抗胃蛋白酶水解的蚯蚓纤溶酶组分

ｌБайду номын сангаас料与方法
１．１赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａ ｌ＇ｅｔｉｄａ），天津贾立明蚯蚓养殖公司提供。 １．２蚯蚓纤溶酶全组分的制备，采用亲和层析分离蚯蚓纤溶酶全组分埔１。 １．３蚯蚓纤溶酶耐酸性的检验 将蚯蚓纤溶酶全组分用Ｏ．１ ｍｏｌ／Ｌ甘氨酸一盐酸（ＰＨ２．２）缓冲液溶解，浓度为ｌ 温浴不同时间，分别在０，５， 酸一氢氧化钠（ＰＨＩＯ．６）１０ 止反应。 １．４蚯蚓纤溶酶组分对胃蛋白酶抗性 将ＥＦＥ用Ｏ．１ ｍｏｌ／Ｌ甘氨酸一盐酸（ＰＨ２．２）缓冲液溶解，浓度为１
２
４结粜分析 将ＥＦ【：棚胰蛋白酶起保韫，发现所有组分都能耐受胰蛋自酶的水解，述与将蚯蚓纤溶酶制备成肠
溶性腔囊是致的。将能耐受胄蚩白酶的几个组分纯化以后，单独与管蛋白酶起保温．发现其耐受性
有所降低，表明蚯蚓纤溶酶组分之间存在相互作用。 另外，采用加热和不加热的纤维蛋白平板法检测，组分１和２只具有直接纤溶活性，无激活活性， 而且两者都是糖蛋白。而组分８只具有激活活性，也是糖蛋白。 参考文献
抗胃蛋白酶水解的蚯蚓纤溶酶组分
武金霞，张贺迎
（河北大学生命科学学院，保定０７１００２） 【摘要】目的鉴定抗胃蛋白酶水解的蚯蚓纤溶酶组分．方法酸性缓冲液和胃蛋白酶处理纤溶酶组分，用
聚丙酰胺凝胶电泳检测组分是否被水解．结果有组分都耐受Ｏ．Ｉ ｍｏｌ／Ｌ甘氨酸一盐酸缓冲液（ｐＨ２．２），
一些组分在该缓冲液中能耐受胃蛋白酶水解３００分钟。结论蚓纤溶酶组分能耐受酸性环境，一些组分
还能耐受胃蛋白酶的水解．
【关键词】蚯蚓纤溶酶；抗胃蛋白酶；纤溶活性
蚯蚓纤溶酶（ｅａｒｔｈｗｏｒｍ
ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ
ｅｎｚｙｍｅ，ＥＦＥ）作为溶栓药物广泛应用于临床，具有疗效好、
副作用低等优点，尤其是能制备成口服药物，方便了患者使用ｕ－３１。有人研究了蚯蚓纤溶酶组分能完整 地通过小肠上皮细胞吸收Ｈ１，但许多入置疑蚯蚓纤溶酶能否耐受胃酸环境而失活，经常将其制备成肠溶 性胶囊哺１。本文研究了蚯蚓纤溶酶组分对酸性环境和胃蛋白酶的耐受性，为研制蚯蚓纤溶酶的剂型提供 理论依据。
ｕ
１８０，３００分钟取样１０
Ｌ，立即用甘氨酸一氢氧化钠（ＰＨＩＯ．６）１０ＩＩ Ｌ中和，后加入１
ＬＩＯ倍ＰＢＳ
缓冲液，使ｐＨ值接近７，－２０℃放置，终止反应。 １．５聚丙烯酰胺凝胶电泳检测组分的耐酸性和对胃蛋白酶的耐受性 将ＥＦＥ在酸性条件下水解不同时间的水解液加入同体积的两倍天然样品液，电泳检测。将ＥＦＥ的胃 蛋白酶不同时间的水解液加入同体积的两倍天然样品液，电泳检测。 １．６单组分的活性检测 采用加热和不加热的纤维蛋白平板测定组分的直接纤溶活性和激活活性。¨。
３
ｐ ＩＩ Ｉｌ
ｇ／ｕ Ｌ。在３７℃
１５，３０，６０，９０，１２０，１５０，１８０，３００分钟取样１０
１１
ｐ
Ｌ，立即用甘氨
Ｌ中和，后加入ｌ
ＬＩＯ倍ＰＢＳ缓冲液，使ｐＨ值接近７，一２０℃放置，中
ｇ／弘Ｌ，按纤溶酶：胃蛋白酶
１５，３０，６０，９０，１２０，１５０，
ＩＩ
０：１的比例加入胃蛋白酶，在３ ７℃温浴不同时间，分别在Ｏ，５，
４５ｌ
抗胃蛋白酶水解的蚯蚓纤溶酶组分
作者： 作者单位： 武金霞， 张贺迎 河北大学生命科学学院,保定 071002
本文链接：/Conference_6474887.aspx 授权使用：石家庄学院(sjzxy)，授权号：7cb11706-f6d1-497b-a6a5-9dce009f9bdc 下载时间：2010年8月10日
