儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病检测及其进展

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病检测及其进展
摘要：主要综述了急性淋巴细胞白血病(ALL）患儿检测体内微小残留病（MRD）
的临床意义、现阶段主要使用的检测手段（PCR、FCM、NGS），寄希望于为提高ALL患儿MRD检出率及临床处理提供一定参考。

关键词：急性淋巴细胞白血病；体内微小残留病；PCR；FCM；NGS 急性淋巴细胞白血病(ALL）是发生于单个B或T淋巴细胞前体细胞的恶性肿
瘤，主要包括急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)、急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)。

其
致病成因现阶段不具统一定论，较认可的理念是与离子辐射、先天易感性、化学
物质、污染、病毒感染等因素具正相关连带性。

MRD是ALL患者经诱导缓解治疗
后(或骨髓移植后) ，于患儿机体内残留的具有形态学而难以常规检测到微量白血
病细胞的病变状态。

检测ALL患儿MRD对延长生存时间具有重要的现实意义，
本文对此展开相关论述。

1 ALL患者检测MRD的临床意义
MRD临床检测意义及其应用于危险度分层治疗、制定治疗方案具有正相关连
带性。

因而，使用不同治疗方案的临床人员，多倾向于使用各具差异的MRD检
测时间点、1或2种检测方法以及不同MRD阈值予以危险程度分级。

例如St．Jude的XVI号方案，其将治疗第15d与第42d的骨髓中MRD水平检测予以危险的分级。

第15d，若患儿MRD≥1%，主张开展经强化的诱导性缓解治疗；患儿MRD≥5%，则给予双重强化性治疗。

而患儿MRD ≤0.01%，则给予次级强度的诱导
治疗与低剂量蒽环霉素。

标准危险度的ALL患儿若于第42d，MRD≥0.01%，则归
类于高危；第42d MRD≥1%，将于首次至缓解时实施造血干细胞移植。

同时仅仅
检测并监护第42d MRD阳性且经缓解后的B-ALL患儿进，但所有T-ALL患儿均需
使用外周血检测经缓解的MRD，若MRD持续呈阳性或转变为阳性，需再行造血
干细胞移植。

2 现阶段检测ALL患儿MRD所应用方法
2.1 实时荧光定量检测（PCR）
PCR检测ALL患儿中，约有40%可精准检测到融合基因转录本[1]。

例如
RUNX1-RUNX1T1(AML1-ETO)、CBFB/MYH11以及MLL基因重排，灵敏度为0.01%；FLT3内部串联重复突变与RAS突变也是MRD检测靶点之一，但假阴性较高；而NPMI基因突也是PCR检测靶点之一，与Ig、TCR基因重排一致，仅仅在10%的
AM患儿可检出，因而临床应用具有显著局限性。

在ALL中WT1基因表达过度，
通过PCR检测水平变化可作为评估MRD及危险度的首选，而儿童ALL WT1基因
表达过度的比例与PCR检测的灵敏度仍需借助大批样本予以深入研究。

现阶段
ALL患儿检测MRD最为基本的方法即是RQ-PCR，主要检测异常融合基因转录本，敏感性达0.0001%，但难以融合基因予以联合检测，该技术应用于ALL患者仅具
有25%左右。

1.2多参数流式细胞仪(FCM)
临床大量研究证实FCM检测LAIPs的灵敏度为0.01% ~0.001%，＞90%的ALL
患儿主张使用FCM测定MRD。

药物治疗、白血病细胞的异质性可致使LAIPs并发
抗原漂移（免疫表型变动）。

此时凭借初诊时建立模板，无法用于评估MRD，增
加结果假阴性检出率。

糖皮质激素可致使B-ALL患者血清CD10、CD34表达弱化。

源自不同正常法（different fromnormal）是使用FCM检测MRD方法之一，主要
是使用已明确的健康群体的骨髓细胞免疫表型谱，检测并区分异常白血病细胞，
优点在于无需考虑初诊时患者LAIPs，防止抗原漂移所致假阴性，但改法相对耗时较大。

有研究表明，急性髓系白血病中，增加机体髓样抑制性凝集素C、CD-123
至FCM的抗体组合中，可避免抗原漂移导致检出为假阴性[2]。

而应用于ALL患儿中尚不具相关报道。

综合而言，适当增加抗体组合，联合使用其他检测手段，有
助于提升MRD检出阳性率。

1.3 二代测序(NGS)
由于NGS可采用共有引物实现快速、平行测序，因此无需耗费大量时间精力
建立患儿者特异性引物，相较于PCR更为便捷。

加之，所选样本中样本中靶基因
座的所有重排均正序排列，NGS可反馈连带至生理B细胞库或T细胞库对诊断具
辅助价值的有效信息。

Fabio等人[3]对比FCM、NGS检测ALL MRD，其表明NGS
相较于FCM之于预测病症复发率、复发区间及3年总生存率更为精确，尤其是MRD阴性患儿(复发率0% ：15.44% ；3年总生存率97.26% ：81.59% )。

并且，移
植后NGS检测MRD 相较于FCM预测复发更为便捷，尤其是移植后30 d及30d+。

唐雪等人[4]对比分析PCR与NGS检测MRD预测复发结果，也表明NGS更优于PCR。

借此分析可表明，NGS相较于PCR、FCM灵敏度相对更高，预测ALL的危
险分层、复发预测效果更优，但存在局限性在于针对生物学信息、校准器使用、
临床经验、后期数据处理、经济适用性、标本污染等问题还需进一步深入拓展研究。

结语
综合来说，FCM、PCR、NGS三种检查方法检测MRD均具特点，FCM检测MRD可将骨髓作为首选标本，但T-ALL患儿的外周血仍可作为MRD检测标本；ALL患儿检测MRD可针对其实现危险程度分级、评估疗效，以选择不同或优化治
疗策略，实现针对性的个体化治疗。

ALL患儿检测MRD还可为评估、判断预后提
供一定价值；而NGS技术应用于ALL患儿检测MRD的特异度、灵敏度相较于FCM、PCR更高。

临床应对三种检测方法的优势、局限性均进行拓展分析，为临
床及时、安全且有效治疗MRD提供实质性的辅助价值。

参考文献
[1]徐梅珍. Screening of adult Ph-like acute lymphoblastic leukemia by multiplex real-time quantitative PCR[J]. China Medical Abstracts(Internal Medicine),2018,01:57-58. [2]代晓宇,路媛,王志恒,李明卓,司书成,李吉庆,井明,薛付忠. 血常规数据判别骨髓增生异常综合征和急性髓样白血病的应用价值[J]. 山东大学学报(医学版),,:1-7.
[3]Efficace Fabio,Cottone Francesco,Sparano Francesco,et al. Patient-reported outcome assessment in acute leukemias: Moving beyond the barriers.[J].
Cancer,2018,12414:.
[4]唐雪,宪莹,温贤浩,等. 流式细胞术及PCR技术在儿童急性B淋巴细胞白血病微
小残留病监测中的价值[J]. 现代医药卫生,2018,04:502-505.。