(优选)超低温冷冻保存种质
超低温保存技术的相关机理综述
二甲基亚砜二甲基亚砜(DMSO)是一种含硫有机化合物,分子式为(CH3)2SO,常温下为无色无臭的透明液体,是一种吸湿性的可燃液体。
具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物,被誉为“万能溶剂”。
同时,氯化铬,氯化锰等过渡金属卤化物与氯化钾,氯化钠等卤化物在DMSO中有一定溶解度,故可以应用在有机电化学中。
二甲基亚砜广泛用作溶剂和反应试剂,特别是丙烯腈聚合反应中作加工溶剂和抽丝溶剂,作聚氨酯合成及抽丝溶剂,作聚酰胺,聚酰亚胺和聚砜树脂的合成溶剂,以及芳烃,丁二烯抽提溶剂和合成氯氟苯胺的溶剂等。
除此之外,在医药工业中二甲基亚砜还有直接用作某些药物的原料及载体。
二甲基亚砜本身有消炎止痛,利尿,镇静等作用,亦誉为“万灵药”,常作为止痛药物的活性组分添加于药物之中。
DMSO是二甲基亚砜,用途广泛。
用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。
是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。
对皮肤有极强的渗透性,有助于药物向人体渗透。
也可作为农药的添加剂。
也是一种十分重要的化学试剂。
DMSO也是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。
但研究表明,DMSO存在一定的毒性作用,与蛋白质疏水集团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。
DMSO存在一定的毒性作用,用的时候要避免其挥发,要准备1%-5%的氨水备用,皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤.在防冻剂中的应用纯DMSO 的冰点是18.45℃,含水40%的DMSO在-60℃不冻,而且DMSO与水、雪混合时放热。
这种性质使DMSO可作为汽车防冻液、刹车油、液压液组分。
乙二醇防冻液在超过-40℃低温时已不适用。
而且比DMSO沸点低,有毒,易生产气阻。
DMSO 防冻液在北部严寒地区用于除冰剂,涂料、各种乳胶的防冻剂,汽油、航煤的防冰剂,骨髓、血液、低温保存的防冻剂等。
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展一、超低温冷冻技术的原理和特点超低温冷冻技术是一种将生物样本(如细胞、组织、精子等)在极低温条件下迅速冷冻,并存储在液氮罐中的技术。
其主要原理是通过将生物样本的温度降至极低温度(通常为零下196摄氏度),使生物样本处于一种叫做“玻璃态”的状态,从而避免了细胞内部结构和生物大分子的冻结破坏。
超低温冷冻技术在生物样本保存和维持其活力方面具有独特的优势,因此被广泛应用于细胞培养、生物医学研究等领域。
超低温冷冻技术具有以下特点:1. 低温保存稳定性好:超低温冷冻技术能够将生物样本保存在极低温度下,使其处于基本静止状态,从而实现长期稳定保存。
2. 保存有效性强:超低温冷冻技术在保存生物样本的活力和遗传信息方面具有独特的优势,保持样本的原貌和功能。
3. 保存成本低廉:相比于其他生物样本保存方法,超低温冷冻技术的保存成本较低,操作简单,易于推广应用。
二、超低温冷冻技术在鱼精子保存中的研究进展近年来,随着超低温冷冻技术的不断完善和推广,越来越多的研究者开始将其应用于鱼精子的保存。
通过对不同鱼种精子的冷冻保存实验,得出了一系列具有重要意义的研究成果,有效地推动了鱼类资源的保护和利用。
1. 鱼精子的冷冻保存条件的优化在超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究中,首要的问题是确定最适宜的冷冻保存条件。
研究者在选择冷冻保存液体、添加保护剂、采用不同的冷冻速率等方面进行了大量的实验研究,最终确定了适用于不同鱼种精子的最佳冷冻保存条件。
这为鱼精子保存的实际应用提供了有力的科学依据。
2. 对冷冻保存鱼精子的质量评估研究为了评估冷冻保存鱼精子的质量,研究者们进行了大量的质量评估研究,包括鱼精子的存活率、活力、形态以及遗传物质的完整性等指标。
通过大量的实验数据和对比分析,研究人员明确了超低温冷冻技术对鱼精子保存质量的影响规律,并提出了改进措施。
3. 鱼精子保存技术的实际应用除了在实验室条件下进行研究外,超低温冷冻技术在鱼精子保存领域也已得到了一定的实际应用。
第10章《种质保存》复习题及参考答案
第10章《种质保存》复习题及参考答案第11章种质保存⼀、填空:1、种质保存分为原地保存和异地保存两种⽅式;2、超低温保存分为:快速冷冻法、慢速冷冻法、分步冷冻法和⼲燥冷冻法四种冷冻⽅法;3、分步冷冻法分为:两步冷冻法和逐级冷冻法两种⽅式;4、冷冻保存后细胞和器官最基本的活⼒检测⽅法是再培养法。
⼆、名词解释:1、⼈⼯种⼦(artificial seeds)或体细胞种⼦(somatic seeds)。
任何⼀种在离体培养条件产⽣的繁殖体,⽆论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过⼲燥的,只要能够发育成完整的植株,均称之为⼈⼯种⼦。