【ｌ】Ｍｉｈａｒａ Ｈ，Ｓｕｍｉ Ｈ，Ａｋａｚａｗａ Ｋ Ｙｏｎｅｔａ ｔ Ｓｏｅｄｅ Ｍ，Ｍａｒｕｙｙａｍａ Ｍ，Ｍｃｚｕｍｏｔｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅａｒｔｈｗｏｒｍ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９８３，５０：２５８・２６２． ［２］赵炜明，，许超千，，何树庄，等．蚓激酶溶栓作用的实验研究［Ｊ］．哈尔滨医科大学学报，２００２，３６（３）：１８３・１８５． ［３］赵晓瑜，静天玉．蚯蚓纤溶酶的成分分析［Ｊ］．中国生物化学与分子生物学报，１９９８，１４（４）：４０７－４１１． ｆ４】４ Ｑｉａｏ Ｅ Ｗｕ Ｃ，Ｌｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｍｅ Ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔａｃｔ Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ＥｎｚｙｍｅｌｌＩ－Ｉ ｆｒｏｍ Ｌｕｍｂｒｉｅｕａ
ｌ ５０
Ｉ，～ｌＯ升刖为水觯ｏ ５ １５ ３０∽９０ １２０
１８０ ３００分的样品
图：ｊ显示，所有蚯＇Ｎ－ｉＴ皤酶组ｊ，在３０
ｍｉ
ｒｌ内没有明显变化．说明短时司内这些组分能耐受胃夤白
酶水解：但在３０分后，迁移率腊中ｆ｝ｉ】的编分条带颜色逐渐变浅，说明这些条带被胃蚩臼酶水解；当水 解３００ ｍｉｎ后，组分Ｉ、２和８没有变化，说明这蝗缀分极具胃蚩白酶抗性，而组分３和９还有少量残 留，其它组分则馊胃蛋向酶水解，
５ １５ ３０ ６０ ９０
１０
ｌ—１０舒刺为瞳性条件保温０
１２０ ｌｊ０ ｊ８０ ３０ｒ）分的样品
目２显示，将蚯蚓纤溶酶全纽分在酸性缓冲液中保温３００ ｍＪｎ后，所有组分的条带基奉没有变化 说明．这些组分都能耐受酸性环境。
２
３胃蛋白酶对蚯蚓纤溶酶ｆ；ｆ１分的怍用
【
２
３
４
５
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７
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９
１０
圈３
胃蛋白酶耐析蚓纤溶酶组分的水解作用
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ｒｕｂｅＵｕｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，２００１，１ ５２６：２８６－２９２． ［５］张俐伟．蚓激酶肠溶包衣微丸的制备及其胶囊剂释放度研究［Ｊ］．江西中医学院学报，２００４，１６（２）： ７５—７６． ［６］杜学敏，武金霞，赵晓瑜，等．两种配基亲和层析分离蚯蚓纤溶酶［Ｊ］．河北大学学报（自若那科学版），２００６，２６（增 刊）：９７－１０１． ［７］武金霞，赵晓瑜．酪蛋白平板法检测蚯蚓纤溶酶活性［Ｊ］．自然杂志，２００４，２６（３）：１８４—１８５．
２结果与讨论
２．１蚯蚓纤溶酶全组分检测 以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和层析获得蚯蚓纤溶酶的全组分，聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱如图
１。
４４９
‘。Ｈ
图ｌ
ＰＡＧＥ检测蚯蚓纤溶酶垒组丹
可知，亲羊¨层析能从蚯蚓匀浆液中获得１０～１２个组分，这些组分多数具有纤溶酶活性。 ２．２蚯蚓纤溶酶组分的耐酸性
１
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