胃癌组织lncRNAMEG3、GAS5表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系

胃癌组织lncＲNA MEG3、
GAS5表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系
徐瀚斌，章由贤，刘放，高晓慧，朱以祥（湖北省中西医结合医院，武汉430015）
摘要：目的观察胃癌组织长链非编码ＲNA （lncＲNA ）母系表达基因3（MEG3）、生长特异抑制物5（GAS5）表
达变化，
并分析其表达变化与患者临床病理特征和预后的关系。

方法选择胃癌组织及其癌旁正常组织各73例
份，
采用real-time PCＲ法检测MEG3、GAS5表达。

以胃癌组织MEG3、GAS5相对表达量的均值为临界值，高于临界值作为高表达，低于或等于临界值作为低表达。

分析胃癌组织MEG3、GAS5表达与患者临床病理特征和预后的关系。

结果
胃癌组织MEG3、
GAS5相对表达量均明显低于癌旁正常组织（P 均＜0．05）。

胃癌组织MEG3、GAS5表达均与肿瘤组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有关（P 均＜0．05）。

MEG3高表达者36例、低表达者37例，GAS5高表达者38例、低表达者35例。

MEG3、GAS5高表达者术后生存率和生存时间均明显高于MEG3、GAS5低表达者（P 均＜0．05）。

结论
胃癌组织MEG3、GAS5低表达，其低表达与胃癌进展和患者预后不良有关。

关键词：胃癌；长链非编码ＲNA ；母系表达基因3；生长特异抑制物5；临床病理特征；预后doi ：10．3969/j．issn．1002-266X．2019．10．002中图分类号：Ｒ735．2
文献标志码：A
文章编号：1002-
266X （2019）10-0006-04基金项目：湖北省科技计划项目（2014CFB605）。

第一作者简介：徐瀚斌（1980-），男，主治医师，主要研究方向为普外科疾病诊治。

E-mail ：tyni104@126．com 通信作者简介：朱以祥（1968-），男，主任医师，主要研究方向为普外科疾病诊治。

E-
mail ：hbcz_061001@sina．com Expression changes of lncＲNA MEG3and GAS5in gastric cancer and their relationships with clinicopathological features and prognosis
XU Hanbin ，ZHANG Youxian ，LIU Fang ，GAO Xiaohui ，ZHU Yixiang
（Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine ，Wuhan 430015，China ）
Abstract ：Objective
To observe the expression changes of long non-coding ＲNA （lncＲNA ）maternal expression
gene 3（MEG3）and growth-specific inhibitor 5（GAS5）in the gastric cancer tissues ，and to analyze the relationships be-tween the expression changes and clinicopathological characteristics and prognosis of patients．Methods
Seventy-three
gastric cancer tissues and 73adjacent normal tissues were selected．The real-time PCＲwas used to detect the expression of MEG3and GAS5．The relationships between the expression of MEG3and GAS5in gastric cancer tissues and the clinico-pathological characteristics and prognosis of patients were analyzed．Ｒesults
The relative expression of MEG3and GAS5
in the gastric cancer tissues was significantly lower than that in the adjacent normal tissues （both P ＜0．05）．The expres-sion of MEG3and GAS5in the gastric cancer tissues was correlated with the degree of differentiation ，lymph node metasta-sis ，and clinical stage （all P ＜0．05）．According to the mean value of relative expression of MEG3and GAS5in gastric cancer tissues ，there were 36cases with high expression of MEG3，37cases with low expression ，38cases with high ex-pression of GAS5，and 35cases with low expression．The survival rate and survival time of patients with high expression of MEG3and GAS5were better than those with low expression of MEG3and GAS5（both P ＜0．05）．Conclusion The ex-pression of MEG3and GAS5in the gastric cancer tissues is low ，which is related to the progression of gastric cancer and
prognosis of patients．
Key words ：gastric carcinoma ；long non-coding ＲNA ；maternal expression gene 3；growth-specific inhibitor 5；clini-copathological characteristics ；prognosis
胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，由于其
早期症状不典型，大部分患者确诊时已处于进展期，常伴有淋巴结或腹腔脏器转移，预后较差，
5年总生存率不足10%［1］。

但目前对胃癌发病的分子机制
尚不完全清楚。

长链非编码ＲNA（lncＲNA）是一类转录本长度超过200nt的ＲNA分子，它们并不编码蛋白，但可与DNA、ＲNA或蛋白质相互作用，通过基因印记、染色质重塑、细胞周期调控等机制，参与基因表达调控。

近年研究发现，多种肿瘤组织中ln-cＲNA异常表达，并与肿瘤的发生、发展密切相关［2，3］。

母系表达基因3（MEG3）是第一个被发现具有抑癌基因功能的lncＲNA，可通过抑制肿瘤血管生成，阻止肿瘤恶性进展。

有研究报道，在肺癌、宫颈癌等组织中MEG3表达缺失，其表达缺失可促进肿瘤血管生成，继而导致肿瘤恶性进展［4］。

生长特异抑制物5（GAS5）亦为近年发现的、具有肿瘤抑制功能的lncＲNA。

已有研究报道，在乳腺癌、前列腺癌等组织中GAS5低表达，其低表达可促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移［5］。

