实验四 血涂片的制备与染色
实验报告 血涂片的制备
实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液细胞的形态和数量。
通过制备血涂片，我们可以了解疾病的诊断和治疗过程中的重要信息。
本实验报告将介绍血涂片的制备过程和相关技术。
一、材料与设备：1. 血液样本：采集自健康人士或实验动物。
2. 血涂片玻片：具有一定的光学透明度和平整度。
3. 血涂片刮板：用于制备血涂片的工具。
4. 血涂片染色剂：如吉姆萨染色剂。
二、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验台面，并确保材料和设备的无菌状态。
2. 血液采集：使用无菌针头采集血液样本，将血液缓慢抽入无菌注射器中。
3. 制备血涂片：a. 取一片无菌血涂片玻片，用无菌棉球蘸取适量的酒精擦拭玻片表面，使其干燥。
b. 用无菌血涂片刮板，将血液样本滴于血涂片玻片的一端。
c. 快速而均匀地将刮板从滴液处向另一端刮过，使血液在玻片上均匀分布。
d. 在刮板刮过的血液上方，迅速将另一片无菌玻片平放在上方，使血液与玻片接触。
e. 缓慢而均匀地将上方的玻片向下滑动，使血液在两片玻片之间形成薄膜。
f. 将制备好的血涂片放置在通风干燥的地方，待其完全干燥。
三、血涂片染色：1. 准备工作：将吉姆萨染色剂按照说明书的要求稀释至适当浓度。
2. 染色过程：a. 将制备好的血涂片放入染色盒中，使其与染色剂接触。
b. 根据需要，将血涂片浸泡在染色剂中的时间可调整为几分钟至几十分钟。
c. 取出血涂片，用清水轻轻冲洗，直至水清。
d. 将血涂片放置在通风处晾干。
四、结果与讨论：通过制备和染色的血涂片，我们可以观察到不同类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。
通过观察它们的数量、形状和结构，我们可以判断出是否存在异常情况，如贫血、感染或血液疾病等。
血涂片的制备和染色技术在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用。
结论：通过本实验报告，我们了解了血涂片的制备过程和相关技术。
制备血涂片的步骤包括血液采集、血涂片制备和血涂片染色。
血涂片制作与染色
姬姆萨染色法
总结词
姬姆萨染色法是一种高分辨率的血涂片染色方法，能够更好地显示出细胞的细节 和特征。
详细描述
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料对血涂片进行染色，能够使细胞核呈蓝色，细胞质 呈红色，各种血细胞在染色后呈现出不同的颜色和形态，易于鉴别。该方法染色 效果较为稳定，但需要较长的染色时间。
苏木素-伊红染色法
05 血涂片制作与染色注意事项
CHAPTER
采血注意事项
采血部位
选择合适的采血部位，通常为手指或耳垂，确保 采血过程无菌操作，避免感染。
采血量
根据实验需求，控制采血量，确保足够用于制作 血涂片，同时避免过多采血造成浪费。
采血时间
选择合适的时间进行采血，避免在进食、运动后 等情况下采血，以免影响结果。
染色注意事项
染色剂选择
根据实验需求选择合适的染色剂，确保染色效果良好，能够清晰 显示细胞结构。
染色时间
控制染色时间，确保染色均匀，避免染色过度或不足。
冲洗与脱水
在染色完成后，进行充分的冲洗与脱水，去除多余的染色剂，使观 察效果更佳。
结果观察注意事项
观察方法
01
采用正确的观察方法，如显微镜观察，确保观察结果准确可靠。
观察指标
02
关注细胞形态、大小、染色情况等指标，综合分析结果，避免
片面解读。
结果解读
03
结合临床情况和其他检查结果，综合分析血涂片结果，为临床
诊断和治疗提供依据。
谢谢
THANKS
总结词
苏木素-伊红染色法是一种常用的组织学染色方法，常用于显 示组织结构和细胞形态。
详细描述
苏木素-伊红染色法使用苏木素染料和伊红染料对组织切片进 行染色，能够使细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色，便于观察 组织结构和细胞形态。该方法染色效果稳定，但对某些特殊 类型的细胞可能染色效果不佳。
血涂片的制备、染色、观察方法、复检
04
章节 PART
血涂片的复检
血涂片的复检
血涂片复检的意义，首先是复核该复检标本的血常规报告的准确性， 其次是在观察血细胞形态时，根据所观察到的外周血细胞形态，提供给临 床有效的信息，要做到保证血常规结果的准确、不漏检、不误诊、不误导。 切实的结合临床，关注已知的患者信息，查看患者的相关检查结果，了解
靠等待自然干燥章。节 PART
血涂片的染色
4、瑞氏染色是最经典，最常用的染色法，尤其对于细胞质成分，中 性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。姬姆萨染 液对细胞核着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。采
用瑞-姬姆萨章复节合染PA液R可T使细胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。
患者出现的体章征节、P症A状R（T 必要时要询问临床医生），在此基础上，了解临
床医生的诊断或治疗思路，然后在显微镜下有目的地进行查找，才能做到 有百密而无一疏。
红系统细胞形态
一、正常红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
二、红细胞大小改变
章节 PART
红系统细胞形态
三、红细胞血红蛋白含量改变
章节 PART
章节 PART
红系统细胞形态
3、卡波环
章节 PART
红系统细胞形态
4、有核红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
