水相合成荧光纳米晶与碱性蛋白酶的偶联及纯化
双水相萃取法提取发酵液中碱性蛋白酶的研究
双水相萃取法提取发酵液中碱性蛋白酶的研究
作者：刘天一李长森张浩东宋翔枫徐璐张晓宇
来源：《世界家苑·学术》2017年第06期
摘要：目的采用双水相萃取法提取高产菌株SD发酵液中碱性蛋白酶，考察相关条件对萃取的影响，并对该法提取发酵液中碱性蛋白酶的工艺条件进行探索。
方法碱性蛋白酶高产菌株SD8液体发酵培养，采用高聚物聚乙二醇（PEG）-硫酸铵体系进行双水相萃取。
整个过程包括单因素试验、正交试验和酶的浓缩提纯试验三个部分，考察了PEG分子量，PEG浓度，硫酸铵浓度以及pH对萃取的影响；进一步采用正交试验，探索最佳萃取条件及不同因素之间的相互影响；对获得的提取物采用超滤的手段进行浓缩和纯化，去除PEG并测定浓缩液的酶活及回收率。
结论单因素实验确定选择PEG1500，其他因素以PEG浓度2096，硫酸铵10%饱和度，pH 7 5，碱性蛋白酶的提取效果较好；正交试验结果表明以上因素的影响主次顺序为体系pH值、PEG浓度和硫酸铵浓度；纯化实验显示，超滤去除聚乙二醇的方法可行，纯化效果较好。
本试验的成果对于碱性蛋白酶的生产以及科学研究有着一定的借鉴意义。
关键词：双水相萃取法；碱性蛋白酶；分配系数；活性回收率。
荧光量子点的水相合成及其在化学和生物分析中的应用
荧光量子点的水相合成及其在化学和生物分析中的应用近年来，荧光量子点（Quantum Dots（QDs））在很多领域受到了广泛关注，例如，它们可以被用作有机分子检测器、光学元件和专门的病原体检测器。
因此，获得均匀分布的、优质量子点以满足以上需求，已经成为研究的热点话题。
其中，水相法的量子点合成具有优质的稳定性，简便易行，以及可以控制量子点尺寸和表面状态等优点，因而在材料合成、功能定制和应用研究中受到广泛关注。
荧光量子点本质上是硅、锗、铟等族元素的固体微晶体，它们的结构可以用一个简单的模型来描述，即贵金属核心由一层或多层的轻稀土金属外层环绕形成。
水相法是一种廉价、安全、环境友好的合成方法，它通过将量子点合成前驱体分子，借助氧化还原反应和析构离子交换反应等技术，来精确地控制量子点的表面状态，调整量子点尺寸和形貌形成。
由于水相合成量子点具有优异的稳定性和可控性，它们可以用于众多领域。
第一，在化学领域，量子点可以用作氧化物的尺寸分离，从而更好地控制催化反应；第二，在生物领域，量子点具有优异的光学性能，可以有效改变生物体表面，用于生物分子解析和定位；第三，在材料领域，量子点可以用于多种应用，如太阳能电池、荧光共振能量转换器和传感器等。
水相法量子点合成具有诸多优点，但也存在一些局限性，如控制复杂表面上组分的组合配置和控制量子点尺寸等。
如何通过水相合成量子点，更好地提高量子点的性能，在研究量子点性能的提高、功能的定制、以及量子点用于化学、材料和生物领域的众多应用中，仍有待于进一步研究。
总之，水相法量子点合成是一种廉价、安全、简单、可控的合成方法，可以控制量子点的表面状态、尺寸和形貌，极大地提高其稳定性和可控性，有助于量子点在化学和生物领域的分析应用。
从而，水相法量子点合成有望成为材料合成、功能性定制和应用研究的重要工具。
荧光量子点的水相合成及其在化学和生物分析中的应用
关键词
量子点 ；水溶性 ； 成方法 ； 光 ； 合 荧 生物 应用
０ ５ ６７ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０ ５ －７０ ２ １ １—９ ５１ ２ １ ９ （ ００）０ １０ —１ ０
中图分类号
荧光 量子 点 （ 又称 为半 导体 纳 米 晶体 ） 由 Ⅱ． 是 Ⅵ族 及 Ⅲ一 Ｖ族 元 素组 成 的纳米 颗 粒 ，由于 其 具有 优 异 的光学 性能 ，已 引起 了科 学界 的广 泛兴 趣 “ ．量子 点 的尺寸 大 约为 １～１ ｍ， 尺 寸和 形 貌可 以 ０ｎ 其 通过 反应 时 间 、 温度 和配 体 的选择 等 来精 确控 制 ．当量 子 点 的尺 寸 小 于它 的波 尔半 径 时 ，其 连续 能 级 开始 分离 ， 离 能级 的大 小最 终 由其 粒径 的尺 寸 决定 ．随着 量 子 点 尺 寸 的变 小 ， 能 隙 相 应增 加 ，将 分 其 导致 其发 射峰 位置 蓝移 ．基 于这种 量 子 限域效 应 ， 称 它为 “ 子点 ” 故 量 ．
