cN0期隐匿性颈淋巴结转移喉鳞癌中关键性microRNA表达谱的探究
喉鳞状细胞癌相关microRNA的筛选及功能鉴定
基金项目:辽宁省教育厅科学研究经费资助项目,项目编号:JYTQN2020018㊂ 作者简介:刘浩(1994),男,辽宁锦州人,在读硕士研究生,主要研究方向为喉癌方面研究㊂ 通讯作者:宫亮(1980),男,辽宁锦州人,副教授,硕士学位,主要研究方向为喉癌的诊疗工作㊂喉鳞状细胞癌相关microRNA 的筛选及功能鉴定刘浩,穆兰,黄志伟,杨瑞明,宫亮(锦州医科大学附属第一医院,辽宁锦州121000) 摘要:目的 采用生物信息学技术及第二代RNA 测序技术检测喉鳞状细胞癌相关microRNA ,通过筛选及功能鉴定,为喉癌特定且有意义的靶向基因治疗提供依据㊂方法 临床收集3组经术后病理证实为喉鳞状细胞癌患者的喉癌与癌旁组样本,并应用第二代RNA 测序技术检测喉癌及癌旁组织中miRNA 的表达情况㊂采用生物信息学技术,对差异表达miRNA进行分层类聚分析及筛选;随机选取1种差异的表达的miRNA (miR-106a-5p ),采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR )验证miR-106a-5p 在30例喉癌及癌旁组织中的表达水平㊂结果 3组喉癌及癌旁组织样本经第二代RNA 测序,共检测到1624种miRNA ;经过火山图及聚类分析共得到显著差异表达的miRNA 44种,其中表达上调21种,表达下降23种;经过qRT-PCR 结果显示,miR-106a-5p 在30例喉癌组织样本中表达水平(5.71±1.65),显著高于癌旁组织(2.66±0.87),差异具有统计学意义(P <0.05)㊂结论 通过生物信息学方法筛选出喉癌差异表达miRNA ,其中miR-106a-5p 在喉癌组织的表达水平明显高于癌旁组织,与第二代测序结果一致㊂关键词:miR-106a-5p ;喉鳞状细胞癌;第二代测序;高通量分析中图分类号:R739.65 文献标志码:A 文章编号:2096-305X (2021)02-0040-05Screening and Functional Identification of microRNA Related to Laryngeal Squamous Cell Carcinoma Liu Hao,Mu Lan,Huang Zhiwei,Yang Ruiming,Gong Liang(The First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University,Jinzhou 121000China)Abstract :Objective To detect microRNAs associated with laryngeal squamous cell carcinoma with bioinformatics technologyand second-generation RNA sequencing technology and to provide a basis for specific and meaningful targeted gene therapy for larynge⁃al carcinoma through screening and functional identification.Methods Samples of laryngeal carcinoma and paracancer tissues from 3groups of patients with laryngeal squamous cell carcinoma confirmed by postoperative pathology were collected clinically,and the ex⁃pression of miRNA in laryngeal carcinoma and paracancer tissues were detected by second-generation RNA sequencing technology.The differentially expressed miRNAs were analyzed and screened by stratified classification and clustering by means of bioinformatics tech⁃niques.One differentially expressed miRNA (miR-106a-5p)was randomly selected,and the expression level of miR-106a-5p in 30cases of laryngeal cancer and adjacent tissues was verified by real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR).Re⁃sults A total of 1624miRNAs were detected in 3groups of laryngeal cancer and paracancer tissue samples by second-generation RNA sequencing;a total of 44miRNAs with significantly different expressions were obtained by volcano map and cluster analysis,among which 21were up-regulated and 23were down-regulated.QRT-PCR results showed that the expression level of miR-106a-5p in 30laryngeal cancer tissues was (5.71±1.65),significantly higher than that in adjacent tissues (2.66±0.87),with statistically signifi⁃cant difference (P <0.05).The results are identical with those detected by the second-generation sequencing.Conclusion Throughthe combined use of next -generation RNA sequencing technology and bioinformatics methods,a large number of differentially ex⁃pressed miRNAs were successfully screened from laryngeal cancer tissues,providing a basis for further research on the relationship be⁃tween miRNA and the phenotype of laryngeal cancer.Key words :miRNA-106a-5p;laryngeal squamous cell carcinoma;second-generation sequencing;high throughput analysis 喉鳞状细胞癌(laryngal squamous cell carcino⁃ma,LSCC)是头颈部第二大常见的恶性肿瘤,仅04锦州医科大学学报J Jinzhou Medical University2021Apr.42(2)次于鼻咽癌,病因至今仍不十分明了,其发生可能与吸烟㊁饮酒㊁病毒感染㊁放射线㊁性激素等因素有关㊂目前LSCC的治疗方式主要是手术切除肿瘤结合放疗和化疗[1]㊂尽管治疗技术有所提高,但LSCC的生存率并没有显著提高[2]㊂因此迫切需要寻找新的喉癌靶向治疗,以延长患者的生命并提高患者的生存质量㊂第二代测序技术又称下一代测序技术(next generation sequencing,NGS),是近年来新兴的一项比较成熟的转录组学测序技术,可同时对数以百万的基因进行序列测序并筛选差异表达的基因㊂miRNA是一类大小为19~25个核苷酸组成的非编码小RNA分子,通过结合mRNA的3'端,导致mRNA沉默或降解影响其表达水平㊂研究表明miRNA的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关㊂大量研究表明[3-4],miRNA在喉癌的发生发展中起着重要的调控作用㊂本研究通过第二代测序技术与生物信息学方法的结合,并通过qRT-PCR在临床样本上去验证去筛选差异表达的miRNA,并期望对喉癌的临床诊断㊁治疗及预后提供重要信息㊂1 