪操作手册(戴安全自动)
液相色谱操作规程-U3000(全自动)一、操作前准备:1.1流动相的配制:1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜(0.45um)还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理:1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品,用适当的溶剂(最好采用流动相或流动相的主成分)进行充分溶解(也可借助超声波进行超声溶解),使其浓度为0.1~1mg/mL(根据检测结果再适当调节溶液的浓度)。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜(0.45um)还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择:根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机:2.1打开电源,打开仪器接线板电源开关;2.2打开电脑显示器电源,打开电脑主机电源,启动电脑;2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源;等待各个部件自检完成2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标(工作站主程序)。
2.6在左下方点击仪器,则在右边会自动显示该仪器控制面板2.7 旋开泵上的排液阀(两圈以上);设置A通道为100%,点击“冲洗”,然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”;(默认冲洗5分钟);然后用同样的方法分别“冲洗”流路中其他通道气泡;排完气泡后关闭排液阀;2.8设置流动相的比例及流速后,点击“马达”。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
2.9在控制面板“自动进样器”控制框中,分别执行“灌注注射器”,“清洗缓冲环”,“清洗针外壁”,执行“到进样位置”;(操作过程中注意注射器有没有气泡。
如有先机器排气,如果不行手动拆除排气泡。
)3.0 在控制面板“柱温箱”控制框中,设置准备分析样品所使用的柱温箱温度。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3. 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4. 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9. 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10. 登记。
一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答:关于漂移问题：1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
高效液相色谱仪使用说明
高效液相色谱仪使用说明1.准备工作-确保仪器处于良好的工作状态，包括液相泵、进样器、检测器等。
-检查液相系统的压力，确保其正常运转，防止发生泄漏。
-配制样品溶液，根据实验要求合理选择溶剂，并进行适当的预处理（如过滤、稀释等）。
2.仪器开机-打开HPLC主机电源，并等待其自检完成。
-检查HPLC控制软件是否正常运行，确保能够与仪器进行连接。
-点击仪器上的电源按钮，启动液相泵和检测器。
3.参数设置-在HPLC控制软件上设置分离柱类型、柱温、流速、梯度时间等参数，根据具体分析需求进行调整。
-设置进样器类型、进样量、进样方式等参数。
对于自动进样器，可以根据需求选择自动取样量和进样模式（如全自动、自动稀释等）。
4.样品进样-将样品注射器浸入样品溶液中，吸取适量的溶液。
-将注射器插入进样器，并按照设定的参数进行进样。
-如果使用自动进样器，将样品放置在样品托盘上，设置好进样量和进样模式，然后启动自动进样程序。
5.进行分离-点击HPLC控制软件上的“运行”按钮，启动色谱分离程序。
-观察检测器的信号和色谱图，确保分离效果良好。
-如有需要，可以对实时结果进行记录，以便后续的数据分析和处理。
6.清洗仪器-在实验结束后，关闭色谱柱，避免柱材料干燥堵塞。
-关闭液相泵和检测器，将废液排空。
-按照要求进行液相系统的清洗和保养，包括冲洗柱子、清洗进样器、检测器等。
