金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。
3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。
3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。
4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。
4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。
4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。
5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。
金黄色葡萄球菌
Part 2
致病性
致病性
1
金黄色葡萄球菌是一种常见的病原体， 可以引起多种人类和动物疾病
其中，食物中毒是最常见的疾病之一， 通常是由于摄入被金黄色葡萄球菌污
染的食物引起的
2
3
此外，金黄色葡萄球菌还可以引起皮 肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、
败血症等疾病
Part 3
传播途径
传播途径
金黄色葡萄球菌可以 通过多种途径传播， 包括空气传播、直接 接触传播、食物传播
x
然而，由于金黄色葡萄球菌 具有抗药性，一些抗生素可 能无法有效治疗该细菌
同时，对于严重感染的患者， 可能需要采用综合治疗措施， 包括手术治疗、支持治疗等
Part 6
预防措施
预防措施
为了预防金黄色葡萄球菌感 染，可以采取以下措施
加强个人卫生 勤洗手、洗脸、刷牙 等个人卫生习惯可以
减少细菌的传播
施
Part 1
生物学特性
生物学特性
它可以在各种环境条件下生长， 包括高温、低温、高盐度、低 pH值等
金黄色葡萄球菌是一种需氧型 细菌，具有高度的适应性和生 存能力 金黄色葡萄球菌具有多种毒力 因子，如溶血素、肠毒素、细 胞毒素等，这些毒力因子可以 破坏细胞、诱导炎症反应和免 疫应答，从而引起各种疾病
思到最后定稿的各个环节给予细心指引与教导,使我得以最终完成毕业论文设计！ 最后，我要向百忙之中抽时间对本文进行审阅，评议和参与本人论文答辩的各位
老师表示感谢！
恳请各位老师批评指正！
避免接触污染源 避免接触被金黄色 葡萄球菌污染的水
源、食物等
生 加强对食品的卫生管理，
避免食品被污染
增强免疫力 加强锻炼、保持健康的 生活方式可以提高免疫 力，减少感染的风险
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌一、生物学性状1、形态与染色革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。
无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。
在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。
2、培养特性需氧或兼性厌氧。
营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。
属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。
3、生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。
致病性菌株能分解甘露醇，产酸。
触酶阳性，可与链球菌相区分。
4、抗原（1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。
在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。
（2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。
（3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。
金黄色葡萄球菌中可提出A群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。
5、抵抗力葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。
在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。
对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。
该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。
耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合成的量有关。
二、致病性葡萄球菌中金黄色葡萄球菌毒力最强，通过与宿主体内的增殖、扩散和产生有害的胞外物质（酶和毒素）引起宿主疾病。
1、致病物质（1）葡萄球菌的毒力因子包括：①酶：酶和其他酶（纤维蛋白溶媒、耐药核酸酶、透明质酸酶、酯酶等）；②毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ）、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等；③细菌的一些表面结构蛋白，如黏附素、荚膜、细胞肽聚糖和SPA等。
金黄色葡萄球菌(牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37。
C，最适生长pH7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15% NaCI肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
生物学特性：
1.球菌，直径0.8-1.0μm左右，显微镜下排列成葡萄串状
2.无芽胞、鞭毛，无荚膜
3.革兰氏染色阳性
4.化能异养菌，呼吸代谢和发酵代谢
5.高度的耐盐性（10-15%NaCl肉汤中生长）
培养特性：
1.营养要求不高
2.需氧或兼性厌氧，在好氧环境下生长最好
3.最适生长温度37°C，干燥环境下可存活数周
4.最适生长pH 7.4
5.菌落光滑、低凸、闪光、奶油状、并且有完整的边缘。
6.血平板菌落周围形成透明的溶血环
生化特性：
（1）可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
（2）金黄色葡萄球菌在厌氧条件下分解甘露醇产酸（非致病性菌则无此现象）
（3）许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
（4）具有较强的抵抗力，磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等高度敏感
贴膏剂预处理
1.取规定量供试品
2.去掉贴膏剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上
3.用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起
4.将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中
5.用力振荡至少30 分钟，制成供试液
生化试验：
血浆凝固酶为阳性（应呈凝固状）阳性对照管液呈凝固状
阴性对照管血浆流动自如。
凝固为阳性反应，不凝固为阴性反应。
6.金黄色葡萄球菌GB 4789.10-2016
• 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉 素）
金黄色葡萄球菌生物特征
• 形态特征：革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。
无鞭毛、 无芽胞、有荚膜（体外培 养一般不产生）。 在陈旧培养物中，衰老的菌体常转 为革兰氏阴性。 • 培养特性：最宜温度：37℃（6.5-46 ℃） 最适宜pH:7.4(4.2-9.3） 耐盐性：可在10%-15% NaCl，40%胆汁中生长 • 能产生色素、血浆凝固酶、接触酶、肠毒素等
定性检测——选择性增菌
• 步骤：称取25g样品至盛有225ml 7.5%氯化 钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的容器 中，均质。液体样品量取25mL。 • 作用：1，复苏细菌； 2，选择性增菌 • 操作要点：1，准确称（量）取； 2，按标准要求时间温度培养
定性检测——平板划线分离
• 步骤：分别用接种环取培养液1环，划线接 种于一个Baird-Parker平板和一个血平板（， 于36±1℃分别培养18-24h（血平板）或4048h（ Baird-Parker平板） • 作用：以划线方式在琼脂平板上分离出单菌 落，通过单菌落的菌落形态判别出具有典型 形态的可疑菌落进行下一步生化及血清实验 确定。 • 操作要点：1，保持用于划线平板表面干燥 2，必须在平板中画出单菌落 3，用于划线平板需要现配现用
定性检测——平板划线分离