2、种质保存(germplasm conservation):是利⽤天然或⼈⼯创造的适宜环境,保存种质资源,使个体中所含有的遗传物质保持其完整性,有⾼的活⼒,能通过繁殖将其遗传特性传递下去。
3、超低温保存(cryopreservation):也叫冷冻保存(freeze preservation ),⼀般以液态氮(-196℃)为冷源,使温度维持在-196℃。
在如此低温下,新陈代谢活动基本停⽌,处于“⽣机停顿”状态。
三、问答题:1、提⾼冷冻后细胞或组织存活率的⽅法有哪些?(1)植物材料的性质冷冻前材料材料的性质,包括物种、基因型、抗寒性、年龄、形态结构和⽣理状态等,都会对冷冻效果产⽣很⼤影响。
(2)冷冻前的预处理:同步化、预培养、低温锻炼、冷冻防护剂(3)、解冻⽅法:快速解冻法;慢速解冻法(4)、重新培养2、为增强细胞的抗冻⼒,可对冷冻前的材料进⾏哪些预处理措施?(1)悬浮培养或继代培养(2)预培养(3)低温锻炼(4)冷冻防护剂3、常⽤的冷冻防护剂有哪些?其作⽤是什么?(1)常见种类:⼆甲基亚砜(DMSO),⽢油,糖,糖醇类等(2)作⽤:降低冰点,促进过冷却和“玻璃态化”的形成;提⾼溶液的黏滞性,阻⽌冰晶形成;DMSO可使膜物质分⼦重新分布,增强细胞膜的透性,在温度降低时,加速细胞内的⽔流往细胞外结冰,防⽌细胞内结冰产⽣伤害;稳定细胞内的⼤分⼦正常结构,特别是膜结构,阻⽌低温对膜的伤害。
植物种质的超低温保存
在培养基中添加生长延缓剂能有效减缓材料的生长。
a.不同抑制剂对不同植物材料的作用效果有所差 异 b.同一种抑制剂应用在不同植物中,要达到抑制 作用而不对植物造成伤害所需要的浓度也有所不 同。 c.在一种植物上有效地抑制剂在另一种植物上则 可能无效。
实验已经证明,利用多效唑可以使玉米、水稻、小麦和马铃 薯等的试管苗生长素率降低,同时移栽成活率提高。利用二 甲基氨基琥珀酰胺酸(B9)、矮壮素(CCC)可以使葡萄试 管苗的转管从3个月一次变为一年一次。如果将低温保存与 一些生长抑制剂配合使用,则效果更佳。
d.材料大小也有影响,太大影响预培养效果,冻 存易受冰晶伤害;太小则切取困难,而且增加切 取时对材料的伤害。 e.如果采用大田生长的植物的芽,最好选择在冬 季取材。因为夏季生长的芽都不耐寒,而经秋冬 季的低温锻炼后,植物体的抗冻能力提高,所以 动机去才有较高的存活率
10.2.2材料的预处理
预处理包括材料的预培养和低温预处理,目的是 减少系孢子油水的含量,使细胞经受低温锻炼, 以有效提高组织活细胞的抗冻能力。 •在冰冻保存前的预培养时常在培养基中加入一些 可以提高材料抗冻能力的物质,如山梨酸醇、脱 落酸、脯氨酸、和二甲基亚砜(DMSO)等,最 常用的方法是增加培培养基中蔗糖的浓度。
• (1)种子保存 目前常用的种质保存方法有以下几类: 特点:传统的种质资源保存的主要方式 种子保存占用空间少,保存期较长 易干燥、包装和运输 因此种子在低温下长期保存是防止良种衰变的一条重 要途径。 但是,随着储藏时间的延长,种子生活力逐渐下降, 而且易受病虫鼠害侵袭。 此外,这种方法对于无性繁殖的种类等不适用。
•
10.2.3.2保护剂预处理
配制保护剂时,应该将其溶解在培养基里, 或是溶解在有糖或无糖的水中。为防止对细 胞的渗透冲击,保护剂应在30~60min内逐 渐加入,如用甘油则加入速度需更慢。由于 DMSO有一定毒性,所以预处理应该在0℃ 左右的低温下进行。处理时间也不能过长, 一般不宜超过1h。
果树种质资源超低温保存研究进展
果树种质资源超低温保存研究进展随着科技的不断进步和人们对自然资源的认识不断提高,越来越多的果树种质资源被认为是生物多样性、食品安全和经济发展的关键资源。
然而,由于各种自然灾害和人为破坏的影响,许多宝贵的果树种质资源正面临丧失的威胁。
为了保护和利用这些宝贵的果树种质资源,超低温保存技术被广泛应用。
本文将系统地介绍一下果树种质资源超低温保存方面的研究进展,并讨论其未来的发展前景。
1. 超低温保存的原理和方法超低温保存是一种利用极低温度(通常在-80℃至-196℃之间)对生物材料进行保存的技术。
其原理是将生物材料放置在低温液体中,使水分子停止活动,从而防止组织细胞的损伤或死亡。
在超低温条件下,生物材料的代谢活动几乎完全停止,并且细胞组织的结构保持不变,可以长期保存。
目前主要的超低温保存方法有两种:液氮冷冻和离子凝胶冷冻。
2. 不同果树种质资源的超低温保存研究进展2.1 野生果树种质资源野生果树种质资源在生境保护、生态系统服务、食品加工和药用等方面具有重要的价值,因此种质资源保存至关重要。
目前对于不同种类的野生果树种质资源的超低温保存已经取得了部分成功。
例如,2007年荷兰瓦赫宁根大学的研究表明,苏门答腊的红毛丹种子可以在超低温下保存三年以上。
此外,在印度的橘子和柠檬种子中首次实现了成功的液氮冷冻保存,开展了超过十年的超低温保存研究。
2.2 经济果树种质资源经济果树种质资源是人们的食品和经济发展中不可或缺的资源。
然而,由于种质资源保护不力,这些果树品种正在遭受严重的基因流失。
因此,超低温保存对于维护经济果树种质资源的完整性和发展具有重要作用。
针对芒果、苹果、葡萄等不同经济果树品种的超低温保存已经开展了很多研究。
例如,在中国的研究中,将苹果和梨种子分别进行液氮冷冻和离子凝胶冷冻,成功实现了长时间的保存。
3. 对果树种质资源超低温保存技术的挑战和展望虽然超低温保存技术是维护并保护果树种质资源的重要手段,但是该技术也存在着一些挑战和限制。
植物种质的超低温保存
