实验二 酵母菌的死活染色和放线菌的形态观察(二类参照)
2霉菌、放线菌、酵母菌的形态观察及酵母菌细胞死活鉴定
四、操作步骤
2.霉菌形态观察：
直接制片观察法滴一滴乳酸石碳酸棉蓝染液于载玻片上， 用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量以产孢子的霉菌菌丝， 先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片 上的染色液中，用解剖针小心地将菌丝分开，盖上盖玻片， 置低倍镜下找到适当视野，再换高倍镜观察。
繁殖方式：主要产生无性孢子和有性孢子繁殖。
乳酸石碳酸棉蓝染色：细胞不变形，不易干燥，防 腐，保存时间较长，防止孢子飞散。
霉菌的菌丝。构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。 菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很 像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌 和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产 生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝 体。
酵母菌的形态
酵母菌细胞形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状和香肠 状。酵母菌细胞大小为2.5-10x4.5-21m。
酵母菌细胞形态
酵母菌出芽
酵母菌细胞形态
（2）霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体（基内菌 丝和气生菌丝），气生菌丝长到一定阶段分化产生分 生孢子梗，分生孢子梗上产生孢子。分生孢子梗和分 生孢子的形态特征是分类鉴定的重要依据。
胞。 ④染色30分钟后再次观察，注意细胞死活比例是否发生变化。 ⑤用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 （2）水-碘液浸片法 将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍，滴加一滴于载玻片中央，无菌操作取少许菌体于染色液
中止菌丝污染显微镜物镜镜头。 采取恰当的处理方法永久保持微生物的自然形态。 美蓝染液水浸片法制作酵母菌制片注意染液的浓度和染色
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。
2.学习区分细胞的死活状态。
二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。
放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。
放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。
2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。
酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。
酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。
3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。
三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。
b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。
e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。
g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。
四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。
放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。
酵母菌形态观察及死活细胞鉴定2
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；
实验二 酵母菌的形态观察、霉菌的形态观察
实验二酵母菌的形态观察、霉菌的形态观察酵母菌和霉菌都是微生物，通过观察这两种微生物的形态特征可以确定它们的种类。
在实验室中，通常用显微镜观察微生物的形态，以帮助区分微生物的种类。
在本实验中，将观察酵母菌和霉菌的形态，以帮助区分它们。
实验步骤：1.准备显微镜，然后准备两种微生物样本：酵母菌和霉菌。
2.上照相纸，把每种样品的一小部分放在照相纸上。
3.用显微镜观察未涂抹物质的样品。
4.把溶液放在样品上，涂抹照相纸，再放入显微镜观察它们。
酵母菌的形态：在不涂抹任何物质的情况下，酵母菌呈流线形，由单个、多个的条状成分构成，在高倍镜下观察时呈多条状也可以看到酵母菌有两极分布的特点。
涂抹染色液后，酵母菌的特点是单个、多个长条状悬浮物，它们是由许多一样的小球状物体组成的，小球状物体有链分子状的特点，且在高倍镜下具有清晰的轮廓。
不涂抹染色液时，霉菌呈马尾形，有单个、多个马尾形条状成分。
马尾形较长，比酵母菌要长。
涂抹染色液后，霉菌的形态有许多变化，形状如贴壁小细节一样，贴壁小细节略微弯曲，表现在高倍镜下长条形，上面有明显的螺旋纹路。
总结：本实验中，通过显微镜观察了酵母菌和霉菌的形态，结果表明：酵母菌与染色液无关时呈流线形，由单个、多个的条状成分构成，在有染色液的情况下，它的特点是单个、多个长条状悬浮物，是由许多一样的小球状物体组成的，而霉菌不涂抹染色液时呈马尾形，有单个、多个条状成分，涂抹染色液后它的形状如贴壁小细节一样，贴壁小细节略微弯曲，表现在高倍镜下长条形，上面有明显的螺旋纹路。
本实验中，把酵母菌和霉菌的形态作了比较，两者存在明显的区别。
因此，可以从形态上来区分酵母菌和霉菌。
实验二细菌、放线菌的形态观察
四、实验方法和步骤
3. 气生菌丝、孢子丝的活体观察
将培养皿盖打开，选择菌丝和孢子丝生长较薄的部 位，直接用低倍镜和高倍镜观察。
4．气生菌丝、孢子丝的印片观察
载玻片—滴1滴美兰染液—盖玻片印片—印片面向下 置于美兰中—吸去多余染液—镜检（用油镜观察）— —维护还原显微镜。
五、 思 考 题
1、绘出所观察的几种细菌和放线菌的形态并注 明名称和放大倍数。 2、放线菌菌落和细菌菌落有何不同之处？ 3、放细菌的菌体为何不易挑取？
文档名
THE END!THANK YOU !