5、网织红细胞：是指晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红 细胞之间的过度细胞，分为4型。Ⅰ型：丝球形，Ⅱ型：网型， Ⅲ型：破网型，Ⅳ型：点粒型（图2-165、2-166、2-167）
红系统细胞形态
章节 PART
血涂片的制备
二、将推片接近血滴处，然后轻轻接触血滴并压在血滴上，使血滴呈”一”字型展开, 充满推片宽度(如果能做到边缘血量较少,中间血量稍多为最佳)(图1-2,图1-3).
血涂片的制备与染色实验报告
血涂片的制备与染色实验报告血涂片的制备与染色实验报告简介本报告旨在介绍血涂片的制备与染色实验方法及步骤，以及相关注意事项和结果分析。
实验步骤1.准备所需材料：–血液样本–血涂片载玻片–血液涂片器–双氧水–细胞染色剂–拖尾液–显微镜片2.制备血涂片：–取一滴血液样本，滴于载玻片中。
–使用血涂片器，将血液涂片器顶端垂直贴附在载玻片上。
–慢慢向后移动血涂片器，使血液样本均匀地涂布于载玻片上。
3.干燥血涂片：–将制备好的血涂片放置于通风处，自然晾干。
4.染色处理：–将已干燥的血涂片浸入双氧水中，浸泡5分钟，用来溶解红细胞。
–用显微镊子夹取血涂片，轻轻晃动10次，使红细胞充分分散。
–轻轻将血涂片冲洗干净，以去除残留的双氧水。
–将血涂片浸入细胞染色剂中，染色1分钟。
–将血涂片冲洗干净，确保没有染色剂残留。
5.拖尾处理：–取适量拖尾液滴在盖玻片上。
–将染色好的血涂片倒置放在盖玻片上，使其与拖尾液接触。
–轻轻拖动血涂片，使细胞核进入拖尾液。
6.结果观察与分析：–将染色好的血涂片放置在显微镜下进行观察。
–分析细胞形态、染色程度等指标，记录结果。
注意事项•实验过程中需戴好实验手套，避免直接接触血液。
•制备血涂片时，务必将血液涂布均匀，以免影响结果。
•双氧水具有漂白作用，使用时需小心避免溅到衣物或皮肤上。
•染色剂使用过程中，应注意避免吸入或误食。
•结果分析时，应根据实验要求和标准参考范围进行判断。
结论通过本实验，我们成功制备了血涂片并进行了染色处理。
观察结果可为后续血液相关研究提供重要数据和参考。
在实验过程中，我们严格遵守实验室操作规程，并注意了安全事项。
希望本报告对今后的血涂片制备与染色实验有所帮助。
参考文献：无。
血涂片的制备与染色
血涂片制备与染色血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。
血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
（一）血涂片制备1.载玻片的准备新载玻片常带有游离碱质，须用浓度为lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。
旧载玻片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。
使用载玻片时，不要用手触及玻片表面，保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
2.血涂片制作方法取血液标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持30～45○夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。
涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。
血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。
一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。
（二）血涂片染色染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。
血涂片染色包括两个过程：固定和染色。
固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。
常用的染色方法有瑞特染色法（Wright）、姬姆萨染色法（Giemsa）等。
1.瑞特（Wright）染色法为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。
血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。
目前常用瑞特染色法。
（1）瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。
亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。
通常为氯盐，即氯化美蓝。
美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。
血涂片的制备及染色
图 １ 血涂片制备
·１６８·
２０ｍｉｎ，用热水将肥皂和血膜洗去，然后，用自来水对其反复
冲洗，擦干或烤干后备用。 取用载玻片时需用专用仪器，不
可用手接触玻片表面，以免污染玻片表面。 另外，还需对载
玻片两角作斜线标记，用剥离切割刀将载玻片两角裁去，制
成宽度约为 １５ｍｍ 的推片。
（ 二） 采血
准备好载玻片后，便可给受检者采血，可采用静脉采血
的着色效果较差。
（ 二） 姬姆萨染色法
姬姆萨染色法染色操作基本同瑞特染色法，不同的是其
采用的染料为姬姆萨染料，这是一种由天青和酸性染料伊红
组成的复合染料，可对细胞核结构和寄生虫进行良好的着
色，从而能清晰显示出这些物质的结构，但是，其对细胞质和
颗粒的着色效果较差。
（ 三） 瑞－姬染色法
瑞－姬染色法指的是将瑞氏染料与姬姆萨染料充分混
