HPLC法测定醋氯酚酸片中有关物质

HPLC法测定醋氯酚酸片中有关物质【摘要】用高效液相色谱法测定醋氯酚酸片中有关物质。

方式选用Waters C18 （×150mm，5μm）色谱柱；流动相为L醋酸钠溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：）；检测波长为275nm；流速为min；柱温为40℃。

结果醋氯酚酸的保留时刻约7min；有关物质双氯酚酸钠和未知杂质的保留时刻约6min与9min；有关物质双氯酚酸钠线性范围：～μg/ml,Y=++003，r= 。

结论本方式简便、准确, 适于醋氯酚酸片有关物质的测定。

【关键词】醋氯酚酸双氯酚酸钠高效液相色谱（HPLC）法有关物质
【Key words】 aceclofenac;diclofenac sodium ;HPLC;related substance
醋氯酚酸属苯乙酸类非甾体抗炎镇痛药，为双氯酚酸的衍生物，用于急性炎症、关节炎和疼痛的医治。

有报导含量测定采纳高效液相色谱法［1，2］；有关物质采纳薄层色谱法［3，4］。

本实验采纳不同于报导的流动相对有关物质进行测定，结果说明：本实验条件合理、有效，可将双氯酚酸钠及未知杂质与醋氯酚酸分离,测定结果准确、靠得住。

现报告如下。

1 仪器与试药
高效液相色谱仪为Waters2695和Waters2996二极管阵列紫外/可见检测器，高效液相色谱柱为Waters C18 （×150mm，5μm）。

甲醇为色谱纯，冰醋酸、无水醋酸钠均为分析纯。

对照品醋氯酚酸、双氯酚酸钠均为中国药品生物制品检定所提供,含量别离为%、%；供试品醋氯酚酸片3批，批号为H40024（A）、H40025（B）、H40026（C）。

2 方式与结果［1，2］
色谱条件与系统适用性实验色谱柱温为40℃；流动相为L醋酸钠溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：）；检测为波长275nm；流速为min；进样量10μl。

醋氯酚酸的保留时刻约为7min，双氯酚酸钠和未知杂质峰的保留时刻别离约为6min和9min；双氯酚酸钠与醋氯酚酸及未知杂质峰间的分离度别离为和 6，理论板数按醋氯酚酸计为5000。

色谱图见图1。

有关物质
线性范围周密称取双氯酚酸钠对照品10mg置100ml量瓶中，
加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，周密量取该溶液25ml置100ml量瓶顶用流动相稀释至刻度，摇匀。

周密量取、、、、别离置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液1～5。

在上述色谱条件下,别离进样5次，记录色谱图。

以浓度X为横坐标,峰面积Y 为纵坐标作标准曲线，计算线性回归方程。

结果本品在～μg/ml范围内呈线性关系：Y= ++003，r= 。

测定法周密称取供试品适量（相当于醋氯酚酸50mg）置50ml 量瓶中,加甲醇适量振摇使溶解，用流动相稀释至刻度,摇匀，即得供试品溶液。

以有关物质线性范围项下浓度μg/ml溶液为对照品溶液。

在上述色谱条件下,别离进样5次，调剂检测器灵敏度，使对照品溶液主成份峰高度达到满量程的20%，相对标准误差不得过%。

记录供试品溶液色谱图至主成份峰保留时刻的2倍，用外标法计算有关物质的含量。

见表1。

表1 有关物质测定结果周密度实验取有关物质测定项下供试品批号（A）溶液，持续5次进样测定,RSD为%。

重复性实验取同一批样品（批号 A）,别离称取5份,依照有关物质测定项下方式操作,RSD为%。

稳固性实验将有关物质测定项下的溶液光照放置3天和9天及30天，按上述色谱条件进行测定，同时新配制对照品溶液。

测定结果详见表1。

色谱图见图2。

响应值测定在上述色谱条件下,别离取线性范围项下对照溶液1～5 10μl注入液相色谱仪，其主峰的保留时刻约为6min，理论板数按醋氯酚酸钠峰计算不得小于4000，重复进样5次，计算每种溶液的平均面积及相对标准误差值。

结果见表2。

表2 响应值测定结果
3 讨论
本实验采纳HPLC法测定醋氯酚酸片中有关物质双氯酚酸钠和未知杂质的含量。

该法可有效地将醋氯酚酸与有关物质分离，且分离度好，结果更准确地反映出样品的纯度与质量。

图2 色谱图
该样品不是很稳固，对光比较灵敏，光照3～30天，有关物质的含量由%增加到65%以上。

颜色由无色变成橘黄色。

测定有关物质的供试品溶液浓度为1mg/ml，从表2能够看出：有关物质的对照溶液的浓度为供试品溶液的倍（%），测定结果的相对标准误差较小，有较强的可操作性。

该方式周密度高，重现性好，适用于醋氯酚酸片有关物质测定。

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