烟草中游离氨基酸的测定
烤烟游离氨基酸的研究
湖南农业大学硕士学位论文烤烟游离氨基酸的研究姓名：刘荣森申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：杨虹琦;周冀衡20071201幽４．２不同烤烟晶种适熟中部叶片炎冬氩酸、谷氦阪的禽罐Ｆｉｇｕｒｅ４．２ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＡｓｐ．Ｇｌｕｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ幽４．３≈；同烤煳赫秭透热中部ｆｆｆＨ”苯丙氯陂、脯氩酸的禽凝ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＰｈｅ．Ｐｒｏｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔａｉ＇ｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｌｏｂａｃｃｏＪｅａｖｅｓｔｈａｔＡｆｔｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ图４．４小州烤船ｌ品种通热中部ｎＩ片酪氟酸、缬氰酸的含鼙ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｎｆＴｙｒ．Ｖａｌｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｎｒｅｆｌｕｅ—ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｌｌｅｍｉｄｄｌｅ幽４．５不同烤烟品种适熟中部叶片丝氨酸、苏氨酸的含簧Ｆｉｇｕｒｅ４．５ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＳｅｒ．Ｔｈｒｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ，ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏＩｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｌ射４．６不同馋烟晶种适熟中部ｎＩ片甲硫氨酸、亮氦酸的禽嫩ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭｅｔ，Ｌｅｕｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏ｜ｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ豳４．？不弼烤翅麓秘惩熬中帮＃｜。
跨瓣‘缀酸，赣氦酸的禽繁ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＧ｜ｙ．酶ｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｏｒｃｆｌｕｅ－ｃａｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｃｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅＩ割４．８／ｆｉ同必烟品种适熟ｑ１部叶片’ｒ胱氦酸，色氰酸的禽苗Ｆｉｇｕｒｅ４．８ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＣｙｓ．Ｔｒｐｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ－ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅ—ｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ幽４．９不同烤烟品种适熟中部ｎｌ片异亮氨酸、精氩酸的含鼙ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｌｉｅ．Ａｒｇｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｍａｔｕｒｅｆｌｕｅ—ｃｕｒｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ２．２不同烤烟品种烟碱和蛋白质含量的差异不同烤烟品种适熟中部叶片中烟碱含量和蛋白质含量的测定结果见图４．１０。
反相高效液相色谱法测定不同烟叶中的游离氨基酸
Ｔ ｒＣ ｓ Ｖ ｌ Ｍｅ、 ｈ 、ｌ 、 ｅ 、 ｒ、 ｏ 基 酸 试 ｙ 、 ｙ 、 ａ 、 ｔ Ｐ ｅ Ｉ Ｌ ｕ Ｐｏ Ｎ ｒ氨 ｅ
剂： 生化 试剂 ；
量 的多少 与烟 叶质 量 的优 劣 、 基 酸种类 、 氨 数量 及作
期 间 环境对 烟 叶 中游 离 氨 基 酸 的 影 响 ， 及 烟 叶调 以 制期 和发 酵期 游 离氨 基 酸 的 变化 ］ 对 于 不 同 品 ，
称取 阳离 子 树 脂 ３ ０ ｇ置 于 烧 杯 中 ， 后 加 入 然 １０ｍ ０ Ｌ的浓 盐酸并 搅拌 浸 泡树 脂 ２ ， 后 再将 盐 ４ｈ 然
甲醛丹酰氯 ） Ｆ Ｏ （ 芴 基甲氧基羰 酰氯 ） 、Ｍ Ｃ ９一 联合 柱前衍生反相高效液相色谱法测定其 中的游离氨基 酸 。由于该 方 法 克 服 了 Ｏ Ａ 和 Ｆ Ｃ单 独使 用 时 Ｐ ＭＯ
的弊 端 ， 承 了两 者 的优 点 ， 继 因此 使 利用 高效 液相 色 谱测 定氨 基酸 的方 法 更 趋 完 善 ； 不 同烟 叶 中游 离 对 氨基 酸 的含 量进 行 测 定 ， 烟 叶 中游 离 氨 基 酸 的应 为
