清热止咳口服液质量标准研究

清热止咳口服液质量标准研究
目的：研究清热止咳口服液的质量标准。

方法：用薄层色谱法检查麻黄、甘草；用HPLC法测定黄芩苷的含量。

结果：该药每支含黄芩苷不得低于50.0 mg。

结论：该定量方法快速灵敏、稳定可靠。

[Abstract] Objective: Study the methods of quality control of Qingre Zhike Oral Liquid. Methods: Check hebra ephedrae and licorice root by thin layer chromatography; check the content of baicalin by high performance liquid chromatography. Results: The content of baicalin should not under 50.0 mg every bottle. Conclusion: The quanlitative analysis is expeditious and delicate, stable and reliable.
[Key words] Qingre Zhike Oral Liquid; Baicalin; Quality standard
清热止咳口服液由麻黄、苦杏仁、甘草、黄芩等七味药组成，载于部颁标准，具有清热、宣肺、平喘、利咽的功效，多用于小儿外感、邪毒内盛、发热恶寒、咳嗽痰黄、气促喘息等症。

其疗效可靠、应用面广，但其质量标准尚不够完善，为加强清热止咳口服液的质量控制，必须提高其质量标准。

本文就其定性、定量有关内容进行研究和探讨。

1 仪器与试药
日本岛津LC-10A液相色谱仪。

清热止咳口服液（广州群星药业股份有限公司，批号为20051005、20051008、20051010）。

盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0714、9903）；甘草对照药材（中国药品生物制品检定所，批号为0904-200108）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110715-200212）。

甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1定性鉴别
2.1.1麻黄的鉴别对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品20 ml，加浓氨试液1 ml，用乙醚振摇提取2次，每次20 ml，合并乙醚提取液，加盐酸乙醇溶液（1→20）1 ml，摇匀，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。

吸取上述两种溶液各约10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇
-浓氨试液（20∶3.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热约10 min。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。

2.1.2 甘草的鉴别对照品溶液的制备：取甘草对照药材1 g，加乙醚40 ml，加热回流1 h，滤过，药渣加甲醇30 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，按供试品制备方法，自“残渣加水30 ml使溶解……”同法操作，作为对照药材溶液。

供试品溶液的制备：取本品20 ml，加20 ml水稀释混匀，加乙醚40 ml提取，弃去乙醚液，取水液蒸至近干，加甲醇50 ml使溶解，滤过，水浴蒸干，残渣加水30 ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30 ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20 ml，弃去水液，水浴蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。

吸取上述两种溶液各约10 μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点。

2.2 含量测定
2.2.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为40℃，流动相为甲醇-磷酸三乙胺水溶液（50∶50），流速为1.0 ml/min，检测波长为278 nm，理论塔板数按黄芩苷色谱峰计算，不得低于5 000。

2.2.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每毫升含0.15 mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品溶液，混匀，精密吸取2 ml，置100 ml容量瓶中，加入70%乙醇稀释至刻度，摇匀，溶液经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，溶液备用。

阴性对照液的制备：取缺黄芩的阴性对照溶液，同上制备。

2.3 阴性干扰实验
在选定的色谱条件下，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品液各5 μl，注入液相色谱仪中，测定，阴性样品在对照品相同保留时间位置上无干扰峰。

2.4 线性关系考察
精密称取黄芩苷对照品15.86 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.158 6 mg的溶液。

分别精密吸取1、3、5、7、9 μl溶液，注入液相色谱器仪中，测定色谱峰面积，测定结果见表1。

表 1 线性范围考察结果
以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得回归方程为Y=6 463 698.61X＋60 182.0，r=0.999 9。

测定结果提示，黄芩苷进样量在0.15～1.42 μg范围内线性关系良好。

2.5 供试品溶液制备方法考察
鉴于本制剂为液体制剂，本试验采用精密吸取样品液一定量，加入溶剂稀释的方法制备供试液，根据黄芩苷的化学性质及参考现行药典黄芩测定方法，分别采用70%乙醇与甲醇为溶媒，对黄芩苷提取量为指标进行考察，考察结果见表2。

表 2 提取溶剂考察结果(n=3)
测定结果表明，以70%乙醇为提取溶剂，黄芩苷含量明显高于甲醇，故选用70%乙醇为提取溶剂。

2.6 稳定性试验
取样品5支，倾出内容液，混匀，精密吸取2 ml，按含量测定方法制备供试液，精密取同一供试液，按0、2、4、6、8 h间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表3。

表 3 稳定性试验考察结果
试验结果提示，供试液制备后8 h内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

2.7 精密度试验
取样品6支，倾出内容液，混匀，精密吸取2 ml，按含量测定方法制备供试液，精密取同一供试液，分别精密吸取5 μl，连续进样5次，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表4。

测定结果表明，本试验精密度符合有关规定。

2.8 重复性试验
取5份样品，各5支，分别倾出内容液，混匀，精密吸取2 ml，按含量测定方法制备供试液，精密取同一供试液，测定，测定结果见表5。

结果表明，本法重复性良好。

表 5 重复性试验测定结果
2.9 回收率试验
取本品6份（含量为70.68 mg/支，装量为10 ml/支），每份各5支，倾出内容液，混匀，精密吸取1 ml，置100 ml容量瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液（0.262 mg/ml）25 ml，按样品含量测定项下方法操作，测定，测定结果见表6。

表 6 回收率试验测定结果
测定结果提示，本方法回收率在95.1%～99.2%之间，RSD为1.69%
2.10 样品含量测定
采用前述含量测定方法，测定3批样品中黄芩苷的含量，测定结果见表7。

表7 3批样品含量测定结果(mg/支)
根据上述测定结果，暂定本品每支含黄芩以黄芩苷计算，不得少于54.0 mg。

3 讨论
清热止咳口服液主要由麻黄、甘草、黄芩等组成，麻黄、甘草为止咳平喘的主要成分，因此用薄层色谱法测定麻黄、甘草。

笔者曾对组分中有效成分比较明确的甘草中的甘草酸及黄芩中的黄芩苷等进行了含量测定研究，但由于该处方中组分较多、成分比较复杂，干扰有效成分的含量测定，除黄芩苷含量测定比较理想外，其他成分无法完成含量测定，因此最终选择黄芩中的有效成分黄芩苷作为含量测定指标。

根据多批市售清热止咳口服液中黄芩苷含量测定结果，结合《中国药典》一部黄芩项下黄芩苷的含量限度，建议每支清热止咳口服液中黄芩苷的含量限度应不低于50.00 mg。

[參考文献]
[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:211-212.
[2]吕武清.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社,1997:300.
[3]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997:615-640.。