猪骨髓树突状细胞的体外扩增及鉴定

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树突状细胞的体外培养及鉴定

【关键词】外周血；核细胞；突状细胞；外扩增单树体
【中图分类号１３２１Ｒ９．ｌ
【文献标பைடு நூலகம்码】Ａ
【文章编号】０４６７（０７０－１３０１０－８９２０）２０－３ｌ
ＣＩＩＩＴＥＡＮＤＩＴ、ＤＤＥＮＴⅡ ＤｏＦＤＥＮＲＩＣＤＴＩＣＥＬＬＳＩＶＴＮＩＲＯ
（．１河北工程学院医学院，河北邯郸
０６２；２北京大学基础医学院）５０９．
【摘要】目的：建立树突状细胞（ｅｄｉｃｃｌ，ｓ体外培养的方法。ｄｎｒｉｅｓＤＣ）ｔｌ方法：从正常人外周血分离获得单
核细胞，入ｒＧ加ｈＭ—ＣＦｌ０Ｕ／ｎ、ｈＬ４０Ｕ／体外培养。培养７的细胞，Ｓ００ｒｌｒｌ－５０ｍｌ取天采用免疫细胞化学方法和流式细胞仪测定细胞表型，并对其进行鉴定。结栗：免疫细胞化学方法显示，０／９￣以上培养７的细胞表，０天
ＭｏｏｙｅｒｂａｎｄｆｏｎｒｌｕｎｐｒｐｅａｌｏｎｕｔａｅｎｖｔｏｗｉＧＭ－Ｆ１０Ｕ／ｎｃｔｓｗｅｅｏｔｉｅｍｏｍａｍａｅｈｒｌｏｄａｄｃｌｖｔｄ／ｉｔｒｒｈｉｂｉｒｈｈＣＳ００
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ＶＯ．４Ｎｏ．２０１２．２０７
Ｊ０ＵＲＮＡＬＯＦＨＥＣＮＧＤＥＭＥＣＡＬＣＯＬＧＥＤＩＬＥ

猪血中经典和浆细胞样树突状细胞的表征和转录

DC-1: 2016 猪血中经典和浆细胞样树突状细胞的表征和转录组学分析揭示了显著的物种特异性差异1 引言猪pDC 转录组谱分析表明，pDC与cDC的距离比pDC与单核细胞的距离更远。

猪DC子集对TLR配体的反应表明，pDC 是TNF-α，IL-12p40 和IFN-α的最重要的来源，而cDC主要在在MHC 和共刺激分子表达方面发挥作用。

cDC中CD40和CD86的上调受到pDC的影响甚至取决于pDC的存在，特别是对于TLR 7和TLR 9配体而言。

单核巨噬细胞系统（MPS）是先天性免疫细胞的复杂网络。

先天性免疫细胞通过特异性表达（可识别保守的微生物相关分子模式的）多种模式识别受体（PRR）来感知环境。

基于个体发育，MPS可分为单核细胞及其衍生细胞，组织巨噬细胞和bona fide树突状细胞（DC）（1）。

小鼠的研究表明，单核细胞和DC来源于骨髓中的造血干细胞（2 - 4）。

DC是专业的APC，可连接先天性和适应性免疫反应，并根据接收到的先天信号和暴露到组织微环境中的信号来诱发免疫反应。

pDC【通过产生大量I型IFN（尤其是IFN-α）】对于抗病毒反应特别重要，但cDC在提呈Ag和激活幼稚T细胞方面最有效。

在小鼠中，功能方面，cDC1只与CD8 T细胞进行抗原交叉递呈反应，能够有效地促进Th1的应答反应（3，5）；CDC2能有效促进Th17 和Th2的免疫应答（3，5）。

这些cDC子集的每个已知的功能都不互斥，因为cDC网络是具有重叠特性。

关于先天免疫反应，DC亚群的表达与TLRs表达有所不同。

尽管某些表达模式在小鼠和人类之间很常见，例如由pDCs过表达的TLR7和TLR9，由cDC1亚群表达的TLR3，但仍观察到一些差异。

例如，TLR9在人类中仅限于pDC表达，但在小鼠中也由cDC表达（6）。

cDC1的关键标记物，在小鼠中是CD8α和CD103，而在人类中是CD141。

在这两个物种中，cDC1特异性表达趋化因子受体XCR1 和C型凝集素受体CLEC9A的表达。

dc细胞培养方法

dc细胞培养方法（原创版3篇）《dc细胞培养方法》篇1DC 细胞（树突状细胞）是一种重要的免疫细胞，在机体内发挥着呈递抗原和启动免疫应答的重要作用。

然而，由于DC 细胞在体内分布散，含量少，分离和扩增具有一定的难度。

因此，体外扩增和培养DC 细胞成为了研究和应用的必经之路。

DC 细胞的培养方法通常包括以下步骤：1. 获取原始DC 细胞：可以从外周血、骨髓、脾脏等组织中分离获取DC 细胞。

常用的方法是使用抗CD14 和抗CD3 的磁珠负选，然后再使用抗CD11c 和抗CD19 的抗体阳性选择，从而得到纯化的DC 细胞。

2. 细胞培养：将分离得到的DC 细胞接种到培养皿中，加入适量的完全培养基（如RPMI-1640、DMEM 等）和细胞因子（如IL-4、IL-12、GM-CSF 等），然后在37℃的培养箱中培养。

