血液中葡萄糖的测定
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葡萄糖
CH 3 4
H NH C OH (CHOH) 4 CH 2 OH
葡萄糖邻甲苯胺
邻甲苯胺
H2 O CH 3 H N= C (CHOH) 4 CH 2 OH
雪夫氏碱 （绿色）
三、实验器材
1.分光光度计（630nm），比色皿 2. 计算纸（9 cm×9 cm） 3. 水浴
血 液 中 葡 萄 糖 的 测 定
——邻甲苯胺法 ——邻甲苯胺法
一、实验目的
掌握血糖的测定方法。
二、实验原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩 合成雪夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈 兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色 深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下:
CH3
H NH2+ C = O (CHOH) CH 2 OH
1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸 100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 3. 血清 （～100ml）
五、实验步骤
取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25， 0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀 （则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200， 300mg ）； 混匀后，置沸水中 15分钟，立即移入冷水浴中冷却； 以0号管调零，在630nm 处比色（见下表），以各管的 吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标， 绘制标准曲线，并根据测定管吸光度查找含量。
六、附注
4. 轻度溶血的血清对结果无明显影响。根据推导，血清中含血红 蛋白 450毫克/100毫升时，可使测定结果降低约10%。 5. 高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先 制备血滤液后再行测定。 6.试剂的配制 1）葡萄糖标准贮存液(10mg/ml)：准确称取干燥无水葡萄糖1克， 加0.25%苯甲酸液至100毫升，置冰箱内保存备用。 2）葡萄糖标准应用液(1mg/ml)：准确吸取上述贮存液10ml，加 0.25%苯甲酸至100毫升。 3） 0.25%苯甲酸液：称取苯甲酸2.5克，加入煮沸的蒸馏水 1000毫升中，使成饱和液，冷却后，取上清液备用。
管号 试剂(ml) 邻甲苯胺试剂 上述稀释葡萄糖 全血 蒸馏水 质量/mg A 630nm
0
1
2
3
4
5
测定管
—— —— 0.1
各加5.0 ml 0.1 0.1 —— —— 25 —— —— 50
0.1 —— —— 100
0.1 —— —— 200
0.1 —— —— 300
—— 0.1 ——
100ml全血相当于葡萄糖 0 0.000
六、附注
1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原 性物质基本上无影响。 2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、 冰醋酸浓度、加热时间有关。此法显色稳定，24小时内无变化。如将加热时 间缩短，生成颜色容易消褪。 3. 此法也适用于全血葡萄糖测定，特别是小儿病人作静脉抽血困难时，可 采用指端血或耳垂血 0.1毫升，加入 3% 三氯醋酸溶液1.9 毫升中，以沉淀 蛋白质。离心后吸取上清液 1.0毫升，加入邻甲苯胺试剂 5毫升作为测定管。 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0.05mg/ml）1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5 毫升，在空白管中加入蒸馏水 1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，然后按上表 进行测定。测定结果即为全血葡萄糖含量。
CH 3 4
H NH C OH (CHOH) 4 CH 2 OH
葡萄糖邻甲苯胺
邻甲苯胺
H2 O CH 3 H N= C (CHOH) 4 CH 2 OH
雪夫氏碱 （绿色）
三、实验器材
1.分光光度计（630nm），比色皿 2. 计算纸（9 cm×9 cm） 3. 水浴
血 液 中 葡 萄 糖 的 测 定
——邻甲苯胺法 ——邻甲苯胺法
一、实验目的
掌握血糖的测定方法。
二、实验原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩 合成雪夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈 兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色 深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下:
CH3
H NH2+ C = O (CHOH) CH 2 OH
1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸 100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 3. 血清 （～100ml）
五、实验步骤
取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25， 0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀 （则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200， 300mg ）； 混匀后，置沸水中 15分钟，立即移入冷水浴中冷却； 以0号管调零，在630nm 处比色（见下表），以各管的 吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标， 绘制标准曲线，并根据测定管吸光度查找含量。
六、附注
4. 轻度溶血的血清对结果无明显影响。根据推导，血清中含血红 蛋白 450毫克/100毫升时，可使测定结果降低约10%。 5. 高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先 制备血滤液后再行测定。 6.试剂的配制 1）葡萄糖标准贮存液(10mg/ml)：准确称取干燥无水葡萄糖1克， 加0.25%苯甲酸液至100毫升，置冰箱内保存备用。 2）葡萄糖标准应用液(1mg/ml)：准确吸取上述贮存液10ml，加 0.25%苯甲酸至100毫升。 3） 0.25%苯甲酸液：称取苯甲酸2.5克，加入煮沸的蒸馏水 1000毫升中，使成饱和液，冷却后，取上清液备用。
管号 试剂(ml) 邻甲苯胺试剂 上述稀释葡萄糖 全血 蒸馏水 质量/mg A 630nm
0
1
2
3
4
5
测定管
—— —— 0.1
各加5.0 ml 0.1 0.1 —— —— 25 —— —— 50
0.1 —— —— 100
0.1 —— —— 200
0.1 —— —— 300
—— 0.1 ——
100ml全血相当于葡萄糖 0 0.000
六、附注
1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原 性物质基本上无影响。 2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、 冰醋酸浓度、加热时间有关。此法显色稳定，24小时内无变化。如将加热时 间缩短，生成颜色容易消褪。 3. 此法也适用于全血葡萄糖测定，特别是小儿病人作静脉抽血困难时，可 采用指端血或耳垂血 0.1毫升，加入 3% 三氯醋酸溶液1.9 毫升中，以沉淀 蛋白质。离心后吸取上清液 1.0毫升，加入邻甲苯胺试剂 5毫升作为测定管。 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0.05mg/ml）1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5 毫升，在空白管中加入蒸馏水 1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，然后按上表 进行测定。测定结果即为全血葡萄糖含量。