材料与方法1.1 材料研究样本:临床收集2019年1月至2020年10月就诊于锦州医科大学并接受手术治疗的33例患者的喉癌组织及癌旁组织(>0.5cm),所有患者在行手术前均未接受过放疗和化疗等治疗方式㊂所有标本切除后取部分喉癌及癌旁组织(与肿瘤安全界>0.5cm),迅速放入液氮中并转-80℃冰箱保存㊂病理采集过程及后续实验均得到知情者同意以及医学伦理委员会批准,且为患者签署保密协议㊂主要试剂:TRIzol试剂㊁反转录试剂盒(In⁃vitrogen,美国);miRNeasy Mini Kit(总RNA抽提试剂盒,Qiagen,德国);RNA Nano6000检测试剂盒㊁SYBRGreenPCR试剂盒(罗氏公司);文库制备试剂盒(Illumin,美国);miR-106a-5p引物购自北京擎科生物科技有限公司㊂仪器:分光光度仪(NanoPhotometer,美国);核酸样品分析仪(Agilent Bioanalyzer2100,美国);第二代DNA测序系统(Illumina Hiseq4000,美国);实时定量PCR检测仪(Roche Light CyclerTM480,瑞士)㊂1.2 方法1.2.1 RNA提取及质量鉴定 取喉癌及癌旁组织样本各20mg,按照TR⁃Izol和miRNeasy Mini Kit试剂盒提供的说明书要求提取总RNA,应用NanoPhotometer分光光度仪对提取的总RNA进行纯度及浓度检测,使用Agilent Bioanalyzer2100系统的RNA Nano6000检测试剂盒评估RNA完整性㊁质量及分布㊂1.2.2 miRNA测序文库的制备与测序随机抽取3例患者的喉癌组织及癌旁组织的总RNA进行cDNA文库的建立和测序㊂每个样本总RNA量为3μg用于下一代测序实验,采用Illumi⁃na的NEBNext Multiplex Small RNA Library Prep Set 制备cDNA文库㊂将获得的小RNA文库在生物分析仪(Agilent,High Sensitivity DNA Kit)上进行定量,合并,并使用3%凝胶BluePippin HT(Sage Science)提取适当范围的cDNA片段(140~160 bp)㊂文库最终长度范围在安捷伦Bioanalyzer2100 (Agilent)上用高灵敏度DNA试剂盒进行验证,仅包含部分微小RNA㊂最后用第二代DNA测序系统(Illumina Hiseq4000)对构建获得的cDNA文库进行测序,获取的信息通过计算机进行分析,并对微小RNA序列进行解码和注释[5]㊂1.2.3 差异miRNA的生物信息学分析首先使用Cutadapt软件修剪并去除质量评分较低的碱基序列和测序得到的序列3′和5′接头,并去除短17bp的修剪序列㊂然后对剩余序列质量进行验证(FastQC软件),进而初步完成对数据的筛选㊂然后用miRDeep2v2.0.0.7软件的quantifier.pl 模块[6]和SeqBuster软件的miraligner[7]使用默认参数,以前体和成熟miRNA序列作为参考,对过滤后的reads进行miRNA和isomiRNA定量(miRBase v21)㊂利用 DESeq2”R中实现的负二项广义线性模型,对3组喉癌和癌旁样本中的miRNA进行差异表达的分析,以P<0.05且log2(fold change, FC)>1判定为表达具有显著差异性㊂通过绘制火山图展现喉癌组织中有显著性差异表达的miRNA,以红点表示喉癌组织中表达显著上调,绿点表示表达显著下降;取差异表达明显的miRNA,通过绘制聚类分析热图,展现miRNA在不同组织样本中的表达情况,红色代表高表达,蓝色代表低表达㊂通过绘制维恩图,展现筛选出的miRNA在喉癌与癌旁组织的分布情况㊂1.2.4 qRT-PCR随机挑取1种差异表达明显的miRNA(miR-106a-5p),采用qRT-PCR检测miR-106a-5p在30例喉癌及癌旁组织中的表达水平,并对比二代测序结果㊂将30组提取好的总RNA,按逆转录试14刘浩,等:喉鳞状细胞癌相关microRNA的筛选及功能鉴定剂盒合成cDNA,然后进行qRT-PCR,反应条件为:95℃60s㊁95℃10s㊁60℃15s(40个循环)㊂本反应以U6snRNA为内参基因,应用7500System SDSSoftware软件,统计ΔΔCt值,并以2-ΔΔCt值代表miR-106a-5p的表达水平㊂引物序列见表1㊂1.3 统计学方法采用SPSS25.0软件进行统计学分析,数据以均数±标准差(⎺x±s)表示,组间比较采用t检验,以P<0.05表示差值具有统计学意义㊂表1 引物序列基因引物序列(5′-3′)miR-106a-5p上游CGCGAAAAGTGCTTACAGTG下游AGTGCAGGGTCCGAGGTATT U6上游TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAG下游GTGCAGGGTCCGAGGT2 结 果2.1 RNA抽提结果经NanoPhotometer分光光度仪检测结果显示,喉癌及癌旁组织中抽提获得的RNA的D260nm/ D280nm值均为1.8~2.1,说明提取的总RNA有较好的纯度㊂经过Agilent Bioanalyzer2100检测结果显示,RNA的RIN值≥6,数据表明提取的总RNA具有较好的完整性㊂样本提取的RNA总量≥3μg,具备二代测序的要求㊂2.2 差异表达miRNA的可视化分析本次测序共检测到1624种miRNA,其中差异表达明显miRNA的共44种,其中23种在喉癌组织中显著下调,21种在喉癌组织中显著上调㊂miRNA的差异表达见火山图1,聚类分析热图见图2,miRNA在喉癌及癌旁的分布情况见维恩图3㊂2.3 qRT-PCR结果及验证在46种差异表达明显的miRNA中随机抽取1种(miR-106a-5p),其二代测序结果显示在喉癌组织中表达上调,见表2㊂qRT-PCR检测结果, miR-106a-5p在30例喉癌组织中的表达水平为(5.71±1.65),癌旁组织中的表达水平为(2.66±0.87),差异具有统计学意义(P<0.05),与二代测序结果一致,见图4㊂绿点表示显著下调,红点表示显著上调,蓝点表示无明显差异图1 火山图表2 癌组织及癌旁组织中miR-106a-5p表达水平分组n miR-106a-5p表达水平P癌组织305.71±1.65癌旁组织302.66±0.87<0.053 讨 论第二代测序技术为分析miRNA的生物学信息研究提供了新的思路,它可同时分析miRNA的表达水平和序列变化[8]㊂与其他需要使用预先设计的探针的微阵列或qRT-PCR方法不同,第二代测序技术可以识别分析样本中存在的所有miRNA分子,而不受新的miRNA和新序列亚型[9]的影响㊂miRNA是一种短链非编码小RNA,通过与转录本[10]中的互补序列结合抑制蛋白编码基因的表达㊂虽然关于miRNA的所有生物学功能尚未明确,但已有研究表明,miRNA可以调控至少一半的人类蛋白编码基因的表达,包括致癌基因和抑癌基因[11-12]㊂因此,应用第二代测序技术去研究发掘差异性表达的miRNA,并为临床治疗提供有价值的生物靶点具有重要的临床意义㊂本研究通过第二代测序技术与生物信息学方法的结合方法,从3组喉癌及癌旁组织中共筛选出1624种miRNA,其中差异表达明显的miRNA共有44种,23种在喉癌组织中表达显著下调,21种在喉癌组织中表达显著上调㊂经过qRT-PCR验证表明,miR-106a-5p在30组喉癌组织的表达水平明显高于癌旁组织,与二代测序结果一致㊂虽然此次24锦州医科大学学报 2021年4月,42(2)测序成功筛选的miRNA 并不多,而且显著差异性表达的miRNA 占比比较少,但是它们潜在的临床价值是非常巨大的㊂譬如我们经过qRT-PCR 验证并筛选的miR-106a-5p 已经在相关肿瘤性疾病中进行了大量的研究㊂研究表明,miR -106a -5p 在肺癌[13]㊁卵巢癌[14]中高度表达,并促进癌症细胞的增殖及迁移,然而在肾癌[15]中表达下调,并通过调控VEGFA 抑制癌症细胞的增殖及迁移㊂然而关于miR-106a-5p 与喉癌的相关性分析尚不明确,有待于进一步实验去研究㊂喉鳞状细胞癌的发生与发展是复杂而多变的病理过程㊂而miRNA 在机体的生长㊁细胞凋亡㊁分化㊁代谢和肿瘤性疾病的发生发展中均展现了强大的调控能力㊂因此提高miRNA 与喉癌之间的发病机制的认知尤为重要㊂本次实验二代测序及qRT-PCR 验证的样本相对较少,且筛选出差异性表达明显的miRNA 并不多,将来可以投入更大量的样本中去筛选㊁验证有价值的miRNA㊂综上所述,应用二代测序技术去筛选疾病相关miRNA 是一条高效率且快捷的途径,为探索喉癌的分子机制提供了重要思路,也为临床寻找新的生物靶点奠定了基础㊂红框代表高表达,蓝框代表低表达,Tumor 代表喉癌组,Normol 代表癌旁组图2 聚类分析热图34刘浩,等:喉鳞状细胞癌相关microRNA 的筛选及功能鉴定差异miRNA 分布情况,VPT 代表喉癌组,VPN 代表癌旁组图3 维恩图图4 miR-106a-5p 在30组喉癌及癌旁组织的表达水平参考文献:[1] Santos TS,Estevao R,Antunes L,et al.Clinical and his⁃topathological prognostic factors in locoregional advanced larynge⁃al cancer [J].J Laryngol Otol,2016,130(10):948-953.