补体溶血实验 PPT

合集下载

《补体溶血实验》课件

《补体溶血实验》课件

注意实验误差
补体溶血实验存在一定的误差, 因此对于结果的解读需考虑实验 误差的影响。如对结果有疑问, 可进行重复实验或采用其他检测
方法进行验证。
05
补体溶血实验相关疾病
自身免疫性疾病
系统性红斑狼疮(SLE)
补体溶血实验在SLE的诊断中具有重要价值,可检测到多种补体成 分的异常。
类风湿性关节炎(RA)
THANKS
感谢观看
补体系统是先天免疫系统的一部 分,由一系列蛋白质组成,能够 识别并清除被感染或受损的细胞

当补体系统被激活时,它能够通 过溶解细胞来清除病原体,这是
免疫系统的一种防御机制。
补体溶血实验的原理
当补体系统被激活时,补体分 子附着在红细胞表面,导致红 细胞溶解。
通过检测溶解的红细胞数量, 可以评估补体系统的功能。
感染性休克
补体溶血实验可检测到感 染性休克患者血清中补体 活性的异常,有助于诊断 和评估病情。
肿瘤疾病
肺癌
补体溶血实验可检测到肺 癌患者血清中补体活性的 异常,有助于诊断和评估 病情。
肝癌
补体溶血实验可检测到肝 癌患者血清中补体活性的 异常,有助于诊断和评估 病情。
结直肠癌
补体溶血实验可检测到结 直肠癌患者血清中补体活 性的异常,有助于诊断和 评估病情。
04
补体溶血实验结果解读
正常结果解读
正常结果
补体溶血实验结果正常,通常表 示受检者体内补体活性正常,免 疫系统功能正常。
解读
在正常结果下,无需特别关注或 采取治疗措施,但仍需关注身体 状况,定期进行体检。
异常结果解读
异常结果
补体溶血实验结果异常,通常表示受 检者体内补体活性异常,可能存在免 疫系统疾病或感染等情况。