四、实验方法和步骤
1、细菌简单染色
取菌（要求无菌操作）—涂片—干燥—固定 —染色（1min）—水洗—干燥—镜检（注意形 状、大小、排列方式）
葡萄球菌
四、实验方法和步骤
2、放线菌菌落 形态观察
（1）表面形状 大小、颜色、边缘 、紧密程度等。
（2）区别营养菌 丝、气生菌丝、孢 子丝
四、实验方法和步骤葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、大肠杆菌、 灰色链霉菌等。
2、器材
显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、无菌水、 香柏油、碱性染料番红、结晶紫等。
四、实验方法和步骤
1、细菌简单染色
取菌（要求无菌操作）—涂片—干燥—固定 —染色（1min）—水洗—干燥—镜检（注意形 状、大小、排列方式）
二、细菌染色的基本原理
细菌细胞小而透明，在普通光学显微镜 下不易识别，必须对它们进行染色。细菌常 用碱性染料来进行简单染色，这是因为在中 性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带 负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色部分带正电荷，很容易使细菌结合使菌体 着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明 的对比，在显微镜下更易于识别。
实验二放线菌真菌形态观察
芽孢染色
材料：破伤风杆菌培养物 石炭酸复红染液，吕氏美蓝染液 玻片、95%酒精 方法： 1． 涂片 2． 染色： （1）以石炭酸复红染液滴加于一固定好的涂片上，并 加热到有蒸汽发生为止，染色 5 min，注意随时添加染液以免蒸 干。 （2）水洗后，95%酒精脱色 2 min。 （3）水洗后，以吕氏美蓝染液染 1 min。 （4）水洗，吸干，油镜检查。
原理（2）
美蓝染色可区分死活细胞，因为在活细胞中美蓝 被还原为无色，死细胞不能使美蓝发生还原反应， 故死细胞呈现为蓝色。 本实验中芽孢染色采用石炭酸复红初染（加热） 和美蓝复染法，基于石炭酸复红为酸性染料，与 菌体结合差，易被水冲洗掉，而芽孢中的复红染 料却难以脱去（芽孢壁较厚，芽孢一旦着色后难 以脱色）。结果是菌体被染成蓝色，芽孢呈红色。
细菌芽孢染色
绘图示青色链霉菌的气生菌丝、孢子丝； 绘图示酵母菌的形态。 思考题： 为什么芽孢染色法中用酸性复红初染时需要加热并 维持5 min？
插片法
高氏1号琼脂培养基倒平板 无菌盖玻片斜 插（45oC）入琼脂 划线接种放线菌 28oC培养6-7d 取出盖玻片 固定 染色 水洗 镜检
水浸片
滴加吕氏美蓝于载玻片
接种环取酵母培养物
盖上盖玻片（防止气泡产生）
镜检
Streptomyces scabies
Saccharomyces cerevisiae
实验二 放线菌、真菌形态的观察 细菌芽孢染色
目的要求
学习观察放线菌和真菌形态的基本技术； 加深对放线菌和真菌形态特征的理解； 掌握细菌芽孢染色的方法。
原理
Βιβλιοθήκη 放线菌与真菌虽然都有分支状菌丝，但两者在系统 发育学上分属两大界：放线菌---原核生物， 16SrRNA；真菌---真核生物（低等），18SrRNA。 链霉菌是放线菌的重要类群，其菌丝体分为基内菌 丝（营养菌丝）、气生菌丝两部分，气生菌丝的顶 端分化为孢子丝，生长到一定时期形成成熟的孢子。 可用插片法观察链霉菌的孢子。 酵母菌是单细胞真核微生物，其细胞比细菌细胞大， 呈卵圆形或柱形。 可制成水浸片在高倍镜下观察酵母菌的形态和繁殖 方式（芽殖）。
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
印片法：取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔
上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢固定。
上：孢子丝
右上、右下：基内菌丝 和气生菌丝
2. 结果 革蓝氏染色阳性：深紫色 革蓝氏染色阴性：浅红色
3. 放线菌的观察
基内菌丝（substrate mycelium）：也称营养菌丝，生长于培养基内，主
要功能是吸收营养物质和排泄代谢废物，营养菌丝一般无隔膜，内含有许多核质体， 直径约为0.2-0.8μm，但长度差别很大。色浅、较细。
气生菌丝（aerial mycelium）：营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外伸
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
基本概念： 革蓝氏染色（Gram staining） 革蓝氏染色阳性（Gram Positive） 革蓝氏染色阴性（Gram Negative） 基内菌丝（substrate mycelium） 气生菌丝（aerial mycelium） 孢子丝（sporophore）
放线菌的基本特点
¾分枝丝状体，原核微生物 ¾革蓝氏染色阳性反应 ¾不运动 ¾大部分腐生菌，少数寄生菌，也有致病菌 ¾ 抗生素的主要产生菌 ¾ 许多酶和维生素的产生菌 ¾甾体转化、石油脱蜡、污水处理 ¾某些与植物共生固氮
放线菌的菌丝
1、营养菌丝 匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无
隔膜，直径0.2-0.8 μm，长度差别很大，有的可产生色素。
[实验目的]
1. 学习细菌革兰氏染色原理和方法 2. 学习放线菌培养观察方法 3. 观察细菌形态及运动（活体观察）
[实验材料] 1. 菌种
细菌、酵母菌、霉菌和放线菌接种方法和形态观察
