弓形虫速殖子体外对人类精子运动参数影响的实验研究

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弓形虫速殖子体外对人类精子运动参数影响
的实验研究!
周永华!，陆永娟"，胡玉红#，王瑞兵$，高庆凤"，石芳$
摘要：目的了解弓形虫速殖子对人类精子运动参数的体外影响，探讨弓形虫感染对男性不育的可能发病机制。

方法将纯化的活弓形虫速殖子悬液，在体外与生育男性经上游优化处理的精子一起孵育。

于孵育%、"、$、&、!’、"$(后，应用计算机辅助的精子分析系统，分别检测其精子运动参数。

在各时间点均设立对照组。

结果弓形虫速殖子与精子孵育%、"、$(后，孵育精子的运动参数与其对照组无显著性变化；孵育&(后，精子运动速度显著低于对照组。

孵育&(、!’(后的精子运动方式为原地转圈和锯齿形运动，孵育"$(后，精子的运动速度小于!%!)／*，有活力精子则全是原地转圈运动。

结论弓形虫速殖子对精子运动速度和运动方式有明显影响，弓形虫感染可能是引起男性不育的原因之一。

关键词：弓形虫速殖子；精子运动参数；计算机辅助的精子分析系统；体外
中图分类号：*文献标识码：+
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男性生殖道感染可累及生殖道的不同部位，如睾丸、附睾及其它附属性腺，从而危及其精子的发生，导致精液质量的下降，伴随精浆生化特性的变化，以致影响精子的功能和受精能力〔!〕。

因此男性生殖系统感染是男性不育的一个经典原因〔"〕。

有文献报告，弓形虫感染与男性不育具有相关性〔#，$〕。

但是弓形虫速殖子体外对人精子运动参数有无直接影响，目前尚不清楚。

为此，本研究拟通过在体外弓形虫速殖子分别与生育男性经上游优化处理的精子一起孵育，建立弓形虫人工感染精子实体模型，按照Q,-标准，采用计算机辅助精子分析系统直观分析弓形虫感染对人精子运动速度和运动方式的影
响，以期探讨弓形虫引起男性不育的可能病理机制。

!资料与方法
!,!研究对象!J例正常生育男性，平均"L（"$" "R）岁，禁欲L""!"%(；检查前均以无菌等渗盐水清洗阴茎，用手淫法留取精液于无菌的容器中待用。

!,#精子悬液的制备精液液化后，经上游优化处理，使其前向性运动的精子达$%S以上，（4T H级精
!江苏省计生委基金资助（U G V"%%!V%$）
作者单位：!F江苏省寄生虫病防治研究所，无锡"!$%’$；
"F苏州市吴中区计划生育局；
#F南京军区南京总医院；
$F苏州市吴中区计生指导站
L
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"%%#，!R（$）中国人兽共患病杂志O(=17*7U03?1490D+0010*7*
万方数据
子百分率），再用!"#$%液调节精子密度至&’(
&’
)*$。

!"#弓形虫速殖子的制备和纯化
取弓形虫+,
分离株感染-./的小鼠腹水，反复洗涤0次，过123&&纤维素柱，
滤液离心，用生理盐水调节弓形虫速殖子&(&’4／*$备用。

!"$器械北京伟力技贸公司研制的56789
:’’’彩色精子质量分析系统。

精子运动速度和运动轨迹特征、参数，均按5;<规定的标准设定，其结果由现代计算机技术和先进的图像处理技术结合运用于精液检测。

!"%方法取上述纯化的弓形虫速殖子悬液!*$
，=’’’#／*>?离心&4*>?，弃上清，沉淀物用&*$精子悬液悬浮。

另取&*$精子悬液作对照，置0-@恒温水浴箱中孵育，于.、=、A 、&)、.=/时采用1B ,B 系统分别进行精子运动速度和运动轨迹的分析。

操作按说明书进行，每份检测标本实测&’个左右视野。

!"&主要观察指标和统计方法
主要观察指标是
精子的形态和凝集情况，并对各组1B ,B 测定的精子活力、直线速度（C ,6）、曲线速度（C 16）
、平均路径速度（C B D ）、前向性（,E F ）、直线性（6G H ）等分别进行分析，对测定结果均按统计学要求计算，实验组和对照组比较用两样本差异显著性检验（采用I 检验）。