与传 统 的有 机 荧光 染料 相 比 ， 子点具 有 尺 寸可 调 、发射 光 谱 窄 而对 称 以及 斯 托 克位 移较 大等 特 量 点 ］ ．这些 光学 特性 使 之能 够通 过选 择合 适 的激 发波 长来 减少 激 发 光 与荧 光 信号 之 间 的 串扰 ， 现 单 实
一
波长 光 源激发 下 目标 分子 的 量子 点多 色标 记 和 同时检 测 ．同时 ，量子 点 具 有较 高 的摩 尔 消光 系数 和
等 领 域 中具有 广 泛 的应
荧 光量 子产 率 以及极 好 的耐 光漂 白性 能 ，因此 在细 胞 内生 物分 子 单 颗粒 跟 踪 等方 面具 有 明显优 势 ．此
碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究
碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究碱性蛋白酶(alkaline protease)是一类最适pH为碱性的蛋白酶,是一种非常重要的水解酶类,在医药、饲料、食品等领域中都有广泛应用。
本论文以Cellulomonas bogoriensis sp.nov为出发菌株,对其产酶条件、碱性蛋白酶的分离纯化及酶学性质等方面进行了研究,并得到以下结论:利用单因素法和响应面Box-Behnken组合设计方法对菌株产碱性蛋白酶的发酵条件进行了优化,得出菌株最佳产酶条件为:培养温度30℃,培养基初始pH 10.5,装液量75/250 mL,1.5%(w/v)蔗糖为碳源、1.5%(w/v)的牛肉膏酵母浸粉(1:1)为混合氮源、NaCl 含量为2.67%(w/v),培养时间120 h。
经硫酸铵分级沉淀和CM Sepharose Fast Flow柱层析纯化得到一个相对分子质量约为18.3 kDa的碱性蛋白酶,纯化倍数为10.83,回收率为25.79%。
酶的最适反应温度70℃,最适pH为11.0。
在4-60℃、pH3.0-12.0范围内酶活力稳定;1 mM的Mg2+、Fe2+会增加蛋白酶活力;而1 mM的Ba2+、Mn2+、Ca2+对蛋白酶活力几乎没有影响,但在10mM时会明显抑制蛋白酶的活力。
EDTA浓度为10m M时,碱性蛋白酶的酶活力仍能达到77%。
抑制剂PMSF,TPCK对酶有强烈的抑制作用,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶家族中的胰凝乳蛋白酶。
酶对甲醇、乙醇、甘油等有机溶剂具有较强的耐受能力,Triton X-100强烈抑制酶活力。
该蛋白酶最佳作用底物为酪蛋白,可以水解血红蛋白和牛血清白蛋白,不能水解明胶和胶原蛋白,米氏常数Km为19.2μg/mL,Vmax为2000μg/min。
该蛋白酶与市售的洗涤剂均有良好的相容性,具有良好的脱毛效果、处理血污的能力和耐盐性。
测定了该酶的N端序列,为FDVIGGNAYT。
本论文纯化的碱性蛋白酶具有耐碱性、耐高温、耐盐及耐有机溶剂等优良的特性,在皮革、洗涤等工业生产中具有应用前景。
量子点的水相合成及表征
ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅｄ ｉｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ｈｉ曲－ｑｕａｌｉｔｙ
ｅｍｉｓｓｉｏｎ ＱＤｓ ａｒｅ ｂｒｏａｄ ａｎｄ ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ
ｓｐｅｃｔｒａ ａｒｅ ｎａｒｒｏｗ ａｎｄ ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ，