通常情况下，DC 细胞在体外可以持续培养数天至数十天，但需要注意定期更换培养液和检查细胞生长状态。

3. 细胞分化：在培养过程中，DC 细胞会逐渐分化为成熟的DC 细胞。

为了评估DC 细胞的分化程度，可以使用流式细胞仪检测细胞表面标记物的表达情况，如CD11c、CD19、CD80、CD86 等。

4. 细胞扩增：在培养过程中，可以通过加入细胞因子、激素、细胞激活剂等物质来促进DC 细胞的扩增。

此外，也可以使用体外扩增技术，如流式细胞术、激光激活细胞扩增技术等来增加DC 细胞的数量。

《dc细胞培养方法》篇2DC 细胞（树突状细胞）是一种重要的免疫细胞，在机体内发挥着呈递抗原和启动免疫应答的重要作用。

然而，由于DC 细胞在体内分布散，含量少，且从体内分离费时费力，得到的数量也很少，因此体外扩增成为研究和应用的必经之路。

DC 细胞的培养方法通常包括以下步骤：1. 获取原始材料：可以从外周血、骨髓、脐带血等来源中获取DC 细胞。

2. 细胞分离：通过密度梯度离心、免疫磁性分选等方法，从混合细胞中分离出DC 细胞。

树突状细胞的研究进展

树突状细胞的研究进展许亚明,池诏丞,任明综述,程龙伟审校(吉林省肿瘤医院腹二科,吉林长春130012) [关键词]权突状细胞;研究进展1973年Ste i m an和Cohn[1]首次从脾脏中分离出一类与粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞形态和功都不同的白细胞,因其细胞膜向外伸出,形成与神经细胞轴突相似的膜性树状突起,故而命名为树突状细胞(dendritic cells,DCs)。

此后的研究发现DC s在免疫应答的首要环节-抗原提呈中扮演着重要的角色,是目前公认的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞(an tigen-presen ting ce l,l APC)。

它能激活静息型T细胞,主要参与细胞免疫和T细胞依赖的体液免疫反应,在抗肿瘤免疫应答中起关键作用。

因此,DC s被认为是联系天然防御功能和获得性免疫的关键,近年来受到越来越多的重视。

1DC s的来源与分布DCs是具有典型的树突状形态、膜表面高表达MHC-I 类和MHC-Ò类分子、能移行至淋巴器官,刺激初始型T细胞增殖活化,并且具有一些相对特异性表面标志的一类细胞。

DC s起源于骨髓CD34+细胞,广泛分布于除脑外的全身各脏器,数量较少,仅占外周血单核细胞的1%以下[2]。

DC s前体细胞由骨髓进入外周血,再分布到全身各组织,根椐其移行部位不同而命名不同:¹滤泡树突状细胞,主要定位于淋巴滤泡,是淋巴结浅皮质区淋巴滤泡内的主要APC。

其树突能有效地捕捉复合形式的抗原,并将抗原长期保留在其表面,以维持二级滤泡的记忆功能,也与B记忆细胞的产生有关;º并指状树突细胞,定位于淋巴组织胸腺依赖区,是淋巴组织胸腺依赖区的重要APC,其表面缺乏Ig受体和C3受体,但富含MH2 CI类和Ò类抗原;»朗汉斯巨细胞,位于皮肤和胃肠上皮层,是这些部位的重要APC,其表面有丰富的MHC I类和Ò类抗原,胞浆内有birbeck颗粒,此为LC的重要特征;¼隐蔽细胞,分布于输入淋巴管。

