羊棘球蚴(包虫)基因工程亚单位疫苗与口蹄疫灭活疫苗及小反刍兽疫活疫苗联合使用的免疫效果分析

健康养殖·诊疗2020.13 畜牧业环境
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摘　要：为分析羊棘球蚴（包虫）基因工程亚单位疫苗（GESV）与羊口蹄疫灭活疫苗（IFMDV）及小反刍兽疫活疫苗（LPPRV）联合使用的免疫效果。

本试验采用羊棘球蚴基因工程亚单位疫苗与口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗及小反刍兽疫活疫苗联合免疫绵羊，观察绵羊不良反应。

采用间接ELISA法和液相阻断ELISA 法分别测定绵羊血清中抗羊棘球蚴主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体和口蹄疫抗体及小反刍兽疫抗体水平。

结果显示 GESV（皮下）和 IFMDV（肌肉）及LPPRV（皮下）联合免疫绵羊后，仅个别羊出现一过性体温升高的免疫反应现象，未见明显的不良反应；同时，绵羊血清中抗羊棘球蚴主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体水平明显高于单独免疫GESV组（P＜0.05），且不影响口蹄疫抗体及小反刍兽疫抗体水平（P＞0.05）。

表示GESV与IFMDV及LPPRV联合使用具有良好的安全性，且可提高GESV的免疫效果。

关键词：绵羊；棘球蚴（包虫）基因工程亚单位疫苗；口蹄疫灭活疫苗；小反刍兽疫活疫苗；联合免疫
1　前言
《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》中将棘球蚴病列入人畜共患病防控名录。

目前主要多发于新疆、甘肃、青海等西北地区，在生产过程中控制包虫病的流行可以通过切断绦虫的生活发育环节来进行，如预防中间宿主感染棘球蚴，加大终末宿主的驱虫力度，阻断虫卵发生扩散，根据棘球蚴病流行的特点选择适宜的棘球蚴灭活疫苗进行免疫及定期进行抗体监测是防控该病的主要方法。

口蹄疫和小反刍兽疫是一类动物疫病，发病率及死亡率高。

这3种疫病对公共卫生安全造成了严重威胁，是我国动物重点防控疾病，疫苗免疫是目前防控棘球蚴病、口蹄疫、小反刍兽疫较为有效的方法。

有研究表明IFMDV 与 LPPRV 联合使用安全性良好，且可提高 LPPRV 的免疫效果。

在西北广大农牧地区基层防疫工作中，如何在保证防疫效果的同时减少免疫次数，且兼顾重要疫病的预防，成为当务之急。

为此，本试验对GESV与IFMDV及LPPRV联合使用的免疫效果进行综合评价，以便为我国养羊业疫病防控提供一种高效、实用的免疫模式。

2　材料与方法
2.1　供试疫苗
羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗（批号：2019016）由重庆澳龙生物制品有限公司生产；口蹄疫O型、A 型二价灭活疫苗（批号：1911002）及小反刍兽疫活疫苗（批号：2019022-2）均由天康生物股份有限公司生产。

2.2　试验动物
52只约2月龄的健康绵羊（棘球蚴抗体、小反刍兽疫抗体及口蹄疫O型、A型抗体均为阴性），由哈密市巴里坤县萨尔乔克乡苏吉西村提供。

2.3　主要试剂
羊棘球蚴（包虫）病间接ELISA抗体检测试剂盒（批号：20200501）由重庆澳龙生物制品有限公司生产；口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒（批号：20200603101-1）及口蹄疫A型抗体液相阻断E L I S A检测试剂盒（批号：20200603103-1）均购自兰州兽医研究所；小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒（批号：020171915）购自青岛立见诊断技术发展中心。

2.4　GESV、IFMDV及LPPRV联合应用免疫效果的综合评价
2.4.1　试验分组及免疫接种。

将绵羊分为3组：A组（GESV+ IFMDV+LPPRV），20只，ESV与LPPRV经颈部两侧皮下分别注射1头份，IFMDV经臀部肌肉注射1 mL；B组（IFMDV+LPPRV 对照组），12只，经颈部皮下注射LPPRV 1头份，同时臀部肌肉注射IFMDV 1 mL；C组（GESV免疫对照组），20只，经颈部皮下接种GESV 1头份。

2.4.2　不良反应评价。

免疫后连续3d检测绵羊体温，同时观察绵羊的精神、食欲等情况。

2.4.3　免疫抗体检测。

分别于免疫后14、21、28 d，经绵羊颈静脉无菌采血3 mL，分离血清。

采用羊棘球蚴（包虫）病间接ELISA抗体检测试剂盒检测羊血清中抗羊棘球蚴主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体，样品OD值≤0.3±0.05，判为阴性；样品OD值＞0.3±0.05，但≤0.6±0.05，判为弱阳性；样品OD值＞0.6±0.05，判为细粒棘球蚴（包虫）抗体阳性；用小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒测定小反刍兽疫抗体，阻断率PBs≥50时，判定为小反刍兽疫抗体阳性；采用液相阻断ELISA 试剂盒检测口蹄疫抗体，抗体效价≥1：64时判定为口蹄疫抗体阳性。