[2] Ei L,Hui L,Wang Z,et a1.MicroRNAs in laryngeal cancer:implications for diagnosis,prognosis and therapy [J].Am JTransl Res,2016,8(5):1935-1944.[3] 赵越,孙媛媛,佟雪,等.miR-362-3p 在喉癌组织中的表达及其对喉癌Hep-2细胞迁移的影响[J].中国医科大学学报,2019,48(3):236-239.[4] 刘扬帆,屈中玉,王文亷,等.miR-135a 通过下调SOX2抑制喉癌Hep-2细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2019,26(9):955-961.[5] Farazi TA,Brown M,Morozov P,et al.Bioinformatic analysisof barcoded cDNA libraries for small RNA profifiling by next -generation sequencing [J].Methods,2012,58:171-187.[6] FriedlnderMR,Mackowiak SD,Li N,et al.miRDeep2accu⁃rately identifies known and hundreds of novel microRNA genes inseven animal clades.Nucleic Acids Res [J].2012,40(1):37-52.[7] Pantano L,Estivill X,Marti E.SeqBuster,a bioinformatictool for the processing and analysis of small RNAs datasets,re⁃veals ubiquitous miRNA modifications in human embryonic cells[J].Nucleic Acids Res,2010,38(5):e34.[8] Cloonan N,Wani S,Xu Q,et al .MicroRNAs and theirisomiRs function cooperatively to target common biological path⁃ways [J].Genome Biol,2011,12(12):R126.[9] Swierniak M,Wojcicka A,Czetwertynska M,et al.In-depthcharacterization of the microRNA transcriptome in normal thyroid and papillary thyroid carcinoma [J].J Clin Endocrinol Metab,2013,98(8):1401-1409.[10] Bartel DP.MicroRNAs:target recognition and regulatory func⁃tions [J].Cell,2009,136(2):215-233.[11] Ma J,Wang W,Azhati B,et al.miR-106a-5p Functions asa Tumor Suppressor by Targeting VEGFA in Renal Cell Carcino⁃ma [J].Dis Markers,2020,2020:8837941.[12] Liu J,Huang Y,Wang H,et al.MiR-106a-5p promotes 5-FU resistance and the metastasis of colorectal cancer by 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MicroRNA与肺癌顺铂耐药相关性研究进展
MicroRNA与肺癌顺铂耐药相关性研究进展张芳(综述);李洋(审校);周清华(审校)【摘要】MicroRNAs (miRNAs) are a class of small, about 22 nucleotides endogenous noncoding RNAs that negatively regulate their target genes’ expression through post-transcriptional suppression. MicroRNA has a broad effect on tumorigenesis and tumor biological processes, including tumor development, differentiation, metastasis and chemoresistance. Chemoresistance represents a major obstacle in effective clinical treatment of tumors, how to conquer the chemoresistance in tumor arouses people’s interst. A growing number of studies have proved that microRNAs play a crucial role in tumor che-moresistance. hTis view will discuss the the progress research between microRNA and tumor therapy, especially the cisplatin chemotherapy in tumor.%微小RNA（microRNA, miRNA）是一类长约22 nt的非编码小分子RNA，在转录后水平上负性调节靶基因的活性。
宫颈癌相关microRNAs表达调控机制的研究进展
宫颈癌相关microRNAs表达调控机制的研究进展赵皓琦;贺斌;王介东;刘书言;徐祥波【期刊名称】《生殖医学杂志》【年(卷),期】2015(24)3【摘要】宫颈癌是世界范围内三大妇科肿瘤之一,其高致死率严重威胁着女性的健康.microRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码蛋白的、长度约为18～25个核苷酸的小RNA,在转录后水平调控靶基因的表达.现已证实miRNAs的异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关.宫颈癌中调控miRNAs异常表达的研究报道相对较少,调控机制也不十分明确.有研究表明,表观遗传修饰、人乳头瘤病毒(HPV)、miRNAs海绵及miRNAs的多态性均可以对宫颈癌中miRNAs的表达及其功能产生影响.本文拟从这四个方面对miRNAs的表达调节以及所引起的宫颈癌发生发展的角度展开综述.【总页数】5页(P251-255)【作者】赵皓琦;贺斌;王介东;刘书言;徐祥波【作者单位】国家人口计生委科学技术研究所生殖生理室,北京 100081;北京协和医学院研究生院,北京 100730;国家人口计生委科学技术研究所生殖生理室,北京100081;国家人口计生委科学技术研究所生殖生理室,北京 100081;广西医科大学,南宁530021;国家人口计生委科学技术研究所生殖生理室,北京 100081【正文语种】中文【相关文献】1.肿瘤相关长非编码RNA的表达及调控机制的研究进展 [J], 陈葳;薛梅2.地中海贫血的分子机制及其相关microRNA表达调控的研究进展 [J], 孙士鹏;吴志奎;刘贵建3.动物肌肉生长发育相关microRNAs的表达模式和调控机制 [J], 王敬;王琪;黄金秀;齐仁立4.MicroRNA let-7表达调控机制研究进展 [J], 湛敏;陈尧;周宏灏5.宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制[J], 宋伟国;钱莉莉;吴大保;申震;朱靖;程勇;肖卫华;周颖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同转移能力卵巢癌细胞系的microRNA和基因表达谱研究的开题报告