(三)基本程序
• 冰冻保护剂0℃预处理 • 如何选择冰冻保护剂:易溶于水;适当浓
度下对细胞无毒害;化冻后容易从组织细 胞中清除。 • 常用的冰冻保护剂:DMSO、甘油、糖、 PEG等。
(三)基本程序
• 3、降温冰冻操作
– 1)直接快速冷冻 – 2)分级冰冻法 – 3)玻璃化法
– 4)干燥冷冻法 – 5)包埋冻存法
(二)关键问题及解决措施
• 关键问题:在超低温条件下,冰冻过程中避免细 胞内水分结冰,解冻过程中防止细胞内水分次生 结冰。
• 解决措施:
– 选取细胞内自由水少、抗冻力强的植物材料; – 采取预处理措施,提高植物的抗冻力; – 在冷冻和解冻过程中尽量减少冰晶的形成;
(三)基本程序
• 1、材料的选择:
致培养物的染色体和基因型的变异;费用较高 • 超低温冷冻保存:在液氮超低温下保存种质的
技术。应用前景广阔。
一、离体保存方法
• 使保存种质处于缓慢生长或无生长状态, 需要时可迅速恢复生长。
• 抑制生长的方式:
– 降低温度 – 降低环境中的氧含量 – 使用生长延缓剂 – 其它方法
离体种质保存的优点
• 占用空间少,节省人力 、物力和土地; • 便于种质资源的交流利用; • 需要时,可以利用离体培养方法很快大量
• 玻璃化:液体转变为非晶体(玻璃态)的固化 过程。
• 原理:将高浓度的保护剂在超低温环境下凝固 ,形成无规则的玻璃化液,将玻璃化液和材料 一起处理一段时间后投入液氮中,此时冰冻保 护液和材料一起进入玻璃化状态(冰冻过程中 水分子没有发生重排,不形成冰晶,也不产生 结构和体积的改变。
玻璃化法
• 优势:设备简单、操作方便、冻存效果好。 • 影响因素: ✓ 玻璃化冰冻保护液的组成及浓度; ✓ 植物材料的脱水温度和脱水时间。
药用植物种质资源的超低温保存
·综述·△[基金项目] 广西科技计划项目(桂科AD17292004,桂科ZY1949023);广西壮族自治区药用植物园创新团队项目(桂药创2019011)[通信作者] 缪剑华,研究员,研究方向:药用植物保育学;E mail:mjh1962@vip 163 com药用植物种质资源的超低温保存△李翠,陈东亮,陈晓英,雷明,郭晓云,缪剑华广西壮族自治区药用植物园/广西药用资源保护与遗传改良重点实验室,广西 南宁 530023[摘要] 药用植物种质资源是发展中医药的特有野生生物资源和战略生物资源,药用植物种质资源的保存至关重要。
原位保存和离位保存是药用植物种质资源的主要保存方法,超低温保存是迄今为止最为安全、经济、有效的药用植物种质资源离位保存方法。
本文从超低温保存的原理及优势、材料的选择和预处理、保护剂的使用、化冻方法及药用植物超低温保存现状进行总结综述和展望,提出药用植物超低温保存研究应以遗传稳定性为首要考察指标并逐步与生产实践相结合。
[关键词] 药用植物;种质资源;超低温保存;原理[中图分类号] R282 2 [文献标识码] A [文章编号] 1673 4890(2020)06 0966 05doi:10 13313/j issn 1673 4890 20190807001CryopreservationofMedicalPlantGermplasmResourcesLICui,CHENDong liang,CHENXiao ying,LEIMing,GUOXiao yun,MIAOJian huaGuangxiBotanicalGardenofMedicinalPlants,GuangxiMedicinalResourcesConservationandGeneticImprovementLaboratory,Nanning530023,China[Abstract] GermplasmresourcesofmedicinalplantsareuniquewildliferesourcesandstrategicbiologicalresourcesinthedevelopmentoftraditionalChinesemedicine,andtheconservationofgermplasmresourcesofmedicinalplantsisparticularlyimportant Themainmethodsofpreservationofmedicinalplantgermplasmresourcesarein situpreservationandin situpreservation Byfar,cryopreservationisthemostsafe,economicalandeffectivemethodofex situpreservationofmedicinalplantresources Inthispaper,theprincipleandadvantage,materialselectionandpretreatment,protectiveagentusage,lowtemperaturedomestication,freezingmethod,andproblemsofmedicinalplantscryopreservationareanalyzedandsummarized Finally,itissuggestedthatthegeneticstabilityshouldbetakenastheprimaryindexintheresearchoncryopreservationofmedicinalplants,whichshouldbecombinedwithproductionpracticestepbystep[Keywords] medicinalplants;germplasmresource;cryopreservation;principle长久以来中药用传统方式为世人健康服务,其需求量正随着人们对健康生活需求的提升而不断增长。