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别.
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、目的要求1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法；2.观察并掌握酵母菌的个体形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态；3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。
二、实验材料1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、粟酒裂殖酵母（Sachizosaccharomyces pombe）2.染色液：0.1％美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95％乙醇等3.其他：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等三、基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。
酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由兰色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。
四、操作步骤1。
水浸片观察：1）制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片（先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上），应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分（菌液不宜过多或过少，否则，在盖盖玻片时，菌液会溢出或出现气泡而影响观察；盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡）。
2）镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式，并进行记录。
实验二放线菌霉菌和酵母菌形态的观察ppt课件
实验二
放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察和测量 一旦我单位在贵局承办的“海峡两岸渔业资源增殖放流活动”放流苗种招标中中标，我单位将严格按照招标方案的要求和合同的约定执行
一、实验目的
熟练使用显微镜、显微测微尺的工作原理和操 作要领；
通过观察和测量了解放线菌、酵母菌、霉菌细 胞的形态和大小
实验二 放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察和测量
三、实验材料、仪器、试剂
仪器：光学显微镜〔Leica〕〔带测微尺〕 材料 永久装片〔注意生产厂家：放线菌、酵母菌、
根霉、青霉菌 4种未知真菌的新鲜培养物(PDA培养基中28℃
培养4d〕 试剂及其他 0.05%棉蓝乳酚油染色液 香伯油，擦镜液，镜头纸，镊子、载玻片、盖4
丝、基内菌丝，孢子丝〕。 霉菌：由菌丝体构成的真核微生物。不同种类
的霉菌可以通过子实体的形态来区分，此外特 化的营养菌丝也可以作为主要的区别特征。
3
实验一
一旦我单位在贵局承办的“海峡两岸 渔业资 源增殖 放流活 动”放 流苗种 招标中 中标， 我单位 将严格 按照招 标方案 的要求 和合同 的约定 执行
木霉 5. 真菌的活体染色原理及方法
21
根霉：菌丝、假根、匍匐枝，孢子囊及孢子 青霉：菌丝、分生孢子头、分生孢子 曲霉：菌丝、分生孢子头、分生孢子
活体真菌染色及观察
菌丝大小及是否有隔膜、子实体、分生孢子
5
一旦我单位在贵局承办的“海峡两岸 渔业资 源增殖 放流活 动”放 流苗种 招标中 中标， 我单位 将严格 按照招 标方案 的要求 和合同 的约定 执行
五、实验要求
实验要求 每位学生独立操作 选择适宜的放大倍数观察和测量三种类
实验二细菌、放线菌的形态观察
掌握放线菌的菌丝和孢子形态特征，了解其在自然界中的分布和作用，以及其 在生物工程领域的应用价值。
02 实验材料
细菌、放线菌培养物
细菌培养物
选择不同的细菌培养物，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，以观察不同细菌的形 态和特点。
放线菌培养物
选择常见的土壤放线菌作为实验材料，以便观察放线菌的菌落形态和微观结构。
放线菌形态观察结果
总结词：结构独特
详细描述：放线菌的形态呈现出独特的辐射状排列，同时菌体结构也较为多样，包括分枝状、丝状等。这种结构使得放线菌 具有较强的生存和繁殖能力。
结果分析
总结词
功能与形态相适应
详细描述
细菌和放线菌的形态与其功能和生存环境密切相关。例如，螺旋形细菌常常具有较好的 运动能力，有助于其在液体环境中扩散；而放线菌的辐射状排列和多样结构则使其在各
通过显微观察，我们成功地识别了不 同形态的细菌和放线菌，并对其进行 了分类。
结果讨论与思考
实验结果与微生物学理论基本一致，表明我们的实验操作和观察方法较为 准确可靠。
对于实验过程中出现的问题和误差，我们认为可能是由于显微镜操作不熟 练、样品制备不规范等原因造成的。
在今后的实验中，我们应更加注重操作规范，提高实验技能，以确保实验 结果的准确性和可靠性。
学习显微镜观察技术
显微镜操作
学习如何正确操作显微镜，包括调整 焦距、对光、移动载玻片等步骤，以 确保观察到的图像清晰。
样本制备
学习如何制备细菌和放线菌样本，以 便在显微镜下观察，包括制片、染色 等步骤。
