脂肪酶测定标准操作程序
脂肪酶活测定
一．脂肪酶活测定原理：脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。
在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。
水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。
酸碱滴定法 :酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。
脂肪酶活力单位＝(A-B)*nf/t*v式中：A为样品耗碱液ml数，B为对照组耗碱液ml数，n为每毫升碱液微克分子数(n=cM=0.05x23x1000)，f为稀释倍数，t为作用时间(分),v:反应的酶液的体积二．挥发性脂肪酸（VFA）的测定滴定法分析1原理：将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。
废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。
4．计算挥发性脂肪酸含量计算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;Vs--------被测废水水样的体积，ml.酶活力定义：40℃,ph为5.6的条件下，每分钟酶解淀粉释放出lmg的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。
1U=1mg还原糖\min.ml酶三．淀粉水解酶活性原理：淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
四.纤维素酶酶活力测定：原理：纤维素酶水解纤维素，产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定的范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法测定其还原糖的量就可测定纤维素酶的活力。
脂肪酶实验方案
脂肪酶实验方案富集培养基( %) :酵母膏0. 02 , Na2HPO4 0.35 , K2HPO4 0. 15 , MgSO4·7H2O 0. 05 , NaCl 0.05 , 橄榄油1. 0 , pH 7. 0.溴甲酚紫筛选平板分离培养基 ( %) : 牛肉膏0. 5 , 蛋白胨1. 0 , NaCl 0. 5 ,葡萄糖0. 3 ,聚乙烯醇1. 0 ,橄榄油2. 5 , 琼脂1. 5 ;灭菌后加入过滤灭菌的溴甲酚紫(50 mg/ 100 mL) 0. 4 mL , pH 6.0 ,7.0 ,8. 0.种子培养基( %) :葡萄糖 2. 0 , (NH4 ) 2SO4 0.5 , K2HPO4 0.1 ,MgSO4·7H2O 0. 05 , 蛋白胨2. 5 ,橄榄油1. 0 , pH 7. 0.发酵培养基( %) :蛋白胨2. 0 , 蔗糖0. 5 , 橄榄油1. 0 , (NH4 ) 2SO4 0. 1 , MgSO4 〃7H2O 0. 05 ,K2HPO4 0. 1 ,pH 自然产脂肪酶菌株的筛选：将细菌接种到种子培养基上，于30 ℃,200 r/ min 摇床培养24 h，划线于溴甲酚紫筛选平板分离培养基上。
观察已生长的菌落周围有无透明圈,有红色水解圈的菌落对应的菌株即为产脂肪酶菌株。
脂肪酶高产菌株的筛选：（1）产脂肪酶菌株发酵培养：将产脂肪酶菌液按 1 %的接种量接入50 mL 发酵培养基中(250 mL 三角瓶) ,30 ℃,200 r/ min 摇床培养48 h；（2）上清液的制备：经6000 rpm/min离心10 min，收集上清液，用0.20 μm滤膜对上清液过滤除菌，滤液分装后-20℃保存待用；（3）(i)度法测定各菌株产酶相对大小：在pH7.5, 30℃条件下, 每分钟释放 1 μmol 对-硝基酚( ρ- nitrophenol) 所需的酶量, 定义为一个活力单位。
酶测定方法
脂肪酶活性测定方法1、粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g，用蒸馏水溶解并定容至100 mL，配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。
2、实验设计本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
3、酸价的测定酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数，它用于衡量油脂的水解程度。
实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价，参照文献[ 3，4 ]中所使用的方法，向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液，摇匀，终止反应，并加入2滴酚酞指示剂，迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色，在30 s内不消失为终点，记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。
