酸奶中保加利亚乳杆菌的分离和鉴定

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结
论
将实验结果与鉴定流程和生化特性对照，可以 得出 C 利用 ;<= 培养基分离出的菌种，表现为菌落 较大、透明、灰白色，镜检细菌形状为杆状，麦芽 糖和七叶苷发酵试验均为阴性，乳糖发酵为阳性的 菌种，即为保加利亚乳杆菌。
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生化鉴定的结果是：乳糖发酵试管中培养基由 紫色变为黄色者，其余 & 种糖发酵培养基均未变色 的菌落，见表 $。 表$
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研究报告 引 言
配 方 ： 葡 萄 糖 )* B； 胰 蛋 白 胨 &* B； 牛 肉 膏 &* B；酵母提取物 . B；柠檬酸二铵 ) B；磷酸氢二钾 ) B； 5B79/ ・1C) 9 *$ .D B； 5E79/ ・/C) 9 为 *$ ). B； 吐温 D* 为 & >F；蒸馏水 & F；琼脂 )* B。 葡萄 配制方法：将 5B79/ ・1C) 9， 5E79/ ・/C) 9， 糖以及吐温 D* 以外的各成分溶解，冷至 .* G ，以醋 酸调节 ?C 值为 H$ * I H$ .，而后加入 5B79/ ・ 1C) 9， 最后加葡萄糖和吐温 D* 。在 &)& G ， 5E79/ ・/C)9， 高压灭菌 )* >JE 2 / 3 。 &$ )$ ) 乳清培养基的制备 配方：乳清 .** >F；蒸馏水 .** >F；胰蛋白胨 . B；葡萄糖 & B；酵母膏 )$ . B；琼脂粉 )* B ； ?C 值 为 H$ .。 制法：将上述各成分加热溶解于乳清中，调整 ?C 值为 H$ .，加入琼脂，加热溶解， &&. G 高压灭 菌 )*>JE，倾注平板。 &$ )$ % 乳清的制备 ! 称取乳清粉 &** B 加入 4* G 的 & F 蒸馏水中 溶解（先将水加热，而后加入乳清粉，以防糊底） " 取 H I D >F 浓度为 & >"# K F 的 C8F 倒入上述 & F 乳清粉液中，调节 ?C 值至 /$ . 左右（最好 & 次 调成），保持 4* G 、 %* >JE，使酪蛋白大量析出， 凝结成块。 # 用脱脂棉和纱布过滤出乳清，将乳清用浓度 为 & >"# K F 的 (-8# 调 回 ?C 值 至 H$ . ， 而 后 煮 沸 ， 再用滤纸过滤，流通蒸汽灭菌 %* >JE 备用。 &$ )$ / 567 改良配方（糖发酵培养基）的制备 配方：鱼肉蛋白胨 . B；酵母提取物 . B；胰蛋 白胨 . B；柠檬酸二铵 ) B；乙酸钠 . B；磷酸氢二钾 ) B； 5B79/ ・1C) 9 为 *$ ) B； 5E79/・/C) 9 为 *$ ) B； 8-89% 为 % B；吐 温 D* 为 & >F；蒸 馏水 & F； 质量 分数 为 &$ HL 溴甲酚 紫；琼脂 粉质 . B； 麦芽 糖 K 七 叶苷 &* B。 制法： 将 5B79/ ・1C) 9， 麦芽糖 K 5E79/ ・/C) 9， 七叶苷， 吐温 D* 以外的各成分溶解，冷却至 .* G ， 以醋 酸调 节 ?C 值 至 H$ ) I H$ /。 在 &)& G 高压 灭菌 )* >JE。 &$ )$ . 配制方法 （& ）取罗地亚直投型酸奶发酵剂 *$ *) B，放入 无菌试管中，加入无菌生理盐水 4 >F，充分溶解混 匀。 （ ) ） 从 试 管 中 取 出 & >F 菌 液 ， 于 另 一 试 管 中，再加入 4 >F 无菌生理盐水。 （ %）如此稀释 / 次。 . 个试管分别按顺序记为 & ， ) ，% ， / ， . 。 （/）分别从 . 个试管中取 *$ *. >F 菌液涂布于 567 琼 脂 培 养 基 平 板 。 稀 释 菌 液 置 于 / G 冰 箱 备 用，平板置于 %1 G ，在 89) 培养箱中培养 ) I % M。
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结果与讨论
生化鉴定 实 验 中 使 用 了 % 个 菌 液 稀 释 度 （ $"& ， $"% ，