’结
果
’"!精子形态和凝集情况观察’!=/内显微镜下各组精子的形态无明显变化，./和=/实验组虽有部分精子出现凝集现象，但未现显著性凝集。

而A /后则可见弓形虫附着在精子上数目显著增加，部分精子出现断尾和卷尾现象。

’"’弓形虫速殖子体外对人精子运动参数的影响结果见表&。

实验组（B 组）与对照组（J 组）相比较，精子活力未见明显差异，运动参数在’!=/内差异不显著，但A /后则可见显著性差异。

’"#弓形虫速殖子体外与人精子悬液孵育前后运动速度和运动方式比较见表.。

表!弓形虫速殖子与人精子悬液体外孵育不同时间后"#$#分析结果
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C B
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表=弓形虫速殖子体外与人精子悬液孵育前后运动速度和运动方式比较
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时间（/）E >*%S 精子运动速度（平均径速度）
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!讨论
近年来，病原体对人类精子的直接作用越来越引起人们的重视。

男性生殖道感染对精子的影响是多方面的。

它可导致精子密度的减少、形态异常，活力下降〔!〕。

黄自平等〔"〕曾在体外将正常人精液同弓形虫滋养体混合液置"#$恒温箱内孵育后发现精子活力及活动力明显下降，同时可见弓形虫附着在精子上，大部分精子发生断尾和卷尾。

但我们应用%&’((纤维素纯化的弓形虫速殖子与正常人精液孵育，在)!*+内显微镜检各组精子的形态未甚显著改变，也未出现显著的凝集现象。

同时，在)! *+内人类精子运动参数虽然有随时间延长而下降的趋势，但无显著性差异。

孵育,+后，则可见弓形虫速殖子附着在精子表面，产生精子卷曲或头尾折角等。

提示精子在"#$恒温箱内孵育*+内，精子运动参数无明显改变。

推测弓形虫速殖子本身可能不会对精子的运动功能产生直接影响，它可能主要通过侵入机体后，引起机体的炎症反应和免疫反应，利用产生的炎性介质和细胞因子损伤生殖道和生精细胞。

计算机辅助精子分析系统是上世纪-)年代发展起来的一项新技术，它可以使精子运动的分析达到客观、准确和量化，同时，对精子运动轨迹的分析，可以得到较人工检测更为丰富的参数，而且较为省时和方便〔.，#〕。

精子运动轨迹分析是通过对精子运动速度和运动方式的测定，直观地了解精子运动的状态，在某种程度上反映精子的受精能力〔#〕。

我们通过对受试者严格筛选，建立人工感染弓形虫精子的实体模型，在不同实验时间观察弓形虫对精子运动轨迹的影响。

实验表明，弓形虫感染精子*+，精
子运动速度和精子运动方式略有变化，但,+后精子运动速度明显下降，感染(.+，精子运动方式则为原地转圈和锯齿形，感染/*+，精子运动速度!()"0／
1，而精子的运动速度是影响精子受精能力的一个重要因素。

人类精子在受精前其尾部活动增强，呈超激活状态，这种有力的前向运动形成的冲击力加上顶体的作用，对穿透卵子的透明带等外层结构是必需的。

精子尾部的运动与精子受精能力密切相关。

据此我们认为，弓形虫影响精子运动的机制，可能系弓形虫吸附于精子表面，从而造成精子运动阻力增大，精子运动速度减慢，运动方式呈锯齿形；另外，已与弓形虫结合的精子，又相互连接，使精子卷曲或折角，导致运动器官’精子尾部的摆动减弱，影响精子
的运动速度；再者，由于精子卷尾或头尾折角，又使精子尾部的自由摆动受到限制，仅偏向一个方向摆动，出现原地转圈的运动轨迹。

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