但目前鲜见胃癌组织MEG3、GAS5表达的报道。

为此，本研究观察了胃癌组织MEG3、GAS5表达变化，并分析其表达变化与患者临床病理特征和预后关系。

现报告如下。

1资料与方法
1．1临床资料选择2012年7月 2014年12月湖北省中西医结合医院收治的胃癌患者73例。

所有患者经术后病理或活检病理检查明确诊断。

纳入标准：①符合胃癌诊断，且病理学类型为腺癌；②初诊，入院前未行任何抗肿瘤治疗；③临床病理资料和随访资料完整。

排除标准：①非胃腺癌或病理学类型难以判断者；②合并其他部位恶性肿瘤或重要器官功能不全者；③临床病理资料或随访资料不完整者。

其中，男42例、女31例，年龄32 75（55．42ʃ16．31）岁；肿瘤直径：＜5cm37例，≥5cm36例；组织分化程度：低未分化39例，中高分化34例；临床分期：Ⅰ、Ⅱ期38例，Ⅲ、Ⅳ期35例；有淋巴结转移43例，无淋巴结转移30例。

本研究经湖北省中西医结合医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意。

1．2MEG3、GAS5表达检测采用real-time PCＲ法。

取胃癌组织及其配对的癌旁正常组织（距肿瘤组织边缘≥5cm），采用TＲIzol法提取组织总ＲNA，经紫外分光光度计鉴定，OD260/OD280为1．8 2．0，表明提取的总ＲNA纯度合格，可用于后续实验。

采用AMV逆转录酶将总ＲNA逆转录为cDNA，－80ħ保存。

以cDNA为模板，按荧光定量PCＲ试剂盒说明进行PCＲ扩增。

所有引物由武汉华联科生物技术有限公司设计合成。

引物序列：MEG3上游引物5'-CTGCCCATCTACACCTCACG-3'，下游引物5'-CTCTCCGCCGTCTGCGCTAGGGGCT-3'；GAS5上游引物5'-CTTCTGGGCTCAAGTGATCCT-3'，下游引物5'-TTGTGCCATGAGACTCCATCAG-3'；GAPDH上游引物5'-AGCCACATCGCTCAGACAC-3'，下游引物5'-GCCCAATACGACCAAATCC-3'。

PCＲ反应体系共20μL：1μmol/L的上下游引物混合物0．5μL，cDNA1μL，Taq酶0．5μL，SYBＲ-Green1μL，Buffer 2μL，dNTPs1μL，去离子水14μL；反应条件：95ħ预变性10min，95ħ变性15s、60ħ退火60s、60ħ延伸60s共40个循环。

每个样品设3个复孔。

采用2－ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。

实验重复3次，取平均值。

1．3随访所有患者术后采用门诊、电话等形式定期随访，随访截至2018年5月，随访时间9 66个月、中位随访时间32个月，统计患者生存时间和术后3年生存率。

以胃癌组织MEG3、GAS5相对表达量的均值为临界值，高于临界值作为高表达，低于或等于临界值作为低表达。

比较MEG3、GAS5高表达者与低表达者生存时间和术后3年生存率。

1．4统计学方法采用SPSS20．0统计软件。

计量资料以珋xʃs表示，结果比较采用t检验。

计数资料比较采用χ2检验。

生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。

P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果
2．1胃癌组织与癌旁正常组织MEG3、GAS5表达比较胃癌组织与癌旁正常组织MEG3相对表达量分别为0．71ʃ0．26、1．16ʃ0．32，GAS5相对表达量分别为0．62ʃ0．34、1．11ʃ0．42。

胃癌组织MEG3、GAS5相对表达量均明显低于癌旁正常组织（t分别为－9．325、－7．748，P均＜0．05）。

2．2胃癌组织MEG3、GAS5表达与患者临床病理特征的关系胃癌组织MEG3、GAS5表达与肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴结转移有关（P均＜0．05），与患者性别、年龄、肿瘤直径无关（P均＞0．05）。

见表1。

2．3胃癌组织MEG3、GAS5表达与患者预后的关系MEG3高表达者与低表达者分别为36、37例，其术后生存时间分别为（39．94ʃ12．13）、（32．11ʃ10．24）个月，术后3年生存率分别为83．33%（30/ 36）、62．16%（23/37），二者术后生存时间和术后3年生存率比较差异均有统计学意义（t/χ2分别为2．983、4．112，P均＜0．05）。