自体外周血CD34+干细胞来源树突状细胞体外扩增治疗恶性体腔积液

自体外周血CD34+干细胞来源树突状细胞体外扩增治疗恶性体腔积液邸立军;任军;宋国红;余靖;方健;车利;祝毓琳【期刊名称】《北京大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(040)005【摘要】目的:研究CD34+造血干细胞来源树突状细胞体外培养扩增后,经引流管回输治疗恶性体腔积液的疗效和安全性.方法:自2004年6月至2006年3月,我们采用化疗加粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或G-CSF方案动员采集恶性肿瘤患者外周血CD34+干细胞,经体外白细胞介素-4(IL-4)、粒单细胞集落刺激因子(GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)诱导分化为树突状细胞,培养10～14天以促使其成熟和扩增.每周经引流管回输入患者体腔内一次,连续3周为一疗程,观察治疗后患者体腔积液的变化及治疗的不良反应.结果:治疗23例患者共26处体腔积液,其中完伞缓解(CR)1例,部分缓解(PR)13例,稳定(SD)7例,进展(PD)5例,有效率54%(14/26),获益率(CR+PR+SD)81%,有效及稳定患者的中位缓解时间为20周(4～45周),82%的患者治疗后卡氏(KPS)评分升高,初治患者有效率(CR+PR)为50%,复治患者有效率(CR+PR)为57%.治疗巾无严重不良反应发生.结论:树突状细胞免疫治疗恶性体腔积液的疗效肯定,是一种极具希望的治疗方法.【总页数】3页(P486-488)【作者】邸立军;任军;宋国红;余靖;方健;车利;祝毓琳【作者单位】北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142;北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所内科,北京,100142【正文语种】中文【中图分类】R730.51【相关文献】1.树突状细胞体腔回输治疗恶性体腔积液的疗效观察及护理 [J], 尤渺宁;任军;邸立军;张红;商靖2.自体骨髓间充质干细胞联合自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病 [J], 王景昌;白海;魏敦宏;李鸣;温玉;黄克斌;王存邦3.间充质干细胞体外扩增联合自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病 [J], 孟丽娟;李建勇;陆化;吴汉新;吴冠宇;朱雨;刘澎;黄峻4.自体骨髓间充质干细胞联合自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病 [J], 王景昌;白海;魏敦宏;李鸣;温玉;黄克斌;王存邦5.恶性胸腔积液来源树突状细胞对自体肿瘤浸润性淋巴细胞的作用 [J], 曾波航;陈静琦;黄慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导扩增和鉴定

为开展ＤＣ的相关实验研究提供大量稳定的细胞来源。关键词：树突状细胞；诱导；鉴定
中图分类号：Ｒ３２９．２ＤｏＩ：１０．３８７０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２ — ０７４１．２Ｏ１３．０４．００３
ＩｎｖｉｔｒｏＩｎｄｕｃｔｉｏｎ，ＥｘｐａｎｓｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｏｕｓｅＢｏｎｅＭａｒｒｏｗ— ｄｅｒｉｖｅｄＤｅｎｄｒｉｔｉｃＣｅｌｌｓ
ｉｎａｎａｔｔｅｍｐｔｔｏｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｍａｔｕｒｉｔｙｏｆＤＣｓｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｔｈｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｉｃｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｏｎｅｍａｒｒｏｗｃｅｌｌｓｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏＤＣｓｉｎｖｉｔｒｏｂｙｕｓｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｍｏｕｓｅｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ（ｒｍＧＭＣＳＦ）ａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｍｏｕｓｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ４（ｒｍｌＩ４）．Ａｆｔｅｒ２４ｈＩＰＳｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ。ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＤＣｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｌｉｇｈｔｉｎｖｅｒｔｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄａｎｄａｔｔａｃｈｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＣｓｕｒｆａｃｅｍａｒｋｅｒｓｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．ＴｈｅｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｒｅａｃｔｉｏｎｗａｓｕｓｅｄｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｌｌｓｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆａｌｌｏｇｅｎｅｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＯｎｄａｙ３ｏｆｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅ，ａ

大鼠骨髓来源树突状细胞的体外培养与鉴定

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ａｄａＣｌｇ， ’ｎ７０７，ｈｎ；ｅｔＰｔｏｇ，ｕａ Байду номын сангаас ｄａｎｖｒｔ；ｅａｏａｈｅｔ，ｉｔｏｉｌｆｌ — ｎＭｅｉｌｏｅｅａ１０７ＣｉａｐａｈｌＦｊｎＭｅｉｌｉｓｙｐｔｔｙＣｎｒＦｒｓｔｉｃｌＤｏｆｏｙｉｃＵｅｉＨｐｅｓＨｐａＡａｉ
ｔｕａｄａｎｖｒｔ；ＣｒｓｏｄｎｕｒＥｍｉａｍｎａｉ加ｅｕｃ）ｅｔＦｆｎＭｅｉｌｉｓｙ ’ ｏｒｐｎｉａｔ，— ａｌｉｉ＠ｍｌｄｏｉｃＵｅｉｅｇｈｏ：．ｄ．ａＡｓａｔＯｊｃｖＴｅｋｆｅｅｅｈｄｏｌｒｇｉｕｉｇｎｍｌｙｇｄｎｒｉｃｌｔｏｏｅｒｗｓｍｂｔｃ：ｂｔｅｏｓｅｒａｔｒｔｏｆｕｔｎ，ｄｃｄａｐｉｉｅｄｔｅｌｉｖｒｆｍｂｎｒｔｒｅｉｏｂｔｍｃｕｉｎｎａｆｎｉｃｓｎｉｏｒｍａｏｅ
的树突状细胞。
通过运用大鼠淋巴细胞分离液和培养过程的手法筛选相结合能培养、诱导、扩增大量
关键词：树突状细胞；免疫耐受；大鼠中图分类号：Ｒ２．８３９２文献标志码：Ａ文章编号：１０６１（００００４００７— ６１２１）８— ７０— ５
・
７０・４
酉医科太学学报（ＳａｘＭｄＵｉ００年８。１（Ｊｈｎｉｅｎ）２１ｖ月４８
Ｄ：０．９９ＪＩＳ１０ＯＩ１３６／．ＳＮ．０７—６１．０１０．２６２０．８０４１

猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究

猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究引言：猪胚胎干细胞 (pig embryonic stem cells, pESCs) 是具有自我更新和多向分化潜能的一类细胞，它们可以分化为各种细胞类型，包括神经细胞、心肌细胞和肝细胞等。

猪胚胎干细胞对于研究疾病机制、药物筛选以及组织器官的修复和再生具有重要意义。

本文将深入探讨猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究，以期为相关领域的研究提供参考。

一、猪胚胎干细胞的分离和培养1.1 选择合适的胚胎阶段猪胚胎干细胞的分离最好选择在初中胚胎期 (early to mid-stage) 进行，此时胚胎内细胞的多能性较大。

通常使用体外受精的方法获得猪胚胎，进而通过体外培养技术将胚胎发育至所需的阶段。

1.2 分离和培养将胚胎置于去膜卵黄体外囊内培养基中，经过适当的处理后，即可分离出内细胞团 (inner cell mass, ICM)。

在I型胶原酶中加入0.1%胰酶，由于细胞外基质的断裂，使得内细胞团可以被完全获得。

所获得的内细胞团可用于培养和传代，从而分离出猪胚胎干细胞。

二、猪胚胎干细胞的鉴定为了确保得到真正的猪胚胎干细胞，需要通过特定的标记和鉴定方法进行确认。

2.1 形态学特征猪胚胎干细胞的具有原始胚胎细胞的形态特征：小而柔软的圆形细胞，细胞质丰富、核大而圆。

通过显微镜观察，可以初步判断细胞的特性。

2.2 基因表达使用荧光定量PCR等方法，检测特定的基因如Oct-4、Nanog和Sox2的表达水平，以确定细胞是否具有胚胎干细胞的特征。

2.3 免疫细胞化学法通过免疫染色技术，检测细胞表面或胞浆内的特定标记物，如Oct-4、CD9和SSEA-4。

根据标记物的阳性和阴性表达，可以确定细胞是否为猪胚胎干细胞。

三、猪胚胎干细胞的分化猪胚胎干细胞具有多向分化的潜能，可以分化为多种细胞类型，从而为组织器官修复和再生研究提供基础。

树突状细胞体外培养各阶段作用因子研究进展

（ａｒＤｍＤ低表达与吞噬有关的受体，ｍｔｅＣ，Ｃ）ｕ高表达Ｍ — ＨＣＩ、ＣＩＣＳ、Ｄ６Ｃ４、Ｄ４和热休克蛋白等免疫ＭＨ —Ｉ、Ｄ０Ｃ８、Ｄ０Ｃ５
刺激分子，在一定条件下ｍＣ能够分泌ＴｌＤｈ细胞因子，激活初始Ｔ细胞，发挥抗肿瘤作用因此，。促成熟阶段很重要，常用促成熟物质有以下几种。３１细胞因子．实验表明Ｉ型干扰素（Ｆ — ＩＮ一）ＩＮ、Ｆ１可增３
可获得活化ＤＣ的许多典型特征。
３促成熟阶段
介素（Ｌ一Ｉ）２和干扰素（Ｆ一促进Ｔ细胞介导的细胞毒作ＩＮ）
用，启动Ｔｌｈ应答，于肿瘤免疫治疗；用另一方面分泌Ｉ一、Ｌ４Ｉ＿、Ｌ６和Ｉ－０等细胞因子，促进Ｂ细胞分泌保护性抗Ｌ５Ｉ＿Ｌ１体，启动Ｔ２应答，ｈ用于诱导免疫耐受。ＤＣ诱导Ｔ细胞分化主要取决于培养体系中的环境因素或活化信号＿１１。笔者主要介绍用于肿瘤免疫治疗ＤＣ的培养及各阶段的作用因子。
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９６５
ＴａｊｄＪｅ０７ｏ３ｏ１ｉｉＭｅ，Ｄｃ２０，Ｖｌ５Ｎ２ｎｎ
综讲述与座
树突状细胞体外培养各阶段作用因子研究进展
赵园园
关键词树突细胞细胞培养技术
张淑敏
综述［文献类型】
增作用且联合应用显著高于单因子作用１Ｄ４胞在培养２１。Ｃ３堋
过程中出现２种不同ＤＣ中间前体，Ｄ４Ｃａ胞和Ｃ４Ｃ１￣Ｄｌ堋Ｄ１Ｃａ细胞，ｎａｏ等报道了ＳＦＴＯ、ＬＩ一Ｄｌ一ＥｃｂＣ、ＰＦ、Ｌ３和ＳＦＣ、ＴＯ、ＬＩ一ＰＦ、Ｌ６这两种因子组合分别对应上述两种前体表现出良好的扩增作用；并且证明Ｉ一Ｌ６对Ｃ１－Ｄａ细胞增殖Ｄ４Ｃｌ