不同转移能力卵巢癌细胞系的microRNA和基因表
达谱研究的开题报告
一、研究背景和意义：
卵巢癌是女性生殖系统中最常见的一种恶性肿瘤，其高度侵袭性和
易于复发的特点给治疗带来了挑战。
近年来，越来越多的研究表明，microRNA（miRNA）和基因表达谱（gene expression profile）在卵巢癌的发生和转移中发挥着关键作用。
然而，虽然已有研究报道了不同转移
能力的卵巢癌细胞系的miRNA和基因表达谱存在明显差异，但整体上还
未形成系统性、综合性的证据，因此有必要对该领域进行深入系统研究。
二、研究内容和方法：
本研究将收集两种不同程度转移能力的卵巢癌细胞系，综合运用miRNA和基因表达谱的分析技术，分别对两种卵巢癌细胞系进行分析，
并将其与正常卵巢成纤维细胞的miRNA和基因表达谱进行比较，挖掘差
异表达的miRNA和基因。
同时，结合miRNA和基因表达的分析结果，探究其在卵巢癌发生、发展和转移中的生物学功能和相互关系。
三、研究意义：
本研究将为卵巢癌的研究提供重要参考。
首先，该研究将揭示miRNA和基因表达谱在卵巢癌的发生、发展和转移中的调控机制和作用，为研究卵巢癌的病因学提供重要证据。
其次，本研究的结果将为发现新
的治疗目标和治疗策略提供一定的理论依据。
最后，本研究的整体研究
设计和研究方法对miRNA和基因表达谱在其他癌症中的应用也具有一定
的参考和借鉴作用。
microrna研究课件
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MicroRNA与其他非编码RNA的相互作用研究
探索miRNA与其他非编码 RNA（如lncRNA、circRNA
等）的相互作用和调控机制 ，揭示它们在基因表达和细
胞功能中的相互影响。
研究miRNA与病毒或宿主基 因的相互作用，深入了解病 毒复制和致病机制，为抗病
毒治疗提供新思路。
探索miRNA与表观遗传学修 饰的相互作用，揭示它们在 基因表达调控中的协同作用 。
疾病发生与发展
miRNA的异常表达与多种疾病的发生和发展密 切相关，包括癌症、心血管疾病、神经退行性 疾病等。
miRNA可以作为疾病的生物标志物，用于疾病 的早期诊断和预后评估。
通过调控miRNA的表达，可以开发新的治疗策 略和药物靶点。
肿瘤转移与耐药性
miRNA在肿瘤转移和耐药性的发生中发挥重要作用。
MicroRNA在人类健康与疾病中的全面认识
01
全面了解miRNA在人类健康和疾病中的功能和作用机制，为疾病的早期诊断、 预防和治疗提供新策略。
02
深入研究miRNA与药物代谢和药物反应的相互关系，为药物研发和个性化治疗 提供依据。
03
探索miRNA在衰老和衰老相关疾病中的作用，为抗衰老研究和治疗提供新思路 。
02
MicroRNA可以作为癌症诊断的生物标志物，用于早期发现、病情监 测和预后评估。
03
MicroRNA可以作为癌症治疗的靶点，通过调控MicroRNA的表达或 功能，实现治疗癌症的目的。
04
针对MicroRNA的靶向治疗是当前癌症治疗领域的研究热点之一，有 望为癌症治疗提供新的策略。
MicroRNA与神经退行性疾病
MicroRNA通过调控心血管细胞的生长、分化、凋亡等过 程，影响心血管疾病的发生和发展。
食管鳞癌患者特异血清microRNA表达谱的筛选及其临床意义的研究的开题报告
食管鳞癌患者特异血清microRNA表达谱的筛选及
其临床意义的研究的开题报告
题目：食管鳞癌患者特异血清microRNA表达谱的筛选及其临床意
义的研究
研究背景：
食管鳞癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，具有高度侵袭性和转移性，其发病率和死亡率在全球范围内都处于高位。
目前，食管鳞癌的诊断和
治疗仍然存在一定的局限性，因此需要寻找更准确、方便、可靠的生物
标志物来指导其诊断和治疗。
研究目的：
本研究旨在筛选食管鳞癌患者特异血清microRNA表达谱，并探讨
其在食管鳞癌诊断和预后评估中的临床价值。
研究内容：
1. 采集食管鳞癌患者和健康对照者的血清样本；
2. 提取血清中的总RNA，并进行高通量测序分析；
3. 比较食管鳞癌患者和健康对照者的microRNA表达谱差异，筛选
出差异显著的microRNA；
4. 探讨筛选出的microRNA在食管鳞癌诊断和预后评估中的临床意义。
研究意义：
本研究将有助于筛选出特异的、可靠的、对食管鳞癌敏感的microRNA标志物，并探讨其在临床应用中的价值，为食管鳞癌的早期诊断和后续治疗提供新的理论和实践指导。
喉鳞癌颈淋巴结隐匿性微转移的检测
ｑ ＴＰ Ｒ ａｓｙ ｍ ｌｉａｏ ｆ ｙ ｋｒｔ ９（ Ｋ ９ ， ｑ ａ ｏ ｓ ｅ ａｃ ｏ ａａｔｅ Ｓ Ｃ ， ｅ ｐ ｉ ｓ ｕｇｒ Ｒ —Ｃ ｓ ．Ａ ｐｉｃｔ ｎｏ ｃｔ ｅａｎ１ Ｃ １ ） ｓｕｍ ｕ ｌｃｒｉ ｍ ｉ ｎ（ Ｃ Ａ） ｐｍ ｈ ｕ ｌａ ａ ｆ ｉ ｏ ｉ ｃｌ ｎ ｎｇ ｇ ｖ —
Ｔ ＯＬｉ Ｚ Ｏ ｉ ｇ Ｌ ｈ— ｉ Ａ ｅ， Ｈ ＵＬａ ， Ｉ ｉ ｎ Ｚ ＵＬ ． Ｄ ｐ ｒ ｅｔｆＯｏｈｎｌ ｙｇｌ ｙ ｎ Ｓ ｍ ， Ｈ ｉ ｅａｔ ｎ ｔ ｉｏ ｒｎ ｏ ｇ ， ｍ ｏ ｒ ａ ｏ
ｔｌ，Ｆｕ ａ ａ ｄ ｎ Ｕｎｉｅｓｔ ｖ ｒｉ ｙ，Ｓ ａ ｇｈ ２０ ０ ｈ ｎ ａｉ ０ ３１，Ｃｈｉａ ｎ Ｃｏ ｒ ｓ ｏ ｄ ｎ ｕｈｏ ： ｒｅ ｐ ｎ ｉ ｇ ａ ｔ ｒ ＴＡＯ ｉ Ｌｅ ．Ｅｍａｌ ｔｏ ｅ＠ ｆ ｅ ｎ ． ｒ ｉ：ａ ｌｉ ｄ ｅ ｔ ｏ ｇ
【 关键 词】 喉鳞癌 ； 细胞角蛋 白 １ ； ９ 鳞状细胞癌相关 抗原 ； 寻常 天疱疮抗 原 ； 实时定量 逆转 录聚合酶 链反
MicroRNA在慢性淋巴细胞白血病中的研究进展
Ａｓｓｌａｂｅｒ等¨纠在７５例ｃＬＬ患者中检测到ｍｉＲ－３４ａ 低表达，并与Ｐ５３突变及１７Ｐ１３．１的缺失相关。Ｐ５３ 通路介导细胞衰老、凋亡等，ｍｉＲ－３４ａ是Ｐ５３的直接
ｍｉＲ．１５／ｍｉＲ一１６是最早被发现与血液系统肿瘤相 关的ｍｉＲＮＡ，编码人类ｍｉＲ—１５和ｍｉＲ．１６的基因定 位于染色体１３ｑ１４的微小缺失区域，这一区域在超 过６５％的ｃＬＬ患者中缺失ｏ ４｜。ｃａｌｉｎ等”１发现， ｃＬＬ患者Ｂ细胞中ｍｉＲ．１５／ｍｉＲ一１６呈低表达。 ｃｉｍｍｉｎｏ等∞１发现，ｃＬＬ中ＩＩｌｉＲ一１５、ｍｉＲ一１６的水平
万方数据
埘ｃ阳只ⅣＡ在慢性淋巴细胞白血病中的研究进展 ｍｉＲＮＡ在ＣＬＬ靶向治疗中的研究
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ｍｉＲＮＡ与ＣＬＬ预后
自从ｍｉＲＮＡ被发现以来，人们一直在探寻它与疾 病进展、预后的相关性，ｃａｌｉｎ等”’分析９４例ｃＬＬ 患者的ｍｉＲＮＡ表达谱观察到１９个ｍｉＲＮＡ的异常 表达与ｚＡＰ７０、ＩｇＮＨ重排等预后因素密切相关。 ｓｔａｍａｔｏｐｏｕｌｏｓ等旧２‘发现，ｃＬＬ患者ｒｎｉＲ一２９ｃ和 ｍｉＲ一２２３的下调与ｃＬＬ Ｂｉｎｅｔ Ａ期进展到ｃ期等不 良预后因素相关，对无进展生存期及总生存期有预 测价值，将实时定量ＰｃＲ（ｑＲＴ—ＰＣＲ）、ｍｉＲ一２９ｃ和 ｍｉＲ．２２３、ｚＡＰ－７０、脂蛋白酶（ＬＰＬ）联合起来对ＣＬＬ 患者进行危险分层的评估，评分由０—４分，评分越 高，危险分层越差。Ｒｏｓｓｉ等【２叫研究认为，ｍｉＲ一２ｌ 和ｍｉＲ—１８１ｂ在ＣＬＬ中异常表达与预后不良相关， 还创制了“２１ＦＫ”评分方式（联合ｒｎｉＲ－２１
ｏ
ｃＬＬ中发现许多突变或异常表达的ｍｊＲＮＡ、 ｒｎｉＲＮＡ的靶基因，这对ｃＬＬ的研究及诊治提供了 更多的信息及依据。
声门上型喉癌cN0患者颈部淋巴结转移的相关因素分析