否存在血液疾病等，虽然该项检验技术在临床应用上极广，
但是，在实际检验过程中，受血涂片制备和染色不当等因素
的影响，常常会降低检验结果的准确性，从而会影响该项检
验技术的临床应用效果。 基于此，就需要检验人员掌握正确
的血涂片制备和染色方法。
一、 血涂片制备
（ 一） 载玻片和推片准备
一般需选用高纯度、耐腐蚀性强、抗水的玻璃制成的载
缘平滑的一端从血滴前方后移接触血液，使血滴沿推片边缘
展开，然后是推片与载玻片保持 ３０ ～ ４５° 夹角，平稳匀速地向
前推动，使血液沿推片散开，在载玻片上形成厚薄适宜、边缘
整齐的薄层血膜（ 边缘需留有一定的空隙） ，且还需保证血
涂片呈舌状，头体尾三部分明显，如图 １ 所示。
（ 四） 血涂片干燥
完成血涂片制备后，还需对其进行干燥处理，可采用空
血涂片制备与染色临床应用
血涂片制备与染色临床应用血涂片制备是临床实验室中常见的实验操作，用于观察和诊断患者的血液情况。
正确的血涂片制备与染色技术将有助于提高血涂片的质量，为临床医生提供准确的诊断信息。
本文将介绍血涂片制备的步骤以及常用的染色方法，并探讨其在临床应用中的意义。
一、血涂片制备步骤1. 准备工作：首先需要准备好检测所需的材料，包括玻璃片、无菌注射器、消毒酒精、无纺布等。
确保工作台面整洁，无尘无菌。
2. 采集血液样本：选择合适的采血部位，用无菌注射器采集血样，并将血样滴在玻璃片上。
3. 制备血涂片：将另一块玻璃片平行放在血样上，以45度角倾斜，缓慢向前移动，使血涂片的宽度均匀。
4. 干燥固定：将制备好的血涂片晾干，或者用火焰烘干，使细胞固定在玻璃片上。
5. 染色处理：根据需要选择合适的染色方法进行处理，使细胞核、胞质等结构清晰可见。
二、血涂片染色1. Giemsa染色：是血涂片最常用的染色方法之一，可用于观察红细胞形态、白细胞分类及寄生虫等。
染色时间和比例需控制好，避免染色过度或不足。
2. Wright染色：适用于白细胞分类和形态分析，特别是嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的染色效果较好。
3. 厌氧染色：用于观察寄生虫、真菌等微生物，需要较长的染色时间和特殊的操作条件。
三、血涂片在临床应用中的意义1. 诊断疾病：通过观察血涂片中各种细胞的数量、形态、分布等特征，可以帮助医生诊断贫血、感染、白血病等疾病。
2. 指导治疗：血涂片可以反映患者的血液情况，指导医生制定合理的治疗方案，监测治疗效果。
3. 预后评估：血涂片中某些指标的变化可以反映患者病情的进展和预后情况，有助于医生及时调整治疗策略。
综上所述，正确的血涂片制备与染色技术对于临床医学具有重要意义。
通过规范操作和严格控制，可以提高血涂片的质量，为临床诊断提供可靠的依据。
希望本文对于血涂片制备与染色临床应用有所帮助，谢谢！。
实验四静脉采血血涂片的制备与染色
取血
待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端 中4～5毫米处，注意手指 持握载片的边缘 ，勿触及其表面。不能使载片接触取血部 位的皮肤。
推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一
端置于血滴前方，向后移动到接触血滴， 使血液均匀分散在推片与载片的接触处。 然后使推片与载片呈30°～40°角，向另 一端平稳地推出。涂片推好后，迅速在空 气中挥干，使之自然干燥。
标记试管
在试管上贴上标签，著名患者姓名、项目名 称、采集日期、门诊或住院号。
消毒双手
采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。
选择静脉
采血前，要求受检者坐在实验台前。将前臂放在 实验台上，掌心向上，并在肘下放一枕垫。卧床 受检者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血 位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。
检查注射器
静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固， 针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光 滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽 ，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严 重后果。
扎压脉带
采静脉血时止血带压迫时间不能过长 、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩 ，最好不超过1min，否则会影响某些试验 结果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高 。
醇所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量 超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5-10分钟;
4、 水洗、吸干、镜检。
血涂片染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液）
血涂片的制备和瑞氏染色
5、实验员作好有关实验记录。
前期准备
↓
采血
↓
干燥
↓
标记
↓
染色
↓
冲洗
↓
观察结果
↓
后期分析处理
6、冲洗：1分钟后，用流水冲去染液，待干。
7、观察结果：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处的血细胞。
四、后期分析处理。
1、学生填写实验报告。