小鼠髓源性树突状细胞的体外扩增及生物学特性的鉴定

余昆，欣△，青松，苟周杨华安，伟营，仲夏阳（重庆医科大学附属第一医院泌尿外科４０１）００６
【要】目的以小鼠骨髓细胞为前体，立一种高效、便的体外扩增、离培养树突状细胞（Ｃ的方法。方法实验分摘建简分Ｄ）
ｔｌｈａｍＴＮＦ Ⅱ）ｏｎｔｉｔｙｆｒｓｉｕｌｔｎｏｒｙｅｇｈｏｕｒｎｄｔｔｉｈＭ／ｏｕｐｗａｅａｏｎｔｏｓｗｉｈｏｏｒａｐ（ｒｈｅｆｆｈｄａｏｔｍａｉｇｆｔｉｔｈｓａｈａｎｔｅＧ４ｇｒｓｕｓｄｓｃｒｌｔｕｔｔｅｔｅｔｒａｍｎ．Ｔｈｅｓｓｎｎａｏｅｙａｕｐｅｄｉｇｎｄｌｏｓｌｄｈｅｅｅｌｗｅｅｃｌｃｅｔｉｔｄｓｖｎｔｙｆｘｍｉｇｗｉｈｃｎｎｎｌｃｒｎｔｃｌｒｏｌｅｔｄｏｎｈｅｆｆｈａｎｅｅｈｄａｓｏｒｅａｎｔｓａｉｇｅｅ
［ｓｒｃ］ＯｂｅｔｖＴｏｅｔｂｉｈａｆｅｔｅａｄｃｎｅｉｎｔｏｉｏｆｒｉｄｃｉｎａｄａｌｉａｉｎｏｅｄｉｉｅｌＡｂｔａｔｊｃｉｅｓａｌｎｅｆｃｉｎｏｖｎｅｔｍｅｈｄｉｖｔｏｕｔｎｍｐｉｃｔｆｄｎｒｔｅｌｓｖｎｒｎｏｆｏｃ（ＤＣ）ｂｓｎｕｅｂｎｒｏｅ１ａｈｒｃｒｏｅ１ＭｅｈｄＴｈｘｅｉｎｒｉｉｅｎｏｔｒｕｓｙｕｉｇｍｏｓｏｅｍａｒｗｅｌｓｔｅｐｅｕｓｒｃｌ．ｔｏｓｅｅｐｒｍｅｔｗｅｅｄｖｄｄｉｔｗｏｇｏｐ：ＧＭ／ｎ４ａｄＧＭ／．ｅｐｅｕｓｒｃｌｗｅｅｃｌｕｅｔｅｏｉａｔｍｏｓｒｎｌｃｔ— ｃｏｈｇｏｏｙｓｉｌｔｇｆｃｏｒ４ｄＴｈｒｃｒｏｅｌｒｕｔｒｄｗｉｒｃｍｂｎｎｕｅｇａｕｏｙｅｍａｒｐａｅｃｌｎｔｍｕａｉａｔｒ（ｍＧＭ— Ｆ）ｈｎＣＳａｄｉｔｒｅｋｎ４ｒＩ４ｎｖｔｏａｄｄｎｒｔｅＩｎｔｅＧＭ／ｒｕｒｒａｅｔｅｏｉａｔｎｏｓｕｒｎｃｏｉｆｃｎｎｅ［ｕｉ一（ｍＩ一）ｉｉｒ，ｎｅｄｉｃｃｌｉｈｉ４ｑｇｏｐｗｅｅｔｅｔｄｗｉｒｃｍｂｎｎｌｕｅｔｍｏｅｒｓｓａｈ

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用树突状细胞的体外培养主要通过分离外周血单核细胞（PBMCs）或骨髓细胞，经过不同的培养条件，使其分化成树突状细胞。

