孕早期血清学产前筛查的性能验证

孕早期血清学产前筛查的性能验证
张艳秋
（太仓市疾病预防控制中心，江苏 太仓　215400）
【摘要】目的：通过时间分辨荧光免疫法分析孕早期血清AFP和β-HCG，评估AFP和β-HCG的临床价值，建立完善的检测体系，有助于降低新生儿缺陷的发病率、致畸率。

方法：使用美国PerKinElmer公司AFP/β-HCG 测定试剂盒进行精密度、正确度、线性范围三方面的性能验证。

结果：AFP和β-HCG检测试剂盒的精密度、正确度及线性范围其与厂家提供的数据基本一致，该方法具有高精密度和正确度，能够满足临床样本检测的性能要求。

结论：血清学指标联合超声进行产前筛查，胎儿染色体异常的检出率大大增高，应用于临床筛查。

【关键词】AFP/β-HCG；产前筛查；性能验证
【中图分类号】R714.5　【文献标识码】A　【文章编号】2096-5249（2022）30-072-04
出生缺陷严重影响着新生儿的生存和后续生活质量，也给家庭和社会造成了巨大的负担，所以临床上多采取产前筛查的方法预防新生儿缺陷的发生，做好产前筛查且明确诊断并及时终止妊娠能显著降低新生儿畸形率。

但是由于产前筛查覆盖率偏低，筛查方案多样化，检测技术平台和风险评估软件不统一而带来筛查诊断效能低下。

血清学产前筛查以无创、迅速、价格低等优点在产前筛查中占有极其重要的地位。

唐氏综合征即21-三体综合征发病普遍，一直是各国医学工作者关注热点[1]，众多国内外研究发现，在检测出怀有21三体综合征的孕妇中，其血清AFP的浓度下降而β-HCG浓度升高。

为了提高筛查诊断效能和保障母婴健康，全市统一孕早期血清学产前筛查方案，检测技术平台和风险评估软件。

毋庸置疑孕早期血清学产前筛查主要集中在AFP 和β-HCG研究上[2]。

在未受累妊娠中，妊娠后母体血清中的AFP水平迅速增加，而羊水中的浓度则减少；如果羊水和母体血清中AFP显著升高，则提示胎儿开放性神经管缺陷。

上述特征在孕16～18周时最为显著，可通过检测母体血清AFP水平来筛查神经管与腹壁缺损[2]。

HCG是含α和β两个亚基的糖蛋白，两个亚基以非共价键结合形成一个完整的HCG分子，也以游离亚基的形式存在于血清中，母体血清中的游离β-HCG水平在妊娠约8周时达到峰值，此后呈指数下降，妊娠18周时达到平稳状态。

受唐氏综合症影响的妊娠在孕早期及孕中期血清中游离β-HCG水平平均增高2倍多，游离β-hCG可以作为筛查唐氏综合症的标记物，用来识别具有此类疾病较高风险性的妊娠[2]。

目前产前筛查质控中心采用的孕早期血清学产前筛查包括AFP和β-HCG。

本文主要通过时间分辨荧光免疫法分析孕早期血清AFP和β-HCG，在了解检测试剂盒检测原理、熟练掌握操作步骤后进行精密度、正确度和线性范围三方面的性能验证，并评估AFP和β-HCG的临床价值，建立完善的检测体系，制定符合临床的检测方案，相关报告如下。

1　资料与结果
1.1　一般资料
研究对象为2019年9月至2019年12月期间，在门诊进行产前筛查的孕11～13+6周孕妇931例。

孕妇年龄22～42（26.9±6.3）岁，其中≥35岁96例，均为单胎妊娠，头臀长为45～84 mm。

1.2　仪器与方法
1.2.1　仪器试剂
AFP，β-HCG检测试剂盒（美国PerKinElmer公司）；高速冷冻离心机；DELFIA Xpress全自动时间分辨荧光免疫分析仪。

1.2.2　标本采集与保存
所有孕妇采血后4小时内分离血清，于常温下2000 r/min，离心20 min，血清置于-20℃条件下保存。

1.3　血清学检测
严格按照检测试剂盒内的说明书进行样本预处理，用时间分辨免疫荧光法检测母体血清AFP和游离β-HCG。

1.4　筛查方法
作者简介：张艳秋，女，太仓市疾病预防控制中心。

通过使用带有Elipse筛查引擎的Wallac LifeCycle 软件进行风险评估的计算。

通过计算相应指标的中位数倍数（Multiples of median，MoM）而得到风险值。

AFP：1/270为风险截断值。

游离β-HCG：1/270为风险截断值。

检测项目结果大于风险截断值者则为高风险孕妇。

2　结果
2.1　精密度
2.1.1　评价方案
分别选取AFP和β-HCG的低、中、高（L/M/H）水平质控品每天各检测3次，连续检测5天，各得到15个检测结果。