声门上型喉癌cN0患者颈部淋巴结转移的相关因素分析胡艳红;王东海;赵国锋;孟祥远;谷彬【期刊名称】《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》【年(卷),期】2014(020)001【摘要】目的分析声门上型喉癌oN0患者颈部淋巴结转移的相关因素.方法回顾分析41例声门上型喉癌cN0患者的临床资料,分析cN0不同T分级及病理分型患者颈部淋巴结转移的情况和颈部淋巴结转移的分布.结果 41例声门上型喉癌颈部淋巴结隐性转移率39.0％.其中T2为14.3％,T3为45.8％,T4为66.7％;T1 +T2组与T3+T4组之间比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).按病理分型分类,其中高分化鳞癌转移率27.3％,中分化鳞癌40.0％,低分化鳞癌55.6％,各型之间比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论声门上型喉癌cN0患者颈部淋巴结转移与T分级密切相关,淋巴结转移多发于Ⅱ区和Ⅲ区,其次为Ⅳ区;对声门上型喉癌cN0患者颈部淋巴结的处理可择区行颈淋巴结廓清术.【总页数】3页(P50-52)【作者】胡艳红;王东海;赵国锋;孟祥远;谷彬【作者单位】唐山市协和医院耳鼻咽喉头颈外科,河北唐山063000;唐山市协和医院耳鼻咽喉头颈外科,河北唐山063000;唐山市协和医院耳鼻咽喉头颈外科,河北唐山063000;唐山市协和医院耳鼻咽喉头颈外科,河北唐山063000;唐山市协和医院耳鼻咽喉头颈外科,河北唐山063000【正文语种】中文【中图分类】R739.65【相关文献】1.中晚期喉癌患者颈部淋巴结转移状况及相关影响因素分析 [J], 陈付华;麻宁0声门上型喉癌的颈部复发相关因素分析 [J], 于文斌;曾宗渊;陈福进;张诠3.声门上型喉癌cN0患者双侧颈部外科处理方式探讨 [J], 于振坤;黄志刚;倪鑫;房居高;范尔钟;韩德民4.临床颈部淋巴结阴性(cN0期)甲状腺乳头状癌侧颈部淋巴结转移的危险因素分析[J], 韦树建; 刘新承; 陈焕杰; 吴国长; 孙海清; 郑桂彬; 马驰; 郭雅文; 郑海涛0单侧叶甲状腺乳头状癌对侧中央区淋巴结转移的相关危险因素分析 [J], 郭为衡;高璐滢;李小毅;刘春浩;刘睿峰;史新龙;夏宇;姜玉新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
舌鳞癌组织microRNA表达谱的检测和分析
【 ｂｔａｔ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｔｄ ｈ ｄ ｅｅｃ ｆｍｉ ｏ Ｎ ｘｒｓｉ ｒｆｅ ｎ ｔｎｕ Ａ ｓ ｃ】 ｒ ｊｃｉ ｏ ｓ ｙ ｔｅ ｉ ｒｎｅ ｏ ｃ Ｒ Ａ ｅｐｅｓ ｎ ｐｏｌｓ ｉ ｏｇｅ ｖ ｕ ｆ ｒ ｏ ｉ
ｓｕｍ ｕ ｅ ａｃｎｍ Ｔ Ｃ ）ａ ｄｆ ｒ ｔ ｌ ｉ ｌ ｔ ｅ ，ｏ ｒ ｅ ｓ ｄｅ ｎｆｎ ｔｎ ｆ ｉｒ Ｎ ｑ ａ ｏ ｓ ｌｃｒ ｏ ａ（Ｓ Ｃ ｔ ｉｅｅ ｉ ｃ ａ ｓ ｆ ｆ ｔ ｒ ｔ ｉｓ ｃｏ ｓ ｃｏ Ａ ｃｌ ｉ ｎ ｃｎ ａ ｓ ｇ ｒｕｈ ｕ ｏ ｕ ｉ ｏｍ Ｒ
ｃｓｓ ｆ Ｓ Ｃ ａｄｃｒ ｓｏｄｎ ｏｍ ｌｏｇ ｅｔｓｅ（ １ ）ａｊｃｎ Ｓ Ｃｗ ｒ ｂａ ｅ ，ａｄｔｅ ａｅ Ｃ ｎ ｏ ｅｐｎ ｉｇｎｒ ａ ｔ ｕ ｓ ｏＴ ｒ ｎ ｉ ｕ Ｎ Ｔ ｄ ｅ ｔｏＴ Ｃ ｅｅｏ ｔｎ ｄ ｎ ｉ ｒ ａ ｔ ｉ ｈｒ
ｅ ｄ ｇ ｎ ｕ ｉｅｅ ｔ ｃｏ ｎ ｏ ｅ ｏ ｓｄ ｆ ｒ ｎ ｒ ＲＮＡ ｅ ｅ ｓ ｒ ｅ ｅ ｙ ｈ ｇ — ｒ ｕ ｈ ｕ ｃ ｏ Ａ ｃ ｏ ｒａ ． ｓ ｌ Ｆ ｆ — ｆ ｍｉ ｓ ｗ ｒ ｃ ｅ ｎ ｄ ｂ ｉｈ ｔ ｏ ｇ ｐ ｔ ｈ ｍｉｒ ＲＮ ｍｉｒ ａｒ ｙ Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｉｙ ｔ
．
基 础 研 究 ．
舌鳞癌组织 ｍｃｏ Ｎ ｉ Ｒ Ａ表达谱 的检测和分析 ｒ
李 劲松 黄 洪章 宋 尔卫 潘 朝斌 陈伟 良 武 东辉 林 钊 宇
MicroRNA196a在喉癌组织中的表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响
第29卷 第8期 中国现代医学杂志 Vol. 29 No.8 2019年4月 China Journal of Modern Medicine Apr. 2019收稿日期：2018-10-12DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2019.08.006文章编号： 1005-8982（2019）08-0030-06MicroRNA-196a 在喉癌组织中的表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响冯国飞，尤慧华，张志锋（金华市中心医院 耳鼻咽喉科，浙江 金华 321000）摘要：目的 探讨microRNA-196a （miR-196a）在喉癌组织中表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响。
方法 选取2015年1月—2017年12月金华市中心医院70例喉癌手术切除标本的喉癌组织和癌旁组织。
将人喉癌Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 组。
siRNA 组细胞转染pcDNA/miR-196a，阴性对照组细胞转染pcDNA/miR-NC，空白对照组不做处理。
采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定癌旁组织和喉癌细胞中miR-196a 水平；Transwell 小室测定喉癌细胞侵袭和迁移能力；Western blotting 检测喉癌细胞磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B （p-PKB）、Bax 及Bcl-2蛋白水平；RT-PCR 测定喉癌细胞PI3K、p-PKB、Bax 及Bcl-2 mRNA 水平。
结果 喉癌组织中miR-196a 水平高于癌旁组织（P <0.05）。
与空白对照组和阴性对照组比较，siRNA 组喉癌细胞中miR-196a 水平降低（P <0.05），细胞侵袭和迁移能力下降（P <0.05），PI3K、p-PKB 及Bcl-2蛋白和mRNA 水平降低（P <0.05），Bax 蛋白和mRNA 水平升高（P <0.05）；空白对照组与阴性对照组细胞各指标比较，差异无统计学意义（P >0.05）。
微小RNA在鼻咽癌发生发展中的作用研究进展
微小RNA在鼻咽癌发生发展中的作用研究进展作者：巴思，莫祥兰来源：《右江医学》2021年第11期【关键词】miRNA ;鼻咽癌 ;细胞增殖;侵袭;转移中图分类号：R766.3文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2021.11.014鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是鼻咽部上皮来源的恶性肿瘤，与EB病毒（EBV）感染密切相关，发病人群具有显著的地理分布特征，好发于中国南部和东南亚地区;95%以上病例为未分化非角化型鳞状细胞癌，对放疗敏感。
虽然早期经规范治疗大部分患者可治愈，但NPC发病部位隐蔽，早期即经淋巴道或血道转移。
约70%患者就诊时已为中晚期，治疗效果差。
因此，有必要深入研究NPC发生发展分子机制，寻找特异度和敏感度高的早期诊断NPC分子标志物，及早发现NPC患者，及早进行规范治疗，进一步提高NPC患者治愈率和生存质量。
研究已证实NPC的发生与EBV感染、遗传因素、环境因素等密切相关。
近年研究发现，miRNA表达失衡参与了NPC的发生和进展，但miRNA致NPC分子机制仍在探讨中。
1miRNA与人类恶性肿瘤miRNA是一类长度为19～25个核苷酸的单链非编码小分子RNA，在转录后水平调控基因表达。
miRNA具有高度保守性，在哺乳动物基因组中广泛存在。
随着对miRNA研究的深入，发现其参与包括细胞增殖、分化、胚胎发育和组织形成等各种生理病理过程[1]。
miRNA 表达异常与人类多种疾病（包括肿瘤）的发生密切相关。
miRNA在人类恶性肿瘤的发生、发展过程中扮演着类似于癌基因或抑癌基因的角色。
