超声辅助提取厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的研究

摘要 :目的 研究超声辅助提取厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的方法 。方法 采用正交实验进行提取方法的研究 ,用 HPLC
法测定厚朴酚及和厚朴酚的含量 ,流动相为甲醇 - 水 - 冰醋酸 (85∶15∶0. 25) ,流速为 1. 0 m l/m in,检测波长为 294 nm , 柱温为 23℃。结果 用超声强度中等 、酒精浓度 100%、提取时间为 24 h以及料液比 1 ∶40的提取条件可很好地提取厚 朴叶中的厚朴酚及和厚朴酚 ,和厚朴酚 、厚朴酚以及总酚的提取率分别为 92. 15% , 70. 83%和 85. 27% ; RP - HPLC方法 较好 ,结果理想 。结论 研究得到了很好的超声辅助提取厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的方法 。
和
k1
71. 90 70. 25 75. 52 63. 91
厚
k2
79. 66 55. 34 49. 83 62. 26
朴
k3
46. 82 72. 79 73. 03 72. 21
酚 极差 R 32. 84 17. 45 25. 69 9. 95
得 因素主次 ACBD
率 最优方案 A2C1B3D3
厚
能温中下气 ,燥湿消痰 。厚朴是一种极为重要的中药材 。厚朴在 自然落叶 。提取用无水乙醇 、甲醇为分析纯 , HPLC甲醇为色谱
我国已有两千多年药用历史 ,用于治疗多个系统和器官的疾病 , 纯 , 厚朴酚 、和厚朴酚标准品由中国药品生物制品检定所提供 。
我国很多1. 2 仪器 JY96 - Ⅱ超 声 波 细 胞 粉 碎 机 ; 美 国 D IONEX 公 司
Key words: M agnolol; Honokiol; U ltrasonic extraction; RP - HPLC
中药材厚朴为木兰科植物厚朴 M agnolia offcina lis Rend et 1 器材与方法
W ils的干皮 、根皮或枝皮 ,性温味苦辛 ,无毒 ,入脾 、胃 、大肠经 , 1. 1 材料与试剂 厚朴叶取自湖北恩施市双河乡 ,为紫油厚朴的
B 料液比
1 ∶10 1 ∶20 1 ∶40
C
D
酒精浓度 ( % ) 提取时间 / h
100
8
75
16
50
24
1. 3. 3 色谱条件 色谱柱为 D iamonsil( TM ) C18 (250 mm ×4. 6
L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2008 VOL. 19 NO. 2
湖北省教育厅科研项目 (No. Q200729003) 作者简介 :刘晓鹏 (19712) ,男 (土家族 ) ,湖北建始人 ,现任生物资源保护与 利用湖北省重点实验室副教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物研究工作.
·278·
因素
1 2 3
A 超声强度及时间
弱 , 30 m in 中 , 30 m in 高 , 30 m in
Rend et W ils. M ethods The extraction method was op tim ized by orthogonal experiment and the contents were determ ined by HPLC. Results 100% ethanol, extracting 24 hours, ration of materials to liquid 1∶40 and m iddle intensity of ultrasonic was the op timal extracting method. The extracting rate ofM agnolol was 92. 15%. The extracting rate of Honokiol was 70. 83%. The RP HPLC for determ ining method was simp le, rap id and accurate. Conclusion The ultrasonic extracting method is p racticable for M agnolol and Honokiol in leaves of M agnolia offcina lis Rend et W ils.
