醋酸洗必泰冲洗剂的制备及质量控制

醋酸洗必泰冲洗剂的制备及质量控制
王宗春;刘红
【摘要】目的进行醋酸洗必泰冲洗剂的配制并建立其质量控制方法.方法参考《湖北省医疗机构制剂规范》(2011年版)中醋酸洗必泰洗剂制备方法,制备醋酸洗必泰冲洗剂,对其性状、鉴别、检查、含量测定进行检验,考察稳定性.用两个不同厂家的鲎试剂对3批醋酸洗必泰冲洗剂进行细菌内毒素干扰试验,验证醋酸洗必泰冲洗剂细菌内毒素检查法的适用性.结果制剂质量稳定,质量浓度为0.50 mg/ml的醋酸洗必泰冲洗剂对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应既无抑制作用,也无增强作用.结论醋酸洗必泰冲洗剂制备工艺简便,性质稳定.细菌内毒素检查法适用于醋酸洗必泰冲洗剂质量控制,无需进行热原检查.
【期刊名称】《山西医科大学学报》
【年(卷),期】2015(046)002
【总页数】3页(P166-168)
【关键词】醋酸洗必泰;制备;质量控制;稳定性;细菌内毒素检查
【作者】王宗春;刘红
【作者单位】武汉大学人民医院药学部,武汉430060;湖北大学生命科学学院【正文语种】中文
【中图分类】R927.12
醋酸洗必泰为消毒防腐药，通过吸附在细菌胞浆膜使细胞内容物漏出而起到抑菌和
杀菌作用，对葡萄球菌、变异链球菌、唾液链球菌、白色念珠菌、大肠杆菌、厌氧丙酸菌等呈高度敏感，《湖北省医疗机构制剂规范》［1］收载了该药物的洗剂。

为了扩大醋酸洗必泰的临床用途，本文配制了其冲洗剂，以用于皮肤及黏膜的消毒、创面感染、阴道感染和子宫颈糜烂的冲洗，并考察了其质量控制方法，重点对鲎试剂方法用于其细菌内毒素检查的可行性进行研究，报道如下。

1 仪器与材料
1.1 仪器
UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津);TG328A型电子分析天平(上海天平仪器厂);PHS-25C型数显酸度计(上海越磁电子科技有限公司);SW-80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);微量移液器(100-1 000 μl)(赛黙飞世尔科技有限公司);恒温
水浴箱(上海卓爵仪器设备有限公司);细菌内毒素检查用具(湛江安度斯生物有限公司)。

1.2 药品与试剂
醋酸洗必泰(锦州九泰药业有限责任公司，批号120901);细菌内毒素工作标准品(中国食品药品检定研究院，每支10 EU，批号2012-10);鲎试剂(TAL，厦门鲎试
剂实验厂，规格 0.10 ml，批号121007，灵敏度0.50 EU/ml);鲎试剂(湛江安度斯生物有限公司，规格0.10 ml，批号121226，灵敏度0.50 EU/ml);细菌内毒素检查用水(BET水，厦门鲎试剂实验厂，每支2 ml，批号121018)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 处方与配制工艺
2.1.1 处方参照《湖北省医疗机构制剂规范》2011年版醋酸洗必泰洗剂制备方法，处方为醋酸洗必泰 0.50 g，注射用水加至 1 000 ml。

2.1.2 配制工艺称取醋酸洗必泰0.50 g，溶解于约800 ml热注射用水中，加入
0.20%(W/V)活性碳，加热煮沸20 min，冷却至50℃左右，滤过脱碳，自滤器上添加注射用水至1 000 ml，搅拌均匀，灌装于100 ml玻璃瓶，轧盖，流通蒸汽
灭菌100℃，30 min，检查，贴签，即得。

共配制3批，批号分别为20130105、20130114、20130121。

2.2 一般质量控制
2.2.1 性状本品为无色的澄明溶液，味苦。

2.2.2 醋酸洗必泰鉴别方法一:取本品5 ml，加重铬酸钾试液1滴，产生黄色沉淀，加稀硝酸数滴，沉淀即溶解;方法二:取本品5 ml，加硫酸铜试液2滴，加热，产生淡紫色的絮状物。