简述作物种质资源的分类
简述作物种质资源的分类
作物种质资源是指植物的种子、果实、块茎、根茎等繁殖器官中所含的遗传物质,是农业生产的基础和保障。
根据不同的分类标准,作物种质资源可以分为以下几类:
1. 按植物分类学分类:按照植物的科、属、种等分类学单位进行分类,如水稻、小麦、玉米等。
2. 按生态地理分布分类:按照植物的生态地理分布进行分类,如热带作物、温带作物、寒带作物等。
3. 按育种目标分类:按照植物的育种目标进行分类,如高产作物、抗病作物、耐旱作物等。
4. 按基因型分类:按照植物的基因型进行分类,如纯合品种、杂合品种、杂交品种等。
5. 按遗传多样性分类:按照植物的遗传多样性进行分类,如地方品种、育成品种、野生品种等。
6. 按保存方式分类:按照植物的保存方式进行分类,如冷冻保存、干燥保存、超低温保存等。
7. 按利用价值分类:按照植物的利用价值进行分类,如粮食作物、经济作物、药用作物等。
8. 按国际标准分类:按照国际统一的作物种质资源分类标准进行分类,如国际种子检验协会(ISTA)的分类标准。
以上是作物种质资源的常见分类方式,不同的分类方式可以更好地满足不同领域的研究和应用需求。
同时,作物种质资源的保护和利用也是全球农业可持续发展的重要议题之一。
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展1. 引言1.1 研究背景鱼类是重要的水生动物资源,具有重要的经济和科研价值。
由于鱼类精子易受环境因素影响而失活,造成了鱼类繁殖过程中的困难。
对鱼精子进行保存并实现长期保存对于鱼类繁殖和保护具有重要意义。
目前对于超低温冷冻技术在鱼精子保存中的研究还相对较少,相关研究尚处于起步阶段。
进一步探索超低温冷冻技术在鱼精子保存中的应用及影响,对于促进鱼类繁殖技术的发展具有重要的意义。
1.2 研究意义鱼类资源是重要的水生生物资源,其繁殖过程对于维持种群数量和保护水生生态环境至关重要。
由于鱼精子保存技术的限制,导致在人工繁殖和资源保护方面存在一系列难题。
超低温冷冻技术的引入将为鱼精子保存带来新的希望,能够有效地延长鱼精子的保存时间,提高保存率和保持精子的生物特性,有助于解决当前鱼类资源保护和利用的难题。
研究超低温冷冻技术在鱼精子保存中的应用具有重要的理论意义和实际价值,有助于推动渔业产业的可持续发展和海洋资源的有效利用。
2. 正文2.1 超低温冷冻技术在鱼精子保存中的应用超低温冷冻技术在鱼精子保存中的应用是一项备受关注的研究领域。
通过将鱼精子置于极低温的环境中,可以有效延长其保存时间,并保持其生物学特性的稳定性。
超低温冷冻技术的应用为鱼类繁殖和育苗技术提供了重要支持。
在实际应用中,超低温冷冻技术可以通过不同的方法进行处理,如添加保护剂、控制冷却速度等。
这些方法可以有效降低鱼精子在冷冻过程中受到的损伤,提高其冷冻后的存活率和受精率。
通过超低温冷冻技术,可以将鱼精子保存时间延长至数年甚至更长,为鱼类种质资源的长期保存和利用提供了可能。
除了在鱼类繁殖中的应用,超低温冷冻技术还在鱼类基因组保护、繁殖生物学研究等领域发挥着重要作用。
随着技术的不断发展和完善,超低温冷冻技术在鱼类精子保存中的应用前景仍然十分广阔,将为鱼类资源保护和利用提供更多可能性。
2.2 超低温对鱼精子保存的影响超低温冷冻技术在鱼精子保存中起着至关重要的作用,但是超低温对鱼精子保存的影响是必须要深入了解和研究的。
种质资源的保存方法
种质资源的保存方法
种质资源的保存方法有以下几种:
1. 冷冻保存:将种子、胚胎、胚乳、芽等种质资源放入低温环境中进行保存,常见的冷冻保存方法包括液氮冷冻、超低温冷冻等。
2. 冷谷保存:将种质资源放入干燥的低温环境中保存,例如在干燥剂中保存。
3. 真空保存:将种质资源放入真空中进行保存,可以减少氧气的作用,减缓种质资源的老化和分解。
4. 无菌保存:将种质资源置于无菌条件下进行保存,防止微生物的污染和传播。
5. 酶处理保存:通过添加酶来保护种质资源,例如添加抗氧化酶来延缓氧化反应,添加脱水酶来抑制水分的作用等。
6. 组织培养保存:将种质资源进行组织培养,使其在人工培养基上生长和繁殖,以便长期保存。
7. 动物胚胎冻存:将种质资源保存在胚胎的形态中,通过冷冻来延长胚胎的存活时间,从而保存种质资源。
以上是常见的种质资源保存方法,不同的种质资源和保存目的可以选择适合的方法进行保存。
种子学吕世琦种子的超低温贮藏
种子超低温贮藏的优点
1. 超低温贮藏保存植物种子,选择适当的 冷冻容器后, 除了 30~60天补充一次液氮外, 不需要机械空调设备 及其它管理,节省了大量 的人力和物力 ,是一种省时、省工 、省费用的 种质保存新技术 2.可保持被保存种子的遗传稳定性 ,适合 于长期保存珍贵稀有种质
种子超低温贮藏的技术关键
不同的包装材料对种子的发芽率和生长势有不同的影响,有试验表 明,液氮保存种子使用聚乙烯塑料袋和铝箔包装材料好于牛皮纸包装。
包装材料 聚乙烯塑料袋 牛皮纸 铝箔