用同样的方法测定空白值，每个试验重复两次，以平均值作为测定结果。
酸价按下式计算：X = C (V - V0 ) ×40 /M式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)M —试样的质量( g)40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)4 粗脂肪酶活力的测定在最佳水解条件下，分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 ，根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力，其中U1为粗脂肪酶活力，U为标准脂肪酶活力。
5标准脂肪酶液的配制根据实验最佳条件，配制标准脂肪酶液。
一篇相关文献粗脂肪酶活力的测定方法的研究.pdf答：实验设计，本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
用色拉油作底物不太妥，一般是用橄榄油，化学纯的。
脂肪酶的测定
脂肪酶的测定脂肪酶是一种能够加速脂肪分解的酶类物质，它在人类的体内起着非常重要的作用。
脂肪酶的测定是衡量人体脂肪代谢能力的一种方法，可以用于研究肥胖、代谢疾病等疾病的发病机制。
脂肪酶的测定方法有很多种，其中最常用的是化学法和免疫法。
化学法是利用化学反应测定脂肪酶的活性，它的原理是将样品与一种特定底物反应，通过测定产生的底物或反应产物的浓度，来计算脂肪酶的活性。
常用的底物有三酰甘油、辅酶A等。
免疫法则是利用特异性抗体与脂肪酶结合反应，进行测定。
这种方法具有灵敏度高、特异性好、操作简单等优点。
在进行脂肪酶测定前，需要收集样品。
常用的样品有血浆、血清、尿液等。
对于血浆和血清样品，需要在采集后立即离心分离血清或血浆，避免冷藏时间过长而影响测定结果。
对于尿液样品，需要在采集后立即保存在冰箱中，避免样品在室温下发生酶解反应。
此外，还需要注意样品的质量和数量，以保证测定结果的准确性。
脂肪酶的测定结果可以反映人体脂肪代谢能力的强弱。
正常情况下，脂肪酶的活性处于一定的范围内。
如果脂肪酶活性过高，说明人体脂肪代谢能力较强，有利于减肥和预防肥胖等疾病；反之，如果脂肪酶活性过低，说明人体脂肪代谢能力较弱，容易出现肥胖和代谢性疾病等问题。
需要注意的是，脂肪酶的测定结果并不是唯一的评估指标，还需要结合其他指标如体重、体脂率、血糖、血脂等指标进行综合分析。
此外，脂肪酶的测定结果也受到许多因素的影响，如年龄、性别、饮食、运动等因素都会对脂肪酶活性产生影响，因此需要综合考虑。
脂肪酶的测定是衡量人体脂肪代谢能力的一种方法，它对于研究肥胖和代谢疾病等疾病的发病机制具有重要的意义。
在进行脂肪酶测定时，需要注意样品的采集、处理和测定方法的选择，以保证测定结果的准确性。
脂肪酶测定标准操作规程
血清脂肪酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清脂肪酶(缩写LPS)测定；组合项目申请：胰腺炎检测。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。
2.3.2如果使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
EDTA、草酸盐、氟化钠、枸橼酸对酶有抑制作用。
2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。
3 方法原理采用1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物，OH－脂肪酶1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵)-酯 ----------1,2-邻-二月桂宗甘油 + 戌二酸 + 甲基试卤灵在570nm波长下，根据产物红色的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶的活性。
脂肪酶的检测方法
脂肪酶的检测方法1. 引言脂肪酶是一类能催化脂肪酯的水解反应的酶。
脂肪酶在食品工业、医学领域等具有重要的应用价值。
为了准确、快速地检测脂肪酶的活性和浓度，科学家们开发了多种检测方法。
本文将详细介绍脂肪酶的相关概念以及常用的检测方法，并对其优缺点进行比较分析。
2. 脂肪酶的概述脂肪酶是一种水解酶，主要催化脂肪酯的水解反应，将脂肪酯分解为甘油和脂肪酸。
脂肪酶广泛存在于动植物的组织中，如胃液、胆汁、胰液等。
脂肪酶的作用对于人体的脂肪消化和吸收至关重要，但过高或过低的脂肪酶活性都可能对人体健康产生不良影响。
3. 脂肪酶的检测方法概述常见的脂肪酶检测方法包括传统的酶活性测定法、光谱法、电化学法、电镜法等。
下面将分别介绍这些方法的原理、步骤以及优缺点。
3.1 传统的酶活性测定法•原理：该方法通过测定脂肪酶对底物的水解反应，间接反映脂肪酶的活性。