掌握细菌、放线菌的形态特征
细菌特征
了解不同类型细菌的形态特征，如革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在显微镜下的 区别，以及它们在生物分类学上的地位。
实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、实验目的与要求观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、基本原理1.单个的酵母菌合同是常见细菌的几倍甚至几十倍。
为单细胞，呈圆形，卵形或椭圆形，内有细胞核，液泡和颗粒体物质。
有的种类能产生子囊孢子或掷孢子、冬孢子、担孢子等。
有的种类一定条件下形成假菌丝或真菌丝。
大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可通过结合产生子囊孢子进行有性生殖。
2.酵母菌在液体培养基中生长时，能利用其中的可发酵型糖，并产生气体，有些产生挥发性的酯香味，菌体可沉于管的底部或悬浮在培养液中，或漂浮在培养液省形成菌膜或菌醭（分析一下为什么）。
当其生长在固体培养基上时，菌落形态与细菌相似，但较大较厚，呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。
随时间延长，菌落颜色往往变暗，有些菌落边缘呈皱褶状。
3. 由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。
美兰对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型呈无色。
由于细胞的新陈代谢，，活细胞内有较强还原能力，使美兰由氧化型转变为无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞内还原力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
三、实验材料1.酵母液体培养物和斜面培养物。
2.吕氏碱性美兰染液，革兰氏染色用碘液。
3.仪器和其他用品四、方法步骤1.制片先在载玻片中央滴加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，再滴加少量水稀释。
无菌操作取试管中培养的酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
2.镜检将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜，再用高倍镜，观察酵母菌的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
染色30分钟后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变化。
用0.05%染液作对照同时进行上述实验。
五、注意事项1.用接种环将菌体与染液混合式不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
实验放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
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六、思考与讨论
1、镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生 菌丝。 2、在显微镜下，酵母菌与细菌有何异同？
下次实验项目：霉菌的形态观察 注意：带上镊子和解剖针
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基内菌丝
孢子丝
链 霉 菌
气生菌丝
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芽细胞
酿酒酵母
裂殖
2021/4/21假丝酵母2021源自4/213二、基本原理
2、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 蓝色。
子囊 子囊孢子
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三、实验器材
1、菌种：链霉菌、酿酒酵母、裂殖酵母、假丝酵母 2、染色剂： 0.05%吕氏碱性美蓝染色液 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、 接种环、盖玻片、显微镜、擦镜纸、滤纸等
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四、操作步骤
1、放线菌形态
用镊子小心拔出盖玻片 擦去背面培养物将有菌的 一面盖玻片朝上 置于干净的载玻片上 镜检
后镜检 放置10min后再次镜检，观察颜色变化
操作要点： • 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 • 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 • 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。
实验二 放线菌、霉菌和酵母菌形态的观察
实验目的：
学习丝状微生物制片和染色技术；
观察和掌握典型放线菌、重要霉菌和酵 母菌的形态结构特征
一、实验材料
1、细黄链霉菌5406平板、插片培养材料。 2、黑曲霉、青霉、毛霉平板培养材料和湿室培养材料。
3、黑根霉（面包霉）装片
4、酿酒酵母菌菌液
–③繁殖菌丝：