收集实验数据并计算批内、批间及总变异系数[3]。

2.1.2　判定标准
精密度总CV值＜厂家声称总变异系数即认为符合要求，AFP（L/M/H）总CV：3.6%、2.6%、2.5%；β-HCG（L/M/H）总CV：2.7%、2.7%、3.6%。

2.1.3　验证结果
均通过，具体资料见表1～表3。

表1　AFP和β-HCG低水平质控品测量结果
日期
第1次第2次第3次
AF Pβ-HCG AF Pβ-HCG AF Pβ-HCG 2019.8.12 6.018.35 6.28.35 6.188.17 2019.8.1368.55 6.088.48 6.048.37 2019.8.14 6.188.53 6.078.49 6.098.65 2019.8.15 6.168.52 6.048.63 6.148.47 2019.8.16 6.138.3 6.068.64 6.18.62
批内CV 1.06%（AFP）、1.39%（β-HCG）
批间CV0.53%（AFP）、1.28%（β-HCG）
总CV 1.09%（AFP）、1.78%（β-HCG）
结论均通过
表2　AFP和β-HCG中水平质控品测量结果
日期
第1次第2次第3次
AFPβ-HCG AFPβ-HCG AFPβ-HCG
2019.8.1244.2744.745.6442.9444.9244.7 2019.8.1344.3245.0644.2443.9544.0644.58 2019.8.1445.542.6345.6242.0444.6543.78 2019.8.1545.1543.8245.2844.5344.0544.2 2019.8.1645.2242.8444.4243.144.5843.54批内CV 1.18%（AFP）、1.58%（β-HCG）
批间CV0.85%（AFP）、1.67%（β-HCG）
总CV 1.36%（AFP）、2.19%（β-HCG）
结论均通过
表3　AFP和β-HCG高水平质控品测量结果
日期
第1次第2次第3次
AFPβ-HCG AFPβ-HCG AFPβ-HCG
2019.8.12101.75111.66102.58111.66103.01111.66 2019.8.13103.45112.56103.72111.48103.6108.35 2019.8.14103.16108.33103.92108.11103.05110.86 2019.8.15105.08106.98104.25107103.52108.03 2019.8.16104.4109.73103.49107.72102.12107.87批内CV0.69%（AFP）、1.19%（β-HCG）
批间CV0.85%（AFP）、1.60%（β-HCG）
总CV0.89%（AFP）、1.92%（β-HCG）
结论均通过
2.2　正确度
2.2.1　评价方案
用参考物质（室间质评质控品）进行正确度验证实验。

分别选取产前筛查AFP和β-HCG卫生部室间质评质控品每天检测各2次，连续检测5天，分别得到10个检测结果。

收集实验数据和室间质评结果，计算均值、与靶值的偏移值、标准差、测量标准不确定度和偏移验证区间。

2.2.2　判断标准
∣偏移值∣≤标准不确定度即认为符合要求，若任一浓度∣偏移值∣＞标准不确定度，则将此偏移值的验证区间与31家产筛实验室室间质评均值（靶值）比
较，若靶值在验证区间内，则认为正确度可靠[5]。

2.2.3　验证结果
均通过，具体资料见表4。

表4　卫生部产前筛查室间质评质控品测量结果
日期
AFPβ-HCG 201911201912201913201914201915201911201912201913201914201915
2019.8.1219.0337.1216.8243.2585.117.8337.6115.3117.9910.23 19.7237.7116.7342.5385.257.6436.1615.7817.9910.23
2019.8.1319.4136.891742.9184.947.9637.3715.418.2410.84 19.8237.6116.8943.0885.258.238.4516.3218.7410.73
2019.8.1419.937.3917.1543.4186.48.2739.3515.9818.1810.86 19.8837.3717.2944.02868.2239.2416.1619.3610.79
2019.8.1519.8837.4517.2342.9985.628.1939.1816.2819.3811.42 19.8337.2317.4243.1786.258.6840.6316.3319.3511.09
2019.8.1619.8937.3917.1843.0785.348.2639.1816.3219.4710.98 19.7937.9916.8843.9186.358.113916.3419.3210.64
均值19.7237.4217.0643.2385.658.1438.6216.0218.8010.78靶值20.137.617.443.687.77.636.515.117.510.0∣偏移值∣0.380.180.340.37 2.050.54 2.120.92 1.30.78室间质评标准差0.490.730.320.69 1.740.3 1.250.570.710.47同组室间质评实验室数31313131313131313131测量标准不确定度0.0880.1310.0570.1240.3130.0540.2250.1020.1280.084验证区间低19.1936.4816.3641.8583.817.3235.3214.8016.869.7验证区间高20.2438.3517.7644.6287.498.9541.9117.2420.7411.87结论均通过
2.3　线性范围
2.3.1　评价方案
分别选取产前筛查AFP和β-HCG标准曲线上限F点及线性下限A点，高值标本可用去离子水稀释或低值样本稀释成系列不同浓度的评价样本；最好有6个或以上的系列浓度的实验样本，数据点数不得低于6个，浓度范围覆盖整个预期线性范围。