菌落形态：白色或者金黄色菌落 ，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱 纤维羊血
注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌；
二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。
定性检测——血浆凝固酶鉴定试验
• 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h； 0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃ 培养6h； 每半小时观察； 同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228) • 阳性现象：试管倾斜或倒置时，呈现凝块，即凝固 注意点： 现象， 1，必须每半小时观察； 或凝固 体积大于原体积的一半。 2，陈旧培养物（培养超过18-24h）或生长不良
金黄色葡萄球菌
1.血浆凝固酶试验：原理:金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝集颗粒；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。
因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。
方法：（1）玻片法：在1张洁净玻片中央加1滴9g／L氯化钠(生理盐水)溶液，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10～20s内无自凝现象发生，则加入兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。
（如出现颗粒状凝集现象即为阳性。
如不立即发生凝集，可稍待一，二分钟，并轻轻摇动玻片，加速反应，若无凝集时则为阴性。
）（2）试管法：用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释，取0．5ml于试管再加0.5ml 待测菌浓菌悬液（需做阳性对照及阴性对照。
），混匀后置37℃水浴中，每30min 观察1次结果。
若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管（即浓菌液管）不凝固，为阳性；若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性。
（观察结果，将试管微微倾斜，血浆成冻胶样凝块者为阳性，血浆仍为液状者为阴性。
）【结果判断】（1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。
（2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。
4h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。
【注意事项】（1）最好使用EDTA抗凝的兔血浆，因为如果使用枸缘酸盐抗凝血浆会产生假阳性结果（2）玻片法：10秒内观察结果，如超过10 秒可出现假阳性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
2. 耐热核酸酶试验原理：致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶，它能分解DNA，使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色玻片法：取融化好的甲苯胺蓝DNA琼脂3ml均匀浇在载玻片上，待琼脂凝固后打上6-8个孔径为2-5mm的小孔，各孔分别加一滴经沸水浴3分钟处理过的待检葡萄球菌和阳性阴性对照葡萄球菌培养物，35℃大气环境孵育3小时，观察有无粉红色圈及其大小。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
金黄色葡萄球菌
• 金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含 90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状 结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后 不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌的细 胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以 紫色复合物被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。 金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。 当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿 中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。 而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代 表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层 的厚度和结构造成的。
• 5、动物感染实验 • 用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的 菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠 体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的 小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件 饲养，观察其症状。对感染试验出现症状 或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料， 进行分离。
• • • •
二．结果与分析 1、培养特性及形态特征 ①培养特性 在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂 平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金 黄色菌落，并且有β溶血现象。 • ②镜检结果 • 显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡 萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落 形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。
• 1、样品的采集 • 称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨）， 置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水， 制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随 机取10ml离心。 • 2、增菌及分离培养 • ①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于 7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温 箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃） 恒温箱中培养24h。 • ②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增 稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释 液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板， 每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。 用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃） 恒温箱中培养24h。之后分别对3个平板上生长的 周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。转接入血平 板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。
金黄色葡萄球菌
葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小 板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使 血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核 酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎 的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。
比如：美国3M公司生产的金黄色葡萄球菌快速检测试片， 可以直接计数产生耐热核酸酶的金黄色葡萄球菌，操作简单， 缩短了时间。
金黄色葡萄球菌污染的控制
防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进 行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上 呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要 暂时停止其工作或调换岗位。 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定 期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出 后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品 要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病 变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介
对分型进行简单的了解 １、血清学分型： 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 多糖抗原有特异性。 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴 性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 ２、噬菌体分型： ３、根据肠毒素分型： ４、根据血浆凝固酶分型：
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
1.形态与染色
形态：呈球形或椭圆形
大小：较大
染色性：革兰染色通常是G+
排列：典型的葡萄球菌排列呈葡萄串状
特殊结构:无鞭毛，无芽胞，少数有荚膜
2.培养特性
营养要求不高
菌落可出现金黄色、白色或柠檬色等色素。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，血琼脂平板上，菌落周围形成明显的全透明溶血环（ 溶血）。
在肉汤培养基中，呈现均匀混浊生长。
3.生化反应
能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。
触酶阳性。
(触酶实验。
触酶又称为过氧化氢酶，催化H2O2分解为H2O与O2。
)
致病菌株能分解甘露醇。
4.抗原
葡萄球菌A蛋白
荚膜多糖
多糖抗原
5.三种葡萄球菌的主要性状比较
6.抵抗力
葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强，耐盐性强。
对龙胆紫、青霉素敏感。
由于广泛应用抗生素，耐药菌株增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)成为医院内感染最常见的致病菌。
致病物质
酶：凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ)、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等
其他：粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖、SPA等
（1）凝固酶（coagulase）
使加有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的耐热酶，可作为鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。
凝固酶的作用：
保护作用：抵抗吞噬细胞的吞噬。
保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏。
使感染病灶具有局限化、脓汁粘稠和形成血栓等病理特性。
具有免疫原性。
金黄色葡萄球菌-综述
金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。
[简介]金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。
其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。
金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。
当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。
而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。
这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。
新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
[流行病学]金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach)
• 3、生化特性： • 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基 红反应阳性，VP反应弱阳性。金黄色葡萄球菌在厌氧条件 下分解甘露醇产酸，非致病性菌则无此现象。 • 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明 胶。 • 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性 低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
血浆凝固酶试验
血平板 Baird-Parker 平板
36℃±1℃ 培养18h～24h。
接种到5mLBHI 和营养琼脂小斜 面 挑取可疑菌落 加入BHI培养 新鲜配置兔血浆0.5 mL 物 如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈 0.2mL～ 现凝块）或凝固体积大于原体积的一半， 置36℃±1℃温箱或水浴箱内， 0.3mL 被判定为阳性结果。 每半小时观察一次，观察6h 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球 菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜 品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝 面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃ 固酶试验。 培养18h～48h，重复试验。
速冻食品新国标：可限量有金黄色葡萄球菌
• 对速冻食品中金黄色葡萄球菌超标的争论有了明确答案。前日，卫生部发出 通知，今年12月21日起，新国标将正式实施，这意味着，速冻食品中，金黄 色葡萄球菌将由不得检出变为限量检出。 此前，三全、思念、湾仔码头等国内知名速冻食品品牌产品，纷纷被检出金 黄色葡萄球菌超标，而有品牌公开表示，现行国标，金黄色葡萄球菌是不得 检出的，但是当时正在征求意见的新国标里，则可限量检出，如果按照新国 标，则产品合格。 而卫生部前日的通知，也明确，食品安全国家标准《速冻面米制品》 (GB19295-2011)，将于2011年12月21日起正式施行。卫生部表示，新标准根 据致病菌风险评估结果，调整了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的限量规定，使 其更具科学性和合理性。 据悉，新国标适用范围包括了饺子、馄饨、包子、粽子、汤圆等速冻预包装 食品。卫生部有关负责人说，在2011年12月21日前，鼓励企业按照新标准组 织生产经营。自2011年12月21日起，企业必须按照新标准组织生产经营。
金黄色葡萄球菌课件
耐药性机制研究
分析金黄色葡萄球菌对抗生素的耐 药性机制，包括产生抗生素酶、改 变药物靶点等，为耐药菌株的治疗 提供指导。
疫苗研究进展
减毒疫苗
DNA疫苗
通过基因工程技术将金黄色葡萄球菌 的毒性基因敲除或降低，制备减毒疫 苗，以激发机体产生免疫应答。
分布与传播途径
总结词
金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界和动物体表，可通过直接接触、食物和水等多种途径 传播。
详细描述
金黄色葡萄球菌可在土壤、水、食物和人体皮肤等表面存活，并可通过直接接触、食物 和水等多种途径传播。在食品加工过程中，金黄色葡萄球菌可污染各种食品，如肉类、 乳制品、蛋类等，导致食物中毒事件的发生。此外，医院内的医疗器械和患者接触的物