360, 180, 90, 45, 22. 5, 11. 25, 5. 6 μg以及每毫升含
和厚朴 酚 标 准 品 440, 220, 110, 55, 27. 5, 13. 75,
6. 875μg的浓度梯度 ,分别吸取溶液 20 μl ,注入
HPLC仪测定 。以对照品浓度为横坐标 ,以峰面积 为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,进行线性回归 。 1. 3. 5 精密度实验 取厚朴酚 90 μg/m l以及和厚
a2标准品图谱 b2样品图谱 1. 和厚朴酚 2. 厚朴酚 图 1 HPLC色谱图
朴酚浓度为 110 μg /m l的对照品溶液 ,重复进样 6
表 2 超声提取正交实验结果
次 ,记录色谱峰面积 ,计算 RSD。 1. 3. 6 重复性实验 取索氏提取的一个样品 ,依法 平行测定 5次 ,记录厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面 积 ,计算 RSD。 1. 3. 7 稳定性实验 取索氏提取的一个样品 ,每隔 2 h进样 1 次 ,共进样 5 次 ,考察供试品溶液的稳 定性 。 1. 3. 8 回收率实验 取已测知含量的样品 5 份 ,分 别精密加入对照品适量 ,依 RP - HPLC法测定 ,计
86. 12
2
1
2
3
73. 57
55. 15
69. 06
2
2
3
1
73. 57
48. 41
71. 11
2
3
1
2
91. 85
65. 42
85. 38
3
1
3
2
53. 98
22. 49
46. 27
3
2
1
3
51. 50
65. 42
45. 88
3
3
2
1
34. 97
25. 85
32. 71
算回收率 , RSD。 2 结果 2. 1 HPLC结果及标准品线性关系 在前述色谱条 件下 ,厚朴酚与和厚朴酚与其他成分能够很好地分 离 (图 1) ;以对照品浓度为横坐标 ,以峰面积为纵坐 标 ,绘制标准曲线 ,进行线性回归 。厚朴酚浓度在 5. 6～360μg/m l,和厚朴酚浓度在 6. 875 ～440 μg / m l范围内与峰面积线性关系良好 。回归方程为 :厚 朴酚 Y = 0. 634 724X - 3. 027 91, R = 0. 997 75;和厚
朴具有抗菌 、抗病毒 、抗过敏 、影响胃肠活动 、肌肉松弛和中枢抑 60目筛 ,取适量用无水乙醇于索氏抽提器中提取至无色为止 ;用
制等作用 [ 2 ] 。
旋转蒸发仪浓缩后定容 ,取样用甲醇稀释 10 倍后进行 HPLC测
厚朴为落叶乔木 ,是重要的林业资源 ,多年生 ,生长周期长 ,一 定含量 , 3次重复 。
项目
实 1 验 2 号 3 4 5 6 7 8 9
因素
实验结果
和厚朴酚 厚朴酚提 总酚提
A
B
C
D
提取率 ( % ) 取率 ( % ) 取率 ( % )
1
1
1
1
83. 20
58. 62
77. 18
1
2
2
2
40. 95
27. 58
37. 67
1
3
3
3
91. 55
69. 39
子厚朴汤中都含有生药厚朴 ; 2005版《中国药典 》Ⅰ部中有包括 P680LPG型高效液相色谱仪 ; RE - 52型旋转蒸发仪 。
藿香正气水 、香砂养胃丸 、开胸顺气丸 、柴胡舒肝丸等二十多个常 1. 3 方法
用中成药的主要原料药均含厚朴 [1 ] 。现代药理学研究表明 ,厚 1. 3. 1 厚朴叶中酚类物质的全提取 取干燥的厚朴叶 ,粉碎 ,过
般要十多年才能供剥皮药用 ;现今厚朴药材的来源是伐树剥皮 ,为 1. 3. 2 厚朴叶中酚类物质的超声提取 采用正交实验 L9 (34 )进 掠夺式取材 ,不利于环境 。厚朴叶含有厚朴的主要有效成分 [3 ] ,但 行超声提取厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的研究 ,正交实验的因素
厚朴叶是否可以替代厚朴皮入药 ,需要进一步研究 。目前尚没有 水平表见表 1。超声处理后 ,进行提取 ,提取过程中进行磁力搅
用超声法提取厚朴叶中厚朴酚以及和厚朴酚的报道 。
拌 ,提取结束后过滤 、3 次淋洗 、浓缩及定容取样 ,用甲醇稀释后
本研究利用正交实验 ,进行了超声法提取厚朴叶中厚朴酚及 进行 HPLC测定含量 。
和厚朴酚的研究 。报告如下 。
表 1 因素水平
收稿日期 : 2007205225; 修订日期 : 2007207211 基金项目 :国家民委科研项目 (No. 07HB04) ;
( 1. Hubei Key L abora tory of B iolog ica l R esou rce Conserva tion and U tiliza tion, Hubei Institu te for N a tiona lities, Ensh i 445000, Ch ina; 2. S chool of B iolog ica l S cience and Technology , Hubei Institu te for N a tiona lities, Ensh i 445000, Ch ina) A bstra ct:O bjective To develop an ultrasonic extracting method for M agnolol and Honokiol in leaves of M agnolia offcina lis