复方地龙胶囊薄层鉴别方法研究

复方地龙胶囊薄层鉴别方法研究
王希斌;王晓燕;刘广娟;杨天燕;陆华;李梅
【摘要】目的:建立复方地龙胶囊薄层色谱(TLC)鉴别方法.方法:利用TLC法分别对复方地龙胶囊中的地龙、川芎、黄芪和牛膝进行定性鉴别.结果:地龙、川芎、黄芪和牛膝色谱斑点清晰,阴性空白无干扰.结论:所建立的TCL鉴别方法对于复方地龙胶囊中的地龙、川芎、黄芪和牛膝的鉴别专属性强,方法可靠简便,可作为复方地龙胶囊的定性控制方法.
【期刊名称】《广西医科大学学报》
【年(卷),期】2014(031)006
【总页数】3页(P1015-1017)
【关键词】复方地龙胶囊;薄层色谱法;定性鉴别
【作者】王希斌;王晓燕;刘广娟;杨天燕;陆华;李梅
【作者单位】广西医科大学第一附属医院药学部南宁530021;广西医科大学第一附属医院药学部南宁530021;上海信谊药厂有限公司上海 201206;广西医科大学第一附属医院药学部南宁530021;广西医科大学第一附属医院药学部南宁530021;广西医科大学第一附属医院药学部南宁530021
【正文语种】中文
【中图分类】R927
复方地龙胶囊临床功效表现为化瘀通络，益气活血，主要用于缺血性中风中经络恢
复期气虚血瘀证，治疗半身不遂，口舌歪斜等。

本方是在清·王清任《医林改错》
中“补阳还五汤”的基础上,调整了原方中的君臣地位，加大了祛瘀通络药物的比例，去桃仁、赤芍、当归、红花，补一味牛膝，经过临床反复验证、修订，确定了复方地龙胶囊以地龙为君药，川芎、黄芪为臣药，牛膝为佐药的基础处方[1]。

方中地龙能活血化瘀且善通络；以川芎、黄芪为臣，川芎配地龙，化瘀通络之功更著，黄芪力专善走，周行全身，与地龙相配，最能疏通瘀阻之络；佐以牛膝，破瘀通络。

四药合用，共奏化瘀通络，益气活血之功，俾瘀消络通，气旺血行，诸症自愈。

因此，对中风病-中经络之气虚血瘀证具有较好的疗效。

本文采用薄层色谱(TLC)法对复方地龙胶囊中的地龙、黄芪、川芎和牛膝进行定性鉴别，方法快速、
灵敏，结果可靠，现报道如下。

1 仪器与材料
1.1 仪器：Camag Automatic TLC sampler 4；Camag TLC visualize；Camag TLC plate heater Ⅲ； win CATS-ATS 4成像系统。

1.2 试剂：硅胶H(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯
1.3 对照品：阿魏酸(中国食品药品检定研究院，110773-201313)，黄芪甲苷(中
国食品药品检定研究院，110781-201314)，齐墩果酸(中国食品药品检定研究院，110709-201206)。

1.4 对照品药材：地龙(中国食品药品检定研究院，120987-201107)；川芎(中国
食品药品检定研究院，110918-201110)；黄芪(蒙古黄芪)(中国食品药品检定研究院，120974-201311)；牛膝(中国食品药品检定研究院，121066-201106)
1.5 供试品：复方地龙胶囊(南京恒生制药有限公司，批号：140203、140406、140601、140602、140604)
2 方法
2.1 对照品溶液的制备：阿魏酸对照品，加乙醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液；
黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液；齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液。

2.2 样品溶液制备
2.2.1 地龙：取复方地龙胶囊内容物0.8 g，加乙醇20 mL，置水浴上加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用石油醚(60～90 ℃)15 mL振摇提取，分取石油醚层，置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[2，3]。

2.2.2 川芎：取复方地龙胶囊内容物0.4 g，加乙醇5 mL，超声处理15 min，静置，取上清液作为供试品溶液[2～4]。

2.2.3 黄芪：取复方地龙胶囊内容物2 g，加70%乙醇40 mL，置水浴上加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15 mL，取正丁醇液置水溶上蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[2，5]。