Ｄｉｓｃｕｓｉｏｎ １．Ａｔ ａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｍｅｒｃａｐｔｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｑｕａｎｔｕｍ ｄｏｔｓ ＣｄＳｅ／Ｓｉ０２，ｕｎｉｆｏｒｍ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ，ａｒｅ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ，ｗｉｔｌｌ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｃｋａｇｅ ＷａＳ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅｓ，ｃｈａｎｇｅ ｓｉｚｅ，ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒａ ａｌｓｏ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｉｍｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏａｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｕｍ ｄｏｔ ｓｉｚｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｎｅｒ． ２．Ｉｎ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｍｅｒｃａｐｔｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ
ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｌｉｇａｎｄｓ ｗｉｔｈ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｃａｐｐｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｂｕｔ ｆｏｒ ｔｈｅｓｅ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＱＤｓ ｗｅｒｅ
荧光有机小分子纳米材料的合成及其应用_龚洁
第25卷第11期2013年11月化学进展PＲOGＲESS IN CHEMISTＲYVol．25No．11Nov．，2013收稿：2013年2月，收修改稿：2013年3月*国家重点基础研究发展计划（973）项目（No．2009CB930600，2012CB723402）、国家自然科学基金项目（No．21222404，51173080，21104033，21105050）、教育部新世纪优秀人才项目（No．NCET-10-0179）、高等学校博士点专项科研基金项目（No．20093223110003，20113223120004）和江苏省高校自然科学基金项目（11KJB150011）资助＊＊Corresponding authore-mail ：iamqlfan@njupt．edu．cn ；wei-huang@njupt．edu．cn ；iamqmshen@njupt．edu．cn荧光有机小分子纳米材料的合成及其应用*龚洁沈清明＊＊范曲立＊＊黄维＊＊（南京邮电大学信息材料与纳米技术研究院有机电子与信息显示国家重点实验室培育基地南京210023）摘要由于荧光有机小分子纳米材料在有机电子和生物传感方面具有良好的潜在应用，已逐渐成为有机纳米材料研究的一个热点。
本文综述了荧光有机小分子纳米材料的最新研究进展，重点介绍了制备荧光有机小分子纳米材料的多种合成方法，这些方法主要包括再沉淀法、离子缔合法、自组装法、微乳液法、激光烧蚀法、吸附剂辅助物理气相沉积法。
本文简要概括了这几种合成方法的优缺点，另外还比较了不同合成方法所制备材料的光电物理性质，并对其在有机光电器件、化学生物传感和生物成像等领域的应用进行了阐述。
关键词荧光有机小分子纳米材料光电材料中图分类号：O641.3；TB322文献标识码：A 文章编号：1005-281X （2013）11-1928-14Fluorescent Organic Small Molecular NanomaterialsGong JieShen Qingming ＊＊Fan Quli ＊＊Huang Wei ＊＊（Key Lab of Organic Electronics ＆Information Displays ，Institute of Advanced Materials ，Nanjing University of Posts and Telecommunications ，Nanjing 210023，China ）AbstractFluorescent organic small molecular nanomaterials ，due to their excellence performance in organicelectronics and biological sensing ，have attracted more and more attention in the fields of chemistry ，materials ，biology ，and so on．