生物碱类药物的分析ppt课件

供试品+内标→供试品溶液，进样，
测定杂质和内标峰面积或峰高，计算
杂质含量
含量C（ x） f
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Ax As Cs
42
（2）外标法测定供试品中某个杂质
的含量
供试品→供试品溶液
杂质对照品→对照品溶液
进样，测定，计算杂质的含量
含量C（ x精） 选ppt CRA ARx
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缺点：不易准确控制进样量，宜 用定量环进样
冰醋酸溶液3～5 m1，加各药品项下规定的
指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）
滴定，并将滴定结果用空白试验校正。
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咖啡因 ChP(2000)
取 本 品 约 0.15g ， 精 密 称 定 ， 加 醋
酐—冰醋酸（5∶1）的混合液 25ml，微
热使溶解，放冷，加结晶紫指示液 1滴，
O CO 阿托品
CH CH 2OH
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4
CH CH 2
CH 3O
H
OH C
N
H
pKb1=5.07
N 奎宁
pKb2=9.7
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5
pKb1=6.0
N
N
O
pKb2=11.7 O
士的宁
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6
CH 3O CH 3O
O CH 3
CH 2
O CH 3
N
pKb=7.87
罂粟碱
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7
O CH 3
100%0.06%
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2. IR
用于药物中无效或低效晶型的
检查。利用药物与杂质有特征峰差
异进行检查。如甲苯咪唑中A晶型的
检查、无味氯霉素混悬剂中A晶型的
检查。
X—射线粉末衍射法
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3. 原子吸收分光光度法 主要用于金属元素的检查，具
有灵敏度高、选择性好等优点。如 肝素钠中钾盐的检查。
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（一）臭味及挥发性的差异 • 利用药物与杂质在挥发性、臭
味等方面的差异进行检查。
ChP（2000） 麻醉乙醚中异臭的检查
取本品 10ml，置瓷蒸发皿中，使自
然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。
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（二） 颜色的差异
ChP（2000） 盐酸阿扑吗啡 [检查] 分解产物 取本品 0.10g，加 无水氧化物的乙醚 5ml，振摇后，乙 醚液只许显极淡的红色。
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（五）对光吸收性质的差异—— 分光光度法
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1. 紫外分光光度法 利用药物与杂质在紫外吸收光
谱方面的差异进行检查。
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例1. 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中
检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸
溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶
液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过
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98：77．乙醇中检查杂醇油是利用 （C）
A. 颜色的差异
B. 旋光的差异
C. 臭味及挥发性的差异
D. 对光选择吸收的差异
E. 溶解行为的差异
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例. 药物中特殊杂质的检查方
法有（ABCDE）
A．沉淀法与颜色法
B．滴定法
C．旋光法
D．分光光度法
E．色谱精法选ppt
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例. HPLC检查药物中杂质的具体方法
10＜pKb＜12 冰醋酸+醋酐
pKb＞12
醋酐
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（三）一般测定方法
一般采用半微量法。中国药典（2000年
版）的测定方法为：取经适当方法干燥的
供 试 品 适 量 〔 约 消 耗 高 氯 酸 滴 定 液 （ 0.1
mol/L）8 ml〕，加冰醋酸10～30 ml使溶解。
若供试品为氢卤酸盐，应再加5％醋酸汞的
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优点：不需杂质对照品，可同时 控制各个杂质及其总量限度
缺点：检测波长处，各杂质和药 物的吸收强度可能有差异，准确度差
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（5）面积归一化法
取一定量供试品溶液进样，测定各
杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面
积及其总和占总峰面积的百分率，不能
超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰
面积内。
理论量1～3倍
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盐酸麻黄碱 ChP(2000)
取本品约 0.15g，精密称定，加冰醋酸 10ml ， 加 热 溶 解 后 ， 加 醋 酸 汞 试 液 4ml 与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴 定 液 （ 0.1mo1/L ） 滴 定 至 溶 液 显 翠 绿 色，并将滴定的结果用空白试验校正。 每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相 当于 20.17mg 的C1精0选Hppt 15NO·HCl。 70
N
ON CH 3 咖啡因
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CH 3 N
N
pKb=14.15
8
pKb=6.13
N CH 3 H
HO
O
OH
吗啡
pKa=9.85