新近研究发现食道癌细胞miR-483-5P表达上调，其通过靶向下调钾离子通道亚家族Q成员1（KCNQ1）表达促进食道癌细胞的增殖、迁移和侵袭[2];提示miR-483-5P在食道癌发生发展过程中扮演癌基因角色。
另一研究发现胃癌组织及细胞系miR-125b表达明显下调，miR-125b模拟物可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移，在胃癌发生发展中扮演抑癌基因角色，其抑癌机制是通过靶向下调信号转导和转录激活子3（STAT3）表达而实现的[3]。
MicroRNA在喉鳞癌中表达及其机制的初步探讨的开题报告
MicroRNA在喉鳞癌中表达及其机制的初步探讨的
开题报告
一、研究背景
喉鳞癌是喉部最常见的恶性肿瘤之一，其发病率日益增加，对全球
健康造成了较大的负担。
针对该癌症的治疗难度较大，因此需要深入研
究该癌症的发病机制以及潜在治疗靶点。
二、研究目的
本研究旨在探讨miRNA在喉鳞癌中的表达及其机制，为进一步深入了解喉鳞癌的发生和发展提供参考。
三、研究方法
本研究将通过文献综述和实验研究两种方法来探究miRNA在喉鳞癌中的表达及其机制。
具体实验方法包括：
1. 采集喉鳞癌患者组织样本，并与正常组织对比分析miRNA的表达情况；
2. 使用实时定量PCR等方法对miRNA在癌细胞中的表达进行定量
分析；
3. 使用miRNA敲减或过表达等方法探究miRNA对喉鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响；
4. 通过生物信息学分析等方法探究miRNA在喉鳞癌中的调控网络。
四、研究意义
本研究将有助于深入探明miRNA在喉鳞癌中的作用机制及其可能的治疗靶点，为临床治疗提供新的方向和策略。
同时，本研究还可以增加
人们对于喉鳞癌的认识，有助于提高公众的健康意识。
cN0下咽鳞癌颈部淋巴结隐匿性转移及预后
cN0下咽鳞癌颈部淋巴结隐匿性转移及预后胡晨;张明;薛继尧;龚洪立;陶磊;周梁【期刊名称】《中国眼耳鼻喉科杂志》【年(卷),期】2022(22)6【摘要】目的探讨cN0下咽鳞癌颈部淋巴结隐匿性转移的规律及处理。
方法回顾分析2006年1月~2017年11月复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科收治的86例cN0下咽鳞癌患者的临床资料。
采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并用Log-rank检验进行验证;采用卡方检验比较不同组别淋巴结隐匿性转移率及局部复发率;采用Cox风险回归模型分析影响预后的独立因素。
结果86例cN0下咽鳞癌患者的颈淋巴结隐匿性转移率为17.4%(15/86),低分化鳞癌颈淋巴结隐匿性转移率远高于中、高分化鳞癌,差异具有统计学意义(P<0.05)。
随访期间,总体局部复发率为14.0%(12/86),低分化鳞癌、T3~T4期、pN+及下咽后壁型下咽鳞癌患者更易出现局部复发,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。
结论cN0下咽鳞癌患者具有较高的颈部淋巴结隐匿性转移率,尤其是低分化鳞癌患者;低分化鳞癌、T3~T4期、pN+及下咽后壁型下咽鳞癌患者更易出现局部复发,应重视cN0下咽鳞癌患者的颈清扫术和密切随访。
【总页数】6页(P597-602)【作者】胡晨;张明;薛继尧;龚洪立;陶磊;周梁【作者单位】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科;复旦大学附属中山医院青浦分院耳鼻喉科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】0口腔鳞癌颈部Ⅱb区淋巴结转移的临床分析0口腔鳞癌颈部Ⅱb区淋巴结的微小转移分析0舌鳞癌颈部Ⅲ区、Ⅳ区淋巴结的微小转移分析0口腔鳞癌颈部淋巴结转移的术后回顾性分析5.能谱CT对喉和下咽鳞癌颈部淋巴结转移诊断价值的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
microRNA-373及TRPS1在喉癌组织中的表达及其临床意义
microRNA-373及TRPS1在喉癌组织中的表达及其临床意义喉癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，主要发生于喉腔粘膜和软骨部位，严重威胁着患者的生命和健康。
在喉癌的发病机制中，微小RNA（miRNA）和转录调节蛋白（TRPS）等因子发挥着重要的作用。
本文将重点探讨microRNA-373及TRPS1在喉癌组织中的表达及其临床意义。
一项研究发现，在喉癌组织中microRNA-373的表达显著下调，而正常喉黏膜组织中microRNA-373的表达水平较高。
这一结果表明microRNA-373在喉癌中可能具有肿瘤抑制作用。
进一步的实验发现，在肿瘤细胞中过表达microRNA-373能够抑制细胞增殖和迁移，同时诱导细胞凋亡，从而抑制肿瘤的生长和转移。
microRNA-373的异常表达可能与喉癌的发生和发展密切相关。
与microRNA-373相关的转录调节蛋白TRPS1也在喉癌中发挥着重要的作用。
TRPS1是一种转录抑制因子，其主要作用是通过抑制靶基因的转录活性来调节细胞的增殖、迁移和侵袭。
研究发现，在喉癌组织中TRPS1的表达呈现上调状态，而与正常喉黏膜组织相比，TRPS1的表达水平显著增加。
这一结果提示TRPS1在喉癌的发生和发展中可能具有促进作用。
除了在基础研究中的重要作用外，microRNA-373及TRPS1在喉癌的临床意义也备受关注。
临床研究发现microRNA-373的表达水平与喉癌患者的预后密切相关。
microRNA-373的低表达往往伴随着肿瘤的恶性生长和转移，患者的生存期也相对较短。
microRNA-373可以作为喉癌预后的潜在生物标志物，用于辅助临床诊断和评估患者的预后。
TRPS1的表达水平也与喉癌的临床病理特征密切相关。
研究发现TRPS1的高表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移以及分化程度呈正相关。
这表明TRPS1可能通过调节肿瘤的侵袭和转移能力来影响喉癌的临床表现。
TRPS1也有望成为喉癌诊断和预后评估的新的生物标志物。
喉鳞状细胞癌微血管密度和层粘连蛋白表达与颈淋巴结转移的关系
喉鳞状细胞癌微血管密度和层粘连蛋白表达与颈淋巴结转移的关系谢晓凤;王建中;吴钦苏;周旭;罗雪梅;常荣先【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2003(030)006【摘要】目的探讨喉鳞癌中微血管密度(microvessel density,MVD)和层粘连蛋白(laminin,LN)表达与颈淋巴结转移的关系.方法应用CD34和LN抗体,采用免疫组织化学(Envision)染色方法对54例喉鳞癌组织中微血管密度及LN表达进行了检测.结果(1)喉鳞癌组织中MVD与颈淋巴结转移相关,淋巴结转移组的MVD高于非转移组(P＜0.05);MVD与喉鳞癌临床分期(TNM)和病理分级无关(P＞0.05).(2)LN 表达与喉鳞癌颈淋巴结转移相关,有淋巴结转移组LN表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05);LN表达与肿瘤组织病理分级和临床分期(TNM)无关(P＞0.05).(3)喉鳞癌组织中MVD与LN表达无关(P＞0.05).结论喉鳞癌中MVD和LN表达可作为预测颈淋巴结转移的指标.【总页数】3页(P585-587)【作者】谢晓凤;王建中;吴钦苏;周旭;罗雪梅;常荣先【作者单位】复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032;复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032;复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032;复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032;复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032;复旦大学附属中山医院耳鼻喉科,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】R739.65【相关文献】1.喉鳞状细胞癌中微血管密度与COX-2、VEGF表达及临床意义 [J], 李正贤;刘庚勋;颜美荣;刘阳云2.喉鳞状细胞癌中VEGF、bFGF的表达与颈淋巴结转移关系的研究 [J], 王占龙;迟放鲁;胡俊兰;赵端力3.层粘连蛋白受体、Ⅳ型胶原的表达及微血管密度与乳腺癌转移的关系 [J], 李艳春;钟仁华;陆爱平;喻宏;贾晓敏;蒋亚湘;刘建成;成志诚4.缺氧诱导因子-1α在喉鳞状细胞癌中的表达及与微血管密度的关系 [J], 宋辉5.喉鳞状细胞癌中PTEN蛋白表达与微血管密度的相关性 [J], 张振新;邱晓霞;达鹏;周维镕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