In the past years ，significant advances in both the experimental and theoretical fronts have been made for the nanomaterials and nanotechnology．However ，compared with fluorescent inorganic quantum dots or polymer nanoparticles ，fluorescent organic nanoparticles （FONs ）which based on π-conjugated systems ，arebecoming more and more important to bio-imaging ，drug carriers and optoelectronic ，since the wider variability and flexibility in materials synthesis and nanoparticles preparation of organic molecules．This paper systematically introduces the recent research developments of the design ，synthesis ，photophysical properties and application of fluorescent organic small molecular nanomaterials．The highlights of this paper are the preparation methods of fluorescent organic small molecular nanomaterials ，such as reprecipitation method ，ion association method ，self-assembly method ，micro-emulsion method ，laser fabrication method ，adsorbent assisted physical vapor deposition method．We briefly conclude the advantages and disadvantages of the above-mentioned synthetic methods．In addition ，we also compare the properties of the fluorescent organic small molecular nanomaterials synthesized by different method ，and give a brief introduction to their application on organic optoelectronic devices ，chemical and biological sensing ，bio-imaging and other fields．Key wordsfluorescence ；organic small molecular ；nanomaterials ；optoelectronic materials第11期龚洁等荧光有机小分子纳米材料的合成及其应用·1929·Contents1Introduction2Preparation methods of fluorescent organic small molecular nanomaterials2.1Ｒeprecipitation method2.2Ion association method2.3Self-assembly method2.4Micro-emulsion method2.5Laser fabrication method2.6Adsorbent assisted physical vapor depositionmethod3Conclusions and outlook1引言近年来，有机纳米材料的研究受到越来越多的关注，其中以聚苯乙烯纳米球及高度有序的二维、三维自组装结构的构建及其光子晶体应用［1，2］和DNA 分子自组装以及器件化［3，4］为代表的有机纳米材料研究得到了蓬勃的发展。
