大鼠肝脏组织总RNA提取

大鼠肝脏组织总RNA提取
实验前准备:
1.试剂
RNAprep pure Tissue Kit (TIANGEN)，无水乙醇，巯基乙醇，DEPC
2．试验用具的处理
去RNase处理：
1〉配制0.1% DEPC 水（1000ml 水加1ml DEPC，用转子于通风橱内搅拌至完全溶解）。

2〉将需要用的枪头，枪头盒和EP管等浸泡入DEPC水中，过夜。

将枪头装入枪头盒中，120C灭菌30min。

60C烘干过夜。

3〉D EPC水于120C灭菌30min。

配制DNase I 工作液：
取9ul DNase I 存储液放入新的RNase-Free的离心管中，加入71ul RDD溶液，轻柔混匀。

试验步骤
1.准备碎冰以及液氮，将肝脏组织从-80C转移到液氮中。

2.称取10-20mg肝脏组织（注意称取组织的部位尽量相同、不含其它结缔组织成分）
与RNase-Free的2ml EP管中。

3.加入300ul 裂解液，匀浆器匀浆（中号探头，最高速度），其间间歇性地将EP管
置于冰上以防止组织裂解液过热。

4.匀浆后，将探头插入水中洗涤30s（开动状态下），转移到新的水中再次洗涤30s，
然后与DEPC水中洗涤30s。

进行下一个样品的匀浆。

5.加入590ul RNase-Free ddH2O和10ul 蛋白酶K，混匀后56C处理15min。

6.13000rpm 离心3min，取800ul上清加入400ul无水乙醇（0.5倍体积），混匀。

将
混匀液转入吸附柱中（吸附柱放在收集管中），13000rpm 离心30s，弃废液，将
吸附柱放回收集管中。

7.向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回
收集管中。

8.向吸附柱中央加入80ul的DNase I 工作液，室温放置15min。

9.向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回
收集管中。

10.向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。

13000rpm 离心30s，弃废液，
将吸附柱放回收集管中。

11.向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。

13000rpm 离心30s，弃废液，
将吸附柱放回收集管中。

12.13000rpm 离心2min，倒掉废液。

将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底凉干吸
附材料中残余的漂洗液。

13.将吸附柱转入一个新的RNase-Free的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加
70ulRNase-Free ddH2O，室温放置2min，13000rpm 离心2min，得到RNA溶液。

浓度：终浓度（ng/ul）=（OD260）X （稀释倍数n）X 40。