GAS5高表达者与低表达者分别为38、35例，其术后生存时间分别为（39．45ʃ15．56）、（32．28ʃ10．19）个月，术后3年生存率分别为84．21%（32/38）、60．00%（21/35），
表1
胃癌组织MEG3、
GAS5表达与患者临床病理特征的关系临床病理特征n
MEG3相对表达量
珋x ʃs t P GAS5相对表达量
珋x ʃs t P 性别男420．69ʃ0．230．951
0．344
0．61ʃ0．33
0．269
0．789
女310．74ʃ0．210．63ʃ0．29年龄
＜60岁310．65ʃ0．191．8130．0740．59ʃ0．300．6400．524
≥60岁420．75ʃ0．260．64ʃ0．35肿瘤直径＜5cm 370．75ʃ0．221．6340．1070．66ʃ0．350．9040．369
≥5cm
360．66ʃ0．250．59ʃ0．31组织分化程度低未分化390．64ʃ0．282．5980．0110．54ʃ0．372．1870．032
中高分化340．79ʃ0．200．71ʃ0．28临床分期Ⅰ、Ⅱ期380．86ʃ0．275．2580．0000．72ʃ0．362．6600．010
Ⅲ、Ⅳ期350．55ʃ0．230．51ʃ0．31淋巴结转移有430．63ʃ0．293．1070．0030．55ʃ0．392．0840．041
无
30
0．82ʃ0．20
0．72ʃ0．26
二者术后生存时间和术后3年生存率比较差异均有
统计学意义（t /χ2
分别为2．308、
5．369，P 均＜0．05）。

见图1、
2。

图1不同MEG3
表达者生存曲线
图2
不同GAS5表达者生存曲线分析
3讨论
我国是胃癌的高发国家，每年新发病例达40万
例，
占全世界的50%以上，已成为威胁我国居民生命健康的重要疾病之一。

由于胃癌早期症状缺乏特异性，
多数患者确诊时已处于进展期，预后较差。

但目前对胃癌发病的分子机制尚不清楚。

lncＲNA 是一类转录本长度超过200nt 的ＲNA 分子，它们并不编码蛋白，以往被认为是基因转录过程中的
“噪音”，不具有生物学功能。

随着基因组学研究的深入发现，
lncＲNA 可在表观遗传、转录及转录后水平调控基因表达，
并参与肿瘤的发生、发展［6］。

MEG3是小鼠母系印记基因GTL2的人类同系物，
定位于人染色体14q32．3，长度约1．6kb ，仅表达于母源性基因，
是第一个被发现具有抑癌基因功能的lncＲNA 。

MEG3在正常组织中广泛表达，
尤其在脑、
卵巢等组织中表达较高［7］。

近年研究发现，
MEG3在胰腺癌中可发挥抑癌基因作用，敲除MEG3可使胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强，
并发现MEG3低表达的胰腺癌患者预后较差
［8］。

Zheng 等［9］研究表明，MEG3过表达可抑制
肝癌细胞增殖。

此外，MEG3低表达还可增加60岁以下人群罹患结直肠癌的风险［10］。

目前认为，MEG3可能是通过调节miＲ-21或p53信号通路，抑
制肿瘤血管生成，从而阻止肿瘤恶性进展［11，12］。

GAS5为近年发现的、具有肿瘤抑制功能的lncＲNA ，
属GAS 家族成员，位于人类1号染色体长臂2区5带，全长4087bp ，由12个外显子组成。

在人体肝、肾和血管等组织中均能检测到GAS5表达。

在卵巢
癌、
肝细胞癌等组织中GAS5低表达，其低表达可促
进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移［13，14］。

Liu等［15］研究发现，在结直肠癌组织或患者血液中GAS5表达均明显降低，并且GAS5低表达的结直肠癌细胞增殖和迁移能力明显增强。

有研究证实，在胃癌组织或细胞中GAS5表达受到抑制，并且GAS5低表达还能降低肿瘤细胞对阿霉素的敏感性，进一步研究发现，其作用机制可能与抑制EＲK信号通路激活有关［16］。

Guo等［17］研究认为，GAS5对胃癌细胞的抑制作用可能是通过调控p21、CDK6蛋白表达，将肿瘤细胞阻滞于G1/S期，从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。

虽然已有研究证实，MEG3、GAS5低表达与肝癌、乳腺癌和胰腺癌等肿瘤进展和患者预后不良有关，但二者表达变化与胃癌进展和患者预后的关系目前报道较少。

本研究结果显示，胃癌组织MEG3、GAS5表达均明显低于癌旁正常组织，提示MEG3、GAS5可能在胃癌的发生、发展中具有抑癌基因作用。

本研究结果还发现，胃癌组织MEG3、GAS5表达与肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴结转移有关，与患者性别、年龄、肿瘤直径无关，提示MEG3、GAS5低表达与胃癌进展有关。

本研究结果还发现，MEG3、GAS5低表达者中位生存时间较MEG3、GAS5高表达者均明显缩短，其术后3年生存率亦明显低于MEG3、GAS5高表达者，表明MEG3、GAS5低表达的胃癌患者术后生存时间更短，预后更差。

综上所述，胃癌组织MEG3、GAS5低表达，其低表达与胃癌进展和患者预后不良有关。

但由于本研究样本量较小，其结论准确性尚需大样本量、多中心研究进一步验证。

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（收稿日期：2018-12-03）。