细胞生物学实验5巨噬细胞吞噬现象的观察

实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察
〔实验目的〕
1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及
意义
2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法
〔实验原理〕
巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。

当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。

巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。

〔试剂材料〕
1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸
2、试剂：
（1）0.85%生理盐水
（2）Alverse溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）
0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。

pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃
保存
（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏
0.3g，蛋白胨 1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其
溶解，煮沸灭菌，4℃保存。

用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）
3、材料：
（1）小白鼠
（2）1%鸡红细胞
〔内容方法〕
一、腹腔巨噬细胞的吞噬
1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。

2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。

3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。

4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。

5、甲醛固定10min。

6、染色：自然干燥后用Giemsa染液染色10in，蒸馏水轻轻冲洗后干燥。

注意染色后勿倾
去染液再冲洗，应直接冲洗，以免染液中细小颗粒附着于标本。

7、镜检。

操作程序
向小鼠腹腔注射淀粉肉汤（含台盼兰）1ml
24小时
再次注射前液 1ml
24小时
向小白鼠腹腔注射1%鸡血悬液 0.5~1ml
20分钟
处死小白鼠，剖开腹腔
向腹腔内加入生理盐水0.5~1ml，混匀吸取腹腔液，滴片
镜检
二、皮下组织中巨噬细胞的观察
1、活体注射，皮下或肌肉台盼蓝溶液（0.5%台盼蓝水溶液），2-3ml/kg，每天注射1次，注射1周，耳朵变蓝后使用
2、取皮下组织，自然干燥
3、甲醛-乙醇固定液固定5min
4、水洗3min
5、盖片观察
〔实验结果〕
在高倍镜下可见有许多较大的圆形和形状不规则的巨噬细胞，因未染色细胞核不易见到，其胞质中含有数量不等的兰色圆形小颗粒（即吞入的含台盼兰的淀粉肉汤所形成）；还可见少量黄色椭圆形有明显细胞核的鸡红细胞，慢慢移动玻片标本，仔细观察视野中的巨噬细胞表面，有的红细胞已部分被吞入；有的巨噬细胞内已吞入了一个或多个红细胞形成吞噬泡，思考一下巨噬细胞将如何进一步处理被吞噬的红细胞？
〔实验作业〕
1、绘图说明巨噬细胞吞噬过程
2、计算吞噬指数和吞噬百分率
注意事项：注射的鸡红细胞在鼠腹中的时间要控制好，时间过短红细胞未被吞噬，时间过长被消化，影响观察。