不同产地椒目药材的质量评价

不同产地椒目药材的质量评价
王少苹;孙欢欢;张沙沙;高建平;仇丽霞;白云娥
【摘要】Objective To compare the quality of 10 batches of Zanthoxyli Semen from different areas roundly,and to provide the basis for establishing the quality evaluation system.Methods The gas chromatography(GC) method was established to determine the content of α-linolenic acid.The contents of water,ash,acid-insoluble ash,alcohol-soluble extractives and fatty oil were determined according to the methods in the General Principle of the Fourth Part of Chinese Pharmacopeia (2015 edition).Meanwhile,the determination results were used for cluster analysis.Results The contents of water,total ash and acid-insoluble ash of 10 batches of samples varied in the range of 9.66％-11.55 ％,5.13 ％-6.51％,0.11％-56 ％,respectively.The contents of ethanol-soluble extractives,fatty oil and α-linolenic acid in dried Zanthoxyli Semen varied in the range of 16.77％-24.80％,19.82％-28.08％,4.06％-
6.56％,respectively.The hierarchical-cluster analysis showed that samples were clustered into two groups.Samples from Linzhou in Henan,Ruicheng and Yuxian in Shanxi were clustered into one class,and the other samples from Chengdu and Anhui were clustered into the other class.The t-test showed that the contents of water,total ash,acid-insoluble ash and α-linolenic acid had no statistical difference between two groups,but the contents of ethanol-soluble extractives and fatty oil showed statistical difference.The contents of ethanol-soluble extractives and fatty oil in
samples from Linzhou in Henan,Ruicheng and Yuxian in Shanxi were higher.Conclusion The GC method established in this study can be used to determine the contents of α-linolenic acid.Multi-index cluster analysis can provide a certain basis for comprehensive evaluation of the quality of Zanthoxyli Semen.%目的综合比较10批不同产地椒目药材的质量,为建立椒目质量评价体系提供依据. 方法建立椒目中α-亚麻酸的气相色谱(GC)测定方法,同时参照2015版《中国药典》第四部通则的相关方法,测定水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、脂肪油的含量,采用聚类分析和t检验对10批不同产地椒目药材进行质量评价. 结果椒目中水分含量为9.66％-11.55％,灰分含量为5.13％-6.51％,
酸不溶性灰分含量为0.11％-0.56％;以干燥品计,椒目浸出物含量为16.77％-
24.80％,脂肪油含量为19.82％-28.08％,α-亚麻酸含量为4.06％-6.56％.聚类分析显示,河南林州、广西、山西芮城4地及山西盂县的样品聚为一类;成都及安徽购买的2批样品聚为一类.两类样品在含水量、灰分、酸不溶性灰及α-亚麻酸含量方面没有显著性差异,在浸出物及脂肪油含量方面有显著性差异,河南林州、广西、山西
芮城4地及盂县的椒目样品的浸出物及脂肪油含量较高. 结论本次建立的GC测定方法可用于椒目α-亚麻酸的含量测定;椒目多指标的聚类分析结果,可为合理评价椒目药材的质量提供一定的依据.
【期刊名称】《山西医科大学学报》
【年(卷),期】2017(048)005
【总页数】6页(P445-450)
【关键词】椒目;聚类分析;质量评价;气相色谱法
【作者】王少苹;孙欢欢;张沙沙;高建平;仇丽霞;白云娥
【作者单位】山西医科大学药学院中药教研室,太原030001;山西医科大学药学院
中药教研室,太原030001;山西医科大学药学院中药教研室,太原030001;山西医科
大学药学院中药教研室,太原030001;山西医科大学公共卫生学院;山西医科大学药
学院中药教研室,太原030001
【正文语种】中文
【中图分类】R927.11
椒目(Zanthoxyli Semen)为芸香科植物花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim.)和青椒(Zanthoxylum schinifolium Sieb.et Zucc.)的干燥成熟种子,性寒,味苦、辛,有小毒,入脾、膀胱二经,具有利水、平喘之功,用于治疗水肿胀满,痰饮喘逆等症[1]。

国内外研究表明,椒目仁中富含不饱和脂肪酸,如α-亚麻酸、油酸、亚油酸等[2],其
中α-亚麻酸对维持人体生理机能[3]和疾病治疗[4,5]有重要作用,结合山西省药检所地方标准提升的要求,以α-亚麻酸作为椒目药材指标性成分。

椒目作为养生保健及医药领域的主要原料,在全国大部分地区均有分布,但市场上椒目的主流基源为芸香
科植物花椒的干燥成熟种子,本实验收集的10批椒目均为花椒的干燥成熟种子。

椒目的质量控制标准仅在山东、上海等地方标准中有关于性状、粉末显微特征及薄层鉴别的收载,徐淑媛等[6]测定了椒目药材中的浸出物、椒目油总量及α-亚麻酸的含量,但并未对椒目药材的质量进行综合评价。