摘要
用 乙醇水溶液提取烟叶 中的游 离氨基酸 并通过 阳离子交换柱 纯化 后 ， 用 Ｏ Ａ（ 采 Ｐ 邻苯二 甲醛 丹酰 氯） 、
Ｆ Ｃ ９一芴基甲氧基羰酰氯 ） ＭＯ （ 联合在 线衍 生反相 高效液相 色谱法对烤 烟 、 白肋烟 和香料 烟 中的游 离氨 基酸进 行 了 对 比研 究， 发现 白肋烟 、 香料烟 和烤 烟的烟叶 中所含游 离氨 基酸 总量分别为 １． ／ｇ ７ ７ｍ ｇ和 ３ ３ｍ ／ ； ４ ０ｍｓ 、． ｓ ／ ． ｓｇ 三者 在所含主要氨基酸种 类上存在 显著差别。用该方法考察 了不同产地 烟叶中游离氨 基酸的含量。
烟草中氨基酸的分离与分析方法研究
郑州轻工业学院本科毕业设计（论文）题目学生姓名陈晓专业班级应用化学06-1班学号200604040104院（系）材料与化学工程学院指导教师(职称) 贾春晓（教授）完成时间2010年 6 月5日目录摘要 (I)ABSTRACT (II)前言 (1)1 实验部分 (2)1.1 实验材料、试剂及仪器 (2)1.1.1实验材料 (2)1.1.2所用试剂与仪器 (2)1.2相关溶液的配置 (4)1.2.1 盐酸的配置 (4)1.2.2 衍生化试剂的配制 (4)1.2.3 10﹪甲醇-水溶液 (4)1.2.4AccQ.Tag 缓冲溶液 (5)1.2.5 60﹪乙腈--水 (5)1.2.6标准溶液 (5)1.2.7 BF08二号样 (5)1.2实验原理 (6)1.2.1 高效液相色谱法分析的原理及特点 (6)1.2.2 AccQ•Tag 方法的原理 (10)1.3 实验方法 (12)1.3.1原料的预处理 (12)1.3.2 HPLC分析条件 (12)1.3.3 柱前衍生 (13)2 结果与讨论 (15)2.1 水解烟叶中游离氨基酸所用盐酸浓度的确定 (15)2.2色谱条件优化 (15)2.2.1 仪器条件 (15)2.2.2样品的稀释浓度的确定 (15)2.3烟叶中氨基酸的定性分析 (16)2.4 烟叶中氨基酸的定量分析 (20)2.4.1 氨基酸标准曲线的绘制 (20)2.4.2 烟叶中氨基酸的定量分析 (25)2.4.3氨基酸含量的对比分析 (29)结论 (31)致谢 (33)参考文献 (34)附表 (36)烟草中氨基酸的分离与分析方法研究摘要烟草中的氨基酸是重要的致香前体物质 ,同时也是合成烟碱、多酚等有关物质的前提,对烟株体内氮的代谢及烟叶品质具有重要作用。
本实验研究两种黑龙江白肋烟BF08和C2F不同工艺处理的烟丝中游离氨基酸种类和含量的变化，为白肋烟的进一步应用研究提供较丰富的基础数据,同时对白肋烟的加工工艺参数的调整有着积极的指导意义，有利于选择优良的工艺条件。
液相色谱串联质谱法测定烟草中的游离氨基酸
Ｃ ｌ ８ （ ５ ０ ｍｍ ｘ ２ ． １ ｍｍ ｘ ２ ． ５ Ｉ ｘ ｍ） ，０ ． １ ％ ｆ ｏ ｒ ｍｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ａ ｋ ｅ ｎ ａ ｓ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ
ｉ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ， ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｄ ｉ ｖ ｅ ｃ ｔ ｌ ｙ ．Ｔｈ ｅ ＬＣ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｄ ｏ ｎ ａ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ—ｐ ｈａ ｓ ｅ ＸＴｅ ｒ ｒ ａ ＭＳ
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ２ ０ ｆ ｒ ｅ ｅ ａ ｍｉ ｎｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ ｔ ｏ ｂａ ｃ ｃ ｏ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｌ ｉ ｑ ｕｉ ｄ ｃ ｈｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈｙ ｔ ａ ｎ ｄｅ ｍ ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ Ｏ ． １ ％ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｃ
５ ８ ８ ４
色谱 条件 ： 色谱 柱为 Ｘ Ｔ ｅ ｒ ｒ ａ Ｍ Ｓ Ｃ １ ８ （ ５ ０ ｍ ｍ ￣ ２ ． １ ｍ ｒ ｎ ￣ ２ ． ５ Ｉ ． ｚ ｍ） ； 进样 量 为 ５ ； 柱温为 ２ ５ ℃； 流 动 相 Ａ为０ ． １ ％甲酸溶液 ， 流动相 Ｂ为 乙腈 ； 洗脱条 件
ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｆ ｒ ｅ ｅ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ．
测AA方法
反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸氨基酸是烟草中的一类重要化学物质，在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应，生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等。
氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系，氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物，对烟气香吃味产生不良影响，个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分。
一般说来，氨基酸含量太高，烟气辛辣、味苦、刺激性强烈；含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度。
因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作，二十世纪60年代以来，国内外在这方面做了大量的工作[1-5]。
植物游离氨基酸样品的制备，国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同。
据文献报道[6-7]，盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸；提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法。
本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究，确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法。
提取、纯化后的样品，采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定。
该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定，且得到较好的定性定量结果。
1 实验1.1 仪器Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器)，PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计。
1.2 试剂正缬氨酸（Norvaline，内标），OPA，FMOC，均为色谱纯，Agilent公司提供；硼酸缓冲溶液，Agilent公司提供；醋酸钠(NaAc)，分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司；三乙胺（TEA），四氢呋喃（THF），乙腈（CH3CN），甲醇(MeOH)，均为色谱纯，Fisher公司试剂；氨基酸标样包括：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、丝氨酸（Ser）、组氨酸（His）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、酪氨酸（Tyr）、胱氨酸（Cys）、缬氨酸（V al）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、脯氨酸（Pro），均为生化试剂，中国医药（集团）上海化学试剂公司；苯乙烯阳离子交换树脂（732型），天津树脂厂。
柱前衍生HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量
烟草科技/T obacco Sc ience&T echno logy烟草化学/T obacco Chem istry2010年第8期(总第277期)柱前衍生HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量程 勇,陈 玲,邓晓春深圳波顿香料有限公司,广东省深圳市南山区大新路19号 518051关键词:H PLC;柱前衍生法;2,4-二硝基氟苯;烟叶;游离氨基酸摘要:建立了以2,4-二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂,0 015m ol/L磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲液和50%乙腈水溶液为流动相,采用反相HPLC法测定烟叶中20种游离氨基酸含量的方法,并采用该法测定了7个烟叶样品。
结果表明: 20种氨基酸的平均回收率在94 2%~118 4%之间;相对偏差小于3%;4个烤烟样品中均未检出甲硫氨酸和异亮氨酸,均是脯氨酸含量最高,且2个上部烟叶样品中的游离氨基酸总量都大于2个中部烟叶样品;!7个烟叶样品中,唯有巴西白肋烟BC RA总氨基酸含量最高,其天门冬氨酸的含量显著地高于其他烟叶样品;∀马里兰烟苯丙氨酸的含量在7个烟叶样品中是最高的,且其天门冬酰胺和脯氨酸含量显著地高于其它6个烟叶样品;希腊香料烟样品中的脯氨酸略低于马里兰烟。
中图分类号:TS411.1 文献标识码:B 文章编号:1002-0861(2010)08-0034-07D eter m i n ation of Tw ent y Free Am i n o A cids in Tobacco Leaves by HPLC w it h Preco l u m n D erivatizationC H E NG YONG,C HEN LI N G,and DENG X I A O CHUNShenzhen Boton Flavours and Fragrances Co.,Ltd.,Shenzhen518051,Guangdong,Ch i n aK eywords:H i g h perfor m ance li q ui d chro m atography(HPLC);Pr e co l u mn deri v ation;2,4-D i n itr ofl u orobenzene; Tobacco lea;f Free a m i n o acidAbst ract:A m et h od for deter m ining20free