3　结果
3.1　GESV、IFMDV及LPPRV联合应用免疫效果的综合评价
3.1.1　不良反应。

免疫后3d内，A组绵羊体温较免疫前平均升高0.7～1.0℃，有部分羊表现轻微的体温升高（＞40℃），维持1d（40℃以上）后恢复正常；B、C组绵羊体温较免疫前平均升高0.5～0.7℃；A、B、C组有少部分绵羊出现一过性精神沉郁，1～2h内恢复正常，免疫3d后体温变化与免疫前比较无显著差异（P＞0.05），食欲无明显变化；C组绵羊未出现明显不良反应，精神、食欲均正常，表明GESV及其联合IFMDV+LPPRV的免疫均具有良好的安全性。

见表1。

羊棘球蚴（包虫）基因工程亚单位疫苗与口蹄疫灭活疫苗及小反刍兽疫活疫苗联合使用的免疫效果分析杨夷平，杨 康，阿达来提·尤素甫，杨 帆，阿不都热依木·赛提*
（哈密市动物疫病预防控制中心，新疆哈密 839000）
基金项目：哈密市人畜共患病畜间防控技术与应用
（2018E02002）。

作者简介：杨夷平（1988-），男，硕士，兽医师，研究方
向：动物疫病预防。

通讯作者：阿不都热依木·赛提（1966-），男，本科，高级
兽医师，研究方向：动物疫病防控。

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表1　各组绵羊的体温变化
组别体温升高（＞40℃）
羊的比例
40℃以上体温
发生率（%）
3d后体温变化
（＞0.5℃）
A2/20100
B0/1200
C0/2000
3.1.2　A、B 组绵羊血清抗体检测结果。

A、B组绵羊血清中免疫抗体检测结果表明，首免后21、28 d，A、B组绵羊血清中口蹄疫O型及A型抗体阳性率和小反刍兽疫抗体阳性率均无显著差异（P＞0.05），见表2。

3.1.3　A、C 组绵羊血清中羊棘球蚴抗体阳性率比较。

A、C组绵羊血清中免疫抗体检测结果表明，首免后21、28 d，A、C组绵羊血清中羊棘球蚴抗体阳性率有显著差异（P＜0.05），见表3。

表2 A、B 组绵羊血清免疫抗体阳性率比较
组别数量/头
首免后21d抗体阳性率首免后28d抗体阳性率
口蹄疫O型 A 型小反刍兽疫口蹄疫O型 A 型小反刍兽疫
A2075（15/20）70（14/20）90（18/20）85（17/20）85（17/20）95（19/20）B1075（9/12）75（9/12）92（11/12）83（10/12）92（11/12）100（12/12）
表3 A、C 组绵羊血清中羊棘球蚴抗体阳性率比较
组别数量/头
首免后21d抗体阳性率首免后28d抗体阳性率
弱阳性数 强阳性数总阳性率弱阳性数 强阳性数总阳性率
A207350（10/20）10575（15/20）C205025（5/20）8355（11/20）
4　讨论
羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗Eg95是一种免疫球蛋白，通过皮下注射给被免动物有一定的毒性，可能会引起溶血，导致被免动物体温升高、食欲不振等应激反应，一般情况下24～36h动物体温恢复正常。

近年来国内多位学者用多个厂家生产的不同种类、毒株的FMD、LPPR等疫苗进行了疫苗的同步分点联合免疫试验，均未见报道有严重不良反应，除个别试验动物有发热、减食等轻度应激反应，表明联合免疫在临床中具有很好的安全性。

为了研究疫苗的联合免疫效果，本试验选择了8周龄左右的羔羊，因为此阶段羔羊的母源抗体水平影响较低，感染包虫病的概率较低，有助于评价疫苗联合免疫的效果。

羊棘球蚴（包虫）基因工程亚单位疫苗与口蹄疫二价灭活疫苗及小反刍兽疫活疫苗联合免疫后，试验组绵羊体温较免疫前平均升高0.7～1.0℃，比口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗与LPPRV联合免疫组绵羊体温均值略高0.3℃，有部分羊表现轻微的体温升高（＞40℃），维持1d（40℃以上）后恢复正常；联合免疫的体温升降趋势及变化范围与GESV单苗免疫和IFMDV+LPPRV联合免疫具有一致性，即均是第3～4d恢复到正常体温状态，表明GESV+IFMDV+LPPRV联合免疫是安全可靠的。

首免后21、28 d，单免羊棘球蚴（包虫）基因工程亚单位疫苗对照组抗体阳性率为25％～55％；而GESV+IFMDV+LPPRV 联合免疫试验组血清中羊棘球蚴抗体阳转率为50％～75％，比GESV单独免疫组的抗体阳性率提高了20%，表明联合免疫不仅不影响羊棘球蚴病抗体的产生，且有促进作用。

GESV+IFMDV+LPPRV联合免疫试验组血清中口蹄疫和小反刍兽疫抗体转阳率为70％～95％，与IFMDV+LPPRV 对照组抗体阳性率差异无统计学意义（P＞0.05），表明GESV+IFMDV+LPPRV联合免疫不影响IFMDV+LPPRV的免疫效果。

综上所述，IFMDV与FMDV+LPPRV联合使用后的免疫效果良好。

动物疫苗联合免疫方式大大降低了基层防疫人员的劳动强度，也减少了对畜群的应激，有利于防疫工作的有序进行。

参考文献
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