补体溶血实验报告

补体溶血实验报告

一、实验目的1. 理解补体溶血反应的原理。

2. 掌握补体溶血实验的操作方法。

3. 通过实验验证补体在免疫反应中的作用。

二、实验原理补体系统是机体免疫系统的重要组成部分,主要由一系列蛋白质组成。

当抗原与抗体结合后,可以激活补体系统,进而导致靶细胞的溶解。

本实验通过观察红细胞在补体存在下的溶血情况,来研究补体的溶血活性。

实验原理如下:1. 将抗原(如绵羊红细胞)与抗体结合,形成抗原-抗体复合物。

2. 激活补体系统,产生具有溶血活性的物质。

3. 将溶血物质与红细胞混合,观察红细胞是否发生溶血现象。

三、实验材料与试剂1. 材料:绵羊红细胞、兔抗绵羊红细胞抗体、兔血清、生理盐水、蒸馏水等。

2. 试剂:溶血素、巴比妥缓冲液、NaCl溶液等。

四、实验步骤1. 准备2%绵羊红细胞悬液:取新鲜绵羊红细胞,用生理盐水洗涤3次,加入适量生理盐水制成2%悬液。

2. 准备兔抗绵羊红细胞抗体:将兔抗绵羊红细胞抗体用生理盐水稀释至适当浓度。

3. 设置实验组:将兔抗绵羊红细胞抗体加入绵羊红细胞悬液中,混匀,置于37℃水浴中孵育30分钟。

4. 设置对照组:将兔血清加入绵羊红细胞悬液中,混匀,置于37℃水浴中孵育30分钟。

5. 加入溶血素:向实验组和对照组中加入等量溶血素,混匀。

6. 观察溶血现象:将实验组和对照组分别加入等量生理盐水,观察红细胞是否发生溶血现象。

五、实验结果与分析1. 实验组:观察到红细胞发生明显的溶血现象,溶液呈粉红色。

2. 对照组:观察到红细胞未发生溶血现象,溶液呈红色。

结果表明,兔抗绵羊红细胞抗体可以激活补体系统,导致红细胞溶血。

而兔血清中不含有抗绵羊红细胞抗体,因此不能激活补体系统,导致红细胞溶血。

六、实验讨论1. 补体溶血实验是研究补体系统功能的重要方法之一。

本实验通过观察红细胞在补体存在下的溶血情况,验证了补体在免疫反应中的作用。

2. 实验结果表明,补体溶血活性与抗体种类、浓度、补体系统活性等因素有关。

2012-3-26溶血性贫血实验室检查2012-3-262-PPT文档

2012-3-26溶血性贫血实验室检查2012-3-262-PPT文档
Hb、HbH病等常高于 45%
4、G6PD荧光斑点试验和活性测定
原理: G6PD 使NADP还原成NADPH, 后者在紫外线 照射下发出荧光
6-磷酸葡萄糖
白 G-6PD
NADP
6-磷酸葡萄糖酸
NADPH
参考值: 正常人强荧光; 酶活性 5 U/gHb
GSH GSSG
H202
氧合血红蛋
H20
高铁血红蛋白
1. Coombs试验(抗人球蛋白试验)
目的:检查红细胞表面的或血清中游离的不完全
抗体,用于诊断AIHA。
原理:不完全抗体(IgG),无法架接两个邻近的红细胞,而只
能和一个红细胞抗原相结合。 抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的Fc
段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。
直接Coombs Test(+)说明病人RBC表面上包被有不完全抗体 间接Coombs Test(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体
什么叫溶血性贫血?
hemolytic anemia----指各种原因导 致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加 速,骨髓代偿造血功能不足时所发生的 一类贫血。
什么叫溶血性疾病?
指骨髓代偿能力尚足以补偿红细胞 的损耗而不出现贫血。
溶血性贫血的分类(病因和发病机制)
1、RBC内在缺陷所致的溶贫 (1) RBC膜缺陷:遗传球 PNH (2) HB结构异常:海洋性贫血 (3)RBC内酶缺陷:G-6PD缺乏症
红细胞寿命测定
方法:51Cr标记红细胞,检测其半衰期 正常红细胞半衰期25—32天 溶血性贫血者半衰期小于15天 确定溶血性贫血的可靠方法
溶血性贫血筛查
血浆游离血红蛋白测定
参考值:<50mg/L(1-5mg/dl) 临床意义:

溶血实验

溶血实验

红细胞抗体,也称溶血素(3)补体
编辑ppt
3
当红细胞与相应抗体相结合,在电 解质存在时,可使红细胞产生凝集 现象;若同时加入新鲜动物血清, 则血清中的补体可与红细胞及其抗 体(溶血素)形成的免疫复合物结 合,从而激活补体导致红细胞溶解, 产生溶血现象。
编辑ppt
4
【实验材料】
1、抗原:2%绵羊红细胞(简称 SRBC)。
编辑ppt
1
薛 亚 (102015100பைடு நூலகம்) 付正阳 (1020151002) 王 淑 (1020151003) 李 飘 (1020151004)
编辑ppt
2
溶血实验
【实验目的】
了解补体的性质与作用。 分析结果及其意义。
【实验原理】
溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的 溶解反应.
参与反应的成分有:(1)红细胞(2)抗
① 0.5 0.5
0.5 0.5
② 0.5 0.5
--- 1.0
③ 0.5 ---
0.5 1.0
编辑ppt
6
2.将试管摇匀后置37℃水箱内:15— 30分钟,取出观察有无溶血现象。
3.管底无血球沉淀,液体红色透明管为 溶血。
【注意事项】
不要摇荡试管,红细胞离开机体是很容 易破裂的。
加样一定要精确,不要漏加。
2、抗体:溶血素(SRBC抗体)。 3、补体,新鲜豚鼠血清。 4、生理盐水。 5、小试管、刻度吸管、试管架、
37℃水溶箱等。
编辑ppt
5
【实验方法】
1、取小试管3支,编号后按表3-1加入各物 (容量单位均为ml)
表3-1 溶血试验加样表
管号 2%红细胞 溶血素(2单位) 补体(2单位) 生理盐水
编辑ppt
7

