植物组织培养园艺
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2.3.1 器皿和器具的洗涤 P19
1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和 洗洁精
2.常用清洗方法 洗涤剂清洗法 超声波清洗法
27
3.玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿的清洗 用过的培养器皿的清洗 已经污染的玻璃器皿的清洗
28
2.3.2 灭菌
2.3.2.1 器具的灭菌方法 干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法） 火焰灼烧灭菌法
⒈玻璃器皿 ⒉器械 镊子类 解剖刀 剪刀 接种针 细菌过滤器
7பைடு நூலகம்
2.1.2.2 仪器设备 ⒈无菌操作设备
超净工作台
8
高压蒸汽灭菌器
9
电热烘箱 接种器具消毒器
10
⒉培养设备
空调 加湿器和去湿机 定时器 培养架 摇床或旋转床 培养箱
11
⒊药品贮存和配制仪器设备 冰箱 天平 酸度计 ⒋观察分析仪器设备 体视显微镜 普通光学显微镜 倒置显微镜 ⒌其它仪器设备 离心机 恒温水浴锅
12
2.2 培养基
组培中培养基的重要性： 基本培养基：指只含有维持离体植物细胞基
本生命活动所需的营养成分的培养基。通常 包括水分、无机营养成分和有机营养成分， 不包括激素和天然有机附加物。 完全培养基：指在基本培养基的基础上另外 附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。
13
2.2.1 培养基的构成
15
2、细胞分裂素类 常用类型：6-BA,KT.TDZ,2-ip 功能 培养基中常用浓度： 10-7～10-5mol/L或
0.1～10mg/L
16
3、组织培养时，植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下，细胞分裂
素的作用有加强的趋势，但二者在使用 上有一定的顺序关系，处理顺序不同， 培养物的分化状态也不同。规律如下：
21
2.2.2.2 基本培养基的选择 MS培养基 B5培养基 N6培养基 改良的White培养基 WPM培养基
★ 培养基是否适合所培养的植物，必须 通过试验进行筛选。
22
2.2.3 培养基的配制
母液稀释法
2.2.3.1 培养基母液的配制和保存 1、基本培养基母液的配制 ⑴ 单配法 ⑵ 混配法 ① 按照避免难溶性沉淀形成的原
⒈琼脂： 用量范围：3～10g/L 影响琼脂凝固的因素
⒉Gelrite：植物凝胶 2.2.1.8 其他添加物
活性炭（AC）、维生素C、抗生素等
20
2.2.2 基本培养基的选择 2.2.2.1 基本培养基的类型
⒈高无机盐含量的培养基 代表类型：MS，LS，BL，ER ⒉硝酸钾含量较高的培养基 代表类型：B5，N6，SH ⒊中等无机盐含量的培养基 代表类型：Nitsch，Miller，H ⒋低无机盐含量的培养基 代表类型：White，WS，HE
18
2.2.1.5 天然有机添加物质
椰汁：CM 100～150ml/L 酵母提取液：YE 0.01%～0.5% 番茄汁：5% ～ 10% 马铃薯汁：100g/L ～ 200g/L 香蕉泥（汁）：150mg/L ～ 200mg/L
19
2.2.1.6 培养基的pH值 灭菌前pH值调控范围：pH=5.7～5.8 pH对培养基凝固的影响 pH调节剂 2.2.1.7凝固剂
则和物质种类的不同，将基本培养基 配方所包括的物质进行分组；
23
②基本培养基配方中物质划分组数的多 少，即配制母液数的多少可根据实际情况而 定，如MS培养基可以配制三液式、四液式、 五液式等； 例如：MS培养基五液式 大量元素母液 钙盐母液 微量元素母液 铁盐母液 有机营养成分母液
24
2、激素母液的配制 ⑴ 激素母液的浓度
2.1.1.2 无菌操作室
⒈功能 ⒉组成 缓冲室（间）： 接种室（间）： ⒊无菌操作室的消毒 ⒋主要设备 超净工作台 金属器械消毒器
1
2.1.1.3 培养室 功能 主要设备 环境条件
2
2.1.1.4 温室 功能
3
2.1.2 组培实验室的布局 2.1.2.1 布局基本要求
便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。
2.2.1.1 水 2.2.1.2 无机盐类 大量元素化合物 微量元素化合物 2.2.1.3 有机营养成分 糖类 维生素类 氨基酸类
14
2.2.1.4 植物生长调节剂
1、生长素类 常用类型：NAA,2,4-D,IBA,IAA 功能 培养基中常用浓度：10-7～10-5mol/L或 0.1～10mg/L
2.1.2.2 基本布局规律
根据实验操作程序排列实验室； 接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区
域； 灭菌室与接种室相邻； 其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为
宜。
4
培
养
储藏室
准备室
室 灭菌室
缓接 冲种 室室
植物组织培养实验室布局示意图
5
2.1.2.3 设计组培实验室时的注意事项
为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊 上方最好安装紫外灯；