•步骤：1.准备含有脂肪酶的样品和底物溶液。
2.混合样品和底物溶液，并控制反应条件（温度、pH等）。
3.反应一段时间后停止反应。
4.使用比色法、比浊法等方法来测定反应产物（如甘油）的含量。
•优点：方法简单、成本低廉。
•缺点：测定结果受其他干扰物影响较大，灵敏度相对较低。
3.2 光谱法•原理：该方法利用脂肪酶催化反应过程中底物或产物的光学性质变化来检测脂肪酶活性。
•步骤：1.准备含有脂肪酶的样品和底物溶液。
2.在一定时间内记录底物或产物的光谱变化。
3.分析光谱数据，计算脂肪酶活性。
•优点：结果准确、灵敏度较高。
•缺点：需要专用的光谱仪器，成本相对较高。
3.3 电化学法•原理：该方法利用脂肪酶催化反应过程中产生的电流或电势变化来检测脂肪酶活性。
•步骤：1.在电极表面修饰脂肪酶或底物，并固定在电极上。
2.浸入电解质溶液中，建立电化学检测系统。
3.测量电流或电位的变化，并计算脂肪酶活性。
•优点：结果准确、实时监测。
•缺点：需要专用的电化学仪器，操作复杂。
3.4 电镜法•原理：该方法通过电镜观察样品中脂肪酶的形态和数量来评估脂肪酶活性。
MMFSCNG粮食油料检验脂肪酶活动度测定法
MM_FS_CNG_0391粮食油料检验脂肪酶活动度滴定法MM_FS_CNG_0391粮食、油料检验脂肪酶活动度测定法1.适用范围本标准适用于商品粮食脂肪酶活动度的测定。
2.主要试剂和仪器.主要试剂1％百里香酚酞乙醇溶液；氢氧化钠乙醇溶液；乙醇和乙醚（4∶1）混合液；甲苯；缓冲液：量取1N乙酸溶液250ml和1N乙酸铵溶液25ml，混合后，加水至1000ml；纯油：量取向日葵油（或用纯花生油代替）约250g注入分液漏斗中加2％碱液100～150ml，摇荡后，静置分层，弃去碱液。
用水将油洗至中性，静置后，将油通过氯化钙柱干燥备用。
.仪器锥形瓶：100ml；移液管：5ml；分液漏斗：500ml；低温烘箱；研钵、细口瓶等。
3.过程简述称取试样（带壳油料称子仁）2g倒入研钵中，加入1ml纯油，混匀，加入5ml缓冲液，研磨成稀糊状，转入锥形瓶中，用5ml水洗净研钵。
锥形瓶中加3滴甲苯，用称量皿盖上瓶口，置于30℃烘箱内保温24h。
取出，加入乙醇乙醚混合液50ml，静置5min，加百里香酚酞指示剂，用碱乙醇溶液滴定至终点（浅蓝色），记下用去的碱液毫升数（V1）。
另称取2g试样做对照试验，除不用30℃保温外，其余操作同上，记下用去的碱液毫升数（V2）。
4.结果计算脂肪酶活动度按下列公式计算：脂肪酶活动度（ml碱液／1g试样）＝（V1－V2）·N×1000 W（100－M）式中：V1——试样滴定用去碱液体积，ml；V2——对照试验用去碱液体积，ml；N——实际碱液浓度，N；W——试样重量，g；M——试样水分百分率，％。
双试验结果允许差不超过平均值的10％，取平均值为测定结果。
测定结果取小数点后第一位。
5.来源：GB 5523—85。
脂肪酶、淀粉酶测定方法
脂肪酶测定——采用p-NPP法取0.5g样品，加去离子水10mL，40℃水浴浸泡2h，过滤。
取滤液1mL于试管中，加入pH8.0缓冲液3mL和1mmol/L p-NPP溶液0.1mL 于40℃下精确反应3min，迅速置于冰上终止反应。
在波长405nm处测定吸光度值。
对照管酶液用等体积去离子水代替，其余试剂相同。
Npp标准曲线Y=0.287x+0.0861（y：吸光度x：NPP浓度（umol/L））试剂配制：1mmol/L p-NPP溶液：称取0.0378g pNPP，加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇，用Tris-HCL（pH8.0）定容至100mL。
pH8.0 Tris-HCl：50mL 0.1M tris碱溶液与29.2mL 0.1M HCl溶液混合，加蒸馏水定容至100mL。
淀粉酶测定称取六神曲0.5g，研细，用20mL去离子水40℃浸泡1h，过滤。
取2只250mL的碘瓶，各加入5%的淀粉液25mL，10mL醋酸钠缓冲液（pH4.5），10mL蒸馏水，摇匀，40℃水浴预热5min。
A管中加入滤液5mL，准确反应1h，立即加2mol/L HCl 1mL终止反应，B管中先加入HCl，再加滤液5mL。
2只碘瓶分别加入0.05mol/L碘液10mL，0.1mol/L氢氧化钠45mL，边滴边振摇，暗处放置20min，加入1mol/L 硫酸2mL，用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定至无色。
每份样品测定3次。
记录消耗硫代硫酸钠的体积，计算得淀粉酶活力。
淀粉酶活力是指1g六神曲粉末在一定条件下(T=40℃，pH=5.0)，1h 内催化可溶性淀粉水解生成葡萄糖的毫克数。
计算公式:淀粉酶活力=［c×(vB－vA)·M·N］/2×m·t式中:c为硫代硫酸钠的浓度(mol/L)，M为葡萄糖的摩尔质量(g/mol)，N为酶液稀释倍数，V A为样品滴定值(mL)，VB为空白滴定液(mL)，m为六神曲的取样量(g)，t为反应时间(h)，淀粉酶活力单位为mg/(g·h) 。
脂肪酶的检测方法
脂肪酶的检测方法
脂肪酶是一种重要的酶类物质，它在人体内起着分解脂肪的作用。