补体结合试验

补体结合试验
“complement fixation test”相关网站: ▪ /medicine/rensou3.htm
• 反应不发生溶血, 证明待测物存在, 试验结果阳性。
• 反应发生溶血,证 明待测物不存在, 试验结果阴性。
• 补体结合试验最早应用于梅毒的检测。
• 补体结合试验曾广泛的应用于临床微生物学检验 中,比如:细菌、病毒、衣原体、立克次体等微 生物所致疾病的血清学诊断。
• 在对SARS的诊断中,补体结合试验的灵敏度要 高于直接做病毒的分离培养。
返回
SRBC
hemolysin
SRBC
SRBCs
补体(complement)
SRBC

SRBCs
1
SRBC
SRBC 图 2
• 图1 绵羊红细胞与溶血素(hemolysin)即抗绵羊红细胞结合,形成致 敏绵羊红细胞(SRBCs)。
• 图2 致敏绵羊红细胞与补体结合,使其激活,补体发生溶细胞作用,引 起红细胞肿胀,发生溶血。
▪ 1.为什么要设计指示系统?
▪ 2.如果将反应步骤颠倒,先加指示系 统与补体,再加检测系统,结果将怎 样?




SRBC
存 在






SRBC



▪1.为什么要设计指示系统?
▪2.如果将反应步骤颠倒,先加指示系 统与补体,再加检测系统,结果将怎 样?
▪ 一、背景知识 ▪ 二、试验原理 ▪ 三、试验结果 ▪ 四、临床应用
检测系统
未A知g 不未存知在
Ab
未生AAg成g
检测系统
已知
已知
SRBC
指示系统

溶血ppt课件

溶血ppt课件

开始溶血及完全溶血是氯化钠溶液的浓度 较正常对照提前两管(0.04%)或更高时,为脆 性增高。
红细胞渗透脆性试验
3.临床意义:
脆性: 见于遗传性球形红细胞增多症 脆性: 见于海洋性贫血等疾病
酸溶血试验
(Ham试验)
1.原理:
正常人红细胞与自身血清中,在弱酸性 (Ph6.6~6.8)条件下,经37C孵育1小时后不 发生溶血.PNH病人的红细胞对补体敏感,加 入稀盐酸酸化的血清中(内含补体及备解素), 经孵育后可呈现溶血现象.
3.珠蛋白合成异常的检验:
血红蛋白电泳 HbF检测 异丙醇沉淀试验 热变性试验 变性珠蛋白小体生成试验 红细胞镰变试验 ……
(三)溶血原因分析的有关检验
4.免疫性溶血的试验:
抗人球蛋白试验 冷热溶血试验 冷凝集试验 血型检验
三、 溶血性贫血 常用的实验室检查
1.红细胞膜缺陷的检验:
红细胞渗透脆性试验
孵育后渗透脆性试验
自身溶血试验及其纠正试验 酸溶血实验
蔗糖水溶血试验
(三)溶血原因分析的有关检验
2.红细胞内酶缺陷的检验:
自身溶血试验极其纠正试验 变性珠蛋白小体生成试验 高铁血红蛋白还原试验 …….
(三)溶血原因分析的有关检验
(一)溶贫确诊的实验检查
1.RBC破坏证据
胆红素代谢异常
血清总胆红素与非结合胆红素 尿胆原,尿胆红素(-)
RBC寿命缩短
用同位素测定、RBC形态改变、血清LDH
2.RBC代偿增生的证据
Ret 外周血片可见:
嗜多染红细胞、有核红细胞等形态学改变
骨髓像:增生性贫血
(二)溶血场所确立的实验检查