2、各组实验结果是否满意，分析造成偏差的原因。
3、器材由各组学生清洗完毕，实验员清点数目后放回准备室，打扫卫生，打扫完毕关闭门窗水电。
2、推片：左手平执载波片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载波片呈30度到45度角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌、头、尾三部分。
3、干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
4、标记：在载玻片的一端用记号笔编号。
5、染色：待血涂片干透后，将波片平置，滴加快速瑞氏染液数滴，使其快速盖满血涂片，
血涂片的制备和瑞氏染色
操作规程
操作流程
一、实验目的：
掌握血涂片的制备和染ห้องสมุดไป่ตู้的方法。
二、前期准备
1、抗凝血和快速瑞氏染液
2、学生分组（每二人一组）分放器材。毛细管、瑞氏染液、载波片、推片、纱布块、显微镜。
3、实验题目内容，操作步骤在黑板上写明。
三、步骤
1、采血：用微量吸管在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。
血涂片的制备及染色
血涂片的制备及染色血涂片的制备及染色摘要血涂片是世界上使用最广泛的实验室检测方法之一，应用于疾病的筛查，发现，诊断以及监控。
本文提供了在临床检验中制备及染色出优质血涂片的一种参考。
虽然在如何人工制备血涂片上仍存在某些“工艺”，但是已尽可能采用了客观标准使得临床实验室能准备和染色出优质血片。
本参考中包含固定和染色手工工艺中的问题解决方法。
关键词：血涂片制备，染色前言血涂片是世界上使用最广泛和最频繁的检测方法之一，但似乎没有关于血涂片制备要求，程序及潜在问题等的综合性文献。
虽然血涂片的制备是个简单的过程，但作为一种检测方法，有很多因素可导致检测失败或比其预期低效。
本文应国际血液学标准化委员会的请求所写，并作为实验室血细胞计数板的指导方针。
本文旨在提供临床检验中用于形态评价的血涂片制备及其染色的指导和标准化。
显微镜分析过程和解释不在本文的范围内。
列举的方法中包括最先进的技术以及发展中国家实验室的适用方法。
发展中国家不具备最高水平的指标，但应在所有条件下可达到其规定的指标，以确保诊断测试的质量，以免降低病人护理。
这点尤其重要，因为无论对于病例发现，诊断或疾病监测，血涂片显微镜分析所得数据通常在临床情况中起最终和决定性的作用。
为了方便参考使用，本文采用一种特殊的格式来描述涉及血涂片制备和染色的各个步骤。
血涂片制备载玻片载玻片应由最高纯度的耐腐蚀玻璃制成；通常不可接受其他材料如塑料。
典型玻片为75×25mm，约有1mm 厚度，必须平整，无扭曲和波痕，而且必须澄清无色（“水白，无色透明”）。
荧光显微镜检测必须使用无自发荧光的玻片。
最好使用预洗过的载玻片，但至少实验室必须确保载玻片无划痕，干净无尘、绒线，油脂（指纹），而且必须干燥。
这就意味着在潮湿环境中，载玻片必须能抗水。
在所处密闭容器开启后，载玻片必须保存于干燥器或装有无水（甲基）乙醇或乙醇与丙酮混合液（3:1）的容器内直至被使用。
载玻片需一直保存于密闭容器中，只能在立即使用前开启。
血涂片制作与染色
血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。
具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。
（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。
（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。
（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。
（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。
（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。
宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。
（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。
（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。
（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。
2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。
下文将以湿涂片法为例进行介绍。
（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。
（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。
（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。
Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。
（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。
（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。
（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。
3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。
