病毒感染性疾病的检验诊断及方法

病毒感染性疾病的检验诊断及方法
发表时间：2013-02-28T13:37:24.560Z 来源：《中外健康文摘》2012年第47期供稿作者：邱一凡
[导读] 病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。

邱一凡（黑龙江省大庆油田总医院163000）
【中图分类号】R511 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）47-0133-02
病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。

然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，结合患者当前所处的时机，确定检验诊断的方法。

有些病毒感染潜伏期较短，发病时机体免疫系统尚未完全应答，没有抗体产生，因此可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸。

对于潜伏期超过10天的病毒感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断、区别初次和再次感染。

对可在机体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体滴度有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。

对原因不明，可能有新病毒感染时，应采集相应部位的标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原病毒。

对同一症状可由多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。

病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。

1 标本的采集与送检
临床医师根据流行病学资料，疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。

实验结果对诊断病毒感染的价值，很大程度上取决于标本的采集和处理的方式是否恰当。

正确采集标本，及时运送和处理，是极为重要的。

1.1 采集标本的时间
尽可能在发病的初期，急性期或患者入院的当天进行。

疾病后期由于机体产生免疫力，开始清除病毒，使病毒数量减少或消失，不易检出。

1.2 标本种类的选择
根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。

处理标本时要考虑病毒的生物学特性，如有包膜病毒冻融易被灭活。

某些病毒如麻疹病毒吸附茬白细胞上，为了有效分离病毒，血液标本应加抗凝剂。

1.2.1 心脏疾病可采取咽拭子、粪便、心脏组织或心包液标本。

分离相关的肠道病毒，包括埃可病毒、柯萨奇A组和B组病毒，也可采取血液标本进行血清学诊断。

1.2.2 中枢神经系统感染可采取咽拭子、粪便标本、脑脊液标本进行肠道病毒的分离；采取咽拭子、脑膜组织分离单纯疱疹病毒，亦可采取脑脊液进行PCR检查；采取咽拭子，尿液、脑脊液或唾液标本用于分离腮腺炎病毒。

另外，虫媒病毒、人类免疫缺陷病毒、麻疹病毒、狂犬病毒等也可引起中枢神经系统的感染，可通过血清学或测定抗原、核酸来诊断。

应在入院时采取第1次血标本5～10ml，第2次在2～3周后或出院前采取，用于双份血清学诊断。

1.2.3 先天或新生儿感染采取咽拭子、尿液分离人类巨细胞病毒，血清学方法测定IgM有助于诊断；采取咽拭子、皮肤、尿液、脑脊液、粪便或直肠拭子分离肠道病毒；采用喉拭子、皮损、尿液标本分离HSV，脑脊液标本用于PCR测定，皮损标本亦可用直接荧光抗体测定，测定血清中IgM有助于诊断。

采集咽拭子、皮损等标本用于分离带状疱疹病毒。

HBV、HIV和微小病毒B19也可引起宫内感染，可以进行血清学诊断。

1.3 常见标本的采集方法
1.3.1 血液以无菌操作抽取抗凝血10ml。

抗凝剂可选用100U／ml肝素钠，常用于分离CMV和HSV，亦可用于虫媒病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠道病毒的分离；如欲进行 PCR检测核酸，则需使用EDTA抗凝；为了血清学检查的需要，应抽取另一管5ml血液，不抗凝送检。

1.3.2 脑脊液以无菌手续抽取脑脊液1～2ml，置无菌试管内，在冰浴中应立即送检。

在4℃可存放72小时。

常用于分离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒等。

1.3.3 宫颈或阴道拭子采取病灶部位分泌物，将拭子置运送液中；如无病损部位，则清理宫颈口粘液，将拭子伸入宫颈约1cm停留5秒以上取出，置运送液中4℃冰浴立即送检。

常用于HSV、CMV的分离。

1.3.4 粪便标本取2～4g粪便标本在无菌的容器中，加8～10ml运送液立即送检，常用于腺病毒、肠道病毒的分离，亦用于轮状病毒的分离及抗原检测。

2 病毒检验的结果评价
通过实验手段，从标本中获得有关病毒感染的证据，从而确定病毒感染和临床疾病之间的因果关系，是病毒检验诊断的目标。

通过分离和鉴定获得致病性病毒，发现病毒感染的特异性改变，如机体内产生特异性抗体、细胞内包涵体的形成等，即说明有病毒感染的存在。

由于各种病毒感染在不同机体内导致的结局差别很大，因此感染病毒的临床意义必须结合流行病学资料、临床表现、病毒种类及机体的病理变化作综合分析才能判定。

对于一些引起急性感染性疾病的病毒而言，在疾病流行季节从人体内各种组织、脑脊液、血液、水疱液中分离到的病毒的致病特征，与患者的临床特征相符时，可作出病原学诊断；或患者急性期和恢复期双份血清中相应的特异性抗体滴度有4倍以上的升高，也可得出病原学诊断，如乙型流行性脑炎病毒、出血热病毒等。

从呼吸道分离到的流行性感冒病毒，副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒和呼吸道合胞病毒等病毒，由于感染后通常都为急性发病，很少有无症状携带者和长期排毒现象，因而具有临床诊断意义。

巨细胞病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒等病毒，虽然分离到了病毒，但与临床症状并不一定密切相关，则需考虑健康带毒、隐性感染、混合感染和持续感染状态等情况。

可寻求血清学特异性抗体滴度是否升高来帮助诊断。

临床上疑为病毒感染，而分离培养阴性，在确认标本采集正确、无污染，并采用了敏感的细胞株，而且通过可靠的识别方法确认无病毒存在，则可排除可疑病毒感染的可能性。

如果可疑病毒为无法培养或难以分离的病毒，则不能排除感染的可能性，可采用血清学检查特异性抗体以助诊断。

急性期和恢复期双份血清的总抗体滴度如有4倍以上的升高，有助于明确诊断，但不适合于早期诊断。

IgM抗体的测定有助于早期诊
断，但在感染的早期机体产生IgM有明显的个体差异，如腮腺炎患者发病三日内有部分患者血清中无特异性 IgM抗体；仅有45％的风疹患者在出疹后第一天特异性IgM抗体阳性。

此外，有少数患者产生的特异性IgM抗体可持续1～2年。

在评价IgM抗体检查的可靠性方面需引起注意。

免疫缺陷的患者、局部感染、多种血清型病毒引起的感染，特异性抗体检查可能为阴性。

分子生物学诊断是通过测定病毒核酸而实现的，利用 southern杂交可根据病毒核酸分子量的大小观察整合型和游离型病毒。

PCR方法有极高的灵敏度，但仍然有假阳性。

另外检出病毒核酸并不等于检出具有传染性的病毒颗粒，其临床意义有待进一步确认。

参考文献
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