补体的溶血实验报告

补体的溶血实验报告

一、实验目的了解补体介导的溶血反应原理,掌握溶血实验的基本操作方法,并通过实验验证补体在溶血反应中的作用。

二、实验原理补体系统是一组存在于血清和细胞膜上的蛋白质,在免疫应答中起着重要的防御作用。

当抗体与抗原结合形成抗原-抗体复合物后,补体可以识别并与之结合,进而激活一系列的级联反应,最终导致靶细胞的溶解。

本实验通过观察红细胞在补体参与下的溶血现象,验证补体在溶血反应中的作用。

三、实验材料1. 红细胞悬液(绵羊红细胞)2. 抗红细胞抗体(溶血素)3. 新鲜血清4. 补体(豚鼠血清)5. 磷酸盐缓冲盐水(PBS)6. 移液器7. 离心机8. 吸管9. 实验试管10. 酶标仪四、实验方法1. 红细胞悬液的制备:取绵羊红细胞,用生理盐水洗涤三次,去除血浆蛋白和杂质,最后配制成2%的红细胞悬液。

2. 抗体和补体的稀释:将溶血素和补体用PBS按适当比例稀释。

3. 实验分组:- A组:红细胞悬液 + 抗体 + 补体- B组:红细胞悬液 + 抗体 + PBS- C组:红细胞悬液 + PBS + PBS- D组:红细胞悬液 + PBS + 补体4. 实验操作:- 将各组的试剂加入试管中,轻轻混匀。