脂肪酶的检测方法有多种，下面将介绍其中的几种常见方法。
1. 酶活力测定法
酶活力测定法是一种常见的脂肪酶检测方法。
该方法通过测定脂肪酶对底物的催化作用，来确定脂肪酶的活力。
具体操作步骤为：将待测样品与底物混合，加入适量的缓冲液，然后在一定的温度和时间下反应。
反应结束后，通过测定反应液中的产物浓度或底物消耗量来计算脂肪酶的活力。
2. 免疫学检测法
免疫学检测法是一种基于抗体与抗原相互作用的检测方法。
该方法通过检测脂肪酶在样品中的含量，来确定脂肪酶的水平。
具体操作步骤为：将待测样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
然后加入标记有荧光物质的二抗，使其与复合物结合。
最后通过荧光信号的强度来测定脂肪酶的含量。
3. 基因检测法
基因检测法是一种通过检测脂肪酶基因的变异来确定脂肪酶水平的方法。
该方法通过PCR扩增脂肪酶基因，然后对扩增产物进行测序，检测基因序列中的变异情况。
根据不同的基因变异类型，可以预测脂肪酶的活力水平。
总之，脂肪酶的检测方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据需要选择合适的方法进行检测。
实验十 脂肪含量的测定
实验十脂肪含量的测定实验目的本实验旨在通过测定食物中的脂肪含量，掌握脂肪含量的测定方法，进一步了解食物中的营养成分。
实验原理脂肪含量的测定可以通过酶法或物理测定法进行。
酶法是利用脂肪酶水解脂肪，生成游离脂肪酸，再通过比色法或滴定法测定脂肪酸的含量。
物理测定法包括直接溶解法和摩擦法，通过测量脂肪在特定条件下的熔点或固体脂肪的流动性来估计脂肪含量。
实验材料和仪器- 待测食品样品- 脂肪酶- 乙醚- 红茜试剂- 乙醇- 滴定漏斗、比色皿等实验步骤1. 准备食品样品，并称取适量的样品。
2. 使用酶法：- 将称取的样品置于容量瓶中，加入脂肪酶溶液。
- 加入适量的红茜试剂。
- 装置冷凝管，加入冷水。
- 反应一段时间后，用1%的乙醇滴定量度。
- 计算脂肪含量。
3. 使用物理测定法：- 将样品放入直接溶解法或摩擦法的设备中进行测定。
- 根据所用方法，计算脂肪含量。
结果分析根据实验步骤所获得的测定结果，可以计算出食品中的脂肪含量。
通过比对理论值或参考值，可以评估食品的营养价值或用于质量检测。
实验注意事项- 操作时需注意安全，避免酶溶液和试剂的接触。
- 严格按照实验步骤进行操作，避免误差的产生。
- 实验后要及时清洗仪器和，保持实验场所整洁。
结论本实验通过酶法或物理测定法，成功测定了待测食品中的脂肪含量，并得出相应的结果。
脂肪含量的测定是了解食物成分和进行质量检测的重要手段。
参考文献（如果有引用的参考文献，请列出）。
血清脂肪酶操作程序
血清脂肪酶操作程序1.目的规范血清脂肪酶(LPS)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理比浊法LPS甘油三酯 + 2 H 2O单酸甘油酯+2脂肪酸 在上述反应中，通过在340nm 波长处测定吸光度的下降速率，即可测得样本中LPS 的活力。
5. 标本采集与处理5.1标本类型：标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血清/血浆。
5.2标本稳定性：血清标本在室温下保存可稳定5天，在20-25℃稳定24h 。
6. 试剂6.1试剂：本科使用朗道试剂盒，干粉试剂。
试剂内主要成分如下：规格: 20×2.5ml6．2试剂准备试剂为液体单试剂，缓冲液溶解后即用。
6．3试剂稳定性 原装试剂在2～8℃避光保存，稳定至有效期。
试剂开瓶溶解后2～8℃稳定7天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：朗道试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700朗道试剂系统的校准：8.2.1 准备：朗道配套校准物,3ml蒸馏水溶解.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期,溶解后2～8℃稳定5天.8.2.3保存位置：2号冰箱。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
脂肪酶酶活测定方法
0.05mol/L氢氧化钠按GB/T601配制与标定。
使用时稀释10倍。
10g/LGB/T603配制。
1.5 待测酶液的制备称取酶样品1g~2g，精确至0.0002g，用磷酸缓冲液溶解并稀释。
如果是粉末，可加少量缓冲液研磨再稀释。
测定时控制酶液浓度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL~2mL范围内。
1.6 测定1.6.1 电位滴定法①②取两个100mL烧杯，分别作为空白A和样品B，分别参加底物溶液4mL和缓冲液5mL，再于A中参加95％酒精15.00mL，于40℃±0.2℃水浴中预热5min，然后各加1mL酶液，立即混匀计时，准确反响15min后，于B中立即补加15.00mL95％酒精终止反响，取出。
