紫外分光光度计的使用原理和方法 ppt课件
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紫外分光光度计使用原理及结构ppt课件
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。
— 1—
（知 识点 名称）
食品营养与检测专业教学资源库
• 紫外-可见分光光度计的使用原理-----朗伯比尔定律
3、吸光系数
当l 以cm，c以g/L为单位，κ称为吸光系数，用 a表示。 A= a cl
a 的单位为L/(g.cm)
— 1—
过渡页
食品营养与检测专业教学资源库
紫外-可见分光光度计的结构
二
1.检测的定义及作用 2.检测的重要性 3.检测的类别 4.检测的原理图 5.XXXXXXXXX
— 2—
（知 识点 名称）
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• 紫外-可见分光光度计的结构 基本结构： 光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统
样品
— 1—
（知 识点 名称）
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• 紫外-可见分光光度计的结构
1、光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2、单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜部分。单色器质量的优劣， 主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。。 3、吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外 区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
目录页
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一
紫外-可见分光光度计使用原理
二
紫外-可见分光光度计结构
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紫外-可见分光光度计的使用原理
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（知 识点 名称）
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• 紫外-可见分光光度计的使用原理-----朗伯比尔定律
3、吸光系数
当l 以cm，c以g/L为单位，κ称为吸光系数，用 a表示。 A= a cl
a 的单位为L/(g.cm)
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过渡页
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紫外-可见分光光度计的结构
二
1.检测的定义及作用 2.检测的重要性 3.检测的类别 4.检测的原理图 5.XXXXXXXXX
— 2—
（知 识点 名称）
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• 紫外-可见分光光度计的结构 基本结构： 光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统
样品
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（知 识点 名称）
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• 紫外-可见分光光度计的结构
1、光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2、单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜部分。单色器质量的优劣， 主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。。 3、吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外 区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
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一
紫外-可见分光光度计使用原理
二
紫外-可见分光光度计结构
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紫外-可见分光光度计的使用原理
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
紫外分光光度计PPT课件
紫外分光光度计的定义
描述紫外分光光度计的基本原理和结 构组成。
简要介绍紫外分光光度计的发展历程 和应用领域。
解释紫外分光光度计在光谱分析中的 重要地位和作用。
02
紫外分光光度计的原理
吸收光谱的基本概念
01
02
03
吸收光谱
物质与辐射能相互作用时， 物质对不同波长的光吸收 程度的特性曲线。
吸收光谱的产生
土壤和固体废弃物分析
通过测量土壤和固体废弃物中有机污染物的紫外 光谱，可以评估其对环境和生态的影响。
05
结论
紫外分光光度计的重要性和应用前景
重要性
紫外分光光度计是一种用于测量物质对紫外线的吸收或发射的仪器，广泛应用于化学、生物学、医学等领域。它 能够提供定性和定量的分析结果，对于物质成分的鉴定、含量测定以及化学反应的动力学研究等方面具有重要作 用。
物质中的电子在不同能级 间跃迁时，会吸收特定波 长的光，形成吸收光谱。
吸收光谱的形状
由电子跃迁的类型、能级 差以及物质的组成和结构 决定。
紫外吸收光谱的产生
紫外吸收光谱
物质在紫外波段产生的 吸收光谱。
电子跃迁
分子中的电子在不同能 级间跃迁，产生紫外吸
收光谱。
跃迁类型
伸缩振动跃迁、弯曲振 动跃迁、电子跃迁等。
THANKS
紫外分光光度计ppt 课件
目 录
• 引言 • 紫外分光光度计的原理 • 紫外分光光度计的种类和用途 • 紫外分光光度计的应用实例 • 结论
01
引言
目的和背景
介绍紫外分光光度计 在科学研究中的应用 和重要性。
强调本课件对于了解 和使用紫外分光光度 计的重要意义。
分析当前紫外分光光 度计市场和技术发展 趋势。