- 将试管置于37℃水浴中孵育30分钟。

- 离心各试管,取上清液。

5. 溶血测定:- 用酶标仪测定各组的吸光度值。

- 根据吸光度值计算溶血率。

五、实验结果1. A组(红细胞悬液 + 抗体 + 补体)出现明显的溶血现象,吸光度值显著降低。

2. B组(红细胞悬液 + 抗体 + PBS)吸光度值略有下降,但溶血现象不明显。

3. C组(红细胞悬液 + PBS + PBS)吸光度值无变化,无溶血现象。

4. D组(红细胞悬液 + PBS + 补体)吸光度值略有下降,但溶血现象不明显。

六、实验结论本实验结果表明,补体在溶血反应中起着重要作用。

当抗体与抗原结合形成抗原-抗体复合物后,补体可以识别并与之结合,进而激活一系列的级联反应,导致红细胞溶解。

补体在溶血反应中的作用实验讨论

补体在溶血反应中的作用实验讨论

补体在溶血反应中的作用实验讨论
补体在溶血反应中起着重要的作用。

在溶血反应中,当红细胞与抗原相结合后,抗原与抗体结合的复合物会激活免疫系统中的补体系统。

补体系统的激活会引发一系列的反应,最终导致红细胞溶解。

具体来说,补体系统的激活分为经典途径和替代途径。

在经典途径中,抗体与抗原结合,形成免疫复合物后,一种叫做C1酶的补体蛋白会结合到免疫复合物上,激活后续的补体反应。

在替代途径中,补体蛋白C3通过蛋白质水解产生C3b,C3b结合至免疫复合物或直接与细菌表面结合,并进一步激活补体系统。

激活后的补体系统会形成膜攻击复合物(MAC),这些复合物能够插入到细菌或抗原溶血性红细胞的细胞膜上,破坏细胞膜完整性,导致细胞溶解。

此外,激活的补体还能激发炎症反应和吞噬细菌的过程。

在实验中,可以通过添加补体试剂来观察红细胞的溶解情况。

通过不同浓度的补体试剂与抗原结合形成免疫复合物,然后通过观察特定的溶血指标(如红细胞溶解度、血红蛋白释放量等)来评估补体的作用效果。

同时,还可以利用不同的实验条件探究补体系统的激活途径和对不同免疫复合物的作用差异。

总结来说,补体在溶血反应中的作用是通过激活补体系统,形成膜攻击复合物,破坏细胞膜完整性,导致红细胞的溶解。

补体溶血实验

补体溶血实验
实验安全操作
遵守实验室安全操作规程,如正确 使用移液器、避免交叉污染等。在 实验过程中保持警惕,及时处理异 常情况。
06
实验拓展与应用前景
补体溶血实验在医学领域的应用
疾病诊断
通过补体溶血实验可以检测某些疾病的存在,如免疫性疾病、感染性疾病等。实验结果可 以为医生提供诊断依据,帮助确定治疗方案。
药物研发
THANKS
感谢观看
相关研究进展及趋势分析
补体系统研究深入
随着对补体系统研究的不断深入,人们对补体溶血实验的原理和应用有了更全面的认识。这为补体溶血实验的进一步 发展和应用提供了理论支持。
新技术不断涌现
近年来,一些新技术如荧光标记、高通量测序等被应用于补体溶血实验中,提高了实验的灵敏度和准确性。这些新技 术的应用为补体溶血实验的拓展提供了新的思路和方法。
补体成分
02
补体系统包括多种成分,如C1、C2、C3、C4等,它们以级联
反应的形式被激活,并产生具有生物学活性的产物。
补体功能
03
补体系统具有多种生物学功能,包括溶解细胞、促进炎症反应
、调节免疫应答等。
溶血反应原理
01
抗原-抗体复合物形成
当抗原与相应抗体结合时,可形成抗原-抗体复合物,该复合物可激活
保持反应体系pH值在7.2-7.4之间,可用缓冲液进行调节,以确保 补体活性。
搅拌方式
在反应过程中轻轻搅拌混合液,以保证红细胞与补体充分接触。
溶血程度观察与记录
溶血现象观察
在反应结束后,观察混合 液的颜色变化,若出现红 色透明溶液,则表明红细 胞发生溶血。
溶血程度评估
根据混合液的颜色深浅和 透明度,可初步判断溶血 程度。可使用分光光度计 等仪器进行定量测定。

3.补体作用观察

3.补体作用观察
1号管澄清 2号管浑浊
13
补体结合反应
• 原理 (可溶性或颗粒性)Ag与相应Ab结合,由 于浓度低不出现可见反应时,应用此反应 可检出Ag-Ab反应。 比沉淀反应和凝集反应灵敏度高。
14
15
16
本法包括:
检测系统
Ag 补体系统 Ab
指示系统
SRBC 溶血素
17
• 步骤
方法与步骤
1 2
红细胞悬液
溶血素 补体 生理盐水
0.5 ml
0.5 ml 0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
11
37℃ 30min,观察结果。
• 步骤
1 1 2 各加SRBC0.5ml和1: 1000溶血素0.5ml 2 加 NS 0.5ml 37℃ 观察结果 1
加1:30补体0.5ml
补体作用观察
• 补体杀菌 • 补体溶血 • 补体结合反应
指导教师:张海霞
1
目的要求
通过补体的溶菌、溶细胞及补 体结合反应了解补体的生物学
功能。
2
3
4
补体杀菌
• 原理 G-菌LPS从旁路途径激活补体
5
实验材料
1、豚鼠的新鲜血清 2、柠葡菌液
3、两只试管,水浴箱,琼脂平板
6
• 步骤
1 伤寒菌液0.1ml 1 2 各加新鲜豚 鼠血清0.1ml 37℃ 2 56℃水浴 30分钟后 加伤寒菌液0.1ml 1
18
• 结果及分析 不溶血 先看第5管 溶血 重做此试验 看1.2.3.4管
19
实验报告: 补体的溶血作用
• • • •
原理 方法与步骤 结果 结果分析
20
2