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9
O CH 3
H N
N
N ON
CH 3 茶碱
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10
二、生物碱类药物的通性
1. 碱性
季铵碱＞脂肪胺、脂环胺＞芳胺、
N—芳杂环＞酰胺
小檗碱＞麻黄碱、阿托品＞罂粟
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（三）溶解行为的差异 利用药物与杂质在溶解性方面的差
异进行检查。如葡萄糖中糊精的检查。
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（四）旋光性质的差异
ChP（2000） 硫酸阿托品
[检查] 莨菪碱 取本品，按干燥品计
算，加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶
液，依法测定（附录 Ⅵ E），旋光度
不得过 –0.40°。
2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨 酸等。
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（三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝
酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛 硫酸等
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（四）UV （五）IR （六）色谱法
1. HPLC 2. TLC
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硅胶为吸附剂：游离生物碱能顺
利迁移，生物碱盐类吸附太牢，造成
严重拖尾。
分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成
分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。
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（4）不加校正因子的主成分自身对照 法
无杂质对照品，且杂质峰面积与主
成分峰面积相差悬殊时应用。
方法
S溶 剂 溶 解 供试品溶液一定量供试 品 源自 释 溶 对 液照溶精选ppt
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分别进样，测定供试品溶液中各 杂质峰面积及其总和，与对照溶液主 成分峰面积比较，控制供试品中杂质 的量。
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（八）还原反应 吗啡与磷酸可待因的区分反应
吗啡 + 3K [Fe(6 C ] N) K2[Fe(6 C ] F N e3+)普鲁士
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二、一般鉴别反应
（一）熔点测定法 （二）沉淀反应
生物碱 + 生物碱沉淀试剂H+ ↓
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常用的生物碱沉淀试剂为：
1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、 I2—KI、二氯化汞等；
第八章 生物碱类药物的分析
第一节 概述
一、生物碱（Alkaloids） 生物碱是生物体内含氮有机化合
物的总称
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1
典型药物的结构
CH 3O CH 3O
pKb=2.5
OH-N+
O
O 小檗碱
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2
pKb=4.42
OH NHCH 3
C C CH 3
HH
麻黄碱
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3
CH 3
N
pKb=4.35
中放射化学杂质的检查。如地高辛
中洋地黄毒苷的检查。
缺点：展开时间长，斑点扩散，
不能用强酸等腐蚀性显色剂
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3．HPLC （1）内标法加校正因子测定供试品中 某个杂质的含量
准确测定杂质含量 方法
内标物+杂质对照品→对照溶液，
进样，测定，计算校正因子
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校正因f） 子 As（ Cs AR CR
解决方法：
（1）在展开剂中加少量的碱性试剂， 如氨、二乙胺、有机脂烃胺类；
（2）硅胶板用碱处理
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第三节 特殊杂质检查
• 特殊杂质检查主要根据药物与杂 质的理化性质差异来进行。
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一、物理法
利用药物和杂质在颜色、溶解行 为、旋光性质、对光吸收选择性等物 理性质上的差异，检查杂质是否符合 限量规定
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优点：不需杂质对照品，简便易 行。
缺点：检测波长处，各杂质和药 物的吸收强度可能有差异，控制杂质 峰面积百分率不一定就是杂质限量， 准确度差。
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4．GC 用于药物中挥发性杂质的 检查。如药物中有机溶剂残留量测定。 检查方法同HPLC。
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二、化学法
利用药物与杂质在化学性质上的 差异进行检查。如阿司匹林中水杨酸 的检查。
用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶
液显黄色，并将滴定的结果用空白试验校
正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相
当于 19.42mg 的C8H10N4O2。
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（四）生物碱盐类的滴定 置换滴定：
B A H HC 4 B lO C H 4 l O HA
无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：
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若被置换出的有机酸不溶于冰醋 酸，应先将样品碱化，有机溶剂提取 游离碱后，再非水碱量法测定。
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2. 氢卤酸盐的测定 一般均预先在溶液中加入
Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，以消除氢卤 酸对滴定的干扰。
2B X H Hg 2 (2 A B A c H ) c H2 g
能影响溶质的解离情况和能影响
酸碱强度很大的溶剂：硝基甲烷、丙
酮、二氧六环
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2. 滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液 或高氯酸的二氧六环溶液
3. 指示终点的方法 电位法：玻璃—甘汞电极系统 指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等
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（二）适用范围
有机碱及其盐类及有机酸碱金属 盐类
8＜pKb＜10 冰醋酸作溶剂
碱＞咖啡因
吗啡具酸碱两精性选ppt
11
2. 溶解性 游离生物碱不溶或难溶于水，能
溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐 而溶解
生物碱盐类易溶于水，不溶于有 机溶剂
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12
3. 旋光性 一般多为左旋体有效。
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第二节 鉴别试验
一、特征鉴别反应 （一）双缩脲反应
侧链具有氨基醇结构
醚层
盐 盐酸 酸麻 伪 +C 黄 麻 uSO 碱 黄 4O H 碱 - 紫堇 乙色 醚
水层
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（二）Vitali反应 托烷生物碱
氢硫 溴酸 酸阿 山托 莨 +品 发 菪碱 烟 HNO3· 黄色醇制深紫色
KOH
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（三）绿奎宁反应 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁
（四）Marquis反应 吗啡生物碱
盐酸 +吗 甲啡 醛紫 硫堇 酸
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16
（五）Frohde反应 吗啡生物碱
0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的为
453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算
肾上腺素酮的限量应为（D）
A. 0.1％
B. 0.5％
C. 0.04％
D. 0.06% E. 0.0002％
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34
肾上腺酮% E11c%mlA100V 100%
ms
0.05
1
4531100 2.01103
有（ABCDE）
A．峰面积归一化法
B．主成分自身对照法
C．内标法
D．外标法
E．内标法加校正因精选ppt
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例. 最常用于药物中特殊杂质检查的 方法是(A)
A. TLC
B. IR C. UV D. MS
E. NMR
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例. 红外分光光度法在杂质检查中主
要用于（A）
A. 药物中无效或低效晶型的检查
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37
（六）吸附或分配性质的差异—色谱 法
1. TLC （1）杂质对照品法
（2）高低浓度对比法
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38
（3）参比杂质对照品法 选用可能存 在的某种物质作为杂质对照品。
（4）选用质量符合规定的与供试品 相同的药物作为杂质对照品。
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2．纸色谱
用于极性较大药物中杂质的检
查或放射性药物注射液（或溶液）
高氯酸＞氢溴酸＞盐酸＞硫酸＞ HSO4
＞硝酸＞其它弱酸 （磷酸、有机酸）
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1. 有机酸盐的测定 由于有机酸系弱酸，被高氯酸置
换出的HA，对滴定无干扰，能准确滴 定。
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马来酸麦角新碱 ChP(2000)
取本品约 60mg，精密称定，加冰醋酸 20ml 溶解后，加结晶紫指示液 1滴，用高 氯酸滴定液（0.05mo1/L）滴定，至溶液显 蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。 每 1ml 高氯酸滴定液（0.05mol/L）相当于 22.07mg 的C19H23N3O2·C4H4O4。
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（3）加校正因子的主成分自身对照法
方法 待测成分对照品+杂质对照品→
溶液，进样，记录色谱图，计算杂 质的校正因子
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S溶 剂 溶 解 供试品溶液 一定量供试 品 稀 释 溶 对 液照溶液
分别进样，供试品溶液的记录时间除另
有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，
测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，
盐酸吗 +钼啡 硫酸 紫色 兰色棕绿
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（六） 官能团反应 吲哚生物碱
1. 利血平 + 新制香草醛→玫瑰红色
2. 利血平 对二甲氨基苯甲醛 冰 醋酸 、 硫酸绿色冰 醋 酸 红色
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（七）紫脲酸胺反应 黄嘌啉类生物碱
咖 茶啡 碱因 +HCl+KClO3 氨 蒸气 干紫色 KOH 紫色消
B. 杂质特征峰的确定
C. 杂质相关峰的确定
D. 杂质官能团的确定
E. 药物和杂质的鉴别
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第四节 含量测定
一、非水溶液滴定法（非水碱量法）
原料药
（一）原理
水溶液中滴定突跃不明显，在非水
介质中，碱性增强，使滴定顺利进行
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1. 溶剂
酸性溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、
醋酐
惰性溶剂：苯、氯仿、四氯化碳