紫外可见分光光度计原理及操作.ppt
吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或
测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。
朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法
定量分析的依据和基础。
朗伯-比耳定律
一、透射率T%
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范类型来自3.比例双光束分光光度计
由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束 通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带
来的误差，但是并不能消除参比造成的影响
UV-2550的特点
6 挡狭缝可选
PC 控制存储、调用方便 可采用复制、拷贝方法在电子表格和字处理软件中处理数据和打印报 告 可加载膜厚、动力学、多波长、色彩分析等软件 DDM（双闪耀波长双单色器）降低杂散光，提高长波长区的能量响应 （UV-2550）
它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫
外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本 类似。
类型
紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类 型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束 分光光度计。
1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以 进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修 容易，适用于常规分析。
紫外分光光度计的使用原理和方法 PPT
这些显色反应,必须满足以下条件:
1、反应得生成物必须在紫外-可见光区有较 强得吸光能力,即摩尔吸光系数较大;
2、反应有较高得选择性,即被测组分生成得 化合物吸收曲线应与共存物质得吸收光谱有 明显得差别;
3、 反应生成得产物有足够得稳定性,以保 证测量过程中溶液得吸光度不变;
4、反应生成物得组成恒定。
按所吸收光得波长区域不同,分为紫外分 光光度法与可见分光光度法,合称为紫外-可见 分光光度法。
紫外-可见分光光度法得特点:
1 与其它光谱分析方法相比,其仪器设备与操 作都比较简单,费用少,分析速度快;
2 灵敏度高; 3 选择性好; 4 精密度与准确度较高; 5 用途广泛。
§1、 紫外-可见吸收光谱
3、 狭缝宽度得选择
为了选择合适得狭缝宽度,应以减少狭 缝宽度时试样得吸光度不再增加为准。一 般来说,狭缝宽度大约就是试样吸收峰半 宽度得十分之一。
二、显色反应条件得选择
对多种物质进行测定,常利用显色反应 将被测组分转变为在一定波长范围有吸收 得物质。常见得显色反应有配位反应、氧 化还原反应等。
参比溶液得选择视分析体系而定,具体有:
1、溶剂参比 试样简单、共存其它成分 对测定波长吸收弱,只考虑消除溶剂与吸收 池等因素;
2、试样参比 如果试样基体溶液在测定 波长有吸收,而显色剂不与试样基体显色 时,可按与显色反应相同得条件处理试样, 只就是不加入显色剂。
3、试剂参比 如果显色剂或其它试剂在 测定波长有吸收,按显色反应相同得条件, 不加入试样,同样加入试剂与溶剂作为参 比溶液。
红移与紫移
在有机化合物中,常常因取代基得变更或 溶剂得改变,使其吸收带得最大吸收波长λmax 发生移动。向长波方向移动称为红移(表3-3), 向短波方向移动称为紫移。
紫外可见分光光度计的原理与使用方法PPT课件
仪器保养和维护方法 仪器工作电源 光源使用注意事项 单色器使用注意事项 正确使用吸收池
3/23/2020
17
紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
18
紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
19
3/23/2020
20
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
目录
• 紫外可见分光光度计的原理 • 紫外可见分光光度计的组成结构 • 紫外可见分光光度计的操作步骤 • 紫外可见分光光度计的校准 • 紫外可见分光光度计的日常维护，保养 • 紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
2
紫外可见分光光度计的原理
• 它是利用物质的分子或离子对某一波长 • 范围的光吸收作用，对物质进行定性分析， • 定量分析及结构分析，所依据的光谱 • 是分子或离子吸收入射光中特定波长的光 • 而产生的吸收光谱。 • 按照所吸收光的波长区域不同，分为 • 紫外分光光度法和可见光光度法，合称 • 为紫外-可见分光光度法
吸收池
检测器
信号显示系统
3/23/2020
6
光源
光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足 够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
紫外光源---氘灯(185-375 nm)
3/23/2020
可见光源---钨灯(320-1000nm)
7
单色器
单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长 单色光的光学系统。 单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向
检测器检测器光电池光电管光电倍增管信号显示器q以检流计或微安表指示仪表q数字显示和自动记录型装置信号显示系统信号显示系统紫外可见分光光度计的操作步骤紫外可见分光光度计的操作步骤p打开电源开关p检验吸收池的成套性具体过程在后面内容中操作p选择工作波长按设定键以及增加减小按钮进行设定p润洗比色皿依次装入参比溶液和测量溶液p参比溶液于光路中透射比模式下同时调0和100p在吸光度模式下测定测量溶液的吸光度p选择测量方式按方式键选择透射比模式与吸光度模式同学们根据教师的要求用白纸片遮住光路改变波长从750nm到400
3/23/2020
17
紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
18
紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
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紫外可见分光光度计的原理与使用方法
目录
• 紫外可见分光光度计的原理 • 紫外可见分光光度计的组成结构 • 紫外可见分光光度计的操作步骤 • 紫外可见分光光度计的校准 • 紫外可见分光光度计的日常维护，保养 • 紫外可见分光光度计的常见故障排除
3/23/2020
2
紫外可见分光光度计的原理
• 它是利用物质的分子或离子对某一波长 • 范围的光吸收作用，对物质进行定性分析， • 定量分析及结构分析，所依据的光谱 • 是分子或离子吸收入射光中特定波长的光 • 而产生的吸收光谱。 • 按照所吸收光的波长区域不同，分为 • 紫外分光光度法和可见光光度法，合称 • 为紫外-可见分光光度法
吸收池
检测器
信号显示系统
3/23/2020
6
光源
光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足 够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
紫外光源---氘灯(185-375 nm)
3/23/2020
可见光源---钨灯(320-1000nm)
7
单色器
单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长 单色光的光学系统。 单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向
检测器检测器光电池光电管光电倍增管信号显示器q以检流计或微安表指示仪表q数字显示和自动记录型装置信号显示系统信号显示系统紫外可见分光光度计的操作步骤紫外可见分光光度计的操作步骤p打开电源开关p检验吸收池的成套性具体过程在后面内容中操作p选择工作波长按设定键以及增加减小按钮进行设定p润洗比色皿依次装入参比溶液和测量溶液p参比溶液于光路中透射比模式下同时调0和100p在吸光度模式下测定测量溶液的吸光度p选择测量方式按方式键选择透射比模式与吸光度模式同学们根据教师的要求用白纸片遮住光路改变波长从750nm到400
紫外可见分光光度PPT(完整版)课件
因此，可能的跃迁为σ → σ*、π→ π*、n→ σ* n→ π*等。
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
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Wavelength
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11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
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常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
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分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
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紫外-可见分光光度法——(最终版)PPT演示课件
第十章 紫外-可见分光光度法
电子跃迁类型
1、※σ→σ*跃迁 跃迁所需能量最大 λ<150nm ε＞104 饱和烃（远紫外区） C-H共价键，如CH4（ λmax 125nm） C-C键，如 C2H6 (λmax 135nm)
仪器分析
第十章 紫外-可见分光光度法
电子跃迁类型
2、π→π*跃迁 跃迁所需能量较大
T,
T A
C
三
者
0.5
的
关
系
0
c
100
T = 0.0 %
A=∞
50
T = 100.0 %
A = 0.0
0
溶液的T越大,说明对光的吸收越小,浓度低; T越小，溶液对光的吸收越大，浓度高
第十章 紫外-可见分光光度法
仪器分析
吸光度的加合性
在多组分体系中如果各吸光物质之间无相互作 用这时体系总的吸光度等于各个吸光物质的吸 光度之和。
仪器分析
2.※百分吸光系数：在一定波长下，
溶液中吸光物质浓度为1%（W/V），液
层厚度为1cm的吸光度。用 E1% 表示， 1cm
单位：ml/cm·g。
将两者之间的转换关系用公式来表达
M E1%
10 1cm
第十章 紫外-可见分光光度法
仪器分析
※摩尔吸光系数ε 的讨论
（1）吸光物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数；
大部分在远紫外区
含非键电子饱和烃衍生物(含N、O、S和卤素等杂原
子)
一氯甲烷 n→σ*跃迁：λmax 173nm 甲醇 n→σ*跃迁：λmax 183nm
第十章 紫外-可见分光光度法
电子跃迁类型
4、n→ π*跃迁
紫外可见分光光度计原理及操作.ppt
光源可能发生故障。检查是否是相对应的操作范围的光源配置 。如果需要请更换。 处理方法 交换样品重新进行基线的校正。 用“MEDIUM”或更低的扫描速度进行基线的校正。 用宽波长范围进行基线的校正。 一些可选样品室可能改变基线。附件装配好后重新执行基线 校正。
光源 2）基线不平 检查项目 高吸收样品 “FAST”扫描速度 波长范围可能太窄 可能使用了样品室可选 配件
４、安装地点具备可靠的仪器接地端子
保养
四、清洁仪器外部和样品室
1、使用软布稍微蘸取水，或水溶液或者中性清洁剂溶液轻柔搽拭 外表面。避免蘸取过量而导致流入仪器内部。 2、清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。 五、波长准确度检查（每半年一次） 利用氘灯的两个特征波长峰486.0nm和656.1nm来检查波长的 精确度。
紫外可见分光光度计原理及操作
潘睿睿
目录
紫外-可见分光光度计仪器原理
1
紫外-可见分光光度计结构及类型
2 3
UV-Vis分光光度法的应 用和分析条件的选择
4
UV-Vis分光光度计的保 养与故障处理
一、紫外-可见分光光 度计仪器原理
原理
波长 200 400 800 3200(nm)
g -X-射线
紫外
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范
围内。
析条件选择