金纳米颗粒的水相法合成及荧光性能
共 振瑞利 散射 ， 也称共 振散 射 ， 是一 种新 的 、 简便 、 灵敏 和选择性 高的分析 技术 ， 已用 于某些 并
痕量无机和有机物的检测． 用同步散射光谱法研究液相中的无机纳米颗粒 的光谱 ， 发现 固液界面存在
共振 吸收和共振 散射 现 象 ，并获 得 了水 相 中 的金 、银 、 、氧 化 铁 和 硫 化 镉 等 纳 米 颗粒 的 共 振散 射 硒 峰 』 中 ， ．其 液相 中的半 导体 纳米颗粒 的荧 光性 能研究 已成 为化学领 域 中研究热 点之 一．Ｒ ｓｅｉ ｏｓｔ 等 ｔ
进行 系统 研究 ， 现其不 仅具有 较强 的共振 散射 现象 ， 发 而且具 有较 强荧光 效应 和非 常高 的量 子产 率．
１ 实验 部分
１ １ 试剂 与仪器 ．
Ｇ ．一Ｏ Ｃ Ｐ ＭＡ 树形 分子 ， 验室 自制 ， ４５Ｃ Ｏ Ｈ Ａ Ｍ 实 使用前 用截 留分子 量为 ３０ ０ ０的透 析袋 透析 ；乙醇
Ｎ ． ｏ８
吕秉峰 等 ： 金纳米颗粒的水相法合成及 荧光性 能
中， 再往 烧瓶 中滴 加一定 量浓度 为 ０ ０ ｏ Ｌ的 Ｎ Ａ Ｃ ． ｉｍ ｌ ／ ａ ｕ １ 水溶 液 ， 蒸馏水 使 反应物 总体积 为 ３ ， 加 ０ｍＬ
避 光通 氮气 ， 置于磁 力搅拌 器上搅 拌 反应 ２ （ 此过程 保证 Ｐ ＭＡ ４ｈ 在 Ａ Ｍ树 形分 子 的浓 度一致 ， 通过 改变 Ｎ Ａ Ｃ 的加入量 来实 现不 同的 Ａ ¨ 与 Ｐ Ｍ Ｍ 树 形 分 子 的摩 尔 配 比 ） ａｕ１ ｕ Ａ Ａ ．然 后 加 人 ３０ｔ ０ Ｌ的无 水 乙 ｘ
Ｖｏ ． １３１ ２１ ００年 ８月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩ ＣＡＬ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩ ＮＥＳ Ｅ ＵＮＩ ＶＥＲＳ Ｔ Ｅ ＩＩＳ
一种检测碱性磷酸酶的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备及其应用[发明专利]
![一种检测碱性磷酸酶的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7ae0def5b04e852458fb770bf78a6529647d3505.png)
专利名称：一种检测碱性磷酸酶的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备及其应用
专利类型：发明专利
发明人：陈兴国,马素黛,陈永雷
申请号：CN201810092920.9
申请日：20180131
公开号：CN108410449B
公开日：
20220311
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测碱性磷酸酶的硅纳米颗粒的制备及其应用，具体制备方法包括将
N‑[3‑(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(DAMO)在搅拌下加入水中,随后分别加入对苯二酚、间苯二酚和邻苯二酚，并在室温常压下搅拌，即可获得黄色荧光硅纳米颗粒(yellow‑SiNPs)、蓝色荧光硅纳米颗粒(blue‑SiNPs)以及橘色荧光硅纳米颗粒(orange‑SiNPs)。
制备得到的水溶性橘色荧光硅纳米颗粒能够用于高选择性灵敏检测碱性磷酸酶(ALP)。
申请人：兰州大学
地址：730000 甘肃省兰州市城关区天水南路222号
国籍：CN
代理机构：北京轻创知识产权代理有限公司
代理人：谈杰