2.2.3 检查符合冲洗剂项下有关的各项规定。

2.2.4 含量测定参照《湖北省医疗机构制剂规范》2011年版醋酸洗必泰洗剂含量
测定方法，精密量取本品2 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光
光度法(《中国药典》2010年版二部附录ⅣA)，在254 nm波长处测定吸收度，
按C22 H30 C2N10·2C2 H4 O2的吸收系数(E1%1 cm)为447计算，3批样品的含量测定结果分别为 0.50 mg/ml，0.49 mg/ml，0.50 mg/ml，均在标示量(0.50 mg/ml)的 95.0%-105.0%范围内，含量检测合格。

2.3 细菌内毒素检查的可行性研究
2.3.1 鲎试剂灵敏度复核按照细菌内毒素检查法鲎试剂灵敏度复核项对2批鲎试剂的标示灵敏度进行复核［2］，2批鲎试剂灵敏度的测定值λc均在0.5λ -2.0λ(λ
为灵敏度标示值)范围之内，灵敏度符合规定，可用于实验，结果见表1。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果Table 1 The sensitivity test results of tachypleus am ebocyte lysate“+”表示反应呈阳性;“-”表示反应呈阴性;每个“+”或“-”代表一支管的反应结果;λ为灵敏度标示值;λc为灵敏度测定值TAL批号λ(EU/ml) 细菌内毒素浓度(EU/ml)1.00 0.50 0.25 0.125阴性λc(EU/ml)121007 0.50
++++ ++++ ---- ---- -- 0.50 121226 0.50 ++++ ++++ +--- ---- -- 0.42
2.3.2 细菌内毒素限值(L)的确定中国药典2010年版二部附录ⅠS(洗剂，冲洗剂，灌肠剂)规定每1 ml冲洗剂中含细菌内毒素应小于0.50 EU，即醋酸洗必泰冲洗剂的细菌内毒素限值(L)为0.50 EU/ml。

2.3.3 样品最大有效稀释倍数(MVD)的确定样品最大有效稀释倍数MVD=L/λ，其中λ为鲎试剂灵敏度，L为细菌内毒素限值(0.50 EU/ml)，目前市售鲎试剂的灵敏度λ 常为 0.50，0.25，0.125，0.06，0.03 EU/ml，对应的样品 MVD 为 1(原液)，2，4，8，16。

2.3.4 干扰预试验为了初步评价样品浓度对鲎试剂与细菌内毒素之间凝集反应的干扰程度及干扰性质，以便筛选出对检查无干扰的样品浓度范围及相应的鲎试剂灵敏度，避免鲎试剂的浪费，选择批号为20130105的样品进行干扰预试验。

用BET
水稀释醋酸洗必泰冲洗剂至1(原液)，2，4，8，16倍的溶液，用酸度计测定pH 值，均在6.30-6.60范围内，符合细菌内毒素检查的pH值要求，不需要调节pH 值，记为供试品阴性对照(NPC)系列。

同时配制含有1.0 EU/ml(2λ)细菌内毒素的
上述稀释倍数系列溶液，记为供试品阳性对照(PPC)系列［3，4］。

取灵敏度为0.5 EU/ml的两个厂家的鲎试剂与上述NPC和PPC系列溶液进行反应，每一稀释倍数重复两管，设立阳性对照(PC)和阴性对照(NC)。

结果显示质量浓度为0.5 mg/ml及以下的醋酸洗必泰冲洗液对鲎试剂与细菌内毒
素之间的凝集反应既无增强作用，也无抑制作用。

2.3.5 正式干扰试验根据干扰预试验结果，可以直接选择3个批号的样品原液，用λ为0.50 EU/ml的鲎试剂进行以下正式干扰试验。

用供试品原液及BET水分别配制细菌内毒素最终浓度为1.00，0.50，0.25，0.125 EU/ml的系列溶液，取 0.10 ml加入到已复溶的两个不同厂家生产的鲎试剂(灵敏度λ为0.50 EU/ml)管内，每个浓度平行做4管，另取供试品溶液做2支阴性对照管，进行干扰确证试验［5，
6］。