喉鳞状细胞癌淋巴结转移相关miRNAs差异表达谱分析
喉鳞状细胞癌淋巴结转移相关miRNAs差异表达谱分析许咪咪; 卢仲明; 张思毅; 詹建东; 盛晓丽; 邓敏鑫【期刊名称】《《实用医学杂志》》【年(卷),期】2019(035)015【总页数】5页(P2447-2451)【关键词】喉鳞状细胞癌; 淋巴结转移; miRNA; 基因芯片【作者】许咪咪; 卢仲明; 张思毅; 詹建东; 盛晓丽; 邓敏鑫【作者单位】南方医科大学第二临床医学院广州 510280; 广东省医学科学院广东省人民医院耳鼻咽喉头颈外科广州510080【正文语种】中文目前，头颈癌已经是全世界第六大高发癌症，根据统计，全世界每年约有645 000例新发生的头颈癌病例[1]，其中超过90%头颈癌为鳞状细胞癌。
喉癌作为第二位常见头颈癌，大多是鳞状细胞癌。
颈淋巴结转移是影响头颈癌包括喉癌患者预后最重要的因素，有淋巴结转移者生存率降低50%[2-3]。
因此，术前颈淋巴结转移的评估尤为重要。
miRNA是一类细胞内源性表达的、由22个单核苷酸组成的、单链小分子非编码RNA，其主要功能为通过降解靶基因mRNA，从而进行转录后调控相关基因的表达[4]。
miRNA在某些疾病中的异常表达，因此miRNA可以作为部分疾病早期诊断的潜在标记物。
同时，miRNA及其靶基因也可以作为特定疾病治疗的疗效评价预测指标及潜在药物靶点。
越来越多的研究表明，miRNA与喉癌的发生、发展相关[5-12]，但绝大多数研究都集中在miRNA的表达失调与喉癌发生之间的关联，至今未见与喉癌淋巴结转移相关的miRNA表达谱相关的报道。
本研究运用miRNA芯片技术，通过检测分析喉鳞状细胞癌（又称喉鳞癌、喉癌）组织中miRNA的表达特点，寻找有淋巴结转移的喉鳞癌肿瘤组织和无淋巴结转移者差异表达的miRNA，探讨其与喉癌侵袭、转移的关系，为后续寻找与喉癌早期诊断及转移相关的潜在的分子标志物打下初步基础，为提高喉癌生存率及保喉率，最终改善喉癌的治疗效果，提供初步的理论依据。
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学校代码：10114分类号：R739.65硕士学位论文（七年制临床医学硕士专业学位）cN期隐匿性颈淋巴结转移喉鳞癌中关键性microRNA表达谱的研究The research on microRNA profiles in cN0stage laryngeal squamous cell carcinoma patients with micrometastasis of lymphnode by microRNA array研究生：樊辉如指导教师：王斌全教授专业名称：耳鼻咽喉科学研究方向：头颈肿瘤基础与临床所在学院：第一临床医学院中国山西二〇一四年五月八日分类号：R739.65单位代码：10114密级：学号：20070007期隐匿性颈淋巴结转移喉鳞癌中关键性microRNA表达谱cN的研究The research on microRNA profiles in cN0stage laryngeal squamous cell carcinoma patients with micrometastasis of lymphnode by microRNA array研究生：樊辉如指导教师：王斌全教授申请学位门类级别：医学硕士（专业学位）专业名称：耳鼻咽喉科学研究方向：头颈肿瘤基础与临床学院：第一临床医学院二〇一四年五月八日本课题由国家自然科学基金面上项目资助，编号：81172584学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。
文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。
论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。
4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。
论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。
本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。
（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）目录中文摘要 (I)ABSTRACT (II)插图和附表清单 (IV)英文缩略词 (V)前言 (1)材料与方法 (2)一、实验材料 (2)二、试验方法和步骤 (4)结果 (9)一、总RNA浓度与质量控制 (9)二、miRNA芯片杂交及质量控制 (9)三、数据统计学分析 (10)讨论 (12)一、microRNA与肿瘤 (12)二、microRNA在转移性喉鳞状细胞癌中的表达及意义 (14)三、基因芯片技术在检测肿瘤相关基因表达谱变化的应用研究 (16)四、审视与展望 (16)结论 (18)参考文献 (19)文献综述 (22)参考文献 (25)个人简介 (27)致谢 (28)中文摘要期隐匿性颈淋巴结转移喉鳞癌中关键性microRNA表达谱的研cN究研究目的：喉鳞状细胞癌（喉鳞癌）颈淋巴结转移的早期发现对喉鳞癌的治疗及预后至关重要，而目前人们对于相关的分子机理及分子标志的认识尚有限。
本研究应用基因芯片技术，研究喉鳞状细胞癌隐匿性颈淋巴结转移相关的microRNA(miRNA)表达谱，筛选cN0期隐匿性颈淋巴结转移阳性的喉鳞癌及无转移者癌组织中差异表达的miRNA，为深入理解喉鳞癌发生淋巴结转移的分子机理，寻找相应的分子生物学标志提供理论基础和研究依据。
研究方法：选取cN0期原发喉鳞状细胞癌患者6例，其中3例术后病理证实伴有颈淋巴结转移，3例无淋巴结转移，手术切除新鲜癌组织及对应癌旁正常黏膜组织标本，Trizol mirVana™miRNA Isolation Kit试剂盒提取总RNA，经Agilent Bioanalyzer2100电泳质检达芯片杂交质控要求后，采用Agilent Human miRNA Microarray version2Kit，P／N G4470B芯片进行RNA样品标记及杂交实验，洗涤后的芯片经Agilent芯片激光扫描仪扫描后采用Feature Extraction软件提取数据，GeneSpring软件分析数据，以t-test检验筛选在转移组和无转移组中差异表达的miRNA(以P值＜0.05和FC值＞2为条件)。
研究结果：共有13个miRNA在隐匿性转移性喉鳞状细胞癌中存在差异表达，相对于无淋巴结转移组，在有淋巴结转移组中有6个表达显著上调（FC＞2，P＜0.05），包括：hsa-miR-5194，hsa-miR-1305，hsa-miR-6717-5p，hsa-miR-1260b，hsa-miR-6131，hsa-miR-1288，其中hsa-miR-1288上调3倍以上；而表达明显下调(FC＜0.5，log2＜-1，P＜0.05)的miRNA有7个，分别是：hsa-miR-31-3p，hsa-miR-144-5p，hsa-miR-4728-3p，hsa-miR-5196-5p，hsa-miR-149-5p，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-4417。
研究结论：基因芯片技术是一种快捷有效的高通量分析喉鳞状细胞癌淋巴结转移相关miRNA表达谱的检测方法。
通过miRNA芯片分析，初步建立起转移性喉鳞状细胞癌差异性miRNA 表达谱，共有13个miRNA：相对于无淋巴结转移组，6个miRNA在伴有颈淋巴结转移的喉鳞状细胞癌组织中表达水平显著上调，7个miRNA的表达水平显著下调。
这13个差异表达的miRNAs可能成为喉鳞状细胞癌早期发生淋巴结转移的分子标志物。
