黄芪多糖的提取和含量测定研究
黄芪多糖的提取与应用研究
病毒 、 马立 克 氏病 毒 、 流感 病 毒 等 多种 禽 畜传 染 禽
性病毒 都有很 强 的抑 制作用 Ｉ。 ｌ ２３抗 肿瘤 作 用 黄芪 多 糖 能够 明显 延 长 移植 有 黑 ． 色素瘤 Ｂ ６细胞小 鼠的生存 期 ， 晚期 肿瘤 有一 定 １ 对 的治 疗效 果【。黄芪 多糖 对 Ｓ ８ ｌ ２ １ １０小 鼠肿 瘤 细胞 凋
［］ 刘瑞生 ， ２ 张述斌 ， 必慧等 ．黄芪多糖的提取和含量测定研究 王
［ｌ 国外 畜牧 学 ，０ ９２ （） ３ ７ ． Ｊ ｌ ｜ ２ ０ ，９１７ — ４ ：
［］ 刘永录 ， ３ 于瑞 ， 国祖等．ｐ 张 Ｈ值对碱法提取 黄芪多糖 收率的影 响及黄芪多糖体外抑菌作用研究 ［ ＿ 河南农业科学 ，０ ０５ Ｊ １ ２ １，：
［２ 黄宏思 ， １］ 黄卫彤 ， 覃志坚等 ．Ｃ ３ Ｋ和黄芪多糖 联合治疗荷 ＤＡ
瘤 动 物 的 实 验 研 究 明 ． 右 江 民 族 医 学 院 学 报 ，０ ２２ （） ２０ ，４３：
３ ２ ３ ４ ３ － ３ ．
［３ 陈光 ， １】 臧文 臣， 刘显清等．黄芪多糖对动物肿瘤细胞凋亡影响
提 取法进 行 了优 化 ， 考察 了加水 量 、 取 时间 、 取 提 提
次 数对 黄芪 多糖 提取 工 艺 的影 响 ， 出最 优条 件 为 得
加 ６倍量 的水 ， 取 １ 提 ． 时， ５小 提取 ３次 。在该 条件
张萍 等［ 合 对 比了微 波辅 助提 取法 与传统 水 ６ １ 综
提法 的提取 率 和 时 间等 ，其 提 取 率分 别 为 ９ ． ％ ３０ ２ 和 ８ ． ％， 时分 别 为 ３ ９３ ４ 耗 ０分 钟 和 １ ０分 钟 。再 考 ２
ｐ０ｙ ａ ｈａ ｉ ｅ ． ｌｓ（ ｃ ｒｄ ｓ
黄芪多糖的提取及含量测定方法简述
黄芪多糖的提取及含量测定方法简述发表时间：2011-11-02T10:39:28.263Z 来源：《中外健康文摘》2011年第22期供稿作者：惠秋沙[导读] 黄芪是一种传统中药材，含有多种有效成分，其中黄芪多糖是黄芪补气的主要活性成分之一惠秋沙（山东中医药大学药学院山东济南 250014）【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）22-0220-02【摘要】黄芪是一种传统中药材，含有多种有效成分，其中黄芪多糖是黄芪补气的主要活性成分之一，现就其提取方法和含量测定做一简单的分析。
【关键词】黄芪多糖提取含量测定The Extracting and the Content Determination Method of Astragalus polysaccharidesHui Qiu-sha (Pharmaceutical College, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China 250014)【Abstract】Astragalus is a kind of traditional Chinese herbal medicine. It contain a variety of effective ingredients, inside, astragalus polysaccharides are one of the main compositions tonifying qi astragalus. Currently, we make a simple analysis on the extracting and the content determination method of astragalus polysaccharides.【Key words】 Astragalus polysaccharides extraction content determination黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，是一种传统的中药材，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。
黄芪多糖的微波提取及含量测定
黄芪多糖的微波提取及含量测定王莉, 刘志勇, 鲁建江, 顾承志, 陈宏伟(石河子大学药学院,新疆石河子832002)摘要 目的:从黄芪中提取多糖,并测定其含量。
方法:运用微波技术用水提醇沉法提取黄芪多糖,用酚———硫酸比色法测定多糖含量。
结果:测得黄芪中多糖含量6.55%,平均回收率为99.05%,RSD= 1.02%(n=3)。
结论:首次运用微波技术从黄芪中提取出多糖,反应速度加快,实验结果令人满意。
关键词 微波技术 黄芪 多糖 提取 含量测定 黄芪(Astragalus lepsensis Bge)为豆科紫云英属植物,具补气固表、脱疮生肌和强心利尿等作用,可用于治疗体虚自汗、久泻等病症[1],黄芪还具有增强免疫系统、抗氧化、延缓衰老、改善心功能状态、抗病毒、抗癌等功效[2]。
微波技术的应用,近年来得到很大发展。
微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。
微波辐射(MWI)可以大大加快反应速度(最高达1240倍),反应时间以分、秒计[3]。
微波技术应用于植物细胞破壁,有效地提高了收率[4],亦取得了令人可喜的进展。
本实验运用微波技术对黄芪用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质,用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分后,再运用微波技术用水提醇沉法制得黄芪粗多糖,并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定[5],取得了令人满意的结果。
1 仪器、试剂及样品 UV-2401PC紫外分光光度计(日本岛津); MC L-3型连续微波反应器(四川大学无线电系); (+)葡萄糖(AR)105℃干燥恒重;苯酚(AR);硫酸(AR)。
黄芪:7月份采集于四川阿坝州,经生药学教研室成玉怀副教授鉴定为豆科紫云英属植物,自然干燥,粉碎待用。
2 标准曲线的绘制2.1 标准葡萄糖溶液的配制 精确称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg,加适量水溶解,转移至250ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀,配成浓度为100.8μg/ml标准葡萄糖溶液备用。
黄芪中黄芪多糖的提取分离及应用研究进展
李红民等［７］用水、氧化钙水溶液和碳酸钠水溶液分别对黄 芪进行提取率比较，结果 ＣａＯ提取收率最高（１１．７％），与水提 取法 相 比 提 取 率 是 水 提 取 法 收 率 （３．６％）的 ３．２５倍，是 Ｎａ２ＣＯ３ 水溶液提取回收率（５．７％）的 ２．０５倍。
８
韩凤兰等 ［８］通过用大 量 实 验 对 黄 芪 中 黄 芪 多 糖 的 几 个 常 用提取方法进行了比较，通过试验发现用常规的水提取多黄芪 多糖提取率为 ５．４６％，而用氧化钙水溶液提取黄芪多糖提取率 为 ６．６８％，而 利 用 碳 酸 钠 水 溶 液 提 取 黄 芪 多 糖 提 取 率 达 到 １０．０６％，最后超细 粉 碎 技 术 提 取 黄 芪 多 糖 提 取 率 也 能 达 到 ６．２８％。