③在烧杯中参加一转子，置于电磁搅拌器上，边搅拌，边用氢氧化钠标准溶液滴定，至pH10.3，为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。
1.6.2①取两个100mL三角瓶，分别作为空白A和样品B，分别参加底物溶液4mL和缓冲液5mL，再于A中参加95％酒精15.00mL，于40℃±0.2℃水浴中预热5min，然后各加1mL酶液，立即混匀计时，准确反响15min后，于B中立即补加15.00mL 95％酒精终止反响，取出。
②于A、B瓶中各酚酞两滴，用氢氧化钠标准溶液滴定，直至微红色并保持30s不退色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。
1.6.3 计算脂肪酶制剂的酶活力按以下公式计算：式中：X1——样品的酶活力，u/g；V1——滴定样品时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升〔mL〕；V2——滴定空白时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升〔mL〕；c——氢氧化钠标准溶液，单位为摩尔每升〔mol/L〕50——0.05mol/L氢氧化钠溶液1.00mL相当于脂肪酸50μmol；n1——样品的稀释倍数；0.05——氢氧化钠标准溶液浓度换算系数；15——反响时间15min，以1min计算。
脂肪酶(LPS)检测
迪信泰检测平台
脂肪酶（LPS）检测
脂肪酶（Lipase, LPS），又称为甘油酯水解酶，是一类特殊的酯键水解酶，具有对油水界面的亲和力，可催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯），在脂质代谢中发挥重要的作用。
脂肪酶普遍存在于动植物组织及微生物中，脂肪酶活性测定对于脂肪代谢分析具有重要意义，血清中脂肪酶活性测定可用于疾病的诊断。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测脂肪酶活性变化。
此外，我们还提供其他脂肪代谢类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定脂肪酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 脂肪酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
脂肪酶测定SOP_LIP临床意义_检验科生化项目SOP
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1检测原理
当辅助脂肪酶、胆汁盐和氯化钙存在，脂肪酶能催化脂肪酶底物1,2-o-双十二烷基-rac-甘油-3-戊二酸-(6’-甲基试卤灵)酯的水解（反应图示如下）。通过水解生成不稳定的中间产物戊二酸-6’-甲基试卤灵酯。然后中间产物被H2O水解生成游离的甲基试卤灵，在577 nm波长上吸光。用577/700 nm的双波长反应可测定脂肪酶的活性。反应的比率与样本中脂肪酶的含量成正比。
5.2校准条件
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
脂肪酶测定
文件编号：
版本号：
页码：第页共页
Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水
平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。
3.1.1试剂组成
试剂船1~3孔为脂肪酶底物0.24 mM，胆汁盐10 mM，钠盐，钾盐，酒石酸盐缓冲液1.6 mM，片剂；4~6孔为三羟甲基氨基甲烷缓冲液50 mM，氯化钙2.0 mM，辅助脂肪酶2.8 x 105 U/Ld，片剂；7~8孔为NaOH0.53 M，液体。
3.1.2试剂准备
脂肪酶酶活测定方法
附录A(规范性附录)脂肪酶酶活测定方法A.1 原理碱性脂肪酶可将甘油酯（油、脂）水解，在不同阶段可释放出脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯及甘油。
水解生成的脂肪酸，可以用标准的碱溶液滴定，以滴定值表示酶活力。
反应式为：RCOOH+NaOH RCOONa+H2OA.2 适用范围本规定仅适用于脂肪酶对油脂水解活性测定方法。
A.3 用语定义A.3.1 酶活在一定条件下（温度36℃和pH9.4），水解甘油三酯每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量，即为一个国际单位，以u/ml或者u/g表示。
A.3.2 基质被酶水解的物质，又称为底物。
A.4 试剂A.4.1 0.05 mol/LGly-NaOH缓冲液（pH9.4）A液：0.2 mol/L NaOH，称取NaOH（A.R）8.0 g，用蒸馏水定容至1000 ml；B液：0.2 mol/L Gly，称取甘氨酸15.014 g，用蒸馏水定容1000 ml；使用前取A液16.8 ml + B液50 ml，加部分蒸馏水稀释，再用酸度计调节pH至9.4，定容到200 ml。