补体ppt课件

补体ppt课件
补体可以调节免疫细胞的活化和功能,因此有望应用于细 胞治疗,如CAR-T细胞疗法、干细胞移植等。
补体与疫苗研发
补体参与免疫应答的调节,因此可以探索将补体作为疫苗 佐剂或靶点,提高疫苗的免疫效果和安全性。
未来补体研究的方向与挑战
深入研究补体的分子机制
尽管对补体的认识不断加深,但其精确的分子机制和调控网络仍 需进一步揭示。
增强细胞免疫应答。
03
补体与B细胞的相互作用
补体能够通过与B细胞表面的受体结合,促进B细胞的活化和增殖,从
而增强体液免疫应答。同时,补体还能够调节B细胞分泌的抗体类型和
数量。
04
补体与疾病关系
补体缺陷与疾病
补体缺陷类型
包括遗传性补体缺陷和获得性补 体缺陷,遗传性补体缺陷多为常 染色体隐性遗传,获得性补体缺 陷则由感染、自身免疫病等因素 引起。
探索补体的新功能和应用
随着对补体研究的深入,未来可能发现更多新的补体功能和应用领 域,如神经免疫、代谢免疫等。
解决补体研究中的技术难题
目前补体研究仍面临一些技术挑战,如如何精确测量补体活性、如 何有效调控补体系统等,需要不断探索新的技术和方法。
THANKS
感谢观看
活途径,减轻炎症反应和组织损伤。
补体调节剂
02
通过调节补体激活过程中的正负反馈机制,使补体系统恢复平
衡,达到治疗目的。
靶向补体的药物研发
03
针对补体系统中的特定分子或通路进行药物设计和研发,为补
体相关疾病的治疗提供新的手段。
05
补体的实验室检测与应用
补体成分的检测方法
免疫化学法
01
利用抗原抗体反应原理,通过沉淀反应、凝集反应等
补体激活产生的C3b等分子可以结合到微生 物表面,作为吞噬细胞的识别信号,促进 吞噬细胞对微生物的吞噬和清除。

50%溶血试验(CH50)测定补体实验

50%溶血试验(CH50)测定补体实验

50%溶血试验(CH50)测定补体实验50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清,然后计算出每毫升血清中补体含量。

以补体量作为横坐标,溶血百分数作为纵坐标,可得到一个清晰的“S”形曲线。

在50%溶血周围,线段近似一条直线。

因此当补体用量稍有变动,就可对溶血程度发生很大影响。

所以用50%溶血作为终点要比100%溶血更为敏感。

50%溶血试验定血清中补体含量用以下公式表示:每毫升血清中补体含量(单位)=(1/血清用量)×稀释倍数。

该公式可以从Von Krogh 方程式进一步加以论证:x=k[1/(1-y)]1/n。

假定X=加入的新鲜血清量,y= 溶血的百分率,以小数表示,V=斜率,k=常数,转变成对数,上述公式就变成:logx=logk+1/n log[y/(1-y)],当以50%溶血作为终点时,y/(1-y)=0.5/(1-0.5)=1,代入上述公式,log x=log k+1/n log1,由于-log1=0,log x =log k,x=k,也即表示补体的50%溶血单位k就是加入的新鲜血清量。

材料及器材使用时取此原液50ml,加90ml蒸馏水,经高压灭菌后即可使用。

加入100%硫酸镁溶液1ml,可增强补体的效能;2、绵羊红细胞悬液(1×10g/ml);3、溶血素(2U);4、被检血清(新鲜豚鼠血清);5、水平离心机;6、水浴箱;7、721型分光光度计。

方法1、浓度为1×10g/ml的绵羊红细胞配制取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液。

取50%细胞悬液1ml,加于14ml蒸馏水中测 O.D值为DI按下式求出于一定体积的5%细胞悬液中应加入稀释液的毫升数。

Vf=Vi(Di-Ds)/Ds,Vi为配制的50%细胞悬液体积,Vf为于一定量5%细胞悬液中应加入稀释的ml数Ds为已知标准化的1×100 个细胞/ml悬液的OD540值-0.385。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