为了综合评价市场上椒目药材的质量,
本文建立了椒目中α-亚麻酸的气相色谱测定方法,测定了10批不同产地椒目药材
中α-亚麻酸的含量,同时依据《中国药典》[7]方法,测定了水分、灰分、酸不溶性
灰分、醇溶性浸出物、脂肪油的含量,并对10批不同产地椒目药材进行了聚类分析及比较,以期为建立椒目较完善的质量评价体系提供依据。

气相色谱仪(北分瑞利分析仪器有限公司,型号SP-2100);聚乙二醇20000(PEG-
20M)毛细管柱(大连市物理化学研究所);电子天平(赛多利斯Sartorius科学仪器(北
京)有限公司,万分之一)。

α-亚麻酸标准品(中国药品生物制品检定所,批号:11163-201404);十四酸(上海振谱生物有限公司,克拉玛尔牌,纯度:99.5%);正己烷(天津市大茂化学试剂厂,色谱纯);甲苯等均为分析纯;椒目药材10批(各地采集或公司购买),并经山西医科大学白云娥副教授鉴定均为芸香科植物花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim.)的干燥种子,样品信息见表1。

2.1 水分
分别取椒目粉末(过二号筛)约15 g(n=3),精密称定,按2015版《中国药典》四部通则0832中的甲苯法测定椒目含水量，结果见表2。

2.2 总灰分及酸不溶性灰分的测定
分别取椒目粉末(过二号筛)4 g(n=3),精密称定,按2015年版《中国药典》四部通
则2302灰分测定法进行测定，结果见表2。

2.3 浸出物的测定
分别取椒目粉末(过二号筛)约4 g(n=3),精密称定,参考文献[6]及2015版《中国药典》四部通则2201中的醇冷浸法,以95%乙醇为溶剂进行测定，结果见表2。

2.4 脂肪油测定
参照2015版《中国药典》亚麻子质量标准及相关文献[8-10],分别取椒目粉末(过
二号筛)10 g(n=3),精密称定,置具塞锥形瓶中,加石油醚(60-90 ℃)80 ml,超声处理30 min,滤过,滤渣再用石油醚60 ml重复处理一次,合并滤液,减压回收溶剂,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上低温蒸干,于干燥器中干燥24 h,精密称定,计算,即得。

结果见表2。

2.5 α-亚麻酸测定
2.5.1 色谱条件与系统适用性试验
采用聚乙二醇20000(PEG-20 M)毛细管柱(柱长30 m,内径0.25 mm,膜厚度0.5
μm)[11,12],氢气40 ml/min,空气400 ml/min,柱温190 ℃,检测器温度250 ℃,进样口温度为250 ℃,分流比25 ∶1。

在该色谱条件下,分别取空白溶剂、对照品溶液、内标[13](十四酸)溶液、供试品溶液进样,结果显示,供试品中α-亚麻酸与内标及其
他成分分离良好,峰形良好,分离度达到要求(见图1)。

2.5.2 溶液的制备内标溶液的制备取十四酸100 mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,加
入0.5 mol/L KOH甲醇溶液1 ml,置60 ℃水浴加热30 min,取出,放冷。

加入14%三氟化硼甲醇溶液1 ml,置60 ℃水浴加热20 min,取出,放冷。

精密加入正己烷10 ml,充分振摇,加入饱和食盐水15 ml,摇匀,静置30 min。

取上层续滤液,作为内标溶液。

对照品溶液的制备取α-亚麻酸对照品150 mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入0.5 mol/L KOH甲醇溶液1 ml,置60 ℃水浴加热30 min,取出,放冷。

加入14%三氟
化硼甲醇溶液1 ml,置60 ℃水浴加热20 min,取出,放冷。

精密加入正己烷10 ml,
充分振摇,加入饱和食盐水15 ml,摇匀,静置30 min。

取上层续滤液,作为对照品溶液。

供试品溶液的制备取脂肪油70 mg,内标10 mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入
0.5 mol/L KOH甲醇溶液1 ml,置60 ℃水浴中加热30 min,取出,放冷,加入14%
三氟化硼甲醇溶液1 m l,60 ℃水浴中加热20 min,取出,放冷。

精密加入正己烷5 ml,充分振摇,加入饱和食盐水20 ml,振匀,静置30 min。

取上层续滤液,作为供试品溶液。

2.5.3 线性范围考察精密吸取对照品溶液0.10,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0 ml,内标溶液
各1.0 ml,分别置5 ml量瓶中,加正己烷稀释至刻线,充分摇匀,静置,取1 μl进样,记
录峰面积。

以α-亚麻酸浓度(mg/ml)为横坐标,以α-亚麻酸峰面积与内标峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线。

得回归方程:Y=0.487 1X+0.001 5,r=0.999 9(n=6)。

结果表明,α-亚麻酸在0.304 6-12.184 0 mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。

2.5.4 精密度试验取样品1椒目脂肪油70 mg,十四酸10 mg,精密称定,按2.5.2项供试品溶液的制备,连续测定6次,记录峰面积,结果RSD为0.54%(见表3),表明该仪器精密度良好。