霉菌的繁殖方式和繁殖结构
• 霉菌主要靠形成各 种无性孢子和有性 孢子进行繁殖。 • 霉菌的无性孢子 厚垣孢子 节孢子 分生孢子 孢囊孢子
根
霉
产淀粉酶等，用于甜 酒的酿制 生产多种有机酸
转化甾体类物质
毛 霉
产蛋白酶、淀粉酶等，
用于腐乳的酿制
生产多种有机酸 转化甾体类物质
• 简易观察
二、实验内容与要求
1、观察细黄链霉菌插片法培养材料 2、用压片法观察细黄链霉菌菌丝
3、观察黑根霉插片法培养材料（菌丝有无横隔、孢囊和孢囊孢子大小形 态、假根、囊托和囊轴），
4、观察毛霉湿室培养材料（菌丝有无横隔、孢囊和孢囊孢子、有无假根、 囊托和囊轴） 5、观察自制黑曲霉装片和湿室培养材料（菌丝有无横隔、分生孢子梗着 生位置、顶囊、分生孢子的位置、足细胞等） 6、观察青霉湿室培养材料（菌丝有无横隔、分生孢子梗和分生孢子穗形 态、有无足细胞等） 7、水浸片法（美兰染色法）观察酵母菌形态、大小、芽殖、计算酵母细 胞的存活率。
问
看到的情况如何？
题
• 如果按照细菌的制片方法观察放线菌，
• 如果要观察放线菌全貌，可采取什么方 法？
放线菌的培养与观察方法p57
• 插片法-水封片法 • 玻璃纸法 • 压片法
• 影印法
霉菌的形态结构观察
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实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察
赵奕玲 121180169
一．实验目的
1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。
2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。
3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。
二．实验原理
1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。
它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。
能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。
酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。
因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。
在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。
3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。
有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。
孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。
气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
三．实验器材
1、菌种：酿酒酵母固体培养物，放线菌固体培养物
2、溶液和试剂： a) 0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，吕氏碱性美蓝染液，蒸馏水等。
b) 香柏油、二甲苯
3、仪器及其它用品：普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等
四．实验步骤
1.酵母菌的死活染色：
a)涂片在洁净盖玻片中部滴一滴0.01%美蓝水溶液，按常规方法接种酵母
b) 加盖玻片加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察；
c) 放置及镜检从接种开始计时，放置3min，然后在高倍镜（×40）下观察酵母菌的形态，根据染色状态判断酵母菌的死活（由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色），寻找并观察酵母菌不同类型的出芽方式（一端出芽或两端出芽）。
将酵母菌美兰浸片放置30min，再用高倍镜（×40）观察，根据染色状态判断酵母菌的死活，并与3min时的情况做一对比说明。
2.放线菌的形态观察：
用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。
然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。
找出3类菌丝及其分生孢子。
五．实验结果
1.吕氏碱性美兰染液作用3分钟时，90%以上的酵母菌都存活，30分钟后，大约有近30%的酵母菌死亡，说明美蓝虽为温和染色剂，但长时间后菌体依然会被染色剂破坏或缺水导致大量死亡。
2.酵母菌的出芽有三种方式，一端出芽，两端出芽和多边出芽，在这次的实验中，出芽效果仅观察到一个一端出芽。
3.子囊孢子的染色没有看到结果，可能是菌株本身的问题。
（以下两幅图是同一视野的上下两部分，图片有部分重叠）
活酵母
死酵母
正在出芽的酵母（一端出芽）
长在气生菌丝上的孢子丝
气生菌丝
1.放线菌的菌落呈灰褐色，有土腥味。
2.呈菌丝状生长，以孢子繁殖。
显微镜下菌丝呈浅绿色，孢子丝呈深蓝色。
3.气生菌丝整体上呈现一种纤细的感觉，像细长的柳枝；基生菌丝整体上呈现一种交联的感觉，像皲裂的泥土。
孢子丝细看可见小小的粒状结构，呈螺旋状，易落在视野的任何位置。
4.观察方法：先在视野中找到气生菌丝和基生菌丝交界的地方，有很多的孢子丝，或者零碎的孢子；然后一侧是基生菌丝，另一侧是气生菌丝。