过程描述：将高值标本（H）与低值标本（L）按5L；1H+4L；2H+3L；3H+2L；4H+L，5H的关系，配成系列浓度，每个浓度各重复检测3次并记录结果。

尽量在同一批内完成所有样品的检测，所有样品以随机的顺序进行检测。

线性统计：以理论值为X，以测定均值为Y，经回归方法学统计，得到R2值。

2.3.2　判定标准
以理论值为X，测定均值为Y，进行线性回归，求得方程Y=aX+b。

若R2≥0.995，a在0.9～1.1之间，b 接近于0，则直接判定该范围为线性范围[5]。

2.3.3　验证结果
AFP的测定结果在0～452Um/L范围内呈线性，见表5。

β-HCG的测定结果在0～184ng/mL范围内呈线性，见表6。

表5　AFP实验数据及结果
H：L
测定值均值
（测定值）
理论值第1次第2次第3次
0：500.010.010.010 1：488.6186.8687.1987.5590.4 2：3179.55177.68178.81178.68180.8 3：2270.23270.3270.22270.25271.2 4：1363.15365.87363.81364.28361.6 5：0450.66453.16450.21451.34452线性回归方程y=0.9995x
相关系数0.9999
结论AFP的测定结果在0～452Um/L范围内呈线性
表6　β-HCG实验数据及结果
H：L
测定值均值
（测定值）
理论值第1次第2次第3次
0：50.010000 1：436.8336.8737.136.9336.8 2：372.2873.6572.4872.873.6 3：2110.14116107.67111.27110.4 4：1146.36146.36146.07146.26147.2 5：0182.23180.78180.78181.26184线性回归方程y=0.992x
相关系数0.9998
结论β-HCG的测定结果在0～184ng/mL范围内呈线性
2.4　血清学检测结果
高风险者63例，筛查阳性率为6.77%。

3　讨论
国际标准化组织（International Organization for Standardization，ISO）颁布的医学实验室认可国际标准IS015189和《医疗机构临床实验室管理办法》均要求实验室在开展新检测项目前，应对其性能进行验证或分析评价，确保其可满足预期用途[4]。

本文性能验证项目是采用全自动时间分辨荧光免疫分析仪，在正式用于孕妇孕早期筛查前，对AFP和β-HCG检测方法的精密度、正确度及线性范围进行验证。

在实验室项目评估中，精密度指提示结果的一致性，本次性能验证的结果表明该方法具有高精密度。

用参考物质（室间质评物质）进行正确度验证实验，参加测量实验室的数量通常应＞10个实验室，判定标准来自WS/T420-2013：∣偏移值∣≤标准不确定度即认为符合要求，若任一浓度∣偏移值∣＞标准不确定度，则将此偏移值的验证区间与室间质评靶值比较，若靶值在验证区间内，则认为正确度可靠。

目前大多数检验科用参考物质（室间质评物质）进行正确度验证实验时选用这样的判定标准：偏移＜1/2TEa即认为符合要求。

以上表4经计算AFP的偏移分别为1.89%、0.48%、2.0%、0.85%、2.34%，β-HCG的偏移分别为7.11%、5.80%、6.09%、7.43%、7.80%。

均＜AFP和β-HCG的1/2TEa（12.5%），正确度验证结果为均通过。

由此可见，第二种方法比第一种方法较为简单，目前为检验科常用方法。

通过对AFP和β-HCG检测试剂盒的精密度、正确度及线性范围进行验证，其与厂家提供的数据基本一致，能够满足临床样本检测的性能要求，两个项目可以进行常规开展。

通过检测931份孕妇血清学标本，筛查阳性率为6.77%，与报道的一致[5-7]。

研究显示血清学指标联合超声进行产前筛查，胎儿染色体异常的检出率大大增高，假阳性率也明显低于单独用血清学指标检测或超声筛查[5-7]。

在今后的研究中，还需扩大样本，并延长随访期限，获取更多客观、有效的数据。

参考文献
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（收稿日期：2022-06-11）。