a m i n o ac i d s in tobacco leaf w as estab lished by usi n g2,4-di n itrofluorobenzene(DNFB)as a derivative reagen,t0.015m ol/L disodium hydrogen phosphate and potassi u m di h ydrogen phosphate as buffer so l u ti o n and50%aqueous aceton itrile as m ob ile phase,and reversed phase HPLC.Seven tobacco leaf sa m ples were de tected.The resu lts show ed tha:t1)The average recoveri e s of t h e20a m i n o acids w ere fro m94.2%to118.4%w it h the RSDs of less t h an3%.2)M eth i o nineand iso leuci n e w ere not detected in four fl u e cured tobacco sa m ples,the content o f pr o li n e w as the h i g hes,tand the contents of total free a m ino acids i n t w o upper leaf sa mp les w ere higher than those i n t w o cuttersa mp les.3)The content o f total free a m ino ac i d s i n the sa m p l e o f Brazil burley tobacco,BCRA,w as the highest,and its aspartic aci d contentw as si g nificantl y higher than t h at i n o ther sa m ples.4)The phenyla lanine content in t h e sa m ple o fM ary land tobacco w as the h i g hes,t and asparag i n e contentw as obv i o usly h i g her thant h at i n other sa m ples,and pr o li n e con tent w as slightly higher than that in the sa m ple o f Greece orienta l andsi g nifican tl y higher than that i n the other five sa m p les.作者简介:程勇(1973-),大专,工程师,主要从事烟草及烟用香精的研究。
离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸
离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸作者：李辉岳先领李皓侯鹏娟张峻松来源：《湖北农业科学》2015年第23期摘要：为了研究离子色谱法测定烟叶中游离氨基酸含量，以游离氨基酸测定总量为指标，考察了萃取所用的溶剂、温度、时间以及料液比等因素对游离氨基酸测定量的影响。
结果表明，烟草中游离氨基酸的最优检测条件为：萃取溶剂为0.1 mol/L盐酸、萃取时间为30 min、萃取温度为30 ℃、烟叶与盐酸的比例为1∶40（w/v）。
测定方法的氨基酸检出限为2.76～22.36 ng/mL，定量限为9.57～102.13 ng/mL，试验的RSD为1.26%～4.96%，氨基酸的加标回收率为83.51%～106.78%，说明该优化方法可行，利用确定的最佳条件测定了国内主产区的10种烤烟型烟叶。
关键词：烟草;游离氨基酸;离子色谱;测定中图分类号：O656.3 ; ; ; ;文献标识码：A ; ; ; ;文章编号：0439-8114（2015）23-6023-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.23.058Determination of Free Amino Acids in Tobacco by Ion Chromatography MethodLI Hui1，YUE Xian-ling1，LI Hao2，HOU Peng-juan2，ZHANG Jun-song2（1.Technology Center of Heilongjiang Tobacco Industry Co.，Ltd.， Harbin 150001， China;2.College of Food and Bioengineering Zhengzhou University of Light Industry， Zhengzhou 450002， China）Abstract： In order to study the effect of ion chromatography method for the determination of free amino acids in tobacco， the optimization of the experimental conditions were studied， the value of free amino acids used as a response value. The experimental results showed that the best experimental