一种常用的方法是使用人造蛋白质GM-CSF和IL-4使PBMCs分化为树突状细胞。

此外，使用细胞因子如TNF-α和IL-1β也可以促进树突状细胞的分化。

通过培养条件的调控，可以获得成熟的树突状细胞，以及具有抗原递呈和免疫调节功能的活化状态。

经过体外培养的树突状细胞可以被用于诱导抗肿瘤免疫作用。

树突状细胞具有特异性抗原递呈的能力，可以对采集的肿瘤抗原进行处理和递呈给T细胞，从而激活T细胞的抗肿瘤免疫应答。

研究表明，经过树突状细胞处理的肿瘤抗原能够激活肿瘤特异性T细胞，增强T细胞的杀伤活性，从而抑制肿瘤生长和扩散。

此外，树突状细胞还可以通过诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的产生来增强抗肿瘤免疫。

树突状细胞经过处理后，可以递呈肿瘤相关抗原给T细胞，从而激活和扩增CTL。

这些CTL具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力，从而对肿瘤产生直接的抗肿瘤作用。

研究表明，经过树突状细胞处理的肿瘤细胞可以显著增加CTL的活性，抑制肿瘤生长和扩散。

此外，树突状细胞还可以通过刺激NK细胞的活性来增强抗肿瘤免疫。

研究发现，树突状细胞可以分泌细胞因子，如IL-12和IL-15，这些细胞因子可以激活NK细胞的活性，并促进其对肿瘤细胞的杀伤作用。

此外，树突状细胞还可以通过递呈肿瘤相关抗原给NK细胞，增强其对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。

因此，通过刺激NK细胞的活性，树突状细胞可以对肿瘤产生直接的抗肿瘤作用。

综上所述，树突状细胞的体外培养技术提供了一种重要的方法来诱导抗肿瘤免疫作用。

通过处理肿瘤抗原并递呈给T细胞、CTL和NK细胞，树突状细胞能够激活并增强这些免疫细胞的活性，从而抑制肿瘤生长和扩散。

因此，树突状细胞体外培养技术对于发展抗肿瘤免疫治疗具有重要的意义。

进一步的研究和应用将继续推动这一领域的发展，为抗肿瘤治疗提供更多的选择和希望。

猪树突状细胞的体外扩增

第３卷第４期ｌ
２１００年ｌ２月
淮北煤炭师范学院学报（自然科学版）
ＪｕｎｌｆａｅＣａＩｄｓｙＴａｈｒＣＨｇＮｔｒｌｃｅｃ）ｏｒａｏｉｉｏｕｔｅｃｅｓｏｅｅ（ａｕａＳｉｎｅＨｕｂｌｎｒ
发挥十分重要的作用，但至今对猪ＤＧ的了解较少．本研究从猪外周血中分离获得单核细胞，分别加入１０ｎ／Ｌ５ｇｍｐＭ —ＣＦ和１０Ｕ／Ｉ４体外培养６ｄ后诱导出大量Ｄ，过显微镜观察可见其细胞表面具有典型的树突状ＧＳ０ｍＬｐＬ一，Ｃ通突起，呈毛刺状．Ｄ猪Ｃ的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定坚实的基础．
１显微镜观察．３
收稿日期：００—０２２１８— ０基金项目：安徽省自然科学基金项目（Ｊ００９）安徽省优秀青年人才基金项目（００ＱＬ８）Ｋ２１ＢＩ２；２１ＳＲ０２
１材料与方法
１主要试剂．１
ｐＭ —ＣＦｐＬ一、巴细胞分离液（ｉｏ，．７／）Ｓｇｍ公司产品．ＭＥｄｌｅｏ８ｏｉＧＳ、Ｉ４淋Ｆｅｌ１０７ｇｍＬ为ｉｌｎＤＭ（ｕｂｅｄ— ｅｍｌａｌｍｄ）ｆｄｅｇｅｉｍ完全培养基包括：酚红ＤＥｅｅｕ无ＭＭ培养基（ｉｏ司）１０ｍ／Ｇｂ公ｃ，０ＬＬ灭活的胎牛血清（ｉｏＧｂｃ公司）１０ＵｍＬ青霉素，０ｇｍＬ链霉素．，０／１０ｌ／ｘ１Ｄ．２Ｃ体外培养从颈下静脉抽取３４月龄无特异性病原体（ｅｉｃｐｔｇｎｆｅＳＦ猪的外周血， — ｓｃｉａｏｅｅ，Ｐ）ｐｆｈｒ加人０２．— ０４ｇＬ．／血液抗凝剂—— 乙二胺四乙酸（ｔｌｅｄｍｎｔａｅｃａｉＥＴ）再加入等体积无菌磷酸盐ｅｙｎｉｉｔｒｃｔｃ，ＤＡ，ｈｅａｅｅａｉｄ缓冲液（ｈｓｈｔｂｆｒａｎ，Ｂ）ｐ．）滴加到淋巴细胞分离液上层，ｐｏａｕｅｉＰＳ（Ｈ７２，ｐｅｆｓｅｌ室温２００ｒｍｎ０／ｉ离心１ｒｎ５ａ，ｉ吸出界面细胞，ＰＳ用Ｂ洗涤两次，ＭＭ完全培养基悬浮细胞，ＤＥ加入到２孔板中，４每孔２０细胞／Ｌ培 ×１ｍ养基，７℃ ５／Ｏ温箱中培养１３０ｍＬＬＣ６ｈ后弃去培养基，ＭＥ完全培养基轻轻冲洗培养板一次，ＤＭ吸去非贴壁细胞，即获得贴壁的单核细胞，孔加入１ｍＬＤＭ完全培养基、Ｇ每ＭＥｐＭ—ＣＦ１０ｎ／）ｐＬ一４Ｓ（５ｇｍＬ、ｌ（０／Ｌ，１０Ｕｍ）隔天半量换液一次，养６ｄ后收集悬浮细胞，培通过显微镜检测其形态．