表2 结果显示，Et/Es在0.5-2之间(Es为用BET水制成的细菌内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值，Et为用供试品溶液制成的内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值)，按照中国药典2010年版(二部)判断标准，供试品原液对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应无干扰作用，可以使用鲎试剂方法检查醋酸洗必泰冲洗剂中细菌内毒素，即细菌内毒素检查法适用于本品，无需进行热原检查［7］。

表2 醋酸洗必泰冲洗剂干扰试验结果Table 2 Interference test results of chlorhexidine acetate irrigation solution“+”表示反应呈阳性;“-”表示反应呈阴性;每个“+”或“-”代表一支管的反应结果TAL批号λ(EU/ml)样品批号细菌内毒素浓度(EU/ml)1.00 0.50 0.25 0.125 NC Et Es Et/Es 121007 0.50 20130105 ++++ +++- ---- ---- -- 0.601.20 20130114 ++++ ++++ ---- ---- -- 0.50 1.00 20130121 ++++ ++++ +--- ---- -- 0.42 0.84 BET水 ++++
++++ ---- ---- -- 0.50 121226 0.50 20130105 ++++ ++++ ---- ---- -- 0.50 1.00 20130114 ++++ ++++ +--- ---- -- 0.42 0.84 20130121 ++++ +++- ---- ---- -- 0.60 1.20 BET水++++ ++++ ---- ---- -- 0.50
2.4 稳定性考察
将样品(批号:20130105)在室温条件下放置12个月，并分别于 1，3，6，9，12 月取样，考察冲洗剂的外观、含量变化，重点进行细菌内毒素限度检查，并与0月结果进行比较。

表3结果显示，在室温留样条件下放置12个月，醋酸洗必泰冲洗剂的各项考察指标均无明显变化，表明醋酸洗必泰冲洗剂稳定性良好。

表3 醋酸洗必泰冲洗剂室温留样考察结果Table 3 Storage stability of chlorhexidine acetate irrigation solution at room temperature留样时间(月) 性状改变含量(mg/ml)细菌内毒素限度0 未变化 0.51符合限度要求1 未变化0.51 符合限度要求3 未变化 0.50 符合限度要求6 未变化 0.50 符合限度要求9 未
变化 0.50 符合限度要求12 未变化 0.50符合限度要求
3 讨论
由于醋酸洗必泰冲洗剂临床主要用于各种创伤、渗出、糜烂的开放性感染性皮肤病及伤口冲洗，在配制过程中应严格按照无菌操作规程，对各种可能污染热原的途径进行严格控制，并通过加入活性碳煮沸30 min吸附热原。

在质量控制方面，考虑到冲洗剂用量大，并且用于创面的冲冼，中国药典2010年版二部附录明确规定冲洗剂需要进行细菌内毒素检查(鲎试剂凝胶法)，不能进行细菌内毒素检查的冲洗剂应进行热原检查(家兔法)。

家兔法存在试验条件要求较高、操作繁琐、费时费力且影响因素较多，而细菌内毒素检查法具有灵敏度高、重现性好、简便易行等优点，但是细菌内毒素检查是否可行的前提是供试品在满足限量检查要求的浓度下对细菌内毒素检查不产生干扰。

如果样品在高浓度(低稀释倍数)时对细菌内毒素试验不产生干扰，则在低浓度(高稀释倍数)时也不产生干扰。

因此，理论上可以选择灵敏度λ为0.50-0.03 EU/ml 的鲎试剂，将样品稀释到相应的倍数(1-16倍)进行细菌内毒素检查。

但在实际检验过程中，为了尽量减少操作步骤(稀释)和降低对鲎试剂灵敏度的要求，可以选择灵敏度λ为0.50 EU/ml的鲎试剂，对醋酸洗必泰冲洗剂原液直接进行细菌内毒素检查。

参考文献:
［1］湖北省食品药品监督管理局.湖北省医疗机构制剂规范2011年版［M］.武汉:湖北省科学技术出版社，2011:355-356.
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［4］秦美蓉，王平，陈润桦，等.药用辅料山梨醇(供注射用)的细菌内毒素检查法［J］.中国现代应用药学，2014，31(2):207-209.
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［7］蔡彤，裴宇盛，高华.中国药典2010年版细菌内毒素检查法的修订建议［J］.药物分析杂志，2014，34(4):723-726.。