$"1 ， $"5 ， $"’ ）进 行 涂布 ， 目的 是 为 了确 定 哪个 稀 释度最适宜。一般在培养基上长出 %" 2 #"" 个菌落 的稀释度为最佳。在 % 个平板上 $"’ 稀释度为最佳。 在 ;<= 琼 脂 培 养 基 上 ， 会 长 出 明 显 的 两 种 菌 落，其中菌落较大，透明，灰白色的为疑似菌落。 对其进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阳性菌并且细 胞形状为杆状
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材料与方法
材料与设备 菌种：罗地亚公司 4**& 型发酵剂。 原料： 567 琼脂培养基 ’ 乳清培养基 ’ 乳清 ’ 567
改良配方（糖发酵培养基） ’ 化学试剂均为分析纯或 生化试剂胰蛋白胨，酵母膏，酵母提取物，鱼肉蛋 白 胨 ’ 生 化 鉴 定 糖 类 （麦 芽 糖 ， 七 叶 苷 ， 乳 糖 ， 蔗 糖，葡萄糖）
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设备： 超净工作台 + 为苏州净化设备厂生产 0 ； 高 压灭菌锅 + 为上海核子医用仪器厂生产； 89) 培养箱 + 美国 6:;<" 公司生产 0 ； 显微镜 + 日本 9#=>?@A 公司 0 。 &$ ) &$ )$ & 方法 567 琼脂培养基的制备
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中
国
乳品工业
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酸奶中保加利亚乳杆菌的分离和鉴定
徐松滨 $，李威娜 !
1 $0 黑龙江乳业集团， 黑龙江 哈尔滨 $%""3’； 黑龙江 哈尔滨 $%"""$ 2 !0 哈尔滨大众食品有限责任公司，
摘
要：利用 ;<= 琼脂培养基对保加利亚乳杆菌进行分离，分别挑取可疑菌落进行革兰氏染色，对镜检结果为革兰
&1
研究报告
/ % 0 挑取可疑单菌落的一半进行革兰氏染色。 / 1 0 另一半分纯接种于乳清琼脂培养基，准备做 生化鉴定。 取麦芽糖、 七叶苷、 乳糖、 蔗糖和葡萄糖五种糖发 酵半固体培养基，分装试管，高度约为 & 2 % 34。用 接种环以无菌操作从纯培养于乳清琼脂培养基的疑 似菌落中挑取菌种穿刺接种。置于 #5 ( 下 )*! 培养 箱中培养 ! 2 # 6 7 %8 1 9 。 !: ! 保加$ 7 龚 广 予 8 李 明 8 郭 彦 友 + 钙 与 补 钙 6 9 7 + 中 国 乳 品 工 业 ， $,,, ， !: 1 & 2 ：!$ / !#0 6 ! 7 孙明日 8 赵军 8 赵山林 8 等 + 酸性饮料稳定性的研究 6 9 7 + 中国乳品 工业，$,,, ， !: 1 $ 2 ：$, / !#0
收稿日期 ：!""# / "& / $& （$,:’ / ） 作者简介 ： 徐松滨 ， 男， 助理工程师， 从事乳品生产技术和乳品检验工作。
为 $%( ，)* 值为 #+ ,%。 #+ # 微生物指标 细菌总数 $% -. / $ ，大肠菌群小于 "0 "# -. / $ ， 致病菌未检出。
规定，微生物指标达到商业无菌的标准，成品在常 温下可贮存 # 4 ’ 个月而不分层、不变质。 （# ）如在加工时用脱脂奶代替脱脂粉，可节省 奶粉复原和水和过程。也可用部分鲜奶与脱脂粉 1 或 脱脂奶 2 混合使用，但需经计算。
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总
结
（ $）通过分析和实验得出高钙酸性含乳饮料的 最佳配方是：脱脂奶粉 #+ %( ，白砂糖 $"( ，稳定 剂 "+ &( ， 乳 酸 "+ #( ， 柠 檬 酸 "+ #( ， 柠 檬 酸 钙 "+ $( 1 或按实际要求 2 ，香料 "+ $( ，软化水 3%+ #( （均为质量分数）。 （! ）本产品通过检验，营养成分符合国家标准 !""# 年第 #$ 卷第 # 期（总第 $%& 期）