关键词：microRNA；基因芯片；喉鳞状细胞癌；隐匿性淋巴结转移ABSTRACTThe research on microRNA profiles in cN0stage laryngeal squamous cell carcinoma patients with micrometastasis of lymphnode by microRNA arrayObjectiveThe early detection of the neck lymph node metastasis of laryngeal squamous cell carcinomas(LSCC)is very important in the treatment and prognosis of laryngeal carcinomas.Unfortunately,our recognization of the related molecular mechanism and biomolecular signature of laryngeal carcinomas is still limited．The research of microRNA(miRNA)expression profiles in cN0stage laryngeal squamous cell carcinoma patients with micrometastasis of lymph node and screening for altered miRNAs between laryngeal squamous cell carcinomas tissues with lymph node metastasis and without metastasis by miRNA microarry will play a foundation for realizing the bimolecular mechanism of lymph node metastasis of laryngeal carcinomas and exploring related biomolecular markers．MethodsSelecting6patients with primary LSCC,3cases with lymph node metastasis confirmeded by pathological examination,3cases without metastasis.Total RNA was isolated from six primary fresh frozen samples of LSCC and their matched adjacent normal tissues by mirVana™miRNA Isolation Kit．The quality of extracted total RNA was determined by Agilent Bioanalyzer2100to ensure the successfull microarry hybridization．Then the total RNA samples were labelled and hybridized with miRNA microarrays(Human miRNA Microarray version2Kit，P／N G4470B)．The hybridized microarrays were washed and then scanned with Agilent microarray scanner．The data in the microarrays was extracted with Feature Extraction software．The significant differential expression miRNAs between the group with metastasis and the control group were determined by T-test(P<0.05and Fold Change>2)using GeneSpring software.ResultsA total of thirteen miRNAs were detected expressing paring with the LSCC tissues without metastasis,six miRNAs were upregulated in squamous cell carcinomas of larynx with micrometastasis of lymph node,they are:hsa-miR-5194hsa-miR-1305，hsa-miR-6717-5p，hsa-miR-1260b，hsa-miR-6131，hsa-miR-1288,besides,the hsa-miR-1288was found to be more than three fold alterations.seven miRNAs were downregulated included hsa-miR-31-3p，hsa-miR-144-5p，hsa-miR-4728-3p，hsa-miR-5196-5p，hsa-miR-149-5p，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-4417.ConclusionsMicroarray technique is an effective high-flux method to detecting differential miRNA expression in LSCC.The preliminary profile of miRNA expression in LSCC with lymph node metastasis were obtained through miRNA microarray analysis which contains thirteen miRNAs, in the laryngeal cacinoma tissues with lymph node metastsis,six miRNAs were upregulated and seven miRNAs were downregulated compared with the LSCC without metastasis.The thirteen miRNAs which showed more significant alterations may be potential molecular signatures for the LSCC with micrometastasis of lymph node．Key wordsmicroRNA;microRNA array;laryngeal Squamous cell carcinoma(LSCC);micrometastasis of lymph node.插图和附表清单表1：纳入患者的临床病理资料 (3)图1：RNA质检电泳图 (11)图2：基因芯片扫描截图 (12)图3：转移癌中差异性miR分子聚类热点图 (13)英文缩略词FGF3fibroblastic growth factor3纤维母细胞生长因子3 HDAC1histone deacetylase1组蛋白去乙酰化酶1 HSCC hypopharyngeal squamous cell carcinoma下咽鳞状细胞癌LMP1latent membrane protein1潜伏膜蛋白1 LSCC laryngeal squamous cell carcinoma喉鳞状细胞癌MECP2Methyl CpG binding protein2甲基化CpG相关蛋白2 miRNA microRNA微小RNA MMP-2matrix-metalloproteinases2基质金属蛋白酶2 MSPCR Methylation-specific polymerize Chain Reaction甲基化特异性PCR OSCC oral squamous cell carcinoma口腔鳞状细胞癌PTEN Phosphatase and tensin homolog磷酸酶张力蛋白同系物RhoA Ras homolog gene family member A gene Ras同族体基因家族成员A前言喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，其病理类型中96%-98%为鳞状细胞癌（简称鳞癌）。