二、反应条件选择 1.显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显 色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量：
光源 2）基线不平 检查项目 高吸收样品 “FAST”扫描速度 波长范围可能太窄 可能使用了样品室可选 配件
４、安装地点具备可靠的仪器接地端子
保养
四、清洁仪器外部和样品室
1、使用软布稍微蘸取水，或水溶液或者中性清洁剂溶液轻柔搽拭 外表面。避免蘸取过量而导致流入仪器内部。 2、清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。 五、波长准确度检查（每半年一次） 利用氘灯的两个特征波长峰486.0nm和656.1nm来检查波长的 精确度。
紫外可见分光光度计原理及操作
潘睿睿
目录
紫外-可见分光光度计仪器原理
1
紫外-可见分光光度计结构及类型
2 3
UV-Vis分光光度法的应 用和分析条件的选择
4
UV-Vis分光光度计的保 养与故障处理
一、紫外-可见分光光 度计仪器原理
原理
波长 200 400 800 3200(nm)
g -X-射线
紫外
dT d lg T 0.434 bdc T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c T lg T
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程 b来控制A的读数在0.15~1.00范
围内。
析条件选择
二、反应条件选择 1.显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显 色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量：
紫外可见分光光度法的原理及应用-PPT
1 光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类： 可见光光源，如钨灯和卤钨灯；紫外光源，如氢 灯和氘灯。
根据测定时所选用的光源： 可见分光光度法(400800nm) 紫外分光光度法(200400 nm)红外分光光度法(800nm50m)
氙灯
氢灯
钨灯
2 单色器 单色器以棱镜或光栅分光，提供单色光。
⑵准确度高,浓度测量相对误差仅有1~3%；
⑶操作简便、迅速，所需设备并不复杂；
⑷应用广泛。
缺点： ⑴仅适合微量分析；
⑵所需仪器相对昂贵。
应用
1
1.定性分析 各种物质具有各自不 同的分子、原子和不 同的分子空间结构， 其吸收光能量的情况 也就不会相同，因此， 每种物质就有其特有 的、固定的吸收光谱 曲线
uv的测定范围有机化学分析无机化学分析光学测定生物化学分析环境分析色彩測定临床分析有机化学分析无机化学分析光学测定生物化学分析环境分析色彩測定临床分析紫外可见分光光度法的应用范围紫外可见分光光度法的应用范围涉及化学化工医疗卫生冶金地质食品饮料农业化肥畜牧水产机械制造计量科学环保制药生物材料石油等领域中的科研教学生产中的质量控制原材料和产品检验等各个方面进行定性分析定量测定纯度检查动力学研究等等
1）对照法
2.5 25.00 1000 0.508 Ci Ci 98.1 g / mL 10 1000 0.518
21:29:12
2.吸收系数法
C=A/E1%L
当其为百分吸收系 数E1%时
吸光度的测量：紫外-可见分光光度计
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
紫外-可见分光光度计的组成
中某些特定波长的光线选择吸收的结果。
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紫外分光光度计的使用原理和方法
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§1. 紫外-可见吸收光谱
1. 物质对光的选择性吸收
物质对光的吸收是选择性的，利用 被测物质对某波长的光的吸收来了解物 质的特性，这就是光谱法的基础。
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通过测定被测物质对不同波长的光的吸 收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光 度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范 围的吸收曲线。如图3-1；
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2.2 有机化合物的吸收带
吸收带(absorption band): 在紫外光谱中，吸 收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分 子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。
(1) R吸收带 (2) K吸收带 (3) B吸收带 (4) E吸收带
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3 无机化合物的紫外-可见吸收光谱
1. f电子跃迁吸收光谱
镧系和锕系元素的离子对紫外和可见光的 吸收是基于内层f电子的跃迁而产生的。其 紫外可见光谱为一些狭长的特征吸收峰， 这些峰几乎不受金属离子的配位环境的影 响。
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2. d电子跃迁吸收光谱
过渡金属的电子跃迁类型为d电子在不同d轨 道间的跃迁，吸收紫外或可见光谱。这些峰 强烈受配位环境的影响。
助色团：是指带有非键电子对的基团，如OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I等， 它们本身不能吸收大于200nm的光，但是当 它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰 向长波方向移动，并且增加其吸收强度。见 表3-4。
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红移和紫移
在有机化合物中，常常因取代基的变更 或溶剂的改变，使其吸收带的最大吸收波长 λmax发生移动。向长波方向移动称为红移(表33)，向短波方向移动称为紫移。