2.2.4 牛膝：取复方地龙胶囊内容物2 g，加乙醇30 mL，置水浴上加热回流30 min，放冷，滤过，滤液加盐酸1 mL，置水浴上加热回流1 h，回流液置水浴上浓缩至约5 mL，加水10 mL，用石油醚(60～90 ℃)20 mL振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[2，6]。

2.3 对照药材溶液制备：分别另取地龙、川芎、黄芪、牛膝对照药材0.2，0.1，0.5，0.5 g，按照“2.2.1”，“2.2.2”，“2.2.3”，“2.2.4”项制成对照药材溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备：按照处方及工艺流程，分别去掉地龙、川芎、黄芪及牛膝，制成胶囊，按照“2.2”提取方法提取，制成阴性对照溶液。

2.5 薄层层析条件
2.5.1 地龙：照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2010年版(一部)附录Ⅵ B，
以下川芎、黄芪、牛膝均参照此法]试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

2.5.2 川芎：吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-冰醋
酸-甲醇(30∶1∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.5.3 黄芪：吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲
醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.5.4 牛膝：吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲
醇(40∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，热风吹至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3 结果
经实验观察确证，本法可行，阴性对照实验在相同斑点位置未见干扰，Rf值在
0.2～0.8之间，结果见图1～图4。

图1 地龙薄层色谱鉴别结果1：地龙对照药材；2：阴性对照；3～12：复方地龙
胶囊
图2 川芎薄层色谱鉴别结果1：阿魏酸对照品；2：川芎对照药材；3：阴性对照；4～13：复方地龙胶囊
图3 黄芪薄层色谱鉴别结果1：黄芪甲苷对照品；2：黄芪对照药材；3：阴性对照；4～13：复方地龙胶囊
图4 牛膝薄层色谱鉴别结果1：齐墩果酸对照品；2：牛膝对照药材；3：阴性对
照；4～13：复方地龙胶囊
4 讨论
TLC法基本原理是根据各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同使含各组分
的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开，它是一种微量、快速和简便的色谱方法[7]。

中药复方的鉴别，由于其复方中的各化学成
分因结构不同，从而在极性和颜色上也存在着异同，所以通过不同的提取方法，不同极性溶剂配比的展开剂，不同的薄层板，及不同的显色剂，从而达到对中药复方中所含组分的鉴定。

中药成分复杂，且在不同中药中可能含同一个成分，如阿魏酸在当归、地骨皮等中药中也存在[8，9]，齐墩果酸在败酱草、枇杷叶等中药中也可检测到[10]。

中药黄芪在实际应用中存在着同物异名和同名异物的现象，而2010版药典规定的黄芪为蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根茎[2]。

因此，单一用标准品去对复方中药进行定性
鉴别存在一定的缺陷。

本文在以标准品为对照的基础上，加以标准药材对复方地龙胶囊中的地龙、川芎、黄芪及牛膝进行定性鉴别。

如图2所示在川芎薄层色谱上
除阿魏酸外，胶囊与川芎对照药材在2个位置出现相同斑点，且阴性对照物无干扰。

黄芪薄层色谱存在4个相同斑点。

但地龙和牛膝只有一个斑点相对应。

本文在对复方地龙胶囊中地龙、川芎、黄芪及牛膝TLC鉴别方法的研究过程中，
参考2010版《中国药典》(一部)及大量文献的基础上，分别采用多种不同的供试
品处理方法及展开剂进行试验，优化了4种药材的TLC鉴别方法。

结果表明，复
方地龙胶囊中地龙、川芎、黄芪及牛膝色谱斑点清晰、分离效果好，具有重现性好、专属性强、简便、快速等特点，可作为复方地龙胶囊定性鉴别的依据。

参考文献：
[1] 张金龙，夏培元.复方地龙胶囊浸膏粉制备工艺的研究[J].浙江中医学院学报，2002，26(1)：65-67.
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广西医科大学学报 2014 Dec;31(6)。