体外诱导树突状细胞活化的方法 -回复

体外诱导树突状细胞活化的方法-回复体外诱导树突状细胞（DC）活化的方法是一种重要的免疫治疗策略，可用于诱导或增强机体免疫应答。

树突状细胞是一类重要的抗原递呈细胞，其在促进免疫应答中起着关键的作用。

体外诱导树突状细胞活化的方法能够激活树突状细胞，使其能够有效地刺激T淋巴细胞，从而提高机体免疫应答的效果。

本文将详细介绍体外诱导树突状细胞活化的各个步骤和方法。

第一步：树突状细胞的获取与分离体外诱导树突状细胞活化的第一步是获取和分离树突状细胞。

树突状细胞可以来源于外周血、骨髓、脾脏等组织。

其中，外周血中的单个核细胞（PBMC）是最常用的来源。

获取PBMC可以通过密度梯度离心法，如Ficoll离心法，将血液样品混合与密度梯度介质，离心分离出PBMC。

而只限于使用糖胶（Dextran）纳米颗粒可以选择短时间分离出PBMC。

得到PBMC后，可以利用磁珠柱、细胞排序术等方法将树突状细胞分离出来。

第二步：树突状细胞的培养与扩增获得树突状细胞后，需要进行培养和扩增，以增加细胞数量，以便进行后续实验。

最常用的培养基是RPMI-1640，其中含有适量的常规培养基、胎牛血清（FBS）和生长因子，如GM-CSF（粒巢集落刺激因子）和IL-4（白细胞介素）。

通过培养基的添加，树突状细胞可以在体外环境中生长和繁殖。

第三步：树突状细胞的活化树突状细胞的活化是体外诱导其活化的关键一步。

目前常用的方法有两种：一种是使用细胞因子刺激，另一种是使用特定的抗原刺激。

第一种方法中，通过添加特定的细胞因子来活化树突状细胞。

最常用的细胞因子包括GM-CSF、IL-4和TNF-α等。

这些因子可以激活树突状细胞，促使其产生更多的树突状突起，并增强树突状细胞的抗原递呈能力。

第二种方法中，使用特定的抗原刺激树突状细胞。

这需要事先知道与所需刺激的免疫应答相关的抗原并进行合成。

抗原可以是蛋白质、肽段或者核酸等，需要装载在适当的载体上。

然后将这些载体与树突状细胞共同培养，使抗原与树突状细胞内的抗原递呈分子结合，从而激活树突状细胞。

树突状细胞的培养及成熟的鉴定

树突状细胞的培养及成熟的鉴定李望;张升宁;冉江华;苏晓三;李来邦;陈奕明【期刊名称】《昆明医科大学学报》【年(卷),期】2015(036)003【摘要】目的探讨人体外周血树突状细胞在体外培养诱导其成熟的方法,通过得到成熟的细胞培养技术,对树突状细胞功能的研究奠定实验基础.方法通过Ficoll-Hypaque梯度离心法得到单个核细胞,再诱导使其分化、扩增、纯化形成稳定的树突状细胞,通过树突状细胞自身形态、特异性表型,抗原摄取能力,鉴别培养的细胞,从而得到具有典型特征的树突状细胞.结果树突状细胞培养第7天,加入LPS后,倒置显微镜及扫描电镜下观察,树突状细胞成熟中,细胞胞质增大,细胞膜表面能形成大量树突状突起,表面标志物CD80、CD86、CD11c、HLA-DR的表达增高(P＜0.05),共聚焦显微镜下,成熟的树突状细胞对抗原的吞噬能力减弱.结论 Ficoll-Hypaque 梯度离心法能够得到稳定的树突状细胞体外培养体系.【总页数】5页(P34-37,44)【作者】李望;张升宁;冉江华;苏晓三;李来邦;陈奕明【作者单位】昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明 650101;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明 650101;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明650101;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明 650101;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明 650101;昆明市第一人民医院肝胆胰一科,云南昆明 650101【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.恒河猴骨髓来源未成熟树突状细胞的培养及鉴定 [J], 支良;陈鹏;李朝战;李昌亮;关兴;褚朋;阿永俊2.未成熟树突状细胞快速分离与体外诱导培养及其鉴定研究 [J], 朱娜;王海桃;李昌;李海僖;郭焱;金宁一3.树突状细胞的培养及成熟的鉴定 [J], 李望;张升宁;冉江华;苏晓三;李来邦;陈奕明;4.小鼠骨髓源半成熟树突状细胞的培养与初步鉴定 [J], 付必莽;何晓顺;余思;胡安斌;马毅;黄洁夫5.大鼠未成熟树突状细胞体外分离、扩增与鉴定 [J], 丁英俊;程翔;廖玉华;唐婷婷;陈勇;姚瑞;谢江娇;余娴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实验项目二住骨髓间充质干细胞的倍增时间与生长曲线的测定

