趋化实验论文

手指中待测菌化学趋向性测定
临床5班第四组
组长：罗冲（135588608476）
成员：唐本智姚秀英苟永英任艳倪凤媛张策秦君君
摘要目的：测定细菌的化学趋化性，研究手指中某菌的趋化性质，了解细菌对不同物质的敏感性方法：分离手指待测菌并培养成一定浊度的悬浊液，与半固体培养基混合，滴加葡萄糖、酒精、生理盐水测定其趋化性，同时用白色葡萄球菌、大肠杆菌做阴阳性对比，观察其浊度变化及其浊度变化区直径，然后分析实验结果。

结果：阴阳性对照正常，对75%酒精浊度变化区直径不同。

结论：大肠杆菌对75%酒精最敏感，手指待测菌次之，白色葡萄球菌不敏感。

手指中细菌对酒精敏感，可以用酒精作良好的消毒剂。

关键词趋化性酒精葡萄糖手指待测菌
细菌是微生物界中最庞大的一支队伍，数量最多，分布最广，对人体危害最大，当代很多重症难病很多都是细菌病毒引起的，比如小儿麻痹症，是由灰质脊髓炎菌引起，乙肝，艾滋病病毒等，所以对微生物的研究则显得很重要，而趋化作用正是对细菌的研究，可以得出物质对细菌的敏感性质。

材料与方法
1.材料
（1）、未知细菌悬液：手指直接擦拭，用分区划线法置于37摄氏度
培养18—24小时。

用消毒接种环取其菌落于肉汤培养基中培养18一24小时。

（2）、半固体培养基：将琼脂溶化于0.9%的NaCI溶液中,制成0.6%的琼脂基。

（3）、其他：大肠杆菌悬浊液、白色葡萄球菌悬浊液、5%葡萄糖、0.9%NaCl溶液、75%酒精
2、方法：
实验组：将此半固琼脂体溶化,冷却,待冷至40一50℃时,按半固体琼脂基、未知悬液1:1混匀,注入小培养皿中。

冷凝后在脂表面滴一滴75%的酒精,并在另一部位滴加等量0.9%NaCI、5%葡萄糖作为对照。

对照组1：将此半固琼脂体溶化,冷却,待冷至40一50℃时, 按半固体琼脂基、大肠杆菌悬浊液1:1混匀,注入小培养皿中。

冷凝后在脂表面滴一滴75%的酒精,并在另一部位滴加等量0.9%NaCI、5%葡萄糖作为对照。

对照组2: 将此半固琼脂体溶化,冷却,待冷至40一50℃时, 按半固体琼脂基、白色葡萄糖菌悬浊液1:1混匀,注入小培养皿中。

冷凝后在脂表面滴一滴75%的酒精,并在另一部位滴加等量0.9%NaCI、5%葡萄糖作为对照。

3.观察：
37℃孵育1小时,检查滴加酒精部分浊度变化。

浊度增加为阳性趋化性,局部透亮为阴性趋化性。

再用配有测微器的显微镜测定浊度变化区的直径。

也可用直径5mm的滤纸片,用75%的酒精润湿,并贴敷于琼脂基表面,观察结果(标准同上)。

此类纸片于37℃干燥后,在4℃可长期保存。

2.结果
2.1.趋化阴阳性测定
细菌在化学物质刺激时所表现的趋向性是运动细菌的本能。

细菌的趋化是指运动细菌趋向某些化学吸引剂(正向趋化反应)或避开某些化学驱斥剂(负向趋化反应)的移行行。

对于各种细菌对不同物质阴阳性趋化性质如下：
待测菌1 待测菌2 白色葡萄
球菌1 白色葡萄
球菌2
大肠杆菌
1
大肠杆菌
2
75%的酒精
-——/ / ——
5%葡萄糖+ + / / + +
0.9%NaCI/ / / / / /
结果表明这些细菌都有共同的特性，对75%酒精是阴性趋化作用，对5%葡萄糖是阳性趋化作用，对0.9%NaCI基本呈无作用。

因为趋化性质可以在一定程度上反应细菌对此物质的敏感性，所以得出细菌对于75%酒精都有一定的敏感度，在酒精区范围内明显比范围之外的细菌浊度要小的多；对5%葡萄糖基本无变化，甚至还有正趋化性质，范围内明显和范围之外细菌浊度无明显变化或范围内的比范围内的略显升高。

而白色葡萄球菌对任何化学物质都不表现出趋化性质，为本实验的阴性对照组。

2.2. 对于75%酒精区变化直径
由上面实验得出细菌对于75%酒精都是有阴性趋化作用的，但是其阴性趋化性质肯定是不同，下面记录阴性变化区的直径：
大肠杆菌葡萄球菌手指待测菌
各菌对于75%酒精区变化直径
此结果表示：大肠杆菌对75%酒精变化区直径在2CM左右，对白色葡萄球菌在1.3左右（约为液体滴的直径），对于手指待测菌基本在1.6左右。

大肠杆菌对75%酒精最敏感，手指待测菌次之，白色葡萄球菌不敏感。

3.结论
手指表面有运动细菌，对于酒精正趋化作用，对于葡萄糖是负趋化作用，对0.9% NaCI基本无影响。

其中不同细菌对75%酒精敏感程度不同，大肠杆菌对75%酒精最敏感，手指待测菌次之，白色葡萄球菌不敏感。

4.讨论
细菌在化学物质刺激时所表现的趋向性是运动细菌的本能。

细菌的趋化是指运动细菌趋向某些化学吸引剂(正向趋化反应)或避开某些化学驱斥剂(负向趋化反应)的移行行为。

大肠杆菌是运动细菌，大肠杆菌对于葡萄糖表现为正向趋化反应，对于酒精应表现为负向趋化反应，
对于氯化钠无明显变化。

趋化性质从微观的世界解释，是一种生物对外界物质做出的本能反应，趋利避害，为了自己更好的生存。

这一切的运动都基于这种菌有运动鞭毛，所以才能运动。

而本实验中的白色葡萄球菌则没有鞭毛，所以不表现出运动性质。

趋化实验应在都具有鞭毛的情况下比较其趋化性质，否则没有实际意义。

趋化性质本身就是反应的细菌的本质性质，对于不同的趋化直径可以得出细菌对于相应此物质的敏感性。

可利用敏感性在一些领域起相当大作用，比如消毒、水的净化等等。

此实验存在极大缺陷，导致我们结果不明显，缺陷项有：分离手指中细菌时，用接种环接种，不能保证接种的是纯菌，可能是几种或几十种细菌的混合体，对后面做的趋化实验影响极大；在滴加物质时，应该改为试剂用纸片浸润后贴在半固体琼脂上，而我们是直接滴加的，这会造成物质挥发，尤其是酒精，严重影响实验结果；孵育时间过短，仅一个小时，可能细菌还没来得及运动，应延长孵育时间。

参考文献
Escherichia Coli to Conflicting Stimuli. Science. 1974, 184: 1292-4。