发芽率% 94.00a 78.00b 95.33a
生长势 76.69a 78.56a 77.53a
不同包装材料对超低温保存红小豆种子发芽率和生长势的影响
种子超低温贮藏的技术关键
3.适宜的种子含水量
植物种子液氮保存时都有一个适宜的含水量范围液 氮保存并非含水量越低越好 ,含水量降到一定极限则产 生脱水损伤 ,导致种子发芽能力伤失。有实验表明低含 水量 (7% 一9%)的种子保存 在液氮 中的 发芽率低于自然 风干种子(12% ~14%)的发芽率 。
2. 可以避免种质保存过程中的自然变异,保证种
质的遗传稳定性,同时有利于种质在国际间的交
换。
参考文献 1、张玉凤,董经纬,,蒋菊生,黄绵佳. 种子贮藏 的研究进展. 安徽农业科学,2007,35(19): 5855-5856. 2、赵跃平,燕平梅,邢勇,张小冰,王小丽. 作物 种子超低温保存方法的构建. 种子科技, 2012,09:27-30 3、文彬,种子贮藏生理学发展史概略.自然辨证法 通讯,2008,30(177):69-74 4、T. L. Malkin, A. Goddard, D. E. Heardetal.. Measurements of OH and HO2 yields from the gas phase ozonolysis of isoprene[J]. Atmospheric Chemistry and Physics, 2010, 10(3).
植物组织培养第十一章植物种质资源的保存
低 温 保 存 冰 箱
2021/2/3
•低温保存的基本特征:保存材料的定期继 代培养,不断繁殖更新; •基本措施是:控制保存材料所处的温度和 光照。 •延缓保存材料生长速度的另一项措施是: 改变培养基的成分。
• 注意!种质库要定期检查,保持清洁, 及时清除污染材料,并注意积累资料。
2021/2/3
• 解冻方法有: 快速解冻 和 慢速解冻
a、快速解冻法
是指将液氮中保存的材料直接投入到 37—40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻 的升温速度为500—750℃/min,大多数植 物材料可采用此种方法。
2021/2/3
b、慢速解冻法
• 将液氮中保存的材料先置于0℃低 温下解冻,再逐渐升至室温下进行 解冻的方法。 • 适宜细胞含水量较低的材料,如木 本植物的冬芽。
2021/2/3
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超低温冰箱
2、基本程序
基本程序包括:
预处理、冷冻处理、冷冻贮存、解冻 和 再培养。
(1)预处理
为保证茎尖在液N2处理后具有稳定且高的存活 率,需进行一定的预处理,或在冷冻防护剂存在 下进行预培养,或直接进行低温(-3—10℃)预 处理。
2021/2/3
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(2)冷冻处理
• 冷冻处理的方法有: 快速冷冻法;
慢速冷冻法; 预冷冻法; 干燥冷冻法。
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a、快速冷冻法
• 指将植物材料从0℃或者其他预处理温 度直接投入液氮中保存的方法,降温速 度为1000℃/min。 • 采用该法要求细胞体积小、细胞质浓厚、 含水量低、液泡化程度低的材料。
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Hale Waihona Puke (5)再培养• 指将已解冻的材料重新置于培养基 上使其恢复生长的过程。 • 再培养是检验冷冻保存效果或确定 保存方法是否合适的最根本方法。
种子玻璃化超低温冻存原理
种子玻璃化超低温冻存原理英文回答:Seed Vitrification and Cryopreservation.Seed vitrification is a cryopreservation technique used to preserve plant germplasm. It involves the removal of water from the seed, either by air drying or by dehydration using a cryoprotectant, and then cooling the seed to ultra-low temperatures (-196°C or below). This process prevents ice crystal formation, which can damage the seed.Cryoprotectants are chemicals that help to protect the seed from damage during the vitrification process. They work by replacing the water in the seed with a non-toxic solution that has a lower freezing point. This solution helps to prevent ice crystal formation and also reduces the amount of