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饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ→σ*， n→σ* 跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区， 吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。
不饱合机化合物的电子跃迁类型为n→π*， π→π* 跃迁，吸收峰一般大于200nm。
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生色团：是指分子中可以吸收光子而产生电 子跃迁的原子基团。人们通常将能吸收紫外、 可见光的原子团或结构系统定义为生色团。 见表3-1和3-2。
I0= Ia+ It
紫外分光光度计的使用光的强度It与入射光 强度I0之比，用T表示：
即 T= It/I0 吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即
A=lg1/T=lgI0/It
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二、朗伯-比尔定律
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有 吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光 物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长 λmax进行物质含量的测定。
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2 有机化合物的紫外-可见吸收光谱
2.1 有机化合物的电子跃迁
与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三 种，即形成单键的σ电子、形成双键的π电 子以及未参与成键的n电子。
跃迁类型有：σ σ*、n σ* 、π π *、 n π * 四种。
1.定性分析
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2.纯度的鉴定 用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方
便的。
如蛋白质与核酸的纯度分析中，可用 A280/A260的比值，鉴定其纯度。
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3.结构分析
紫外-可见吸收光谱一般不用于化合物 的结构分析，但利用紫外吸收光谱鉴定化 合物中的共轭结构和芳环结构还是有一定 价值。
2. 溶剂 注意如下几点：
（1）尽量选用低极性溶剂； （2）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液 具有良好的化学和光化学稳定性； （3）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。
3. pH值
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1.5 紫外-可见吸收光谱的应用
紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量 分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、 结构分析。
例如，某化合物在近紫外区内无吸收，说 明该物质无共轭结构和芳香结构。
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§2. 朗伯-比尔定律
一、吸光度和透光度
设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透 射光强度为 It，反射光强度为Ir，则
I0= Ia+ It+ Ir 由于反射光强度基本相同，其影响可相互抵 消，上式可简化为：
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1.4 影响紫外-可见吸收光谱的因素
物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。 测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同， 吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度 等都可能发生变化。 1.温度 在室温范围内，温度对吸收光谱的影 响不大。
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按所吸收光的波长区域不同，分为紫外 分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外可见分光光度法。
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紫外-可见分光光度法的特点：
1 与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和 操作都比较简单，费用少，分析速度快;
2 灵敏度高; 3 选择性好; 4 精密度和准确度较高; 5 用途广泛。
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紫外-可见吸收光谱 朗伯-比耳定律 紫外-可见分光光度计 分析条件的选择 测定方法 在医学检验中的应用
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紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS)
它是利用物质的分子或离子对某一波 长范围的光的吸收作用，对物质进行定性 分析、定量分析及结构分析, 所依据的光 谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的 光而产生的吸收光谱。
例如 cu2+以水为配位体，吸收峰在794nm 处，而以氨为配位体，吸收峰在663nm处。此 类光谱吸收强度弱，较少用于定量分析。
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3. 电荷迁移光谱 某些分子既是电子给 体，又是电子受体，当电子受辐射能激发 从给体外层轨道向受体跃迁时，就会产生 较强的吸收，这种光谱称为电荷迁移光谱。 如 苯酰基取代物在光作用下的异构反应。