痰涂片镜检操作规范

评价标准 痰片镜检：阳性片符合率≥98%, 阴性片符合率≥96% 制片质量：痰细胞，痰膜面积、厚薄、脱 落合格率≥90%，染色合格率≥95%
镜检：在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色 ，其它细菌和细胞呈蓝色
涂片结果报告标准(萋－尼氏抗酸菌染色法) 阴性 300 视野 0条 报告菌数 300 视野 1～8条 阳性1＋ 100视野 3～9条 阳性2＋ 10视野 1～9条 阳性3＋ 每视野 1～9条 阳性4＋ 每视野 >10条
如何进行痰涂片质量控制
人员不稳定，培训不足
实验室设备不足，更新较慢
不注意总结与提高
如何提高痰细菌学检查在专业人员心目中 地位
加强自身专业技术素质 保证痰细菌学检查工作质量 应用标准、统一的技术规范 注意积累、总结工作经验 不断加强实验室的规范化建设（人员配 备、实验室设备、安全操作、质量控制）
质控范围
二、痰标本制作前的准备 （一）、脱脂玻片（95%乙醇浸泡） （二）、竹签 （三）、痰涂片模板
脱脂玻片 95%的乙醇浸泡后晾干备用
痰涂片摸板 10mm×20mm的椭圆 于玻片右2/3的中心
使用铅笔在磨砂面上标记

三、痰涂片的制作 标本静置消毒 确保标本编号一致（初诊3个、治疗或随访2 个） 轻轻打开盖子 挑取标本中脓样或可疑部分 按照模板，从椭圆形中心开始，从里→外→里， 反复多次涂抹，稍晾，待痰膜水分挥发部分， 视痰膜厚薄程度，再次挑取适量痰液，涂至满 意为止（循环覆盖）
痰标本收集: 标本性状的控制（加强于医生沟通） 3份痰标本（1即时痰、2夜间痰、3晨间痰） 痰标本保存（不能当日检查的保存于冰箱防液化）
染液控制
用之前过滤一下（一周一次）
如何进行痰涂片质量控制 室内质控
抽查复检当日10%的涂片，自查或互查 选取结果可疑的涂片复查，尤其是只看到一条的或 只在一处视野看到细菌 选择痰阳病人有阴性结果的涂片 记录结果1-8条涂片
不得使用火焰加热的方法加速痰膜干燥
痰膜的厚薄
太厚
适宜
太薄
水样痰的涂法 可用反复多次覆盖法，实在挑取不到什么东 西，先用吸管吸取适量标本（标本一定要静 置），稍晾（时间较长），再用竹签涂抹均匀 致满意 涂抹完的标本自然干燥后，再火焰固定（5秒 内来回4次）
四、抗酸染色原理
初染时碱性复红与细胞壁的分枝菌酸结合 脱色时脱色液不能将碱性复红从抗酸菌细 胞壁上洗脱 抗酸菌的染色保持初染的颜色 复染提供背景对比
五、注意事项 加热固定后待彻底冷却 染液覆盖整个痰膜 染架要平衡 玻片间保持一定距离 冲洗用背面冲洗法 脱色时人不能离开
背面冲洗
脱色
讨论（1）：痰盒正确否？right?
那一种可以接受？
讨论（2）滴加染液和加热
讨论（2）滴加染液和加热
讨论（2）滴加染液和加热
玻片的保存
使用显微镜附带的镜油，或者是购 买的镜油（immersion oil）,而不 是香柏油（cedar oil）,则不需使 用二甲苯，直接使用镜头纸擦拭即 可 干燥后的玻片，按实验室序号及涂 片编号放置在玻片盒中，存放在阴 凉干燥环境中。处于潮湿炎热的环 境中）
六、评价痰涂片 位置 大小（10mm×20mm） 厚薄（刚好透过报纸的5号字体，镜下每个视 野20个左右细胞） 染色（肉眼看天蓝色,无红/紫色斑块） 脱落（＜10%痰膜面积）
单一的抗酸菌
“V”- 字形
成簇的抗酸菌
复染太浓造成的影响
适宜的复染
涂片检查视野顺序
痰涂片镜检操作规范
宁波市疾病预防控制中心 平国华
一、标本的来源与收集
初诊时留取标本数量 以三份标本的阳性检出例数作为 100％，留取一份标本的阳性检出 例数占全部阳性例数的80％，留取 两份标本的阳性检出例数占全部阳 性检出例数的95％。
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪样痰 血性痰 粘液性痰 水样痰 例数 55 46 529 92 阳性数 36 16 56 7 阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%