治疗药物。
抗菌肽
利用天然存在的抗菌肽或人工合 成的抗菌肽，研究其对金黄色葡 萄球菌的抗菌作用，为临床治疗
提供新的选择。
免疫治疗
通过调节机体的免疫应答，增强 机体对金黄色葡萄球菌的抵抗力
，以达到治疗目的。
06
金黄色葡萄球菌的案例分析
爆发案例介绍
案例背景
介绍金黄色葡萄球菌爆发 案例的发生背景，包括时 间、地点、涉及人群等。
预防措施
分析预防金黄色葡萄球菌感染的有效措施，如加 强个人卫生、食品卫生管理等。
案例启示与建议
提高认识
强调认识金黄色葡萄球菌危害性的重要性，提高公众对食品安全 和卫生的关注度。
加强监管
提出政府和相关部门应加强对食品生产和销售环节的监管，确保食 品安全。
个人防护
提供预防金黄色葡萄球菌感染的个人防护措施，如勤洗手、避免食 用不洁食品等。
实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性，球形，直径1μm ，呈葡萄串样排列。
圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，直径2mm 左右。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血平板生长后，在菌落周围可见β溶血。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌是院内感染的常
见细菌之一。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 简称金葡菌)是人类最常见的致病菌之一，其侵袭力很强，能产生多种致病物质如：肠毒素、凝固酶等；可引起化脓性炎症、毒素性疾病及葡萄球菌性肠炎。
金葡菌所引起的中毒事件已成为世界性的公共卫生问题，我国每年由金葡菌引起的食物中毒事件屡有报道。
金黄色葡萄球菌测试片(FilmplateTM Staphylococcus aureus BT206) 含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序。
本产品适用于各类生、熟食制品，饮料，糕点类，调味品，奶制品等的快速检测。
执行标准：国家标准食品微生物检验黄色葡萄球菌检验（GB 4789.10）。
金黄色葡萄球菌的检验操作方法:1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸盐缓冲液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，调节样品匀液pH至6.0～8.0。
用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，每次换一支吸管。
2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，将金黄色葡萄球菌测试片（BT206）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片。
做一片空白阴性对照。
3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
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金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。
目录
简介
流行病学
引发病症
球菌检验
球菌控制
感染处理
限量存在
简介
金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。
其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。
金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。
当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。
而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。
这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。
新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死
b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。
葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关
d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌
e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、C3、D、E及F八种血清型。
肠毒素可耐受100°C 煮沸30分钟而不被破坏。
它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。
此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
引发病症
金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。
金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。
呕吐常在发热前出现，发热很高。
轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频数，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。
粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。
体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。
挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。
大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。
球菌检验
第一，金黄色葡萄球菌的检验
样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。
增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C 培养24小时。
分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。
金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。
在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。
染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5~1μm。
血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。
同时做阴阳性对照。
url]耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C 培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。
球菌控制
第一，防止金黄色葡萄球菌污染食品
防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
第二，防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
第三，杀死金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌对热和干燥的抵抗力较一般无芽胞细菌强，加热到73.9℃时瞬间即可被杀死。
在干燥的脓汁、痰液中可存活2～3月。
5%石炭酸中10～15分钟死亡。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。
治疗事项
1、毛囊炎治疗要注意饮食，不要吃辛辣刺激性食物，不能喝酒。
2、不可用手搔抓患处，以防继发感染。
3、待症状完全消失以后，巩固1个疗程。
限量存在
卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》（GB19295－2011）。
在近期几大速冻品牌食品因检出金黄色葡萄球菌而下架的背景下，因有条件允许金葡菌限量存在，新国标引来议论纷纷。
卫生部专家称，新国标更加科学合理，并没有降低要求。
这个新国标是根据《食品安全法》及其实施条例规定，由卫生部在原《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）实施基础上组织制定的，将于2011年12月21日起正式施行。
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