国内外通过大量的试验表明，黄芪中黄芪多糖药用价值较 大，不仅能增强人体免疫力，还能对人体的血糖、血压、心脏、防 衰老、抗氧化等有一定的作用 。 ［１０］ 其在临床上常用于提高抵 抗力、抗癌、消除炎症。而兽医临床目前多用于畜禽产品免疫 力的提高主要对鸡传染性法氏囊病，效果明显。而在兽医临床 试验中，意外发现黄芪多糖对动物增产有一定作用，因而发现 黄芪多糖作为饲料添加剂的另一面，使其在畜牧业生产中使用 越来越广泛。 ３．１ 提高畜禽的生产性能
黄芪多糖的含量测定
黄芪多糖的含量测定1．标准溶液的制备取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100毫克，置100毫升容量瓶中加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。
精密量取十毫升，置100毫升容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成0.1毫克/毫升的葡萄糖标准溶液。
2.标准曲线的绘制准确吸取葡萄糖标准溶液0.1-0.6毫升共6份，分别置25毫升容量瓶中，加蒸馏水补充至2.5毫升，再加入5%苯酚溶液1.0毫升，摇匀，迅速加浓硫酸5.0毫升，摇匀，放置5.0M/N 置80℃水浴中加热15分钟，取出，迅速冷却至室温。
另以2.0毫升蒸馏水同上平衡操作作为空白对照，在490纳米波长处测定吸光度，并求出回归方程。
3.黄芪多糖含量测定取提取并经105℃干燥至恒重的黄芪多糖50毫克，置于50毫升容量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，准确吸取10毫升，置100毫升容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，配成0.1毫克/毫升的黄芪多糖溶液。
吸取上述溶液0.5毫升，置25.0毫升容量瓶中，加蒸馏水补充至2毫升，依法测定吸光度值，并代入回归方程计算，求得黄芪多糖的相对含量。
4.黄芪多糖的含量测定结果表1葡萄糖标准溶液测定结果－——————————————————————————————————————序V取样/ML 葡糖糖浓度C/mg.ml﹣1 吸光度A号—————————————————————————————————————— 1 0.1 0.01 0.0802 0.2 0.02 0.1153 0.3 0.03 0.1754 0.4 0.04 0.2255 0.5 0.05 0.2706 0.6 0.06 0.305 ——————————————————————————————————————经计算的标准回归方程为：C=0.21216A—6.37×10-3，R=0.997057表2黄芪多糖粗提物相对含量——————————————————————————————————————批次提取方法吸光度A 浓度相对含量C /mg.ml-1 ——————————————————————————————————————021108 水提取法0.185 0.0326 65.2% 030516 水提取法0.188 0.033 67.8% 040309 Ca0溶液法0.230 0.0425 85.0% 040305 Ca0溶液法0.215 0.0393 78.6% 040323 Ca0溶液法0.225 0.0414 82.8%从表2可见，水提取法APS含量为65.2%-67.8%，平均为66.5%；Ca0溶液法APS含量为78.6%-85.0%，平均为82.1%；Ca0溶液提取法比水提取法平均提高APS含量15.6个百分点，差异显著（P<0.05）。
实验四黄芪多糖的提取
实验黄芪多糖提取
黄芪为豆科植物的干燥根，主要药理成分是黄芪多糖和黄芪甙。
黄芪多糖在医学和兽医临床上研究应用较为广泛，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用。
能提高未成年禽兽的抗病力，对幼、仔猪、幼畜经常添加可减少疾病，是促进增重，提高生活率，增加整齐度。
一、材料与方法
（一）材料与试剂
黄芪根、氧化钙、95%乙醇均为分析纯。
天平，水浴锅，粉碎机等。
（二）方法
黄芪多糖的提取:
CaO溶液提取法采用pH 9～10的CaO溶液煮沸提取，浓缩时调至pH6.5左右。
1.称取黄芪根1千克，去掉杂质和泥土，粉碎成粉末。
2.黄芪根粉末中加6-7倍的CaO溶液，煮沸1小时，用8层纱布过滤。
3.合并滤液，调pH至6.5左右。
4.将浓缩液中加入2倍量95%乙醇沉淀。
5.倾去上清液，沉淀物中再加入95%的乙醇至浓度为80%，静置，倾出上清，滤渣即为黄芪多糖。
二、结果与分析
1.黄芪多糖的物理性状
提取的黄芪多糖为灰白色粉末，易溶解于水，溶液呈乳白色，无杂质。
三、小结
黄芪多糖作为黄芪纤维质的组成部分，纤维在水中的溶胀作用和溶解性差，因此水提取法收率低。
在碱性溶液中的溶胀作用和溶解性显著增加，纤维之间的酯键易断裂而发生剥皮反应，使更多的多糖得以游离而被提取出来，从而提高多糖收率，因此黄芪多糖尽量避免在酸性条件下提取。
黄芪汤中多糖的提取以及含量测定研究
黄芪汤中多糖的提取以及含量测定研究黄芪汤作为一种常用中药方剂，有着提升免疫力、调节免疫系统和具有抗疲劳、抗氧化等功效。
其中黄芪作为其主要成分，被认为是黄芪汤中最重要和最具有活性的成分。
然而，黄芪中的多糖在其药效中也起着很重要的作用。
因此，本文将探讨黄芪汤中多糖的提取方法以及含量测定研究。
一、黄芪中多糖的提取方法多糖是由许多简单糖分子（单糖）通过糖苷键连接而成的高聚物，不溶于有机溶剂。
因此，提取黄芪中多糖的方法需使用水或醇等极性溶剂。
常用的提取方法有：1.水提法将黄芪粉末加入水中，用热水或蒸汽加热，较高温度下多糖易被水溶解。
但受限于多糖在水溶性上的差异，因此不同来源或不同处理方法的黄芪所得多糖的品质和产率也会有差异。
即使是同样来源和处理方法的化学成分分别也会对多糖的产量和品质有影响。
2.醇提法常用的醇有乙醇、丙酮等。
多糖在醇中溶解度更高，且较容易水解开，因此产量和品质都会高于水提法。
但醇对物质的溶解能力比较大，可能会带走较多的杂质。
同时，操作过程会有火源，需要注意安全。
以上两种方法常被连用来提高多糖的提取产量和品质。
二、黄芪中多糖的含量测定方法黄芪中多糖含量的测定有很多种方法。
如： 1.硫酸蒽醌法该法以硫酸为催化剂，蒽醌为变色剂。
多糖与蒽醌反应，生成颜色，颜色深浅与多糖含量成正比。
该法操作简单、灵敏度高，但易因蒽醌的选择性不够和污染物的存在而出现误差。
2.酚硫酸法该法以硫酸为催化剂，酚用来变色。
采用热酸解、酚硫酸混合试剂共同水解产生浓烈的酸性体系，在加入糖溶液，糖经过反应后能够与酚产生复杂络合物，出现特征性吸收峰。
该法通用性强，且对糖类物质反应稳定、选择性好。
3.紫外分光光度法该法原理相对简单，但需要有被检测物质有固定的吸收峰，故仅能测定部分多糖的含量。
该法可测定部分醛基含量，依法的测定要求光谱仪有一定的波长选择能力。
综上，提取黄芪中多糖的方法主要包括水提法和醇提法。
其中醇提法多糖的产量和品质较高。
黄芪多糖提取及含量测定
黄芪多糖提取及含量测定黄芪多糖是中药黄芪中的一种重要活性成分，具有多种药理作用，如增强免疫力、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等。
因此，对黄芪多糖的提取及含量测定具有重要意义。
一、黄芪多糖的提取1.材料与方法（1）材料：黄芪药材、蒸馏水、乙醇、乙醚、丙酮、葡萄糖等。
（2）方法：将黄芪药材破碎成粉末，加入适量蒸馏水加热煮沸，保温一段时间，过滤并收集滤液。
滤渣再用适量蒸馏水煮沸，重复以上操作，合并滤液。
将滤液浓缩至一定体积，加入乙醇使浓度达到70%-80%，静置过夜，过滤得到沉淀物。