conditions were as follows： the extract solvent was 0.1 mol/L hydrochloric acid; the temperature of experiment was 30 ℃; the extract time was 30 min; the solid to liquid ratio was 1∶40（w/v）. The detection limit of the method was 2.76～22.36 ng/mL，limit of quantitation was9.57～102.13 ng/mL， the method has high recovery（83.51%～106.78%）and good repeatability （RSDKey words：tobacco;free amino acids;ion chromatography;determination游离氨基酸是烟草中的一类重要化合物，约占烟叶重量的0.5%～2.1%[1]，在烟草生长、烘烤、陈化、工艺加工以及燃烧的过程中参与化学反应，并生成许多种具有不同香味特征的化合物，与烟叶内或外加的还原糖发生缩合以及缩合物的进一步降解，生成一系列的吡咯、吡嗪和呋喃类等碱性香味化合物，这些碱性香味成分对烟草的香气、吸味等感官质量产生显著影响[2，3]。
柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸
D0I：10.13822/ki.hxsj.2021007962化学试剂，2021,43(6),801〜805柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸许永「，黄丽佳一2，刘欣1,李晶「，宋春满"，杨光宇1,李雪梅1(1.云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南昆明650106；2.昆明医科大学药学院，云南昆明650504)摘要:建立了柱前衍生-高效液相色谱检测新鲜烟叶中18种游离氨基酸的分析方法。
0.2g样品用5mL超纯水超声提取30min,过滤后取0.5mL滤液以异硫氰酸苯酯(PITC)衍生，以Waters SunFire C18色谱柱为分析柱，80%乙睛和0.1mol/L乙酸钠水溶液为流动相，梯度洗脱，在254nm处检测，外标法定量。
结果表明，18种氨基酸的线性范围为2~ 50wg/mL，定量限为0.03〜0.10mg/g,3个水平加标平均回收率在84.6%-105%之间，相对标准偏差为1.7%~5.5%-该方法简便快速，适用于新鲜烟叶中18种游离氨基酸的含量分析-关键词:柱前衍生;高效液相色谱;烟叶;游离氨基酸中图分类号：0652文献标识码：A文章编号：0258-3283(2021)06-0801-05Determination of Free Amino Acids in Fresh Tobacco Leaves by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization XU Yong1,HUANG Li-jia'，,LIU Xin,LI Jing',SONG Chun-man*1,YANG Guang-yu',LI Xue-mei (1.Technology Center of China Tobacco Yunnan Industrial Co.,Ltd.,Kunming650106,China；2.School of Pharmacy,Kunming Medical University,Kunming650504,China),Huaxue Shiji,2021,43(6),801〜805Abstract:A method was developed for the determination of18free amino acids in fresh tobacco leaves by pre-column derivatiza-tion-high performance liquid chromatography.0.2g Sample was extracted by ultrasonication with5mL ultrapure water for30min, filtrated and then0.5mL of the filtrate was derived with phenyl isothiocyanate(PITC)and analyzed on a Waters SunFire C18 column with80%acetonitrile and0.1moL/L aqueous sodium acetate solution as mobile phase.Derivatives were detected at the wavelength of254nm and quantified with external standard method.The results showed that the linear ranges of18free amino acids were2~50wg7mL,and the limits of quantitation were0.03〜0.10mg/g,and the average recoveries of18free amino acids were in the range of84.6%-105%with relative standard deviations of1.7%〜5.5%.The method is simple and suitable for the analysis of18free amino acids in fresh tobacco leaves.Key words:pre-column derivatization；high performance liquid chromatography；tobacco leaves；free amino acids氨基酸是烟草中一类重要化合物，在烟草生长、调制、醇化、加工直至成品卷烟抽吸过程中,氨基酸与烟草中的还原糖发生非酶棕化反应,生成多种香味前体物质,某些氨基酸如苯丙氨酸还可以自身分解成香味化合物,对形成芳香的烟草香气和吸味有重要贡献［1］-因此，分析烟草中氨基酸含量，对烟草品质评价及卷烟配方设计等均有重要意义-烟草氨基酸的分析方法有直接测定法和间接测定法，直接测定法有离子色谱-脉冲安培检测法［2,3］和液相色谱-串联质谱法［4-6］。