观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。
根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。
总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。
血涂片的制备与染色
血小板
染色结果
血小板呈淡蓝色或蓝紫色，染色质呈 颗粒状或块状。
观察指标
观察血小板数量、形态、大小等，判 断是否存在血小板减少症、血小板增 多症等。
04 染色注意事项
CHAPTER
染色时间
染色时间过短
染色时间适中
染色效果不佳，细胞结构不清晰，颜 色偏淡。
染色效果良好，细胞结构清晰，颜色 适中，便于观察。
染色温度过低
染色效果不佳，细胞结构不清晰，颜色偏淡。
染色温度适中
染色效果良好，细胞核和细胞质对比度明显，易 于观察。
05 染色问题处理
CHAPTER
染色过深或过浅
染色过深
可能是由于染色时间过长或染色液浓 度过高所致。为避免这一问题，应严 格控制染色时间和染色液的浓度，确 保染色过程的一致性。
染色过浅
详细描述
瑞氏染色法使用瑞氏染料和伊红染料进行染色，能够使细胞核呈紫红色，细胞 质呈粉红色，便于观察和鉴别细胞的形态和结构。该方法具有染色鲜艳、对比 度高的优点，适用于多种血细胞染色。
姬姆萨染色法
总结词
姬姆萨染色法是一种特殊的血涂片染色方法，能够更好地显示出细胞的内部结构 和核仁。
详细描述
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料进行染色，能够使细胞核呈蓝色或深紫色，细胞质 呈浅红色或粉红色，便于观察细胞的内部结构和核仁。该方法具有较高的染色敏 感性和特异性，适用于鉴别异常细胞和病原体。
采血量
采集适量血液，一般为 20-50微升，根据实验需 求而定。
推片
载玻片
选择清洁、无划痕的载玻片，用 纱布擦拭干净。
推片方法
将血液滴在载玻片的一端，用边缘 平滑的推片从血滴一侧轻轻推动， 使血液均匀展开成一层薄膜。
实验四 血涂片的制备与染色
实验四血涂片的制备与染色【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。
【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。
用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。
细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或Bunsen灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】1．瑞氏（Wright）染液（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。
将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。
再加15ml甘油密闭保存。
（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。
如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。
将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。
血涂片的制备与染色(29)
血涂片的制备
◈ 制备合格的血涂片，是血液学检查的最基本的技 术和方法， ◈ 血片的质量及染色的好坏，直接影响到细胞形 态的观察、和诊断。
（一） 载玻片的清洁
1. 新玻片：常带有游离碱质，用1mol/L HCl 浸泡24h， 清水冲净，干燥备用。
2. 用过的玻片：肥皂（洗涤剂）水煮沸20 min，再用 热水将肥皂和血膜洗净，清水反复冲洗，干燥备用。
3. 自动推片机法
标准化 自动化 智能化
第四部分 血细胞常用的染色方法
细胞染色技术
细胞涂片，在光学显微镜观察之前需要固定、染色。
固定：将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联和凝固，
以保持细胞原有的形态结构不发生变化。
染色目的：使细胞的主要结构（细胞质、细胞核、
细胞器等）染上不同的颜色，便于显微镜下观察。
Hale Waihona Puke 碱性美蓝结合，偏碱：出现异常蓝染。 ⓑ PH<PI: 酸性环境，蛋白质分子带正电荷多，易与酸
性伊红结合，因此偏酸：氢离子较多，降低对碱性染料 的亲和力，增强伊红着色，出现异常红染。
最佳PH：6.4～6.8，应使用缓冲液。
同时使用优质甲醇（AR）和清洁的中性玻片。
【染色方法】
以血涂片为例 ① 血膜干后，在两端用蜡笔化线，平放在染
色架上； ② 加染液数滴，固定1min； ③ 加等量或稍多的缓冲液，与染液充分混匀，
有一定的空隙（0.3cm和1.5cm），血膜长度
占载玻片的2/3左右。玻片的一端应留有贴标
签的地方。
0.3cm
临
沂 市
1.5cm
人
民
医
院
制血膜
白细胞显微镜分类
瑞氏染色
血涂片制作与染色
淋巴细胞：可观察到中、小型两种。小淋巴 细胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染 成深紫色。周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的 细胞质。中淋巴细胞较大，核圆形。直径6-8 微米。
单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成 灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋 巴细胞的核。直径14-20微米。