培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层 玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边 侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；
培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最 好装移门；
无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移 门，且门要稍大一些。
6
2.1.3 组培实验室的基本设备 2.1.3.1 器皿和器械类
2.3.2.2 培养基的灭菌方法 高温蒸汽灭菌法 过滤除菌法
⑴ 先用生长素处理，后用细胞分 裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不 容易分化,容易产生多倍体细胞。
17
⑵ 先用细胞分裂素处理，后用生长 素处理，细胞分裂也分化。
⑶ 用生长素和细胞分裂素同时处理， 细胞脱分化后分化频率提高。但二者的 使用浓度比值可以决定器官分化方向： 生长素/细胞分裂素比值高时，有利于 根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽 分化，抑制根形成。比值适中时，促进 愈伤组织的形成和生长。
1～10mmol/L或0.1～1mg/L ⑵ 配制方法 生长素类 细胞分裂素类 ⑶ 培养基的保存
25
2.2.3.2 培养基的配制
水 准备 母液 混合定容 调pH 加入琼脂
糖 加热溶解
培养器皿 清洗 干燥 分装 封口
高压蒸汽灭菌 冷却 凝固
培养基配制程序
培养基具体配制操作过程：P21
接种
26
2.3 组培实验基本操作技术
1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和 洗洁精
2.常用清洗方法 洗涤剂清洗法 超声波清洗法
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3.玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿的清洗 用过的培养器皿的清洗 已经污染的玻璃器皿的清洗
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2.3.2 灭菌
2.3.2.1 器具的灭菌方法 干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法） 火焰灼烧灭菌法
⒈玻璃器皿 ⒉器械 镊子类 解剖刀 剪刀 接种针 细菌过滤器
7பைடு நூலகம்
2.1.2.2 仪器设备 ⒈无菌操作设备
超净工作台
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高压蒸汽灭菌器
9
电热烘箱 接种器具消毒器
10
⒉培养设备
空调 加湿器和去湿机 定时器 培养架 摇床或旋转床 培养箱
11
⒊药品贮存和配制仪器设备 冰箱 天平 酸度计 ⒋观察分析仪器设备 体视显微镜 普通光学显微镜 倒置显微镜 ⒌其它仪器设备 离心机 恒温水浴锅
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2.2 培养基
组培中培养基的重要性： 基本培养基：指只含有维持离体植物细胞基
本生命活动所需的营养成分的培养基。通常 包括水分、无机营养成分和有机营养成分， 不包括激素和天然有机附加物。 完全培养基：指在基本培养基的基础上另外 附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。
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2.2.1 培养基的构成
15
2、细胞分裂素类 常用类型：6-BA,KT.TDZ,2-ip 功能 培养基中常用浓度： 10-7～10-5mol/L或
0.1～10mg/L
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3、组织培养时，植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下，细胞分裂
素的作用有加强的趋势，但二者在使用 上有一定的顺序关系，处理顺序不同， 培养物的分化状态也不同。规律如下：
21
2.2.2.2 基本培养基的选择 MS培养基 B5培养基 N6培养基 改良的White培养基 WPM培养基
★ 培养基是否适合所培养的植物，必须 通过试验进行筛选。
22
2.2.3 培养基的配制
母液稀释法
2.2.3.1 培养基母液的配制和保存 1、基本培养基母液的配制 ⑴ 单配法 ⑵ 混配法 ① 按照避免难溶性沉淀形成的原
⒈琼脂： 用量范围：3～10g/L 影响琼脂凝固的因素
⒉Gelrite：植物凝胶 2.2.1.8 其他添加物
活性炭（AC）、维生素C、抗生素等
20
2.2.2 基本培养基的选择 2.2.2.1 基本培养基的类型
⒈高无机盐含量的培养基 代表类型：MS，LS，BL，ER ⒉硝酸钾含量较高的培养基 代表类型：B5，N6，SH ⒊中等无机盐含量的培养基 代表类型：Nitsch，Miller，H ⒋低无机盐含量的培养基 代表类型：White，WS，HE
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2.2.1.5 天然有机添加物质