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纳米荧光素酶的表达、纯化及性质鉴定
纳米荧光素酶的表达、纯化及性质鉴定侯家鹏;丁澦【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2017(032)002【摘要】由荧光素酶(luciferase)催化的一大类发光反应被统称为生物发光(bioluminescence),该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点,是高灵敏检测的发展方向之一.课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶(nano luciferase),研究清楚了其理化性质的基础上,将其作为一种新型的生物发光检测工具.将荧光素酶基因克隆至原核高表达载体上,通过自动诱导系统进行了表达.通过Ni-NTA亲和层析纯化和分子筛将重组纳米荧光素酶进行纯化,其产量可稳定达到每升菌25.3 mg,纯度超过98％;通过酶活实验鉴定了纳米荧光素酶的活性,在1.0×10-4 ～1.0 ×10-7 mg/mL的范围内,该酶均具有良好的线性反应,其线性检测下限低至1.0 ×10-7 mg/mL(约5pmol).纳米荧光素酶具有灵敏度高、数据重复性好、操作简便、稳定性高、易于保存等多重优点,可利用其作为基础平台,开发具有应用前景的超灵敏新型生物发光探针.【总页数】6页(P191-196)【作者】侯家鹏;丁澦【作者单位】复旦大学生命科学学院,上海200438;复旦大学生命科学学院,上海200438【正文语种】中文【中图分类】Q617【相关文献】1.重组人精氨酸酶1的表达、纯化及性质鉴定 [J], 李益鹏;丁澦2.重组人血红素加氧酶2的表达、纯化及性质鉴定 [J], 周传文;李益鹏;丁澦3.人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定 [J], 乔佳明;张芝晴;张振勇;李少伟;夏宁邵;顾颖4.重组人白细胞介素-7原核表达、纯化与理化性质鉴定 [J], 何生美5.荧光素酶基因的克隆表达及其产物纯化和鉴定 [J], 唐晨辉;庄美宝;徐帆;王章;龙綮新;庞义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水相合成CdS纳米晶标记牛血清白蛋白
水相合成CdS纳米晶标记牛血清白蛋白
徐力;郭轶;解仁国;庄家骐;王连英;杨文胜;李铁津
【期刊名称】《功能材料与器件学报》
【年(卷),期】2003(9)2
【摘要】利用水相中直接合成的CdS纳米晶,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶连标记。
通过分子筛层析对标记后的牛血清白蛋白进行纯化,在紫外灯下即可观察到标记蛋
白的荧光。
对CdS纳米晶标记后的牛血清白蛋白的荧光光谱的研究表明,标记蛋白后的CdS纳米晶其荧光无明显淬灭。
【总页数】4页(P201-204)
【关键词】牛血清白蛋白;偶连标记;水相合成;CdS纳米晶;量子点
【作者】徐力;郭轶;解仁国;庄家骐;王连英;杨文胜;李铁津
【作者单位】吉林大学化学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q512.1;TN304.25
【相关文献】
1.用于微生物体标记的CdTe半导体纳米晶超声波水相合成 [J], 刘岩;周建光;沈启慧;于东冬;金丽;范宏亮;金钦汉
2.水溶性CdSe/CdS核壳纳米晶与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 林成芳;黄风华;
蓝亚玲;程陈;王锐环
3.低温固相合成形貌和晶相可控的CdS纳米晶 [J], 王文忠;谭琳
4.CoFe2O4纳米晶与牛血清白蛋白和牛血红蛋白的相互作用:吸附、纳米晶的团聚及蛋白构象的变化 [J], 李强;姬晓旭;张凯;黄新堂;熊丽
5.介观结构SiO2/CdO纳米复合物为前驱体原位水热合成半导体CdSe和CdS纳米晶 [J], 杨海峰;闫妍;张福强;陈颖;屠波;赵东元
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利用水相合成的量子点标记木瓜蛋白酶的研究