烟草中游离氨基酸的测定
烟草中游离氨基酸的测定王娟,张华,郭国宁,李琳(湖北中烟工业有限责任公司技术中心,湖北武汉430051)摘要 [目的]探讨用氨基酸自动分析仪建立一种测定烟草中游离氨基酸的方法。
[方法]用氨基酸分析仪法测定烟叶中的游离氨基酸并对这些游离氨基酸分别定性定量检测。
[结果]氨基酸分析仪法能够分离检测烟叶中的23种游离氨基酸(除了蛋氨酸),其回收率均在78.86%~101.46%,标准偏差均在8%以内,具有较好的重现性和回收率。
最优的氨基酸提取方法是:样品过60目筛,用0.005mol/L 的盐酸超声萃取30m i n 。
对不同的烟叶样品进行检测,发现不同种类烟叶所含有的氨基酸具有一定的规律性。
烤烟和香料烟中所含的游离氨基酸以Pro 为主,而白肋烟以Asn 为主;只有白肋烟中含有氨基酸Tau ,而烤烟和香料烟里面几乎检测不到。
[结论]氨基酸分析仪法是测定烟叶中游离氨基酸较好的方法。
关键词 烟草;游离氨基酸;氨基酸分析仪中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)26-11413-04Detectio n of Free Amino Aci ds i n Tobacco WANG Juan et al (Ch i na Tobacco H ube i Industr i a lCo .lt d .R &D Center ,W uhan ,H ube i 430051)Abstract [Objecti ve]A method establi shed f or t he de t ecti on of free a m i no ac i ds i n t obacco usi ng a m i no aci d ana l yzer was discussed .[M e t hod]The free a m i no aci ds in tobacco were de t ected using t he a m i no aci d analyzer and t hese free a m i no aci dswere detected qualitati vel y and quantit a ti ve l y resp .[R es u lt ]23ki nds of free a m i no aci ds exceptm et hioni ne i n t obacco l eaves were separated and detected by the a m i no aci d anal y z er m et hod ,t he reproduci b ilit y were bet w een 78.86%and 101.46%,and the standard dev i ati on va l uesw ere bel ow 8%.The me t h od had better reproduc i bility and recovery .The optm i u m ex traction m et hod o f a m i no aci d w as as f o ll ows :t he sa mples w ere sieved by 60m e s hes trea t m ent and treated by u l trasonic extracti on w it h 0.005mo l/L hydroch l oride for 30m i n .The contents o f a m i no aci ds i n different varie ti es of tobacco leaves s ho w ed s ome l a w after t he det ecti ng tobacco sa mples .The f ree a m i no aci d cont a i ned i n flue cured tobacco and orient a l tobacco w asma i nl y pro li ne ,while t hat i n bur l ey tobacco was ma i nl y as paragine .The tauri ne was onl y cont a i ned i n burley tobacco and itw as nearl y not detected i n fl ue cured tobacco and orient a l tobacco .[Conc l usion]The a m i no aci d ana l yzerm et hod was t he bett er me t hod for detec ti ng t he free am i no aci ds i n t obacco l eaves .K ey words Tobacco ;F ree a m i no ac i d ;Am i no ac i d analyzer基金项目 国家烟草专卖局资助项目。