damage caused by dehydration.The vitrification process is typically carried out in acontrolled environment, such as a laboratory or a cryobank. The seed is first dehydrated using a cryoprotectant solution. The seed is then cooled to ultra-low temperatures using a specialized cooling device. The cooling rate must be carefully controlled to prevent ice crystal formation.Once the seed has been vitrified, it can be stored at ultra-low temperatures for long periods of time. The seed can be revived by warming it to room temperature and then rehydrating it.Seed vitrification is a powerful tool for the conservation of plant germplasm. It allows for the long-term storage of seeds, which can be used to regenerate plants in the event of a natural disaster or other emergency.中文回答:种子的玻璃化超低温冻存。
种质资源保存方法
种质资源保存方法种质资源保存是指通过某种方式将植物、动物或微生物的遗传信息保存下来,以供未来利用。
种质资源的保存对于农业、畜牧业、渔业、草业和微生物资源的研究和利用至关重要。
在世界各地,种质资源保存已经成为保护生物多样性和可持续发展的重要措施之一。
种质资源保存方法有多种,包括冷冻冷藏、冷冻干燥、显微冻干、液态氮冻存、遗传变异保存和活体保存等。
下面将对几种常见的种质资源保存方法进行详细介绍。
1. 冷冻冷藏:冷冻冷藏是一种经济、简单且广泛应用的种质资源保存方法。
它利用超低温条件将种子、胚胎、花粉或细胞等种质资源冷藏保存,减缓其新陈代谢过程,从而延长其保存寿命。
冷冻冷藏通常在零下18至零下196的冷库中进行。
由于在冷冻过程中可能出现冰结晶的问题,因此在保存前需要对种质资源进行预处理,如加入保护剂、脱水或将其包裹在冷冻保护胶中。
2. 冷冻干燥:冷冻干燥是一种将水分从种质资源中去除的方法。
它通过将种子或胚胎置于低温下,然后将其暴露在低压环境中,使水分以固体的形式从种质资源中转变为气态,达到干燥的效果。
冷冻干燥可以有效防止冰结晶损伤,同时减缓种质资源的新陈代谢速度。
冷冻干燥需要高度精确的设备和操作技术,因此在实践中相对较少使用。
3. 显微冻干:显微冻干是一种将种质资源在显微镜下进行冻干的方法。
它使用显微镜将种质资源放置在微小观察盒中,然后将其冷冻并暴露在低压环境下进行干燥。
显微冻干可以保持种质资源的原始形状和结构,避免了冻干过程中可能出现的形变和损伤。
这种方法主要适用于细胞和微生物等微小种质资源的保存。
4. 液态氮冻存:液态氮冻存是一种将种质资源置于极低温度下保存的方法。
液态氮的温度为零下196,是一种非常冷的物质。
液态氮冻存可以有效地保护种质资源,防止其发生任何生物、化学或物理变化。
液态氮冻存被广泛用于保存胚胎、细胞、酵母菌、昆虫等种质资源。
5. 遗传变异保存:遗传变异保存是指通过人为调控和利用种质资源的遗传变异来保存这些资源。
藻类种质超低温保存研究概况
藻类种质超低温保存研究概况
藻类种质超低温保存研究概况
藻类是一种重要的生物资源,它们在水生态系统中具有重要的作用。
随着环境污染和气候变化的加剧,藻类的种质资源正在受到越来越多的威胁。
因此,对于藻类种质的保存和利用已经成为一个重要的研究课题。
超低温保存是一种常用的保存方式,已经被广泛应用于植物和动物种质的保存。
最近,研究人员开始探索将其应用于藻类种质的保存。
本文将概述藻类种质超低温保存的研究进展。
首先,超低温保存的原理是通过降低样品的温度来减缓化学反应和生命体征的变化,以达到长期保存的目的。
超低温保存技术可分为液态氮冷冻保存和冷冻干燥保存两种。
液态氮冷冻保存是将样品置于液态氮中,使样品温度降至零下196℃以下,而冷冻干燥保存是在样品先冷冻后将冰晶去除,然后将样品置于低温干燥器中,使其温度降至零下50℃以下。
其次,藻类种质超低温保存的关键是选择合适的保护剂和保存方式。
目前,常用的保护剂包括甘露醇、蔗糖、乳糖和羟乙基淀粉等。
这些保护剂可以提高藻类细胞的抗冻性和耐干性。
对于超低温保存方式的选择,则需要考虑到藻类种质的特殊性。
藻类的细胞壁比较坚硬,需要采用冷冻干燥保存的方式。
同时,不同种类的藻类对于超低温保存的适应性也不同,需要针对不同种类的藻类进行相应的保存研究。
冷冻温度范围
冷冻温度范围冷冻温度范围是指物质被冷冻的温度范围,也是冷冻技术中的重要参数。
不同的物质在不同的冷冻温度下会呈现出不同的性质和变化。
在以下文章中,我们将探讨不同冷冻温度范围的应用和效果。