A.4.2 橄榄油分析纯。
A.4.3 4%聚乙烯醇（PVA）溶液称取聚乙烯醇40 g（聚合度1750+50），加1000 ml 0.05 mol/L pH 9.4Gly - NaOH 缓冲液，沸水浴完全溶解后，冷却，必要时过滤，溶解过程中蒸发的水分要用蒸馏水补充，定容至1000 ml。
A.4.4 乙醇含量在95 %以上，为分析纯。
A.4.5 0.01 mol/L NaOH称取0.40 g A.R的NaOH，溶于新制备的冷却蒸馏水中并定容至1000 ml，置冰箱。
取分析纯邻苯二甲酸氢钾（A.R）少量于称量瓶中，105℃烘干至恒重（约2小时），然后称取4份，每份各0.600 g，分别放入4个100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻线，溶解后，分别取10ml至4个250ml的三角瓶中，各取加入40 ml蒸馏水，摇允后，加三滴1 ％酚酞，用待标定的NaOH溶液滴定至微红，即为终点。
乳品中脂肪酶的测定方法
乳品中脂肪酶的测定方法
脂肪酶是一种重要的酶类，在乳品加工中具有关键的作用。
测定乳品中脂肪酶
的含量是保证乳品质量的重要环节之一。
以下是几种常见的脂肪酶测定方法：
1. 滴定法：滴定法是一种简便而常用的测定脂肪酶活性的方法。
该方法通过将
乳样溶液与含有标准化脂肪酶的试剂混合，在一定的反应条件下，用酸碱滴定的方法测定反应溶液中未被分解的脂肪酶的剩余量。
滴定法的优点是操作简便，结果可靠，但缺点是该方法只能测定总脂肪酶活性，无法区分特定种类的脂肪酶。
2. 电化学法：电化学法是一种使用电化学传感器来测定脂肪酶活性的方法。
该
方法通过将乳样溶液与含有底物的电化学传感器接触，利用脂肪酶的催化作用产生的电流变化来测定脂肪酶的活性。
电化学法具有灵敏度高、结果稳定等优点，但需要专业的设备和操作人员，所以适用范围有一定限制。
3. 酶联免疫吸附法（ELISA）：酶联免疫吸附法是一种利用特异性抗体与脂肪
酶结合并通过酶的底物催化生成的产物来测定脂肪酶的含量的方法。
该方法通过将待测样品与含有特异性抗体的酶标记试剂反应，然后用酶底物进行显色反应，最后根据显色产物的浓度来测定脂肪酶的含量。
酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性和较宽的适用范围等优点，但需要耗时和复杂的实验操作。
综上所述，选择适当的乳品中脂肪酶测定方法需要根据实际需求和实验条件来
决定。
不同的方法具有各自的优缺点，在实际应用中需综合考虑实验操作的方便性、测定结果的准确性以及设备和人员的可用性等因素。
只有选择合适的测定方法并严格执行相关操作步骤，才能保证乳品中脂肪酶含量的精确测定，从而保障乳品的质量和安全。
脂肪酶(LIP)测定标准操作程序SOP文件
4-8℃7天
-20℃1年
不能应用其他种类的抗凝剂，否则会造成结果的假性偏低，因为其他抗凝剂会造成lip的失活。
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定28天R2：Fra bibliotek开后机上稳定28天
准备：直接使用。
S.VOLUME(NORMAL) [ 3 ]
SD LIMIT [ 0.1 ]
S.VOLUME(DECREASE) [14/3/140]
SENSITIVITY LIMIT(LOW) [ 3.7 ]
S.VOLUME(INCREASE) [ 6 ]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ 6.5 ]
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-09
脂肪酶（LIP）测定
版序：ABCD
页码：第1页，共3页
1测定方法
速率法。
2测定原理
1,2-氧-dilauryl-消旋-甘油-3-戊二酸酯脂肪酶1,2-氧-dilauryl-消旋-甘油＋戊二酸酯戊二酸酯自发降解戊二酸＋methylresorufin
5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6上机操作
见仪器作业指导书。
7参考范围
成年人：13-60/l
8性能指标
本法线性范围为3-303U/l，不准确度允许范围 ±10%，不精密度CV=0.65%，灵敏度为3U/l。
9注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血、黄疸或抗坏血酸的干扰情况参见抗干扰能力。
PROZONE LIMIT [ 0/LOWER ]
脂肪酶活检测原理及方法
脂肪酶活检测原理及方法脂肪酶活检测原理及实际方法：一、原理以及标准曲线做法1.对硝基苯酚酯（4-Nitrophenyl ester）是脂肪酶水解活力测定中运用最为广泛的一种底物，脂肪酶水解其产生pNP（对硝基苯酚）在碱性条件下显黄色，在410nm下有吸光值，且灵敏度很高。