将沉淀物用适量乙醚、丙酮洗涤，晾干后得到粗多糖。
2.结果与讨论通过上述方法提取的黄芪多糖为淡黄色粉末，具有一定的甜味。
提取率受到多种因素的影响，如药材质量、破碎程度、煮沸时间、乙醇浓度等。
通过对不同批次黄芪药材的提取实验，可以发现不同批次黄芪药材的多糖含量存在一定差异。
因此，在提取过程中需要注意控制实验条件，以提高提取率和多糖纯度。
二、黄芪多糖的含量测定1.材料与方法（1）材料：黄芪多糖样品、葡萄糖对照品、苯酚-硫酸试剂、蒸馏水等。
（2）方法：将葡萄糖对照品配制成不同浓度的标准品溶液，分别加入苯酚-硫酸试剂显色后，在特定波长下测定吸光度值。
以吸光度值与浓度绘制标准曲线，得到回归方程。
取黄芪多糖样品适量，用蒸馏水溶解后加入苯酚-硫酸试剂显色，测定吸光度值。
根据回归方程计算样品中葡萄糖的含量，从而得到黄芪多糖的含量。
2.结果与讨论通过上述方法测定的黄芪多糖含量为一定范围内的数值。
不同批次黄芪药材的多糖含量存在一定差异，可能与药材质量、提取条件等因素有关。
同时，该方法也受到实验条件的影响，如苯酚-硫酸试剂的浓度和加入量、显色时间等。
因此，在测定过程中需要注意控制实验条件，以提高测定准确性和可重复性。
三、结论通过对黄芪多糖的提取及含量测定，可以发现不同批次黄芪药材的多糖含量存在一定差异。
在提取过程中需要注意控制实验条件，以提高提取率和多糖纯度。
黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究
氨 基酸 、 微量 元 素 等众 多 的 生物 活 性 物质 。』 具有 补 气 固 ，
ｍｇ ｍ 的葡 萄糖标 准溶液 。 ／ｌ １４ ２ 苯 酚溶 液 。称 取苯 酚 １０ ｇ 加 ０ １ 片 、 ． ５ｇ ．． ０ ， ．０ ｇ锌 ０ ｏ
ＮＨ Ｏ ， ａ Ｃ 蒸馏 ， 收集 １２ｑ 馏分 ， 取 该 馏分 ５ｇ加 蒸馏 水 ８ Ｃ 称 ，
９ ， ５ｍ１置棕色 瓶 中备用 ， 得浓 度为 ５ 的苯酚溶液 。 ％ １４ ３ 膜 荚黄 芪多糖溶 液 。精 密称取 干燥 至恒 重 的膜 荚黄 ．．
表 、 托毒 、 脓 、 疮生肌 之功 能 。膜 荚 黄芪 多糖不 仅 利尿 排 敛
是 机体 的重要组成 部分 ， 还具 有提 高机体 免疫 能力 、 菌 、 抗 抗
Ｋｅ ｒ ｓ Ａ ｔａ ａｌｓｒｏ ：Ｐｏｙ ａ ｃ ａ ｄ ｓｃ ｎｅ ｔ ｙ ｗｏ ｄ ｓｒ ｇ ｕ ｏ ｔ ｌｓ ｃ ｈ ｒ ｅ ｏ ｔｎ ：Ｓｐ ｃｒ ｐ ｏｏ ｔｙ ｉ ｅ ｔｏ ｈ ｔｍｅｒ
黄芪 （ ａｉＡｔｇ ｌ ） 豆科 植 物 ， 荚 黄芪 ［ｓａａ Ｒ ｄ ｓａａｕ 是 ｘ ｒ ｓ 膜 Ａｔ ｇ — ｒ ｌ ｅ ｂ ｎｃ ｓＦｓ ． Ｂｅ ］ ｕ ｍｍ ｒ ａｅ （ ｉ ｈ ） ｇ． 的干 燥 根 含 有 多 糖 、 质 素 ｓ ａ ｕ ｃ 木 类、 黄酮类化 合物 、 豆 苯 醚类 、 香 生物 碱 类 、 苷 类 、 皂 甾体类 、
黄芪多糖提取条件研究
黄芪中多糖提取条件的研究黄芪(RadixAstragalu s)是豆科植物,黄茂的干燥根中含多糖、皂苷、黄酮、氨基酸及多种微量元素等有效成分，其中黄芪多糖(Astragalu spolysa eeha ride s,APs)是含量最多的一种.其主要生物活性表现为增强免疫功能、脾脏增大、抗流感、抗肿瘤、防衰老及抗辐射,对心急梗塞有改善心肌收缩性能、缩小梗塞面积、减轻心肌损伤等作用.由于黄茂多糖的多种生物活性及良好的临床效果,多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。
近二十年来,报道了多种提取多糖的方法,主要包括水煮醇沉法、超声波提取法、超虑法等。
一般采取水煮醇沉法,因该法工艺简单、操作方便.但一般的水煮醇沉法水煮温度都在100℃进行.这样的工艺至少存在两大缺点一是水煮温度高,对提取物的选择性不好.可把黄蔑中的黄酮、皂贰等同时提取出来;黄酮及其类似物的化学式中含有酚经基,在空气中易被氧化而变色,这样对产品的纯度及颜色都有很大的影响.二是水煮温度高,浪费能源和资源,经济效益低.由于提取温度高,使黄酮、皂贰类等也被提取出来,在后续工艺中又不能把它们分离出来,造成产品不纯和资源浪费。
1.1 实验主要仪器紫外分光光度计、旋转蒸发仪、水浴锅、1.2 试剂及材料黄芪干燥根、酒精、苯酚、浓硫酸、葡萄糖、α—萘酚、2 黄芪多糖的提取将黄芪根短杆(或黄芪根粉末)加人到5~8倍量蒸馏水中,在适当温度下浸取1~3 h.过滤得提取液,滤渣可进行二次提取并留作进一步提取黄酮、皂贰等其它成分.将提取液冷致室温或更低温度后,以适当的速度在搅拌下倾人2倍体积的95 %酒精中,黄茂多糖沉淀出来.离心分离,得黄茂多搪,用95 %酒精洗涤,然后干燥.这样得到的黄蔑多糖称为NGF(粗多糖),称重,与药材用量相比,得收率[1]。
3黄芪多糖的分析3.1 特征反应将约0.2 g沉淀提纯物溶解在约20m L 水中,得无色溶液,浓度约为1%.在试管中加人约1 mL 此溶液,再加人约0.5m L15 %a一奈酚的酒精溶液,混合后,沿试管壁加人约1m L 浓硫酸,此时在二者交界处即出现紫色环.混匀后,混合液呈蓝色.此反应为糖类包括单糖、寡糖和多糖的共同反应,称为Molisch 反应.其反应机理可能是由于糖先转为糠醛或其衍生物,再与酚缩合并经氧化而产生有色物质[1].3.2 标准曲线的绘制用苯酚-硫酸法，以葡萄糖为对照品，在490nm处测定吸光度，以吸光度Y为纵坐标，浓度X（ug/ml）为横坐标，绘制标准曲线准确吸取葡萄糖标准溶液0.1~0.6ml共6份，分别置于25ml容量瓶中，加蒸馏水补充至2ml，再加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5ml ，摇匀，放置5min ，置80℃水浴中加热15min ，取出，迅速冷却至室温，另以2ml蒸馏水同上平衡操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸光度，并求出回归方程[3]Y=...X+....3.3 温度对提取率的影响精确称取5份黄芪粉，每份5g，置于圆底烧瓶中，加入等量的去离子水，水浴加热，不断搅拌，加热温度分别为20，40，60，80，100℃，提取1h后取出，抽滤。
黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究_图文(精)
安徽农业科学,Journal ofAnhui A一.蹦.2009,37(10:4493,4498责任编辑金琼琼责任校对夏蓉黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究李万才 (滨州职业学院生物工程系。
山东滨州256603摘要[目的]研究黄芪根中多糖的含量,[方法]采用分光光度法测定膜英黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品.以苯酚一浓硫酸为显色荆.在波长486m处测定样品溶液的吸光度。
【结果]标准曲线为A=51.654C+0.0372.r=0.9998,脚。
为1.28%.BSD2为 1.50%。
[结论]该方法操作简单,灵敏度高。