./%)0(-) HC )OJ[JCY8 YZJ -G\YROJ B] .0 ^RLDKOGUR[ KCW =0 >ZJO-B)ZGLR[ G[ UB--BCLP J\)LBGYKYJW K[ [YKOY URLYROJ GC YZJ UBRO[J B] PBDROY ]JO-JCYKYGBC GC YZG[ [YRWP8 .0 ^RLDKOGUR[ G[ G[BLKYJW FP YZJ R[J B] ;<= KCW _LLG‘JO KDKO URLYROJ -JWGR- OJ[)JUYGaJLP0 >ZJ [R[)GUGBR[ UBLBCGJ[ KOJ YOJKYJW bGYZ QOK- [YKGCGCD8 KCW QOK- / )B[GYGaJ8 [)ZJOGUKL KCW OBW FKUYJOGK KOJ GWJCYG]GJW FGBUZJ-GUKLLP0 ;KLYB[J KCW J[URLB[GWJ KOJ R[JW ]BO .0 ^RLDKOGUR[ UKOFBZPWOKYJ ]JO-JCYKYGBC 0 >B WOKb UBCULR[GBC[8 .0 ^RLDKOGUR[ BbCJW )OB)JOYGJ[ B] YOKC[)KOJCY8 DOKP / bZGYJ8 UBLBCGJ[ GC ;<= KDKO -JWGR-8 KCW OBW [ZK)J RCWJO -GUOB[UB)GU J\K-GCKYGBC K[ bJLL K[ CJDKYGaJ OJE [RLY[ B] -KLYB[J KCWJ[URLB[GWJ ]JO-JCYKYGBC0 CJaJOYZJLJ[[0 1#2 3&0+%4 .0 ^RLDKOGUR[； ;<= URLYROJ -JWGR-S UKOFBZPWOKYJ DOK- [YKGCGCD
氏阳性菌，且细菌形状为杆状的菌种进行糖发酵试验生物化学鉴定。结论：在 ;<= 琼脂培养基上，菌落较大、透明、灰 白色，镜检细菌形状为杆状，麦芽糖和七叶苷发酵试验均为阴性，乳糖发酵阳性的菌种，即为保加利亚乳杆菌。 关键词：保加利亚乳杆菌；;<= 琼脂培养基；糖发酵；革兰氏染色 中图分类号： >=!%!+ $ 文献标识码： ? 文章编号：$""$ / !!#" 1 !""# 2 "# / ""$’ / "#
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乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸 的细菌总称。乳酸菌从形态上可以分为球菌和杆 菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境 中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。目前，对 乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、 发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相 关的领域。酸奶是以新鲜牛乳经有效杀菌，用不同 乳酸菌发酵剂制成的乳制品。由于该产品营养价值 较高，并能改善肠道正常微生物区系的稳定，调节 胃肠功能，抑制肠道内腐败菌群的生长发育，因此 它已成为深受消费者青睐的营养保健食品。 在生产销售的各种酸奶制品中，作为发酵剂使 用的乳酸菌，通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌 这两株菌。传统的乳酸菌发酵剂生产利用原始菌种 进行活化复壮’ 再进行扩大培养而成 ’ 制备过程比较 复杂且容易造成污染 ’ 菌种质量不易控制。 随着科学技术的发展’ 直接使用型超浓缩乳酸 菌发酵剂应运而生。浓缩乳酸菌发酵剂含活菌数 高，发酵活力强，在生产发酵乳制品或制备生产 发酵剂时，可以直接接种，不需要中间扩大培养 环节，发酵产品质量稳定’ 便于运输、保藏 ’ 使用 方便。由于超浓缩乳酸菌发酵剂的许多优点 ’ 其 在国外中小企业中已广为使用。国内已有实验室 制备超浓缩乳酸菌发酵剂技术的报道 ’ 但尚未商 业化生产 2 & 3 。 许多酸奶生产企业使用的超浓缩乳酸菌发酵剂 均为进口。使用其发酵剂发酵的酸奶， 口味香醇， 质地 均匀，并且较长时间保存不会出现过酸的现象 2 ) 3 。因 此，为了能够生产出高质量的超浓缩乳酸菌发酵 剂，对罗地亚 4**& 型发酵剂进行了研究。首先是对 发酵剂中的保加利亚乳杆菌进行初步的分离和鉴 定，为今后对其进行更深入的研究奠定基础。