2.所需试剂有：CAS 碳链长度出货号价格名称830-03-5 C2 N8130-1G ￥462 对硝基苯乙酸酯2635-54-9 C4 N9876-1G ￥570 对硝基苯丁酸酯1956-10-1 C8 21742-1G-F ￥487 对硝基苯辛酸酯1956-11-2 C12 61716-1G ￥435 对硝基苯月桂酸酯1492-30-4 C16 N2752-1G ￥379 对硝基苯棕榈酸酯14617-86-8 C18 N3627-1G ￥2621.97 对硝基苯硬酸脂全部为色谱纯试剂，购于sigma公司3.标准曲线绘制：a.标准对硝基苯酚母液(2mM，2mmol / L):称取0.02789g的对硝基苯酚(p-NP)溶于100ml 的溶液B（即不同pH的缓冲液），置于棕色试剂瓶内，4℃冰箱保存。
方法一：b.标准曲线绘制：分别取0.02，0.04，0.06，0.08，0.12，0.16ml的对硝基苯酚母液(2mM)，用溶液B（即不同pH 的缓冲液）稀释至4ml，分别测定在410nm处的吸收值。
以对硝基苯酚浓度x（对应浓度分别是0.01，0.02，0.03，0.04，0.06，0.08，单位：mM）为横坐标，吸光值y为纵坐标，绘制标准曲线。
方法二：全部对硝基苯酚经过与测酶活相同的处理，获得吸光度。
b.标准曲线的绘制：分别取0、1.875、3.75、7.5、15、22.5、30、45μL的对硝基苯酚分别加入62.5、60.625、58.75、55、47.5、40、32.5、17.5μL的异丙醇和（全部都是）562.5的溶液B，40℃15min，95%乙醇，10000r / min，3min，测出标准曲线。
脂肪酶(LPS)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4404
脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4404规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体80mL×1瓶4℃保存试剂二液体10mL×1瓶常温保存试剂三液体20mL×1瓶4℃保存标准品液体59.3μL×1支4℃保存溶液的配制：标准品：临用前加入 1.435mL无水乙醇配成125µmol/mL的油酸标准溶液，充分溶解。
用前注意解冻溶解。
产品说明：LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。
LPS广泛的存在于各种生物中。
血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：研钵/匀浆器、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织样本：称取约0.1g样本，加试剂一1.0mL充分研磨，于4℃，15000rpm离心30min，取上清液待测。
血清样本：直接检测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。
2、试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。
3、标准溶液的稀释：将125µmol/mL的油酸标准溶液用无水乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9µmol/mL的标准溶液待测。
4、操作表：加入试剂（mL）空白管测定管标准管试剂一0.3750.3750.375试剂二0.1250.1250.125反复震荡混匀蒸馏水0.2上清液/血清0.2标准溶液0.2迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10min甲苯111反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10min取出离心管，小心吸取上层溶液0.9mL，加入另一2mL塑料离心管中，按下表操作：试剂三0.2250.2250.225反复震荡混匀；室温4000rpm离心10min，小心吸取上层溶液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。
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脂肪酶测定标准操作程序
1. 摘要
脂肪酶检测用于定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活力，用于临床相关疾病的辅助诊断。
2. 适用范围
程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中LPS 的浓度。
3. 职责
使用日立7600自动生化分析仪进行测定LPS 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的二脂肪酶监测试剂盒采用的是酶法。
5. 原理
1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯−−→−脂肪酶