利用水相合成的量子点标记木瓜蛋白酶的研究林章碧;张皓;陈奇丹;万异;杨柏;苏星光;张家骅;金钦汉【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2003(024)004【摘要】@@ 利用半导体纳米粒子(也称半导体量子点, Quantum Dots, 以下简称QDs)和表面修饰技术制备的半导体荧光探针具有极其优良的光谱特征和光化学稳定性[1]. 自1997年以来, 随着量子点制备技术的不断提高, 量子点在生物医学方面已有应用. 1998年, Alivisatos[1]和Nie[2]两个研究小组分别将结合了生物分子的QDs作为荧光探针应用于生物体系, 开创了纳米粒子应用的新领域. 最近Nie等[3]在利用量子点编码生物分子的研究中取得了突破性进展. 目前, 纳米粒子与生物分子的连接以共价键方式相结合最为常见[1,2,4,5], 而且在这些应用中所使用的QDs大都是在有机溶剂中制备的, 其制备条件比较苛刻, 成本较高, 这给进一步推广应用带来了一定的困难.【总页数】3页(P609-611)【作者】林章碧;张皓;陈奇丹;万异;杨柏;苏星光;张家骅;金钦汉【作者单位】吉林大学,化学学院分析科学研究所,长春,130023;吉林大学,超分子结构与材料教育部重点实验室,长春,130023;吉林大学,化学学院分析科学研究所,长春,130023;吉林大学,化学学院分析科学研究所,长春,130023;吉林大学,超分子结构与材料教育部重点实验室,长春,130023;吉林大学,化学学院分析科学研究所,长春,130023;中国科学院激发态物理开放实验室,长春,130021;中国科学院激发态物理开放实验室,长春,130021;吉林大学,化学学院分析科学研究所,长春,130023【正文语种】中文【中图分类】O657.31【相关文献】1.水相合成CdSe量子点用于荧光标记的光谱研究 [J], 杨琴2.CdTe/CdS/ZnS量子点的水相合成及光学特性研究 [J], 贾国治;郭静;费学宁;李强;韦方兴;侯苏轩3.水相合成CdTe量子点标记亲和素前后光谱变化的研究 [J], 万异;林章碧;陈奇丹;张皓;杨柏;苏星光;金钦汉4.CdTe／CdS／ZnS量子点的水相合成及光学特性研究 [J], 贾国治;郭静;费学宁;李强;韦方兴;侯苏轩;5.ZnSe量子点水相合成过程的原位研究 [J], 宋晋湘;刘敏;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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许 多基 本 生命科 学 过程 的监 测都 依赖 于快 速 、 敏 感 的生 物分 子 相 互作 用 ．荧 光 标记 可 提 供纳 米 级 分 辨率 和高 灵 敏度 的单 分子 水平 检 测 Ｉ ２ Ｊ ．传 统 的标 记 方式 通 过 表 达荧 光 蛋 白获得 较 好 的 分辨 率 ，但 其 光学 稳 定性 较差 ，易受 环境 因素 影 响而 改 变 检测 分 辨 率 并 降低 灵 敏 度 ＿ ３ ． ４ Ｊ ．荧 光纳 米 晶具有 稳 定 性 强、 灵 敏度 高 和与 尺 寸相关 的发光 特性 ，已广 泛用 于生 物荧 光标 记 领域 ’ 。 ．生物 荧光 标记 的应 用需 在 水 相 中进行 ， 某些 荧 光纳 米 晶的水 溶性 尽 管可 以通 过表 面配 体 替换 来 实 现 ， 但 存在 配 体 交换 导致 的发 光 性 能 降低和 溶胶 性质 不稳 定 问题 【 ．Ｃ ｄ Ｔ ｅ 荧 光纳 米 晶可方 便地 在水 溶 液 中合 成 ， 通 过选 择 不 同 的 巯 基 配体 可获 得表 面带 不 同功 能 团 的纳 米 晶 ， 从 而 实现 纳米 晶的表面 功能 化 “ Ｊ ．酶 作 为一 类 重要 的 生 物 功能 分子 ，其生 命过 程 中的相 互 作 用 可 采用 荧 光 标 记 法 检测 ＿ １ ．荧 光 纳 米 晶 与 酶分 子 的标 记
摘要
利用水 相中合成的巯基丙酸包覆 的 Ｃ ｄ Ｔ ｅ荧光纳米 晶与碱性 蛋 白酶 （ Ａ ｌ ｃ ａ ｌ ａ ｓ ｅ ） 进行偶 联标记 ．荧 光光
谱分析表 明 ， Ｃ ｄ Ｔ ｅ 纳米 晶体具有较 窄的粒度分布和较 高的光稳定性 ， 室 温下 ３ ０ ｄ时荧光强 度降低 ８ ． ３ ６ ％．