关键词黄芪根;多糖含量;分光光度法中图分类号s567.23+9文献标识码A 文章编号0517—661l(200910—04493—01Research on Extraction Process and Content Determination of Astragalus PolysaccharidesLI Wan-cai(Department of Biological Engineering,Binzhou Vocational College,Binzhou,Shandong 256603Abstract Objective]111P study re.arches the poly鲴echaride content in the Astragalus root.f Method Using spectrophotometry determines polysaceharide content in Astragalus membranaceus.taking slucose酗compari.,“m,taking phenol・concentrated sulfuric acid黯developer and determining the absorbency of sample∞lutionunderA=486nln.『Resultl 111P standard curve is A=51.654C+0.0372。
醇碱提取法提取黄芪多糖
第44卷 第4期吉林大学学报(理学版)V o.l 44 N o .42006年7月J OURNAL OF JIL I N UN I VER SI TY (SC IE N CE ED I T I ON )July 2006醇碱提取法提取黄芪多糖田 洛1,宣依1,范荣军1,姜云垒2,邢 茗1,刘立东1,陈 霞1(1.吉林大学生命科学学院,长春130021;2.吉林农业大学动物科技学院,长春130018)摘要:采用醇碱提取法提取黄芪多糖,通过单因素实验设计分别研究了提取溶剂p H 值、料液比、提取时间、提取温度和提取溶剂乙醇浓度5种因素对黄芪多糖提取率的影响,利用紫外(可见)分光光度法和红外光谱法对醇碱提取法提取黄芪多糖的含量进行检测,计算黄芪多糖的提取率为19.15%,分别是水提取法和碱提取法的3.53倍和2.63倍,残渣中有效成分的残留量低于其他两种提取方法.关键词:黄芪多糖;醇碱提取法;红外光谱法中图分类号:Q 946.3 文献标识码:A 文章编号:1671 5489(2006)04 0652 06Et hanol al kali Extracti on M et hod of Astragal us Polysacchari desTI A N Luo 1,XUAN Y i fang 1,FAN Rong j u n 1,JI ANG Yun le i 2,X I N G M i n g 1,L I U L i dong 1,C HEN X ia1(1.College of L i fe Science ,J ilin Universit y,Changchun 130021,Ch i na ;2.C olle ge of A ni mal T echnology,J ilin A gricult ural Un i ver sit y,Changchun 130018,China)Abstrac:t This paper deals w it h the ethano l al k ali ex traction m ethod of astragalus polysacchar i d es ,by w hich t h e effects o f five extracti o n factors incl u di n g p H of extracti o n so lven,t the ratio of m ateri a l to ex traction solven,t ex tracti o n ti m e ,extracti o n te mperature and et h ano l concentration of extracti o n so lven t on t h e rate o f ex traction w ere studied.The extracti o n rate o f astragalus po lysaccharides ex tracted by ethanol a l k ali ex traction m ethod w as co m pared w ith those o f w ater extraction m et h od and alka li ex traction m ethod and the content o f astragal u s po l y sacchari d es ex tracted by ethanol alkali extracti o n m ethod w as detected by ultrav io l e t spectrophoto m etry and i n frared spectr o m etry .The results sho w that t h e ex traction rate of ethanol a l k ali ex traction m ethod is 19.15%,3.53ti m es that of w ater extraction m ethod and 2.63ti m es that of a l k ali ex traction m ethod ,the resi d ue of the efficiency co m ponents of ethano l a l k ali ex traction m ethod is less than t h ose o f the other m ethods .Key wor ds :astragalus polysacchari d es ;ethano l a l k ali ex traction m ethod ;i n frared spectro m etr y收稿日期:2005 12 30.作者简介:田 洛(1980~),女,汉族,硕士研究生,从事中草药研究,E m ai :l ti an l uo2003@.联系人:陈 霞(1962~),女,汉族,博士,教授,博士生导师,从事纳米技术在生物和医药领域中应用的研究,E m ai :l bbbb z @163.co m.基金项目:吉林省科技厅中药现代化重大项目基金(批准号:20030906 01).黄芪(R adi x A stragalus )是豆科植物蒙古黄芪或夹膜黄芪的干燥根,主要化学成分为多糖、皂甙、黄酮、多种氨基酸及微量元素[1].其中黄芪多糖(A stragalus po l y sacchari d es ,APS)是黄芪中最重要的天然有效成分,其主要生物活性表现为增强免疫功能[2]、抗肿瘤[3]、减轻心肌损伤[4]等作用.目前,黄芪多糖的提取多采取水提取法,该法的缺点是多糖粗品的收率很低,且成本较高,使得黄芪多糖的进一步开发利用受到制约[5].李红民等人[6]采用碱提取法提取黄芪多糖,黄芪多糖的提取率达到水提取法的3 25倍.我们在黄芪有效成分综合利用研究的同时,对黄芪多糖提取方法进行了研究.首次采用醇碱提取法提取黄芪多糖,对影响黄芪多糖提取率的提取溶剂pH 值、料液比、提取时间、提取温度和提取溶剂乙醇浓度5个因素进行了单因素实验设计,确定最佳提取条件,利用紫外(可见)分光光度法和红外光谱法从不同角度对醇碱提取法提取黄芪多糖的提取率进行检测,同时与水提取法和碱提取法进行比较.