7.数据处理-将HPLC分析得到的数据导出到计算机中。
-使用相关的数据处理软件进行数据处理和分析，如峰面积计算、定量分析、质谱图的解释等。
-如有需要，可以生成报告或结果图表，以备后续参考。
注意事项：-严格按照操作规程操作仪器，避免操作失误导致意外事故和数据异常。
-定期维护和保养仪器，确保其长期有效运行。
-注意安全使用有毒、易燃、易爆的溶剂和试剂，如有需要应采取相应的安全措施。
-遵守实验室规章制度，切勿滥用仪器，保证仪器的正常使用和他人使用的权益。
总结起来，高效液相色谱仪的使用说明主要包括准备工作、仪器开机、参数设置、样品进样、分离操作、仪器清洗和数据处理。
高效液相色谱仪的使用
高效液相色谱仪的使用高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析工具，通过使用高压泵将样品溶液推动通过填充在色谱柱中的固定相，在流动相的作用下，不同成分会以不同的速率通过色谱柱，从而实现分离和定量分析。
HPLC的使用需要经过以下主要步骤：1.选择合适的色谱柱和固定相：HPLC的分离效果主要依赖于色谱柱的选择。
不同的样品可能需要不同类型的固定相。
例如，反相色谱柱适合亲水性化合物的分离，离子交换色谱柱适用于离子化合物的分离。
2.准备样品：样品的准备是HPLC分析的关键步骤。
通常需要将样品溶解在适当溶剂中，以便于注射进入色谱柱。
此外，样品中的固体颗粒需要通过滤器进行去除，以保护色谱柱。
3.设置HPLC系统：在使用HPLC前，需要设置仪器参数，如流速、柱温、检测器波长等。
这些参数的设置根据分析目的和样品性质来确定。
4.样品注射：将样品通过自动进样器或手动注射器注入到HPLC系统中。
注射量应根据样品浓度和需要的分析灵敏度来确定。
5.进行分离：样品在色谱柱中进行分离的过程是通过色谱柱中的固定相和流动相之间的相互作用实现的。
样品分子与固定相发生不同程度的相互作用后，以不同的速率通过色谱柱。
6. 检测和定量：分离出的化合物通过检测器进行检测，通常常用的检测器有紫外-可见（UV-Vis）检测器、脉冲电化学检测器、荧光检测器等。
通过与标准样品进行比较，可以确定每种化合物的浓度。
7.数据处理和分析：使用特定的软件对检测到的数据进行处理和分析，得到分析结果。
可以通过峰面积、保留时间等参数来定量目标物质。
此外，为了保证HPLC的准确性和重复性，还需要进行系统的验证和校正。
例如，通过使用标准物质进行重复性和准确性的测试，以确保HPLC系统的稳定性和结果的可靠性。
总之，高效液相色谱仪具有快速、高效、准确、灵敏度高和选择性好等优势，在化学、生物、医药等领域的研究和分析中起着重要作用。
熟练掌握HPLC的使用方法和技巧，对于提高实验效率和获得可靠的结果是至关重要的。
高效液相色谱仪的使用流程
高效液相色谱仪的使用流程1. 准备工作在使用高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作，以确保仪器能够正常运行和准确测试样品。
以下是具体的准备步骤：•确保高效液相色谱仪所需的溶剂和试剂齐全，并检查其保存状态；•检查色谱柱的状态，包括是否需要更换或清洗；•检查液相泵、进样器和检测器的状态，保证其能够顺利工作；•清洗色谱柱和相关管道，以去除可能存在的残留物；•校准液相泵和检测器，以确保其准确度和稳定性。
2. 样品准备在进行高效液相色谱测试之前，需要对样品进行一些准备工作，以确保样品能够被准确分析和检测。
以下是样品准备的一般步骤：•根据分析测试的目的选择合适的样品，并保证其保存状态良好；•如果需要，进行样品的预处理工作，如浓缩、稀释、过滤等；•如果样品中含有固体颗粒或杂质，需进行样品的前处理工作，如固相萃取、萃取液的提取等；•对于不同类型的样品，需要选择合适的提取溶剂和条件，以保证提取的完整性和准确性；•注意避免样品受到外界环境的污染，保持样品极其纯净。
3. 测试流程在样品准备和仪器准备完成后，可以开始进行高效液相色谱仪的测试流程。
以下是一般的测试流程示例：•打开高效液相色谱仪的电源，等待其正常启动；•打开相应的色谱软件，进行系统连接和初始化；•设置色谱柱和流动相的参数，如流速、温度等；•进行样品的进样准备，通常是通过自动进样器或手动进样器进行；•开始测试，观察色谱图和检测器的响应情况；•根据需要，对测试参数进行调整，并进行多次测试以确保测试结果的准确性和重复性；•完成测试后，关闭色谱仪和相应软件，及时清洗色谱柱和相关管道。
4. 数据分析和结果解释完成高效液相色谱仪的测试后，还需要对所得到的数据进行分析和结果解释，以得出准确的结论和科学意义。