血小板
血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。其周 围部分浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒， 聚集成群。
红细胞
淋巴细胞
单核细胞
嗜中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
汇报结束
谢谢大家! 请各位批评指正
白细胞
中性粒细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染 成紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。 嗜酸性粒细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核 染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆 颗粒，被染成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性粒细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细 胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数 目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成 淡蓝色。直径10-11微片做推片。 将其一端置于血滴 前方，向后移动到 接触血滴，使血液 均匀分散在推片与 载片的接触处。然 后使推片与载片呈 30°～40°角，向 另一端平稳地推出， 如右图所示。涂片 推好后，迅速在空 气中摇，使之自然 干燥。
观察
红细胞
淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形， 故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微 米。
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实验四血涂片的制备与染色
【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。
【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。
用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。
细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】
1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或Bunsen灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】
1．瑞氏（Wright）染液
（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。
将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。
再加15ml甘油密闭保存。
（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。
如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。
将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液
（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。
将瑞氏染料和吉姆萨染料置洁净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。
如此连续几次，共用甲醇500ml。
收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各摇3min，共5d，以后存放1周即能使用。
（2）Ⅱ液：即磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）。
包含无水磷酸二氢钾6.64g、无水磷酸氢二钠2.56g，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。
【标本】 EDTA抗凝静脉血或末梢血。
【操作】
1．采血
（1）静脉采血法：用EDTA·K2抗凝1～2h内的标本，使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血，直径约4mm。
（2）皮肤采血法：选择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数，再采血1滴置洁净玻片上用于血涂片制备。
2．制作涂片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方移动接近血滴，使血液沿推片边缘展开，将推片与载玻片呈30°～45°角，用均匀速度向前将血液推成厚薄适宜的血涂片（图1-12），血涂片应呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。
所有血液必须在推片到达末端前用完。
贫血病人推片速度要快。
图1-12 血涂片制备示意图
3．干燥涂片