PMSCs生长曲线和倍增时间的测定【1】来自猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化：取生长状况良好的P1、P3、P5、P9代细胞，用0.25％胰酶消化液,在37℃消化1-3min，制成单细胞悬液,然后以5x104个/ml密度接种到30个直径为35mm培养皿中,随机分成10组,每组3皿，每天检测一组中每皿的细胞总数，取3个皿的均值,如此至第10组结束,细胞技术如下(2004,司徒镇强）即一天消化3个组，共消化10天.P1，P3,P5,P9均如此,每代30个皿,共计120个皿.细胞群体倍增时间（PDT）=（t—t0）lg2/(lgN t-lgN0) t0培养起始时间，t,培养终止时间；N0培养初始细胞数，N t培养终止细胞数。

【2】增强型绿色荧光蛋白转染猪骨髓间充质干细胞特性观察用0.25％胰酶将转染后的细胞克隆消化为单个细胞，用PBS洗2遍，1x105个细胞加入75μl破膜剂，振荡10s,加入PI染料700μl,室温避光30min,上机检测；选同期培养的为转染细胞为对照组，比较EGFP转染对细胞增殖的影响,分别计算出静止期G0/G1 ,增殖期S%，和G2/M【3】两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较分别取两组0，1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液,接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5％CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT （2mg/ml)20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min，用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492),以OD（492）值为纵坐标,时间为横坐标绘制生长曲线.【4】人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性研究取不同代数细胞,调整细胞浓度为2x104/ml后,接种于96孔培养板，置37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱培养后，用胰酶-EDTA进行消化，用台盼蓝拒染法计数活细胞,每天取12复孔,共7天；根据计数结果绘制细胞生长曲线。

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关键词：突状细胞；树分离纯化中图法分类号：３９２；３４２Ｒ２．４Ｒ９文献标识码：Ａ
成功地建立了体外大量扩增猪骨髓
Ａｍｐｉｃｔｎａｄｉｅｔｃｔｎｏｏｃｎｏｅｍａｒｗ－ｅｌｅｅｄｉｃｃｌｎｖｔｏｌａｉｎｄｎｉａｉｆｐｒｉｅｂｎｒｏｄｒｖｄｄｎｒｔｅｌｉｉｉｆｏ，ｅｄｉｅｓＤ）ｒｏｉａａｏｎｄｅｏｂｌｉｌｉｍｎｌｇａｃａａｔｉｓｏｐｈｄｎｒｃｃｌ（Ｃｆｍｐｒａｂｅｌｌｗａｄｙｔｉｍｒｏｏｅ，ｕｏｏｉｌｈｒｅ￣ｅａｉｉｔｌｏｃｅｏｔｗｑｈｒｐｇａｍｃｃｒｒｉｌｅｅｓａｄ帅ａＩｓａｔｎｇｄｎｌｌｔ．ｌｗｒｃｌｒｄ￣ｈｇｎｌｙ－ａ－ｏｔＦＩｅｒｉａｉｔ１ｓｅｅ：ｓｅｕｅ，ｔｒｕｅｅｍｃｐａｏｒｅＴｅ￣ｄ，ｌｅｔｃｅｕｉａｏｔ
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第７４卷第３期
２Ｏ０２年３月
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报
Ｖ．２４．Ｎｏ．３
ＡＣＡＡＡＭＬＥＭＥＣＮＭＩＩＡＲＳＴＲＬ．ＴＣＤＥ￣ＤＩＩＡＥＬＴＩＥＴａＥ
Ｍａ．２０ｒ０２
所，重庆４０３）０ｏ８
提要：目的建立体外大量扩增猪树突状细胞（ｅｄｉｅｓＤ）Ｄｎｒｃｃｌ，Ｃ的方法，ｔｌｉ井进行形态学和免疫学性质鉴定方法制备猪骨髓细胞，分离单个棱细胞，以猪重组Ｇ —ＳＭＣＦ诱导培养，周后收集悬浮细胞，行形态学观察和免疫细胞表面分子浆定，及功２进能检测。结果体外培养富集的猪Ｄｃ达７％～８％，００具有典型的形态、表型及功能。结论ＤＣ的方法．为研究其在异种移植及诱导免疫耐受中的作用打下基础。
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文章编号：０－４２０）３２５３１ｏ＿ｌ０２０ — ５４ｏ￣０３
论著
（第三军医大学附属西南医院烧伤研究
猪骨髓树突状细胞的体外扩增及鉴定
马兵，吴军．郑峻松，易绍萱，贺伟峰，杨世昕．罗高兴，陈希炜，雷晓