实验结果表明,醇碱提取法提高了黄芪多糖的提取率,达到19 15%,残渣中有效成分残留量低,是较理想的提取黄芪多糖的方法,为提高黄芪的综合利用及生产开发提供了可靠依据[7].1 材料与方法1 1 试剂与仪器黄芪(长春多邦医药天益堂药店),所用化学试剂均为国产分析纯.752型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),T J270 30A 红外分光光度计(天津光学仪器厂),TGL 16G 高速台式离心机(上海安亭仪器厂),F 160型药物粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂),RE52 3旋转蒸发器(上海沪西分析仪器厂).1 2 实验方法1 2 1 多糖含量的测定 分别采用硫酸 蒽酮比色定糖法和二硝基水杨酸(DNS)比色定糖法测定总糖和单糖的含量,多糖含量=总糖含量-单糖含量[8].1 2 2 多糖提取率 多糖提取率按下式计算:多糖提取率=多糖含量提取物含量多糖质量黄芪饮片质量100%.1 2 3 单因素实验设计 根据黄芪多糖的提取过程,设计分别以提取溶剂p H 值、料液比、提取时间、提取温度和提取溶剂乙醇浓度5个实验条件作单因素实验并确定黄芪多糖的最佳提取条件.1 2 4 醇碱提取法提取黄芪多糖 准确称取黄芪饮片,根据单因素实验结果确定的提取条件提取黄芪多糖,提取溶剂提取2次,过滤后合并提取液并浓缩沉糖,沉淀物烘干后溶解,用紫外(可见)分光光度法检测,计算提取率.按相同条件分别用水提取法和碱提取法提取黄芪多糖,比较提取率.1 2 5 红外光谱检测 分别将3种方法提取黄芪多糖后的固体残渣在105 条件下烘干恒重,以亚铁氰化钾为外标试样,按质量比1 7 5 150分别称取亚铁氰化钾、残渣和KBr ,混合并在红外灯下用玛瑙研钵反复研磨,使其均匀,压片制样,进行红外光谱检测[9].2 结果与讨论2 1 单因素实验结果提取溶剂p H 值、料液比、提取时间、提取温度、提取溶剂乙醇浓度5个因素对黄芪多糖提取率的影响分别如图1~图5所示[10].Fig .1 The effect of pH of extract i on solven t onthe extraction rateF i g .2 Th e effect of the ratio of material to extractionsolven t on the extraction rate653第4期 田 洛,等:醇碱提取法提取黄芪多糖从图1可以看出,随着pH 值增加,黄芪多糖提取率呈上升趋势,当p H 值为12时,黄芪多糖提取率达到最大值,为9 318%.从图2可以看出,随着料液比提取溶剂体积的增加,黄芪多糖提取率也随之增加,料液比为1 10时,黄芪多糖提取率达到最大值,为13 408%.F i g .3 Th e effec t of extrac ti on ti m e onthe extrac ti onrateFig .4 The effect of extraction temperature onthe extraction rate从图3可以看出,提取时间从0~90m i n ,随着时间增加黄芪多糖提取率呈明显上升趋势,90m i n 时黄芪多糖提取率达到17 248%,90m i n 以后随着提取时间的延长,黄芪多糖提取率没有明显增加.提取初期随着提取时间延长提取溶剂中多糖浓度逐渐增加,多糖提取率也逐渐增加,当达到相对平衡之后溶剂中多糖浓度增加缓慢,提取率增加不明显,时间过长还会造成多糖分解.从图4可以看出,随着提取温度升高,黄芪多糖提取率增加,提取温度为90 时,提取率最高,为11 490%,在90 以后提取率增加缓慢,温度过高还会发生糊化,不利于黄芪多糖的提取,降低黄芪多糖提取率.F ig .5 T he effect of ethanol concen tration onthe extrac ti on rate图5为提取溶剂乙醇浓度对黄芪多糖提取率的影响,当乙醇浓度小于5%时,乙醇也可以破坏细胞膜的完整性而提高细胞膜的通透性,但一般在120h 才能观察到结果[11],从提高得率降低成本的角度考虑,我们采用5%~100%作为浓度单因素实验.从图5可以看出,随着提取溶剂乙醇浓度升高黄芪多糖提取率呈下降趋势,乙醇浓度越高多糖的溶解度越低,提取率下降,当乙醇浓度为5%时,多糖提取率最高,为8 36%.通过以上单因素实验结果,醇碱提取法最佳提取条件为:pH =12、料液比1 10、提取时间90m in 、提取温度90 、提取溶剂乙醇浓度5%.2 2 醇碱提取法提取黄芪多糖实验结果准确称取10 0g 黄芪饮片,按料液比为1 10,加入乙醇浓度为5%的pH =12提取溶剂,在90 条件下提取90m i n ,提取2次,过滤后合并提取液并浓缩沉糖,烘干沉淀物得到多糖提取物质量为2 8897g ,准确称量提取物10 0m g ,溶解于5mL 蒸馏水中,分别采用硫酸 蒽酮比色定糖法和DNS 比色定糖法测定总糖和单糖含量,分别为6 7665m g 和0 138m g ,通过公式计算得多糖含量为6 6285m g ,多糖提取率为19 15%.表1为相同实验条件的水提取法和碱提取法实验结果.从表1可以看出,采用与醇碱法同样条件的水提取法和碱提取法多糖提取率分别为5 47%和7 31%.醇碱提取法多糖提取率分别为水提取法和碱提取法的3 53倍和2 63倍.与文献[6]水提取法提取率为3 6%和碱提取法提取率为11 7%相比,醇碱法多糖提取率分别是两者的5 32倍和1 64倍.这主要是由于碱溶液对植物细胞起到破壁作用[12],醇溶液渗透作用较强[13],在碱与醇的共同作用下,增加了多糖渗透率,降低多糖残留量,达到提高提取率的目的.654 吉林大学学报(理学版) 第44卷Tab l e 1 Th e re s u lts of pol ysaccharide extrac ted by d ifferen t m ethod s fro m A stragalusM e t hod *12The conten t of t o ta l sugar /m g6 4658 000The conten t of monosacchar i de /mg 0 2080 5385The conten t of po lysacchar i des/m g 6 2577 4617The m ass o f extraction /g 0 86750 9745The extrac tion ra te (%)5 437 27*M et hod 1:w ater extraction m et hod ;me t hod 2:a l ka li extraction m et hod .2 3 红外光谱分析图6~图8分别为水提取法、碱提取法和醇碱提取法提取黄芪多糖后的固体残渣的红外图谱.红外光谱定量分析的基础是朗伯 比尔定律[14],但由于制样损耗和溴化钾片的厚薄难以控制,所以直接定量误差很大,因此常用内标法和外标法,由于本实验样品内部成分不易选择稳定的标准吸收峰作为内标,而亚铁氰化钾在2020~2130c m -1处呈现较窄的吸收峰,待测样品在这个区域无吸收峰,同时亚铁氰化钾易于研磨,不易吸湿,对所制成的溴化钾片的透射率不产生不良影响[15],故采用亚铁氰化钾为外标试样.F i g .6 I R spectrum of the resi du e extracted by water extraction methodFig .7 I R s p ec tru m of th e resi due extracted by alkali extraction m ethod在有机化合物中,不同的基团有不同的特征吸收峰.