一、超低温冷冻(-150℃以下)超低温冷冻是指将物质冷冻到-150℃以下的温度范围。
在这个温度下,物质的分子运动几乎停止,从而达到了极低的活性。
超低温冷冻广泛应用于医学和生物科学领域,用于保存生物样本、细胞和组织等。
例如,胚胎冷冻技术可以延长胚胎的保存时间,为不孕症患者提供更多选择。
此外,超低温冷冻还可用于保存疫苗、血液和器官等生物材料,以提高其长期保存和使用效果。
二、低温冷冻(-80℃至-150℃)低温冷冻是指将物质冷冻到-80℃至-150℃的温度范围。
在这个温度下,物质的化学反应速率显著下降,可以有效地延缓物质的衰老和变质过程。
低温冷冻在食品加工和保鲜方面有广泛的应用。
例如,冷冻食品可以延长食品的保质期,保持食物的营养和口感。
此外,低温冷冻还用于保存生物样本、药物和化学试剂等。
三、常温冷冻(-18℃至-80℃)常温冷冻是指将物质冷冻到-18℃至-80℃的温度范围。
在这个温度下,大部分物质可以被冷冻并保持稳定的状态。
常温冷冻是最常见的冷冻技术,在日常生活和工业生产中有广泛的应用。
例如,冷冻食品、冷冻药物和冷冻化学试剂等都是常温冷冻的应用。
此外,常温冷冻还可用于保存生物样本、血液和生物制品等。
四、高温冷冻(0℃至-18℃)高温冷冻是指将物质冷冻到0℃至-18℃的温度范围。
在这个温度下,物质的水分会结成冰晶,从而导致物质的变质和腐败。
高温冷冻广泛应用于食品加工和冷藏领域。
例如,冰淇淋、冷冻蔬菜和冷冻肉类等都是高温冷冻的应用。
此外,高温冷冻还可用于冷藏食品、保鲜蔬果和冷藏药品等。
总结起来,冷冻温度范围的选择取决于物质的性质和应用需求。
不同的冷冻温度可以达到不同的冷冻效果,从而延长物质的保存时间和保持其质量。
冷冻技术在医学、食品加工和科学研究等领域都有重要的应用,为人们的生活和工作带来了便利和效益。
香蕉种质资源超低温保存技术研究进展
香蕉种质资源超低温保存技术研究进展李羽佳I许竹叶I唐文2许奕I王安邦I王笑一I李敬阳I唐粉玲I (1中国热带农业科学院海口实验站/海南省香蕉健康种苗繁育工程技术研究中心海南海口5711012中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101)摘要:香蕉是一种大型草本植物,多数品种没有种子或单性结实,通常以无性繁殖方式为主。
由于其生殖特征,难以通过传统杂交育种的方法来进行晶种改良,而多是采用体细胞突变的方法来选育新岛种。
因此,香蕉资源的多样性对香蕉新岛种改良尤为重要。
但由于常(低)温离体保存、田间活体保存方法易受到生物或非生物胁迫等影响因素限制费力、耗能,其种质资源的长期有效保存对育种工作而言极具挑战性,而超低温保存技术是一种长期有效的保存方法。
本研究主要针对香蕉超低温保存的不同方法,总结了影响香蕉超低温保存效果的几个关键因素。
关键词:香蕉;种质资源;超低温保存;PVSAdvance on the Ultra-Low Temperature Preservation Technology of Banana Germplasm ResourcesLI Yujia1,XU Zhuye1,TANG Wen2,XU Yi1,WANG Anbang1,WANG Xiaoyi1,LI Jiangyang1,TANG Fenling1 (1Haikou Experimental Station,Chinese Academy of Tropical Agricultural Science/Engineering TechnologyResearch Center of Health Banana Seedling Propagation of Hainan Province,Haikou571101,Hainan;institute of Tropical Bioscience and Biotechnology,Chinese Academy ofTropical Agricultural Sciences,Haikou571101,Hainan)Abstract:The banana is a large herb.Most of bananas are free of seeds or parthenocarpy,usually in the form of asexual reproduction.Due to its reproductive characteristics,it is difficult to improve the variety through traditional hybrid breeding methods,and somatic mutation methods are mostly used to select new varieties.Therefore,the diversity of banana resources is particularly important for the improvement of new banana varieties.However,the long-term efiective preservation of germplasm resources is very challenging for breeding work,because normal(low)temperature in vitro