水 相 合 成 荧 光 纳 米 晶 与 碱 性 蛋 白 酶 的 偶 联 及 纯 化
祝金 明 ， 孙 卓 ， 付 瑶 ， 郭 轶 ， 徐 力
（ １ ．吉林大学生命科学学 院分 子酶学工程教育部重点实验室 ， 长春 １ ３ ０ ０ １ ２； ２ ．吉林大学 中 日联 谊医院 ，长春 １ ３ ０ ０ ３ ３ ）
基丙 酸 （ ＭＰ Ａ， 纯度 ＞ １９ ９ ． ０ ％） 、１ ． （ ３ ． 二 甲氨基 丙基 ） － ３ － 乙基 碳 二 亚胺 盐 酸盐 （ Ｅ Ｄ Ｃ，纯度 ≥９ ８ ． ０ ％） 和
Ⅳ － 羟 基琥 珀 酰亚 胺磺 酸钠 盐 （ Ｎ Ｈ Ｓ Ｓ ， 纯度 ｔ ＞９ ８ ． Ｏ ％） 均购 自 Ａ ｌ ｄ ｒ ｉ ｃ ｈ － Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ公 司 ； Ａ ｌ ｃ ａ ｌ ａ ｓ ｅ 购 自诺 和诺 德 中国制药 有 限 公 司 （ 使用 前 纯 化 ，酶 活 力 为 １ ６ ８ ． ４ ６ Ｕ ／ Ｉ ｘ ｇ ） ；Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ Ｇ 一 １ ０ ０柱 料 购 自 Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｉ ａ Ｆ ｉ ｎ ｅ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ； 其 余试 剂均 为分 析 纯 ；实验 用水 均 为高 纯水 ，电阻率 为 １ ８ ． ２ Ｍｎ ・ ｃ ｍ．
Ｖｏ １ ． ３ ６ ２ ０ １ ５年 ３月
高 等 学 校 化 学 学 报
Ｃ ＨＥＭＩ Ｃ ＡＬ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｃ ＨＩ ＮＥ Ｓ Ｅ ＵＮＩ ＶＥＲＳ Ⅲ ＥＳ
ＮＯ ． ３
５ ｌ １～５１ ５
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ７ ５ ０ ３ ／ ｃ ｊ ｃ ｕ ２ ０ １ ４ ０ ８ ０ ３
透射 电子显微镜结果显示 ，Ｃ ｄ Ｔ ｅ纳米晶 的直径约为 ３ ｎ ｍ； Ｘ射 线衍射结果表明 ，Ｃ ｅ Ｔ ｅ 纳米 晶具有 闪锌矿结 构 ．利用 １ ． （ ３ － 二甲氨基丙基 ） － ３ ． 乙基碳二亚胺盐 酸盐 （ Ｅ Ｄ Ｃ） 和Ⅳ 一 羟 基琥 珀酰亚胺 磺酸钠 盐 （ Ｎ Ｈ Ｓ Ｓ ） 偶 联方 法将 Ｃ ｄ Ｔ ｅ纳米 晶与 Ａ ｌ ｃ ａ ｌ ａ ｓ ｅ 进行偶 联 ， 通过超滤 离心 、凝胶 柱层析及 凝胶 电泳技 术对偶 联后 的 Ｃ ｄ Ｔ ｅ — Ａ ｌ ｃ ａ — ｌ ａ ｓ ｅ 进行分离 和纯化．荧 光光 谱显示偶联产 物具有 很好 的光稳定性 和较 高 的酶活力 （ ６ １ ． ０ ６ Ｕ ／ ｌ ￣ ｇ ） ．在 荧光 显微镜下 可观察到标记蛋 白的荧光 ， 为研究酶反应 的示 踪及 酶的构效关系等提供 了实验基础 ． 关键 词 荧光纳米晶 ；碱性 蛋 白酶 ； 偶联标 记 ； 纯化
物很难分离和纯化 ， 在某种程度上降低 了荧光纳米晶标记生物分子的检测效率¨ ．碱性蛋 白酶（ Ａ ｌ ｃ ａ －
ｌ ａ ｓ ｅ ） 是 一种 内切 酶 ，其催 化 部位 为 丝氨 酸 ， 属 于 丝氨 酸蛋 白酶 ，能水 解 蛋 白质 分子 肽链 生 成 多肽或 氨 基酸 ， 具 有较 强 的分 解蛋 白质 能力 ．对其 荧光 标记 物进 行荧 光 检测分 析 ， 可 以观察 生命 活动 现象 的
胶 电泳技 术进 行 分离 和纯 化 ， 标 记 了碱性 蛋 白酶 ， 并 用荧 光显 微镜 进行 分析 ．
１ 实 验 部 分
． ８ ％） 、硼氢 化钠 （ Ｎ ａ Ｂ Ｈ ， 纯度 Ｉ ＞９ ８ ． Ｏ ％） 、氯化 镉 （ Ｃ ｄ Ｃ １ ， 纯度 Ｉ ＞９ ９ ． ０ ％） 、巯
活性 反应 区域 ，提高 催化 活性 ．本 文 以 Ａ ｌ ｃ ａ ｌ ａ ｓ ｅ为模 型 酶 分 子进 行 荧 光标 记 ．在 水相 中 以巯 基丙 酸 为
稳 定 剂合成 了稳定 发光 的 Ｃ ｄ Ｔ ｅ荧光 纳米 晶 ； 并 将其 与 Ａ ｌ ｃ ａ ｌ ａ ｓ ｅ 偶联 ， 通 过超 滤离 心 、 凝 胶柱 层 析及 凝