1，2-领-二月桂基-消旋-甘油+戊二酸+6-甲基试卤素灵 1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯在样本中的脂肪酶的作用下水解生成1，2-领-二月桂基-消旋-甘油、戊二酸以及红色的6-甲基试卤素灵。
由于甲基试卤素灵在波长570nm 附近处有吸收峰所以在一定脂肪酶活力范围内，570nm 处吸光度的变化值与样本中脂肪酶活力成正比。
6. 仪器
日立7600自动生化分析仪
7. 试剂
7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、共脂肪酶、脱氧胆酸钠、乙酸钙
R2：酒石酸缓冲液、1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯、牛脱氧胆酸钠。
7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为
12个月。
试剂不可冰冻。
试剂开瓶后冷藏于分析仪中可以保存14天。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制
8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
9.标本
9.1标本为新鲜血清，或采用EDTA、肝素、枸橼酸钠抗凝的血浆样本。
室温可稳定1天；
2-8℃可稳定7天；冻存可稳定1年。
9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请
单不符状况，一律要求重新留取标本。
9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。
10.测定程序
10.1分析参数：详见参数表。
10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
10.3获取结果：在日立7600仪器上或日立7600传送的中文系统电脑上查找相应结果。
10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。
可报告的
结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。
11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。
无需手工计算，每个标本的结果自动打印
12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。
13.操作性能
13.1可报告范围：本法对CO2检测范围为15-1000 U/L。
当样品测定值超过上限时，应
将样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
13.2特异性/干扰：当样品中VC≤600 mg /L，胆红素浓度≤600mg/L，血红蛋白浓度≤
5.00g/L，甘油三脂≤8mmol/L时对测定结果的影响可忽略。
13.3灵敏度：本试剂的检测限为1000 U/L。
13.4精密度:重复性CV%≤8% 批间差≤10%
14.注意事项
14.1试剂盒仅用于体外诊断。
测定结果仅作为相关疾病的临床诊断依据。
14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器再测定，其余试剂盖紧后
放回冰箱。
如试剂变混浊或空白吸光度值＞0.4A请勿使用。
14.4试剂盒中含有防腐剂叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
如不慎接触，应
用大量清水冲洗。
如误服，应立即上医院诊治。
15.参考值
健康成年人：13-63 U/L 如果结果做为诊断指标应结合病史及其它临床检查结果。
16.临床意义
脂肪酶检测用于定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活力，用于临床相关疾病的辅助诊断。
脂肪酶（LPS）是一组特异性较低的脂肪水解酶类，主要源于胰腺，其次为胃及小肠，能水解多种含长链脂肪酸的甘油酯。
胰腺是人体LPS最主要来源。
LPS增高见于急性胰腺炎及胰腺癌，偶见于慢性胰腺炎。
急性胰腺炎时，淀粉酶增加的时间较短，而LPS活力上升可持续10-15天。
胰腺炎未累及胰腺癌时、LPS通常在正常范围。
此外，总胆管结石或癌、肠梗阻、十二指肠穿孔等有时LPS 亦可增高。
脂肪酶对急性胰腺炎的有很大帮助。
临床研究证实，其灵敏度为80%~100%，特异性为84%~96%，而淀粉酶的灵敏度为73%~79%，特异性为82%~84%，脂肪酶活力测定对急性胰腺炎诊断的灵敏度及特异性均优于淀粉酶活力测定。
目前临床脂肪酶常用的测定方法有滴定法、电极法、比浊法、分光度计法及荧光度计法。
17.支持性文件
17.1日立7600自动生化分析仪使用说明书。
17.2日立7600自动生化分析仪分析参数。
17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。
用户可根据自身情况添加支持性文件。
18.参考文献
18.1《全国临床检验操作规程》第三版，叶应妩等，2006。