以下是一般的数据分析和结果解释步骤：•利用色谱软件对得到的色谱图进行分析，包括峰面积、保留时间等参数的计算；•将测试结果与标准曲线或已知数据进行对比，进行定量或定性分析；•对结果进行统计学分析，如平均值、标准差等；•对异常结果进行排查和分析，确定可能的原因；•根据分析结果和先前的研究背景，对结果进行解释和讨论；•撰写测试报告，并将结果与其他相关研究进行比较和讨论。
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HPLC检测实例：丹参酮IIA含量的HPLC测定
色谱条件：
流动相：甲醇-水（50：50）， 色谱柱：C18色谱柱， 检测波长：270nm， 柱温：30℃， 流速：1.0mL/min。 样品前处理：取药材细粉0.3g，精密加入甲醇50ml定 重，加热回流1h，放冷再定重，补充损失甲醇，摇匀 ，经 0.45μm过滤即可上机检测。 标准品浓度：0.6mg/ul，供试品浓度6mg药材/ml。
进样针） • 5 基线不稳
解决方法
• 1 检查是否漏液 • 2 检查管路中是否有明显的气泡 • 3 观察柱温是否稳定 • 4 若无上述情况，可用水、异丙醇、甲醇、
0.1mol/L的盐酸溶液高流速（5-8ml/min） 冲洗管路
• 5 经4处理后，若还不正常，可拆下单向阀 依次用水、甲醇、异丙醇超声清洗
准备工作
1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过 滤，超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意 方向）和定量环。 3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配 制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性 与有机系的的溶剂） 4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道 是否连接正常。
样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品 中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则 极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动 相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制 备样品液；
数据分析
物质的定性
淫羊藿苷标准品品
C样品
=
C标准品
公式中：A为峰面积、C为浓度
• 添加1% 醋酸或10-30 mMol磷酸盐可以抑 制酸性化合物拖尾
色谱柱的保护
• 一般情况下，使用前用甲醇冲柱30min，再 换流动相。使用完毕后用50%甲醇冲柱 30min，再用纯甲醇冲柱至柱压稳定。若流 动相中有缓冲盐（乙酸、磷酸盐等）应先 用纯水冲柱30-60min，然后同上。
注意事项
实验数据及处理
（1）、以色谱峰面积为纵坐标。丹参酮标准系 列溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（2）、根据试样溶液色谱图中标准品对应时间 的峰面积，计算得出试样溶液中丹参酮IIA的含量。
形成液膜） • 流动相具有一定惰性，与样品不产生化学
反应 • 所有流动相都应该用色谱纯级，水为超纯
水，并且使用前应过滤、超声脱气 • 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不
锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中
峰拖尾的处理
• 添加10-30 mMol 三乙胺(triethylamine) 可 以抑制碱性化合物色谱峰拖尾
1 清洗进样针的液体应该是溶解样品的溶剂 2 样品在进样前，必须经微孔滤膜过滤 3 由于甲醇的极限波长为210nm左右，故短
波长测定时，最好不要采用甲醇，而用乙 腈 4溶解样品和标准品的溶液应相同
常见问题
• 1 柱压不稳 • 2 保留时间不稳定 • 3 峰型不好 • 4 不出峰（检查流动相配比是否无误、清洗
高效液相色谱仪的使用
常见的检测器还有差示折光检测器（通过 连续测定流通池中溶液折射率来检测试样 浓度）、电导检测器（根据物质在某些介 质中电离后产生电导变化来测定电离物质 浓度）。
光电二极管阵列检测器：紫外检测器的重 要进展，全波长扫描、准确定性。
仪器的使用
流动相的选择
• 对样品有适宜溶解性（试溶解样品） • 不能用纯乙腈（粘度大，容易在单向阀上