椰汁：CM 100～150ml/L 酵母提取液：YE 0.01%～0.5% 番茄汁：5% ～ 10% 马铃薯汁：100g/L ～ 200g/L 香蕉泥（汁）：150mg/L ～ 200mg/L
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2.2.1.6 培养基的pH值 灭菌前pH值调控范围：pH=5.7～5.8 pH对培养基凝固的影响 pH调节剂 2.2.1.7凝固剂
则和物质种类的不同，将基本培养基 配方所包括的物质进行分组；
23
②基本培养基配方中物质划分组数的多 少，即配制母液数的多少可根据实际情况而 定，如MS培养基可以配制三液式、四液式、 五液式等； 例如：MS培养基五液式 大量元素母液 钙盐母液 微量元素母液 铁盐母液 有机营养成分母液
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2、激素母液的配制 ⑴ 激素母液的浓度
2.1.1.2 无菌操作室
⒈功能 ⒉组成 缓冲室（间）： 接种室（间）： ⒊无菌操作室的消毒 ⒋主要设备 超净工作台 金属器械消毒器
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2.1.1.3 培养室 功能 主要设备 环境条件
2
2.1.1.4 温室 功能
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2.1.2 组培实验室的布局 2.1.2.1 布局基本要求
便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。
2.2.1.1 水 2.2.1.2 无机盐类 大量元素化合物 微量元素化合物 2.2.1.3 有机营养成分 糖类 维生素类 氨基酸类
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2.2.1.4 植物生长调节剂
1、生长素类 常用类型：NAA,2,4-D,IBA,IAA 功能 培养基中常用浓度：10-7～10-5mol/L或 0.1～10mg/L
2.1.2.2 基本布局规律
根据实验操作程序排列实验室； 接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区
域； 灭菌室与接种室相邻； 其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为
宜。
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培
养
储藏室
准备室
室 灭菌室
缓接 冲种 室室
植物组织培养实验室布局示意图
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2.1.2.3 设计组培实验室时的注意事项
为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊 上方最好安装紫外灯；
培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层 玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边 侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；
培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最 好装移门；
无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移 门，且门要稍大一些。
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2.1.3 组培实验室的基本设备 2.1.3.1 器皿和器械类
2.3.2.2 培养基的灭菌方法 高温蒸汽灭菌法 过滤除菌法
⑴ 先用生长素处理，后用细胞分 裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不 容易分化,容易产生多倍体细胞。
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⑵ 先用细胞分裂素处理，后用生长 素处理，细胞分裂也分化。
⑶ 用生长素和细胞分裂素同时处理， 细胞脱分化后分化频率提高。但二者的 使用浓度比值可以决定器官分化方向： 生长素/细胞分裂素比值高时，有利于 根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽 分化，抑制根形成。比值适中时，促进 愈伤组织的形成和生长。
1～10mmol/L或0.1～1mg/L ⑵ 配制方法 生长素类 细胞分裂素类 ⑶ 培养基的保存
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2.2.3.2 培养基的配制
水 准备 母液 混合定容 调pH 加入琼脂
糖 加热溶解
培养器皿 清洗 干燥 分装 封口
高压蒸汽灭菌 冷却 凝固
培养基配制程序
培养基具体配制操作过程：P21
接种
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2.3 组培实验基本操作技术