烟叶游离氨基酸的测定 氨基酸分析仪法
烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法〔YC/T 282—2021〕日期：2021/6/2 10:39:18来源：烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法〔YC/T 282—2021〕由国家烟草专卖局于2009年3月30日批准发布，自2009年5月1日起实施。
前言本标准的附录Ａ、附录B、附录C为资料性附录。
本标准由国家烟草专卖局提出。
本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会〔TC144/SC1〕归口。
本标准起草单位：XX中烟工业XX公司、中国烟草总公司XX烟草研究院。
本标准主要起草人：王娟、李丹、X建锋、马舒翼、宋旭艳、郭国宁、X克建。
烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法1范围本标准规定了烟叶中游离氨基酸的氨基酸分析仪测定方法。
本标准适用于烟叶中天冬氨酸〔Asp〕、苏氨酸〔Thr〕、丝氨酸〔Ser〕、天冬酰胺〔Asn〕、谷氨酸〔Glu〕、脯氨酸〔Pro〕、甘氨酸〔Gly〕、丙氨酸〔Ala〕、缬氨酸〔Val〕、胱氨酸〔Cys〕、异亮氨酸〔Ile〕、亮氨酸〔Leu〕、酪氨酸〔Tyr〕、苯丙氨酸〔Phe〕、β-丙氨酸〔β-Ala〕、β-氨基异丁酸〔β-Aia〕、γ-氨基丁酸〔γ-Aba〕、赖氨酸〔Lys〕、组氨酸〔His〕、色氨酸〔Trp〕、精氨酸〔Arg〕等21种游离氨基酸的测定。
2标准性引用文件以下文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
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YC/T 31-1996烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3 术语和定义以下术语和定义适用于本标准。
3.1烟叶中游离氨基酸dissociated amino acid〔free amino acid〕in tobacco leaf 烟叶的盐酸浸出物中，以游离状态存在、未结合在蛋白质分子中的氨基酸。
离子色谱-积分脉冲安培法测定烟草中18种游离氨基酸
离子色谱-积分脉冲安培法测定烟草中18种游离氨基酸于宏晓;徐海涛;马强;吕健;张晋;岳勇;赵曰利;肖协忠【摘要】10.3969/j.issn.1007-5119.2012.04.011% 采用离子色谱-积分脉冲安培法同时测定了烟草中18种游离氨基酸的含量.结果表明,该方法同时检测烟草中18种游离氨基酸的平均回收率为80%~115%,最低检出限为0.03~0.75μg/mL,线性相关系数为0.9900~0.9992.该方法成功对比分析测定了烤烟、白肋烟和香料烟3种不同类型单料烟以及国内外不同风格卷烟中18种游离氨基酸的含量【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2012(000)004【总页数】4页(P51-54)【关键词】离子色谱-积分脉冲安培法;游离氨基酸;卷烟【作者】于宏晓;徐海涛;马强;吕健;张晋;岳勇;赵曰利;肖协忠【作者单位】山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101【正文语种】中文【中图分类】S572.01烟草中的含氮化合物对烟草的感官评吸质量和吸者健康有重要的影响，历来受到人们的普遍关注。
氨基酸是烟草和烟气的香味成分之一，也是烟草中一类重要的致香前体物质。
氨基酸的含量与烟草的品质有着密切的关系，其含量的高低直接影响到烟草的味道和烟气的丰满度[1-2]。
适量的氨基酸对形成优美的烟草香气和吸味有重要贡献。
在烟草调制、醇化和加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应，生成多种具有烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等。
烟叶中游离氨基酸总量的测定
烟叶中游离氨基酸总量的测定一、原理游氨基酸可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物。
在一定范围内，颜色的深浅游离氨基酸含量成正比，可用分光光度计，在570nm下测得蓝紫色溶液的消光值，根据标准曲线计算未知样品中游离氨基酸的含量。
二、实验材料、仪器和试剂1.材料新鲜烟叶2.仪器（1）研钵、漏斗、三角瓶、滤纸（2）具塞刻度试管20ml（3）刻度吸管（5ml、1ml、移液枪0.1ml）（4）沸水浴电炉（5）分光光度计3.试剂（1）10％乙酸（2）水合茚三酮试剂：称取0.6g茚三酮加入15ml正丙醇溶解，再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9mlpH4.5乙酸—乙酸钠缓冲液，混匀，贮于棕色瓶于冰箱内保存，10日内有效。
（3）乙酸—乙酸钠缓冲液（PH4.5）：称取54g乙酸钠(NaAc·3H2O)，加入蒸馏水加热至沸，冷却后加30ml冰乙酸，用蒸馏水定容至100ml。
（4）氨基酸标准液：称取80℃烘干的亮氨酸46.8mg，以10％异丙醇溶解，并定容至100ml，取此液5ml用蒸馏水稀释至50ml，即为每毫升含氮5ug的标准液。
（5）0.1％的抗坏血酸：50mg溶于50ml水中，现用现配（6）60％乙醇三、操作步骤1.样品提取取新鲜待测烟叶，剪碎，于研钵中加5ml10％乙酸，研磨，转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容后，用干滤纸过滤至三角瓶中。