(3)引起炎症反应:在补体活化过程中 产生的炎症介质C3a、C4a、C5a。它们 又称为过敏毒素,与相应细胞表面的受 体结合,激发细胞脱颗粒,释放组胺之 类的血管活性物质,从而增强血管的通 透性并刺激内脏平滑肌收缩。C5a还是一 种有效的中性粒细胞趋化因子。
(4)清除免疫复合物:机制为:①补体 与Ig的结合在空间上干扰Fc段之间的作用, 抑制新的IC形成或使已形成的IC解离。② 循环IC可激活补体,产生的C3b与抗体共 价结合。IC借助C3b与表达CR1和CR3的 细胞结合而被肝细胞清除。
实验结果
溶血:液体呈红色透明 不溶血:呈红细胞混悬液
思考题
根据所给的条件,请预测哪几管会溶血? 哪几管不会溶血?请你详细分析溶血和不 溶血的原因。
(5)免疫调节作用:①C3可参与捕 捉固定抗原,使抗原易被APC处理与 递呈。②补体可与免疫细胞相互作用, 调节细胞的增殖与分化。③参与调节 多种免疫细胞的功能。
补体激活的途径:
经典途径 旁路途径 MBL途径
相同点:三条途径有共同的末端通路,即 形成膜攻击复合物溶解细胞。
大家有疑问的,可以询问和交流
溶血反应:由于抗原(红血球)和抗体 (溶血素)进行特异性的结合,在电解质 存在时能发生凝集,若再有补体参与,红 血球则被溶解。
实验目的
掌握补体测定方法 加深了解补体的作用和激活条件
材料与试剂
试剂 1.抗原:2%绵羊红细胞 2.抗体:溶血素 3.补体:实验室常以健康豚鼠血清作为补体 材料:小试管,生理盐水,水浴箱
实验方法
取试管4支,按下表加入各物
实验方法
将上述试管放在37℃水浴箱内30分钟观察 有无溶血现象。
将不溶血试管离心,3000rpm,5min, 使红细胞沉淀。
将2、3号管上清液分别移入5、6管,按下 表加入试剂
实验方法
将上述5支试管放入37℃水浴箱内30min观察有无溶血现 象,并解释原因
3、MBL途径:在感染早期,体内分泌甘露 聚糖结合凝集素(MBL)和C反应蛋白。 MBL与细菌表面的甘露糖残基结合,然后 与丝氨酸蛋白酶结合形成MASP(MBL相 关的丝氨酸蛋白酶),MASP继而水解C4 和C2启动后序的酶促连锁反应,产生一系 列生物学效应和最终发生细胞溶解作用的 补体活化途径。激活物(或激活剂)是炎 症期产生的蛋白和病原体。
灭活:56℃加热30min即可灭活
补体系统的生物学功能
(1)溶菌和溶细胞作用:补体系统激活 后,在靶细胞表面形成MAC,从而导致 靶细胞溶解。
(2)调理作用:补体激活过程中产生的 C3b、C4b、iC3b都是重要的调理素, 可结合中性粒细胞或巨噬细胞表面相应 受体,因此,在微生物细胞表面发生的 补体激活,可促进微生物与吞噬细胞的 结合,并被吞噬及杀伤。
可以互相讨论下,但要小声点
9
1、补体经典途径(classical pathway):是 指以抗原抗体复合物为主要刺激物,使补体 固有成分以C1、C4、C2、C3、C5~C9顺 序发生酶促连锁反应,产生一系列生物学效 应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途径。
2、替代途径(旁路途径):是指不经C1、 C4、C2活化,而是在B因子、D因子和P因 子参与下,直接由C3b与激活物结合启动 补体酶促连锁反应,产生一系列生物学效 应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途 径。在感染早期可为机体提供有效的防御 机制。其激活物是病原微生物等提供接触 表面
实验三 补体在于人和脊椎动物血清 中及组织液中具有酶样活性,不耐热 和功能上连续反应的糖蛋白,是抗体 发挥溶细胞作用的必要补充条件,在 正常情况下,血清中的补体大多以无 活性酶前体形式存在。
物理性质:不稳定,易受各种理化因 素的影响,加热,紫外线照射,机械 震荡,酸碱和酒精等因素均可破坏补 体。
三条途径的区别见下表
补体的来源、采集
实验室常用豚鼠、兔的新鲜血清作为补体 的来源。
补体的采集:一般选用3-5只健康未妊娠的 豚鼠或兔子,以无菌操作采集血液,采集 好的血液置4℃冰箱过夜,次日离心分离血 清即可分离到补体。
溶血素(抗绵羊红细胞抗体):是以SRBC 作为抗原免疫家兔所得到的兔抗血清,无 需进一步提纯,但试验前应先56℃加热 30min或者60 ℃3min灭活补体。
相关文档
最新文档