从图6~图8可以看出三者谱峰位置基本一Fig .8 I R s p ec tru m of th e resi due extracted by e thanol alkali extraction m ethod致,在4000~650c m -1呈多糖类物质的特征吸收峰.3600~3200(3416)c m -1处,有宽展圆滑强吸收峰,为 OH 伸缩振动;3000~2800(2932)c m -1处的吸收峰为糖类的C H 3,C H 2和C H 等的C H 伸缩振动;在1665~1625(1654,1636)c m -1处有一组吸收峰为糖的水化物的吸收峰;1250~950(1244)c m -1之间的一组峰是2种C O 的伸缩振动吸收峰[16].表2为水提取法、碱提取法和醇碱提取法提取黄芪多糖后的固体残渣红外图谱的透过率和相对透过率,从表2可以看出,在相同波数位置出现谱峰的相对透过强度的大小不同,在3416c m -1处出现的谱峰,水提取法、碱提取法和醇碱提取法提取多糖后剩余的固体残渣的相对透过强度分别为1 82428,2 039427和6 066667;2932c m -1处分别为2 27476,2 62724和7 171429;1654c m -1处分别为2 089457,2 315412和7 07619;1636c m -1处分别为2 092652,2 308244和7 038095;1244c m-1处分别为2 316294,2 397849和7 504762.多糖特征峰的相对透过强度依次增强,即相对吸收强度依次减弱.由朗伯 比尔定律可知样片中被测物质的含量依次降低,所以3种方法提取黄芪多糖后的残渣中剩余的多糖含量由高到低顺序为:水提取法、碱水提取法和醇碱提取法,其中醇碱提取法多糖的残留量最低,说明与其他两种方法相比较,醇碱提取法提取多糖的效率最高.655第4期 田 洛,等:醇碱提取法提取黄芪多糖656 吉林大学学报(理学版) 第44卷 T ab le2 T he trans m ittance and re l ative tran s m ittan ce results of I R of re sidues extracted by differen t m ethodsW N T a T a/T(2044)T b T b/T(2044)T c T c/T(2044) 3416 57.11 82428156.92 03942763.76 066667 2932 71 22 2747673 32 6272475 37 171429 2072 72 12 30351471 82 57347759 65 67619 2044 31 3127 9110 512028 46 21 47603845 41 6272425 12 390476 1654 65.42 08945764 62 31541274 37 07619 1636 65 52 09265264 42 30824473 97 038095 1578 78 62 51118278 42 81003680 17 628571 1542 78 72 51437777 62 78136282 37 838095 1508 78 82 517572762 724014837 904762 1458 73 52 34824369 72 49820875 87 219048 1244 72 52 31629466 92 39784978 87 504762670 76 12 4313173 62 63799378 97 514286584 57 41 83386658 42 0931949 44 704762a.W ater extraction m ethod;b.a l ka li ex tracti on me t hod;c.et hano l a l kali ex tracti on m ethod.黄芪多糖提取已有多年研究历史,但目前黄芪多糖的提取分离工艺还不成熟,效率较差,而且提取的成本较高.因此严重阻碍了黄芪多糖的研究与开发[17].本文首次采用醇碱法提取黄芪多糖,利用单因素实验设计得到醇碱提取法提取黄芪多糖的最佳条件,料液比为1 10,p H=12的5%碳酸钠乙醇溶液,90 提取90m in,提取率为19 15%,比文献报道的和本实验水提取法和碱水提取法的提取率高出很多,并利用红外光谱对3种方法提取的残渣进行分析证明,醇碱法残渣中多糖成分的残留量最低,提取效果较好,为黄芪多糖的综合利用提供了可靠依据,在生产应用上具有现实意义.参考文献[1] 肖培根,杨世林,赵永华,等.黄芪[M].北京:中国中医药出版社,2001:123 124.[2] W ENG L i ng,L I U Y an,L I 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黄芪多糖的提取和纯化方法研究
１ 材 料 和 方 法
１ １ 供 试 材 料 与 主 要 仪 器 ．
壳 聚 糖 （ 岛 海 得 贝 生 物 工 程 有 限 公 司 ） Ⅱ型 青 ，
Ｚ Ｃ ＋１天然 澄 清 剂 （ Ｔ Ｉ 天津 正 天 成 澄 清技 术 有 限公 司）ＵＶ２０ Ｇ ， １２Ｐ Ｓ紫外分 光光 度计 （ 尤尼柯 上 海仪器 有限 公 司 ） ＡＵＷ２０ 电 子分 析 天平 （ ， ２Ｄ 日本 岛津 公 司） Ｄ Ｆ一２型 真 空 干 燥 箱 （ 京 市 光 明 医疗 仪 器 ，Ｚ 北
ＬＩ Ｙｏ —ｕ ＺＨＡＮＧ ｏ Ｚ ， Ｕ ｎｇ ｌ ， Ｇｕ — Ｕ ＦＡＮ — ｅ ｇ ＺＨＵ Ｋｅ ｆ ｎ ， Ｚｈｅ — ｕａ ｎｈ 。
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黄芪多糖含量提取及测定方法研究进展_田喜莲
·13·中国民族民间医药Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy论 著Treatise 黄芪多糖含量提取及测定方法研究进展田喜莲 牟学文甘肃奇正藏药有限公司，甘肃 兰州 730000【摘 要】概括了目前黄芪多糖的含量测定方法及提取方法的原理及特点。
【关键词】黄芪；黄芪多糖；提取方法；含量测定；研究进展【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8517（2010）24-013-3黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge）Hsiao或荚膜黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根。
具有补气固表，利尿脱毒，排脓，敛疮生肌的功效，为历代常用的补益中药。
黄芪多糖（Astragalus Polysacharin，APS）是黄芪中重要的天然有效活性成分，具有促进免疫器官功能和抗体生成，抗菌抗病毒和抗肿瘤，防衰老及抗辐射，双向调节血糖等作用。
临床用作免疫增强剂。
自1981年黄芪多糖被提取分离以来，研究报道不断增多，作用范围日益扩大，对黄芪多糖的研究引起了人们的极大关注。
为了进一步开发利用该类活性成分，许多学者在研究黄芪多糖组成、结构和产物活性的同时，为了保证临床应用制剂的质量，研究其提取分离工艺和含量测定方法也显得格外重要。
本文就黄芪多糖的含量测定方法及提取方法做以概述。
1 提取方法1.1 水提取法目前黄芪多糖的提取主要采取水提取工艺，即直接水煎煮法，该法工艺简单，操作简便易行。
一般的水煮醇沉法水煮温度都在100℃，这样的工艺至少存在两大缺点：一是水煮温度高，对提取物的选择性不好，可把黄芪中的黄酮、皂甙等同时提取出来，在后续工艺中又不能把它们分离出来，加上黄酮及其类似物的化学式中含酚羟基，在空气中易被氧化而变色，这样对产品的纯度及颜色都有很大的影响；二是水煮温度高，浪费能源和资源，经济效益低。
