急性毒性试验

保持一定流动性的最大浓度作为口服样品液。
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三、给药方法
(一)动物禁食
动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。
(二)给药途径
中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药
急性毒性试验的目的是推测新药对人的急性毒性的强弱。同时，它可以为长 期毒性试验、生殖毒性试验、致突变试验等试验设计提供剂量选择依据和有关 毒性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间，与半数有效量 (ED50)比较判断新药的安全系数。因此，急性毒性试验对了解新药的毒性是非常 必要的。
鉴于种种因素造成急性毒性试验结果(症状和致死量)在不同实验室内有较大的 差异，且耗费大量动物而所取得的动物毒性的信息量相对较少，因此，各国目 前都在修订急性毒性试验的技术要求，希望能利用尽可能少的动物数量而取得 有价值的信息，同样达到急性毒性试验的目的。
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(二)动物的年龄、性别、体重
急性毒性受动物的健康状态、年龄、性别、遗传因素、体重、药物的吸收、 分布、代谢、排泄和内分泌激素等的影响。未成年的动物药酶活性一般较低， 对于经代谢后减毒的药物表现毒性较强。而且，年幼动物药物代谢功能和敏 感度较易发生变化，性别间的特性也尚未确立，因此，口服毒性通常使用年 轻的性成熟的动物，—般小鼠6—8周龄，两种性别，体重18-22g(同次试验体 重相差不超过2g)，大鼠6—8周龄，两种性别，体重120～150g(同次试验体重 相差不超过10g)。
物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。
各给药途径的容量一般为小鼠0．4—0．5ml／20g(体重)，大鼠lml／ l00g(体重)。小鼠口服最大容量不超过0．8ml／20g(体重)，其他途径不超过 0．5ml／20g(体重)。大鼠口服最大容量不超过2ml／l00g(体重)，其他途径不 超过lml／l00g(体重)。
(二)样品液的浓度及给药容量
为了求得最低致死且或半数致死量，需要设不同剂量组，使部分组反应率在50％以 上，部分组反应率在50％以下。不同剂量的设定有两种方式，—是浓度一定不同给药 容量，另—种是容量一定不同给药浓度，两者各有所长。
浓度一定适用于某些已经固定浓度的制剂，其有利之处是避免了渗透、粘度、溶质
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二、试验准备
实验应在符合GLP的实验室内进行，实验样品质量和稳定性应符合要求，与药效学及 临床试验一致。
(一)样品液的配制
中药材町用浓缩煎剂或浸膏，中药制剂可用不含辅料的提取物加水或用o．5％羧基 纤维素钠，0．5％吐温—80，5％阿拉伯胶等混悬剂、增溶剂配成混悬液等，尽可能配 成水溶液，水不溶性成分可用植物汕配成油溶、乳浊液。也有用乙醇、聚乙醇等溶剂 配成样品液者，但溶剂本身的急性毒性能干扰试验结果，因此，急性毒性试验报告中 应对样品液的配制方法加以详细说明，必要时设溶剂对照组。
急性毒性试验
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急性毒性试验(单次给药毒性试验)主要观察对实验动物一次给药后所产生的毒 性症状及其程度，出现和消失的时间，死亡的发生率并计算出其最大给药量， 最小致死量、半数致死量(LD50)等。由于中药毒性常较小，单次给药往往不能表 现明显的毒性作用，我国药政部门把一日内多次给药观察受试药物毒性的实验 也称作急性毒性实验。
(三)动物数量
视不同试验而异。最小致死量或半数致死量，小动物(大鼠、小鼠)试验组 在三组以上，每组—般至少10只动物(雌雄各半)。一些国家对动物数和组数 不作规定，因此，有只用3只一组经多组试验测得近似致死量或LD50者。大动 物(犬、猴)并不—定要求得到LD50，可用少量动物采用剂量递增的方法观察 中毒症状，求近似致死量即可。最大给约量试验—般要求用小鼠或大鼠20只 即可。
(二}致死剂量计算
可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
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四、急毒试验观察指标和致死量的计算
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实Biblioteka Baidu的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。
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第一节 急性毒性试验方法的有关问题
一、动物
(一)动物种
动物种(或系)的差异是动物急性毒性差异的主要原因，药酶则是毒性种差 的重要原因之一。为推测新药对人的急性毒性，某些发达国家动物急性毒性 试验要求包含非啮齿类动物(除家兔外)在内的两种动物，我国对此未作出明 确规定。由于中药已在临床长期使用，一般认为，如尤特殊情况，使用一种 动物已基本上达到急性毒性试验的目的。目前虽常用的实验动物是小鼠或大 鼠。但在某些特殊情况下，例如受试物中已知含有强烈胃肠刺激物，就还应 再采用非啮齿类大动物进行实验，否则，即使毒性较大(如巴豆)也并不能引 起大、小鼠呕吐反应。
颗粒的分散状态等理化性状不—致对毒性试验结果的影响，因此，浓度一定也可得到
较好的结果，但由于动物的投药用量是有限的，范围较窄，按体重给药容量难以达到
试验要求。因此，通常采用同容量不同浓度的给药方法，注射给药药液浓度应勺体液
浓度等渗(至少不应低渗)，口服液不必作特殊考虑，对毒性低的中药制剂而言，应以能