肝豆状核变性的基因诊断及治疗

肝豆状核变性的基因诊断及治疗
ATP7B基因及其突变
WD的致病基因为ATP7B位于13号染色体长臂(13q14.3), 长约7.5kb，含21个外显子，编码P型铜转运三磷酸腺苷酶，其功能主要是负责铜转运，当基因发生突变时使其功能减弱或丧失，从而使铜离子在特定的器官和组织沉积而致病［2］。

ATP7B 蛋白主要表达于肝、肾、胎盘组织当中，不同组织中，ATP7B基
因具有不同的剪接方式［3］。

ATP7B蛋白符合P型铜转运三磷酸腺苷酶的一般结构特点，具有TGEA模序、DKTG1模序、TGDN模序，以及连接ATP结合区与参加阳离子结合和转导的跨膜区的保守功能域MVGDGVNDSATP7B蛋白的N-端具有6个铜结合模序(GMTCXXC)
目前报道的ATP7B基因突变超过千种，其中80浓上为替代突变(substitution) 。

这些突变中，有的导致基因功能缺失，有的降低蛋白活性，有的甚至产生毒性。

不同的人群，基因突变的分布明显不一致。

基因突变的检测方法
目前主要有三类方法，一类检测点突变及小片段的插入、缺失突变，一类检测大片段的缺失改变，最后是连锁分析。

针对点突变最常用的检测方法为直接基因测序或者DGG、E SSCP DHPLC HRM等基因筛查方法联用基因测序，对ATP7B基
因的21 个外显子进行检测。

Slavka Vrabelova 等研究了200 个
不同白人家系（捷克173，斯洛伐克27）的227位患者，发现在所有检测到的突变类型中，最常见的为His1069Gln ，占57%，其它常见的还有3404delC、Trp779C、Arg778Gly。

Manoj S. Nanji 等对21个不同的日本人患者家系进行基因检测，发现了28种不同的单倍体型，在所有发现的致病等位基因，出现最多的为
Arg778Leu，占12% 然后为一种移码突变，1299insC ,占7.1%, 然后为Pro992Leu[4] 。

Chloe Miu Mak 等研究了65 个不同家系的香港中国人患者，发现其中最为常见的突变为Arg778Leu，占17.3%, Pro992Leu，占13.4%，I1148Thr，占8.7%，Thr1178Ala，占5.5%[1] 。

Chloe Miu Mak 等发现了一例突变Gln1142His、
Ile1148Thr 的复杂杂合子。

Dedoussis GV 等报导了一例突变
Ile1148Thr 、Gly1176Arg 的复杂杂合子[5] 。

尽管上述方法的检出率高，但是由于ATP7B基因具有21个
外显子，因此检测手段繁琐，成本较高。

少数学者尝试建立了针对某种人群常见位点的筛查办法，可能有助于提高检测效率，降低检测成本。

Chloe Miu Mak 等建立了一种实时扩增阻滞（real-time amplication refractory mutation system,
RT-ARMS技术用来快速检测ATP7B基因突变的方法，理论上可以同时检测到28 种常见突变[6] 。

少数患者的突变为大片段的缺失突变，无法用测序等方法检测到。

此时可以使用MLPA技术进行检测。

目前提供MLPA试剂的主要就是MRC-Holland公司（省略）。

目前没有采用MLPA方法检
测WD的研究报告。

连锁分析方法主要适用于当患者家庭的致病突变不明确时，对患者家系进行风险家属的检测、携带者检测、产前检测[2] 。

D13S301 D13S314 D13S316三个位点较为常用，联用这三个位点对于90%的家庭可提供有用信息。

Chloe Miu Mak 等利用该三个位点对65 个患者及其家庭成功地进行了单倍体型分析。

基因型-表型关系
Gromadzka等(2005)研究了142个波兰的WD患者，发现携带1 个或者2 个截短突变的患者，相对于携带两个致病性错义突变的患者而言，其血清铜、血浆铜蓝蛋白水平更低，发病年龄更早[7] 。

而首发症状与突变类型之间却没有发现有相关性。

Luoma等(2010)通过酵母模型对12种ATP7B基因错义突变进行了研究，认为L1043P、G1000R、G1101R、I1102T、V1239G、
D1267V突变是有害的，G1176E G1287S突变为中度有害，T991M
I1148T 突变则轻度有害[8] 。

推测这些突变的有害程度可能与临床表现存在相关性。

总体而言，WD病的基因型与表型之间的关系尚不完全清楚。

大多数患者都携带有两种不同的突变，可能导致基因型-表型之
间的关系复杂化，难以研究。

肝豆状核变性是目前少数可治疗的神经遗传病之一，治疗应坚持早期治疗，终生治疗原则。

早期使用驱铜治疗，减轻或延缓患者的病情及进展。

药物治疗目的是促进体内铜的排泄和减少铜的吸收，药物包
括右旋青霉胺、锌剂等以及各项对症治疗，手术治疗包括脾切除和肝移植。