水提醇沉法提取黄芪中黄芪多糖的工艺优化及含量测定
的质量含量是 ４２．９ ｍｇ／ｇ（４．２９％ ），纯度为 ３１．２％。实验结果表明 ，黄芪多糖的提取效率有所提高 ，对黄芪多糖
的工业 化提取奠定了基础。
关 键 词 ：黄芪 ；黄芪多糖 ；水提醇沉 ；全面实验优化
中 图分 类 号 ：Ｒ２８４．２
文 献标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ： １６７１—０４６０（２０１８）０７—１３７４—０３
（陕 西 中医药 大学 ， 陕 西 咸 阳 ７１２０４６）
Байду номын сангаас
摘 要 ：为得到高效的黄芪多糖提取方法 ，以提高黄芪多糖 的提取效率 。采用全面实验法 ，研 究黄芪多糖
提取时的温度和时间 ，以及醇 沉时乙醇的浓度对提取率 的影响 ；并用液相色谱法测定黄芪多糖 的纯度 。实验发
现提取黄芪多糖最佳的工艺条件是 ：温度 １００ ℃ ，水提取 ２ ｈ，醇沉时乙醇体积分数为 ９０％，黄芪多糖 粗提物
ＱＵＡＮ Ｙａｎ，ＨＥＪａｎ－ｊｕｎ，ＬＩＵＪｉｎｇ—ｌｉ，ＭＥＮＧ Ｑｉｎｇ－ｈｕａ，ＳＯＮＧＸｉａｏ
（Ｓｈａａｎｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｘｉａｎｇｙａｎｇ ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｉ ｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｄｕｒｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ａ ｃｏｍ ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ ｍ ｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎｅｄ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ １ ００ ℃ ，ｔｈｅ ｔｉｍｅ ２ ｈ，ａｌｃｏｈｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ９０％．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃｒ ｕ ｄｅ ａｓｔ ｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ４２．９ ｍｇ／ｇ（４．２９％），ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｗａｓ ３ １－２％．Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｉ ｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗ ａｓ ｉｍ ｐｒｏｖｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｌａｉｄ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐＯｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ． Ｋ ｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍ ｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ；Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；Ｗ ａｔｅｒ ｅｘｔ ｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ； Ｃｏｍ ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔ ｏｐｔｉｍ ｉｚａｔｉｏｎ
黄芪多糖提取工艺正交试验优选与含量测定
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｉ ｎ Ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｇ ａ ｌ ｉ ｒ ａ ｄ ｉ ｘ ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ
Ｏ ｐｔ ｉ ｍｉ ｚａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ Ｅｘｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏｎ Ｔｅ ｃ ｈｎｏ ｌ ｏｇ ｙ ｂｙ Ｏｒ ｔ ｈｏ ｇｏｎａ ｌ Ｔｅ ｓ ｔ ａｎｄ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａｔ ｉ ｏ ｎ Ｏｆ Ｐ０ ｌ ｖｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒ ｉ ｄｅ ｓ ｉ ｎ Ａｓ ｔ ｒ ａ ｇａ ｌ ｉ ｒ ａ ｄ ｉ ｘ ３Biblioteka １ ８ 食 品与药 品
Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ
２ ０ １ ４ 年第 １ ６ 卷第 ５ 期
黄芪 多糖提取工 艺正交试验优选 与含量测定
刘 杨 ， 包华 音 ，刘德 丽
（ 山东中医药大学，山东 济南 ２ ５ ０ ３ ５ ５ ）
摘 要 ：目的 优化水提醇沉法提取黄芪多糖的工艺条件 ，并比较 不同产地黄芪药材 中的多糖含量 。 方法 在单 因素考察提
ＬＩ Ｕ Ｙａ ｎ ｇ， ＢＡＯ Ｈｕ ａ － ｙ ｉ ｎ， ＬＩ Ｕ Ｄｅ — ｌ ｉ
（ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆＴ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ ３ ５ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
取 黄 芪 药 材 多糖 条 件 的基 础 上 ，采 用 正 交 试 验 设 计 法 ， 以黄 芪 药 材 多 糖 含 量 为 指 标 ，确 定 多 糖 回流 提 取 的 最 佳 工 艺 ；并
黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究
黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究
李万才
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2009(037)010
【摘要】[目的]研究黄芪根中多糖的含量.[方法]采用分光光度法测定膜荚黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品,以苯酚-浓硫酸为显色剂,在波长486 nm处测定样品溶液的吸光度.[结果]标准曲线为A=51.654 C + 0.037 2,r=0.999 8,RSD1为
1.28%,RSD2为1.50%.[结论]该方法操作简单,灵敏度高.