（1）空气干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
（2）加热干燥：握住涂片，在距离酒精灯或Bunsen灯火焰上方50mm处晃动，但不能直接对着火焰。
4．标记涂片在载玻片的一端用记号笔编号，注明患者姓名或门诊/住院号。
5．染色
（1）瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。
然后将玻片平置于染色架上，滴加染液（I液）3～5滴，使其迅速盖满血涂片，约0.5～1min后，滴加等量或稍多的缓冲液（Ⅱ液），轻轻摇动玻片或用吸球对准血涂片吹气，使染液充分混合。
5～10min后用流水冲去染液，待干。
（2）吉姆萨染色法：将固定的血涂片置于被pH6.4～6.8磷酸盐缓冲液稀释10～20倍的吉姆萨染液中，浸染10～30min（标本较少可用滴染）。
取出用流水冲洗，待干燥后显微镜检查。
（3）瑞一吉复合染色法：操作步骤同瑞氏染色法，只是染色时将瑞一吉复合染液Ⅰ液和Ⅱ液替代瑞氏染液的Ⅰ液和Ⅱ液。
6．观察结果将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。
在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。
【注意事项】
1．瑞氏染液新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。
放置时间愈久，天青B愈多，染色效果愈好，但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。
甲醇必须用AR（无丙酮）。
染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。
2．采血
（1）不能采集以下部位的血液：①示指或拇指血液。
②感染部位血液，如甲沟炎。
③耳垂部位血液，含单核细胞太多。
（2）不能使用肝素抗凝标本。
（3）玻片必须清洁、干燥、无尘。
①新玻片：应在清洁液中浸泡过夜，然后用水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。
②已用过的玻片：应在60℃清洁液中加热20min，然后用水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。
③边缘破碎、表面有划痕的玻片不能再用。
（4）使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
3．制作涂片许多因素可影响血涂片的厚度，针对不同患者应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的患者应采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。
涂片质量不佳及可能原因见表1-1，图1-13。
表1-1 涂片质量不佳及可能原因
涂片质量不佳可能原因
不规则间断和尾部太长推片污染、推片速度不连续、载玻片太脏
有空洞载玻片污染脂肪、油脂
白细胞和血小板尾部分布不规则制片技术差
涂片太长或太短推片角度不佳
涂片没有尾部血滴太大
涂片很短血滴太小
涂片没有边缘空隙推片太宽
有细胞退变现象固定延迟、固定时间太短、甲醇污染
血涂片厚血滴大、血粘度高、推片角度大、推片速度快
白细胞破损推片时用力过猛
图1-13 血涂片质量比较
（A为涂片质量好，B、C、D、E、F、G、H、I为涂片质量差）
4．干燥涂片血涂片干透后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。
5．染色步骤
（1）操作注意事项及操作不当的后果见表1-3。
表1-2 染色操作注意事项及操作不当的后果
操作注意事项操作不当的后果
加染液应适量过少则易蒸发沉淀，一旦染料沉积在血涂片上，则不易冲洗，使
细胞深染不易检查。
冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗染料沉着在血涂片上
冲洗时间不能过久脱色
冲洗完的血涂片应立放于支架上剩余水分浸泡脱色
（2）染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。
染液淡、室温低、细胞多则染色时间要长；反之，可减少染色时间。
必要时可增加染液量或延长时间。
冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清楚，核质是否分明。
应该在具体实践中摸索合适的时间，特别是在更换染液时。
每批染色液和缓冲液，均需试染，以便掌握染色时间和加缓冲液的比例。
6．结果观察低倍镜下观察血涂片应厚薄适宜，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，一些体积大的特殊细胞常在血涂片的尾部出现。
如有可能，干燥后的血涂片先用中性树胶封片后再观察，不仅能长期保存血涂片，而且观察效果更佳。
染色质量不佳及原因见表1-3。
表1-3 染色质量不佳及可能原因
染色效果可能原因纠正措施
太蓝涂片太厚、冲洗时间太短、中性水pH太高、染色时间太长、稀释染液重复使用、贮存染液暴露于阳
光在含1％硼酸的95％乙醇溶液冲洗2次，用中性水冲洗，待干镜检
太红冲洗时间太长、中性水pH太低、贮存染液质量不佳、涂片干燥前加封片规范操作。
新鲜配置中性水。
保证染液质量不佳
太淡染色时间太短、冲洗时间太长复染。
应先加缓冲液，后加染液，或加染
液与缓冲液的混合液，不可先加染液
染料沉积染料沉淀、染液未过滤、涂片太脏用甲醇冲洗2次，并立即用水冲掉甲醇，
待干后复染
蓝色背景固定不当、涂片未固定贮存过久、使用肝素抗凝剂注意涂片的固定。
使用EDTA抗凝静脉血。