preservation and field living preservation are vulnerable to biotic and abiotic stress and other factors,which are laborious and energy-consuming.Ultra-low temperature preservation technology is a long-term effective preservation method.This paper mainly focused on the different methods of banana cryopreservation,and summarized several key factors affecting the ultra-low temperature preservation effect of bananas.Keywords:bananas;germplasm resources;ultra-low temperature preservation;PVS2021.2总第99期丨49香蕉(Musa spp.)是芭蕉科(Musaceae)植物,属于芭蕉属(Musa)中的真蕉组(Eumusa)。
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保护剂预处理
配制保护剂时,应该将其溶解在 培养基里,或者是溶解在有糖或 无糖的水中。
保护剂应当缓慢加入。 使用复合冰冻保护剂比单独使用
更为有效。
降温冰冻操作
快速冷冻法 慢速冷冻法 预冷冻法 干燥冷冻法 包埋脱水法 玻璃化法
1、快速冷冻法
指将植物材料从0℃或者其他预处理温度直接 投入液氮中保存的方法,降温速度1000℃/min。
材料的预处理
❖材料的预培养
❖材料的低 温预处理
冰冻保护剂预处理
常用的冷冻防护剂:多为小分 子中性物质,在溶液中易结合 水分子发生水合作用,使溶液 粘性增加,弱化水的结晶过程, 达到保护的目的。
所使用的冷冻保护剂 应具有以下特性:
◆分子质量较小 ◆易于与溶剂混合 ◆快速渗入细胞 ◆无毒或毒性小 ◆易洗脱
抑制外植体生长的离体保存方 法
降低温度:抑制生长最常见的方 法。
降低环境中的氧含量:低气压处 理、低氧分压处理
使用生长延缓剂:多效唑、矮壮 素
其他方法:
种子保存
• 优点:占用空间少,保存期较长,易干 燥,易包装和运输。
• 缺点:不适用于无性繁殖的植物种类, 随着时间的延长,种子的生活力逐渐下 降,同时易受到病虫害的侵袭。
物的细胞或组织经过防冻处 理, 在液氮超低温- 196℃ 下保存的方法。
超低温冰箱
离体植物材料的超低温冰冻保存技术
植物材料的选取 材料的预处理 冰冻保护剂预处理 降温冷冻操作 化冻操作 化冻材料的活力检测
材料的选择
常用于离体超低温保存的常用植 物材料
愈伤组织、悬浮细胞、原生质体 花粉和花粉胚 茎尖、胚、幼龄植株
2、慢速冷冻法
将处于0℃或其他预处理温度的材料以1— 2℃/min的降温速度从起始温度降到-100℃, 稳定1h后,投入到液氮保存或以此降温速度连 续降温至-196℃的方法。
c、预冷冻法
指将植物保存材料放入液氮前,需经过短 暂时间的低温锻炼的方法。
d、干燥冷冻法
将材料置于27—29℃烘箱内降低植物含水 量,再投入液氮中保存的方法。
(优选)超低温冷冻保存种质
种质保存
• 是指利用天然或人工创造的适宜环 境保存种质资源,使个体中所含有 的遗传物质保持其完整性,有高的 活力,能通过繁殖将其遗传特性传 递下去。
按保存类型分类
按保存类型分类可分为两种类型
非原生境保存
原生境保存
亚马逊热带雨林
常用的种质保存方法
种子保存 种植保存 离体保存 超低温冷冻保存
e包埋冻存法
(
f玻璃化法
玻璃化冻存:采用添加高浓度抗 冻剂, 使细胞内水分固化形成玻 璃态的超低温贮存方法 。
特点 设备简单 操作方便 冻存效果好
化冻操作
a、快速解冻法 指将液氮中保存的材料直接投入到37—40℃
温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度 为500—750℃/min。 b、慢速解冻法 将液氮中保存的材料先置于0℃低温下解冻, 再逐渐升至室温下进行解冻的方法。
种植保存
自然保护区,植物园,森林公园 缺点:占地多,需要大量的人力物力,
费用高,易受到自然灾害的影响
离体保存
优点:占用空间少,无病虫害以及自然灾害 的影响,不受季节限制。短时间可实现大量 植物的增殖,无病毒。
缺点:连续不断的继代培养可能会引起染色 体和基因型的变异。
种质资源超低温保存是将植
化冻材料的活力检测
• 检验化冻后材料的生活力和存活率的最 根本方法是再培养。
• FDA、TTC等染色的方法进行快速检测, 只能作为生活力的预测指标
超低温保存技术的发展
1973年科学家首次成功地超低温保存 了 胡萝卜悬浮细胞。
1993年,英国国家种质库采用超低温保存 离体的苹果种质进行再培养成功。
超低温保存种质技术的应用前景
• 悬浮细胞和愈伤组织的保存 • 生长点冷冻保存 • 胚状体(体细胞胚、花粉胚)冷冻保存 • 原生质体冷冻保存
小结
生物细胞的低温冻存是防止生物种质灭绝的 重要途径
低温冻存技术的应用取决于冻存技术和在培 养技术的成熟程度
根据细胞类型选择冻存和解冻方法是再培养 成功的前提