2.标准曲线制作取6支20ml刻度试管，按表加入试剂后，盖上玻塞，混匀，置沸水浴中15分钟，然后取出在冷水浴中迅速冷却，使加热时形成的红色逐渐被空气氧化而褪色，直到溶液呈蓝蓝紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀，在570nm下测消光值。
以每管含氮量为横坐标，消光值为纵坐标作标准曲线。
试剂管号1 2 3 4 5 6标准亮氨酸0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0无氨蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1水合茚三酮试剂 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.00.1％抗坏血酸0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1每管含氮量（ug）0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.03.样品测定取样品滤液1ml，放入20ml具塞刻度试管中，加蒸馏水1ml，水合茚三酮3ml，0.1％抗坏血酸0.1ml，同标准曲线方法显色、比色。
云南产卷烟中游离氨基酸含量分析
云南产卷烟中游离氨基酸含量分析向海英;张建铎;高茜;曾婉俐;宋春满;李雪梅【摘要】为明确云南产卷烟中游离氨基酸的含量特征,分析了40份云南产卷烟样品中的19种游离氨基酸含量.结果表明:云南产卷烟的脯氨酸含量最高,达2270.55μg/g,天冬氨酸含量为220.98μg/g,苯丙氨酸含量为144.03μg/g;谷氨酰胺、缬氨酸、色氨酸、组氨酸、谷氨酸、酪氨酸、胱氨酸、丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸和丝氨酸含量为10.59～81.37μg/g,异亮氨酸、亮氨酸、天冬酰胺和甘氨酸含量均低于10μg/g.除赖氨酸与其他氨基酸不相关外,其余氨基酸之间均存在中等程度或高度相关性.对卷烟品质贡献较大的有酪氨酸、组氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、缬氨酸和脯氨酸.40份卷烟样品可聚为3类,聚类结果与样品实际品质较为吻合.【期刊名称】《湖南农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(045)002【总页数】6页(P138-142,161)【关键词】云南产卷烟;氨基酸;主成分分析;聚类分析【作者】向海英;张建铎;高茜;曾婉俐;宋春满;李雪梅【作者单位】云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106;云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南昆明 650106【正文语种】中文【中图分类】S572游离氨基酸是烟草中一类重要的致香前体物，其含量影响烟草的味道和烟气的丰满度。
在烟草调制、醇化和加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖发生酶催化或非酶催化的棕色化反应，生成多种致香成分[1]。
已有研究表明，氨基酸含量受烟草品种[2]、栽培措施[3–5]、生态条件[6–8]和调制工艺过程[9–15]的影响。
反相高效液相色谱法测定不同烟叶中的游离氨基酸
反相高效液相色谱法测定不同烟叶中的游离氨基酸陈文;王存文;王光辉;金亚利;李丹;陈祖刚;马舒翼【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2007(16)1【摘要】用乙醇水溶液提取烟叶中的游离氨基酸并通过阳离子交换柱纯化后,采用OPA(邻苯二甲醛丹酰氯)、FMOC(9-芴基甲氧基羰酰氯)联合在线衍生反相高效液相色谱法对烤烟、白肋烟和香料烟中的游离氨基酸进行了对比研究,发现白肋烟、香料烟和烤烟的烟叶中所含游离氨基酸总量分别为14.0 mg/g、7.7 mg/g和3.3 mg/g;三者在所含主要氨基酸种类上存在显著差别.用该方法考察了不同产地烟叶中游离氨基酸的含量.【总页数】3页(P14-16)【作者】陈文;王存文;王光辉;金亚利;李丹;陈祖刚;马舒翼【作者单位】武汉工程大学化工与制药学院,武汉,430074;武汉工程大学化工与制药学院,武汉,430074;武汉科技大学化工学院,武汉,430081;武汉工程大学化工与制药学院,武汉,430074;武汉烟草集团技术中心,武汉,430050;武汉烟草集团技术中心,武汉,430050;武汉烟草集团技术中心,武汉,430050【正文语种】中文【中图分类】S5【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸 [J], 李丹;黄龙;朱巍;马舒翼;陈文;王光辉2.反相高效液相色谱法测定白肋烟烟叶中的游离氨基酸 [J], 景延秋;周苏玫;王昌军;高玉珍;宫长荣3.柱前衍生反相高效液相色谱法测定马尾松(Pinus massoniana )针叶中γ-氨基丁酸和17种游离氨基酸 [J], 邓文红;沈应柏;李镇宇;张淑静;刘雪萍4.邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸 [J], 杨卫;鲜殊;李大祥;宛晓春5.柱前衍生反相高效液相色谱法测定绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸含量 [J], 曹静亚;张丽先;范毅;王志尧;刘雨晴;魏悦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。