【总页数】2页(P4493,4498)
【作者】李万才
【作者单位】滨州职业学院生物工程系,山东滨州,256603
【正文语种】中文
【中图分类】S567.23+9
【相关文献】
1.黄芪多糖提取工艺正交试验优选与含量测定 [J], 刘杨;包华音;刘德丽
2.黄芪多糖的提取和含量测定研究 [J], 刘瑞生;薛掌林;张述斌;王必慧
3.蒙古黄芪多糖含量测定的方法学研究 [J], 陈虎虎
4.不同提取工艺对黄芪多糖含量测定的影响 [J], 成玲;武彦;石军飞
5.不同提取工艺对黄芪多糖含量测定的影响 [J], 成玲;武彦;石军飞
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黄芪多糖的提取和含量测定研究
黄芪多糖的提取和含量测定研究黄芪为豆科植物，是蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，主要药理成分是黄芪多糖(APS)和黄芪甙。
APS在医学和兽医临床上研究应用较为广泛，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用(张立洲，1996;郭小清等，2004)。
目前APS的提取主要采用水提取和 CaO提取两种工艺，水提取分离工艺不成熟，效率较差，提取成本较高，严重影响了APS的研究开发利用。
李红民等(2000)报道，用pH9~10的CaO水溶液提取APS，得率显著提高，成本下降。
我们用水提取法和CaO溶液提取法进行APS的提取并测定含量，以便从中筛选出较好的提取方法，为生产实践提供参考。
1材料与方法1.1材料与试剂黄芪根:购自平凉市某中药材门市部。
葡萄糖、苯酚、浓硫酸、95%乙醇、丙酮，均为分析纯。
21分光光度计，TN型托盘式扭力天平，容量瓶，水浴锅，干燥器，粉碎机等。
1.2方法1.2.1黄芪多糖的提取。
水提取法用蒸馏水煮沸提取，CaO溶液提取法用pH9~10的CaO溶液煮沸提取，浓缩时调至pH6.5,以后两法步骤相同。
?称取黄芪根1kg，去掉杂质和泥土，粉碎成粉末。
?黄芪根粉末中加以6~7倍的蒸馏水(或CaO溶液)，煮沸1.5h，用4层纱布过滤，滤渣用同样方法煮沸3次。
?合并滤液，调pH至6.5左右，加热浓缩至一定量。
?将浓缩液以2 000r/min离心10min，上清液中加3倍量95%乙醇沉淀。
?倾去上清液，沉淀物中再加入95%的乙醇至浓度为 80%，静置，倾出上清。
?滤渣用丙酮洗涤2次，过滤。
将滤渣放入干燥器中，-20?冷冻真空干燥，即得到APS。
1.2.2黄芪多糖的含量测定:?葡萄糖标准溶液的制备。
取经105?干燥至恒重的葡萄糖 100mg，置100mL容量瓶中加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。
精密量取10mL，置10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。
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黄芪多糖的提取和含量测定研究
黄芪为豆科植物，是蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，主要药理成分是黄芪多糖(APS)和黄芪甙。
APS在医学和兽医临床上研究应用较为广泛，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用(张立洲，1996;郭小清等，2004)。
目前APS的提取主要采用水提取和 CaO提取两种工艺，水提取分离工艺不成熟，效率较差，提取成本较高，严重影响了APS的研究开发利用。
李红民等(2000)报道，用pH9~10的CaO水溶液提取APS，得率显著提高，成本下降。
我们用水提取法和CaO溶液提取法进行APS的提取并测定含量，以便从中筛选出较好的提取方法，为生产实践提供参考。
1材料与方法
1.1材料与试剂
黄芪根:购自平凉市某中药材门市部。
葡萄糖、苯酚、浓硫酸、95%乙醇、丙酮，均为分析纯。
21分光光度计，TN
型托盘式扭力天平，容量瓶，水浴锅，干燥器，粉碎机等。
1.2方法
1.2.1黄芪多糖的提取。
水提取法用蒸馏水煮沸提取，CaO溶液提取法用
pH9~10的CaO溶液煮沸提取，浓缩时调至pH6.5,以后两法步骤相同。
?称取黄芪根1kg，去掉杂质和泥土，粉碎成粉末。
?黄芪根粉末中加以6~7倍的蒸馏水(或CaO溶液)，煮沸1.5h，用4层纱布过滤，滤渣用同样方法煮沸3次。
?合并滤液，调pH至6.5左右，加热浓缩至一定量。
?将浓缩液以2 000r/min离心
10min，上清液中加3倍量95%乙醇沉淀。
?倾去上清液，沉淀物中再加入95%的乙醇至浓度为 80%，静置，倾出上清。
?滤渣用丙酮洗涤2次，过滤。
将滤渣放入干燥器中，-20?冷冻真空干燥，即得到APS。
1.2.2黄芪多糖的含量测定:?葡萄糖标准溶液的制备。
取经105?干燥至恒重的葡萄糖 100mg，置100mL容量瓶中加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。
精密量取10mL，置10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。
?标准曲线的绘制。
准确吸取葡萄糖标准溶液 0.1~0.6mL共6份,分别置25mL 容量瓶中，加蒸馏水补充至2mL，再加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀，放置5.0mL，置80? 水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温。
另以
2.0mL蒸馏水同上平行操作作为空白对照，在 490nm波长处测定吸光度，并求出回归方程:C= 0.21216A-6.37×10-3，r=0.997057。
其中C:葡萄糖浓度，A:吸光度。
?黄芪多糖含量测定。
取提取并经105?干燥至恒重的APS 50mg，置于50mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，准确吸取10mL，置100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，配成0.1mg/mL的APS溶液。
吸取上述溶液0.5mL，置25.0mL容量瓶中，加蒸馏水补充至2mL，依法测定吸光度值，并代入回归方程计算，求得APS的相对含量。
2结果与分析
2.1黄芪多糖的物理性状
提取的APS为灰白色粉末，易溶解于水，溶液呈乳白色，无杂质。
2.2黄芪多糖的收率
从表1可见，水提取法APS收率为3.6%~4.0%，平均为3.8%;CaO溶液提取法APS收率为5.9% ~7.75%，平均为7.05%;CaO溶液提取法比水提取法APS收率提高85.5%。
，差异极显著(P,0.01)。
2.3黄芪多糖含量测定结果
从表2可见，水提取法APS含量为65.2%~ 67.8%，平均为66.5%;CaO溶液法APS含量为 78.6%~85.0%，平均为82.1%;CaO溶液提取法比水提取法平均提高15.6%，差异显著(P,0.05)。
表1不同提取方法黄芪多糖收率
批次原生药重量提取方法多糖重量收率
021108 1kg水提取法36g 3.60% 030516 1kg水提取法40g 4.0%
040309 1kg CaO溶液法59g 5.90% 040315 2kg CaO溶液法150g 7.50% 040323 2kg CaO溶液法155g 7.75% 表2黄芪多糖粗提物相对含量批次提取方法吸光度A浓
度C
(mg.mL-1)相
对含量
021108水提取法0.185 0.0326 65.2% 030516水提取法0.188 0.033 67.8% 040309 CaO溶液法0.230 0.0425 85.0% 040305 CaO溶液法0.215 0.0393 78.6% 040323 CaO溶液法0.225 0.0414 82.8%。