2.5.5 稳定性试验取样品1椒目脂肪油70 mg,十四酸10 mg,精密称定,按照2.5.2项供试品溶液的制备,分别于0,2,4,6,8,10 h时依法测定,RSD为0.83%(见表4),表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.5.6 重复性试验取已知α-亚麻酸含量的脂肪油(样品1)6份,约70 mg,精密称定,按2.5.2项供试品溶液的制备,依法测定。

结果显示,α-亚麻酸含量均值为
4.83%,RSD为4.08%(见表5)。

表明该方法重复性良好。

2.5.7 加样回收率试验取已知α-亚麻酸含量的脂肪油(样品1)5份,约35 mg,精密称定,采用高、中、低(1 ∶1.2,1 ∶1,1 ∶0.8)的不等量加样回收率法进行,依次分别精密加入α-亚麻酸对照品及内标10 mg。

按2.5.2项供试品溶液的制备,依法测定计算,结果见表6。

2.5.8 样品含量的测定分别取椒目脂肪油70 mg(n=3),内标10 mg,精密称定,按2.5.2项供试品溶液的制备,依法测定,计算药材中α-亚麻酸含量。

结果见表2。

由表2可知,椒目中水分含量为9.66%-11.55%,灰分含量为5.13%-6.51%,酸不溶性灰分含量为0.11%-0.56%;以干燥品计,椒目中浸出物含量为16.77%-24.80%,脂肪油含量为19.82%-28.08%,α-亚麻酸含量为4.06%-6.56%。

2.6 聚类分析采用软件SPSS 22.0,对不同产地的10批样品中水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物、脂肪油及α-亚麻酸的测定结果进行聚类分析,结果见图2。

由系统聚类树形图可见,10批样品可聚为两类,河南林州、广西、山西芮城4地、山西盂县的样品(编号为1,3,4,5,9,10,6)间的距离较小,质量相近,聚为一类(即第一类);成都及安徽购买的2批样品(编号为2,7,8)间距离较小,质量相近,聚为一类(即第二类)。

第一类中虽然河南、广西的椒目与山西的聚为一类,但山西芮城4地(样品编号为
4,5,9,10)间距离更近,表明产地相近的样品,在水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物、脂肪油及α-亚麻酸方面相近,进一步说明了地域性对椒目质量的影响。

对聚类分析结果的两大类椒目样品,进行t检验,结果见表7。

结果显示,含水量、灰分、酸不溶性灰分及α-亚麻酸含量按α=0.05水准,P>0.05,说明在含水量、灰分、酸不溶性灰分及α-亚麻酸含量方面,两类样品没有显著性差异;脂肪油和浸出物含量按α=0.05水准,P<0.05,说明在脂肪油和浸出物含量方面,两类样品有显著性差异。

综合表2、图2、表7结果可知,从水分、灰分、酸不溶性灰分及α-亚麻酸含量四
方面考虑,不同产地的10批椒目样品的均一性较好;从浸出物及脂肪油含量两方面
考虑,山西芮城4地、盂县、林州及广西的椒目样品(第一类)的浸出物及脂肪油含量较高,而成都、安徽2批的椒目样品(第二类)较低。

3.1 对脂肪油提取工艺的优化
采用单因素实验,分别对脂肪油的提取溶剂(正己烷、石油醚)、料液比(1 ∶6、1 ∶8、1 ∶10)、提取时间(20，30，40 min)进行了考察,结果以石油醚为溶剂,料液比为
1 ∶8,超声提取30 min,提取率较高。

3.2 对甲酯化条件的优化
在参照2015版《中国药典》亚麻子质量标准及文献[14-16]的基础上,对甲酯化的皂化剂量、酯化剂量、酯化时间进行了考察。

比较了皂化剂量(1，2，3 ml),酯化
剂量(1，2，3 ml)和酯化时间(15，20 min)的甲酯化效果,结果以0.5 mol/L KOH 甲醇溶液1 ml,60 ℃水浴加热30 min;14%三氟化硼甲醇溶液1 ml,60 ℃水浴加热20 min为最佳甲酯化条件。

本文建立的GC色谱法,线性、精密度、准确度良好,可以用于椒目药材中α-亚麻酸的测定,为椒目质量标准的建立提供一定的依据。

椒目多指标的聚类分析及t检验
结果提示,在含水量、灰分、酸不溶性灰分含量较一致的情况下,从浸出物、脂肪油
及α-亚麻酸三方面综合评价不同产地椒目药材的质量较合理,多指标聚类分析可以
为椒目药材质量评价提供参考。

评价椒目药材的质量应从多个影响因素综合考虑,仅考虑一种或几种有效成分含量的药材质量评价方式,需进一步探讨。

致谢:山西医科大学药学院李建宽、张晓霞、张忠鹏老师及2015届毕业生张敏、邹文隽、蔡晶晶、李立文同学;山西药科职业学院蔡翠芳老师;山西省食品药品检验所张彬、史宪海、张俊凤、崔宇宏等老师在实验中给予的帮助,在此一并表示感谢!
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