无孔单分散亲水性强阳离子交换固定相的制备及其在蛋白质快速分离中的应用研究
亲水作用色谱分析吡啶离子液体阳离子
亲水作用色谱分析吡啶离子液体阳离子丁彩云 摘要：本研究建立了一种亲水作用色谱结合紫外检测分析吡啶离子液体阳离子的方法。
以哌啶离子液体为流动相添加剂，明显地改善了吡啶阳离子的分离效果，吡啶阳离子可在短 时间内实现良好的分离检测。
吡啶离子液体阳离子在亲水色谱柱上的保留行为符合亲水作用 色谱的特点, 并且其保留规律符合碳数规律。
采用以氨基甲酰基为功能基团的亲水相互作用 色谱柱，以 3.0 mmol/L N-甲基-N-丁基哌啶四氟硼酸盐(水/乙腈, 40/60, v/v) 为流动相， 以 215 nm 为紫外检测波长，在接近室温的 35°C 下进行分析。
N-辛基吡啶阳离子、N-己基 吡啶阳离子和 N-丁基吡啶阳离子可在 10 min 内完成分离、检测。
检出限(S/N=3)分别为 0.003、 0.005 和 0.017 mg/L，7 次测定保留时间和峰面积的相对标准偏差均小于 0.4%。
关键词 ：亲水相互作用色谱；紫外检测；吡啶阳离子；离子液体离子液体是由离子组成的，在室温或接近室温下呈液态的盐类[1, 2]。
其中阳离子一 般为对称性低的有机阳离子，阴离子一般为体积较小，对称性较好的无机弱配位阴离子或有 机阴离子。
根据离子液体阳离子的化学结构不同，离子液体可以分为咪唑类、吡啶类、季铵 类和季鏻类等。
与传统溶剂相比，离子液体具有很多独特的物理化学性质，如液程宽、不挥 发、溶解能力强、不可燃、热容量大、离子导电率高、萃取能力好、相稳定性好、 热稳定 性好、水稳定性好、酸碱稳定性好等、绿色环保等特点[3-6]。
因此，其已被广泛应用于分析 化学[7-12]、环境科学[13]、有机合成[14]及电化学[15-17]等领域和成为诸多领域的研究热点。
例如， 在液相色谱中离子液体可作为流动相添加剂[18-21]和固定相[22-25]等。
随着离子液体应用范围的 不断扩大，势必会导致其流失到环境中。
因此，越来越多研究者的关注离子液体会对环境造 成的污染有多大、在自然界中的降解程度怎么样以及离子液体的生物毒性又如何等问题。
作者姓名：卢滇楠
附件6作者姓名：卢滇楠论文题目：温敏型高分子辅助蛋白质体外折叠的实验和分子模拟研究作者简介：卢滇楠，男，1978年4月出生, 2000年9月师从清华大学化工系生物化工研究所刘铮教授，从事蛋白质体外折叠的分子模拟和实验研究，于2006年1月获博士学位。
博士论文成果以系列论文形式集中发表在相关研究领域的权威刊物上。
截至2007年发表与博士论文相关学术论文21篇，其中第一作者SCI论文9篇（有4篇IF>3），累计他引20次（SCI检索），EI收录论文14篇（含双收），国内专利1项。
中文摘要引言蛋白质体外折叠是重组蛋白质药物生产的关键技术，也是现代生物化工学科的前沿领域之一，大肠杆菌是重要的重组蛋白质宿主体系，截止2005年FDA批准的64种重组蛋白药物中有26种采用大肠杆菌作为宿主体系，目前正在研发中的4000多种蛋白质药物中有90%采用大肠杆菌为宿主表达体系。
但由于大肠杆菌表达系统缺乏后修饰体系使得其生产的目标蛋白质多以无生物学活性的聚集体——包涵体的形式存在，在后续生产过程中需要对其进行溶解，此时蛋白质呈无规伸展链状结构，然后通过调整溶液组成诱导蛋白质发生折叠形成具有预期生物学活性的高级结构，这个过程就称之为蛋白质折叠或者复性，由于该过程是在细胞外进行的，又称之为蛋白质体外折叠技术。
蛋白质体外折叠技术要解决的关键问题是避免蛋白质的错误折叠以及形成蛋白质聚集体。
目前本领域的研究以具体技术和产品折叠工艺居多，折叠过程研究方面则多依赖宏观的结构和性质分析如各类光谱学和生物活性测定等，在研究方法上存在折叠理论、分子模拟与实验研究结合不够的问题，这些都不利于折叠技术的发展和应用。
本研究以发展蛋白质新型体外折叠技术为目标，借鉴蛋白质体内折叠的分子伴侣机制，提出以智能高分子作为人工分子伴侣促进蛋白质折叠的新思路，即通过调控高分子与蛋白质分子的相互作用，1）诱导伸展态的变性蛋白质塌缩形成疏水核心以抑制蛋白质分子间疏水作用所导致的聚集，2）与折叠中间态形成多种可逆解离复合物，丰富蛋白质折叠的途径以提高折叠收率。
阳离子交换一步层析法纯化抗gp130单克隆抗体
收稿日期 : 2004 - 11 - 18; 修回日期 : 2005 - 01 - 20 基金项目 : 江苏省临床医学免疫重点实验室资助项目 (No. 200319 ) ;
苏州大学医学发展基金资助项目 (No. EE120032) 作者简介 : 马泓冰 (1967 - ) , 女 , 辽宁沈阳人 , 讲师 , 硕士生.
One2step pur if ica tion of monoclona l an ti2 body aga in st gp130 by ca tion exchange liqu id chroma tography
MA Hong2bing, ZHUAN G Yu2m ei, XU Y ing, YU J ian2 feng, L IU L in, L I W en2x iang, ZHAN G X ue2guang3
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
６ ０℃ 下搅 拌 反 应 １ ２ ｈ， 进 行 微 球 表面 环 氧 基 水解 ， 产 物用 超纯 水洗 涤后 真空 干燥 备用 。取 一定 量水解 后的 Ｐ Ｇ ＭＡ— Ｅ Ｄ ＭＡ微球 ， 在 碱性 条件 下加 入一 定 比 例 量 的烯丙基 缩 水 甘 油 醚搅 拌 反 应 ， 即制 得 烯 丙基
的表 面 修饰 ， 以进行 肝素 与抗 凝血 酶 Ｉ Ｉ Ｉ的动态 相互 作用 研 究 。虽然 Ｐ Ｇ ＭＡ基 质 在 生 化 分 离分 析 中
显示 了较好 的应 用 前 景 ， 但 其 骨 架 中 的疏 水 性 结 构
条件 下进 行反 应 ， 产 物 乙醇 、 超 纯 水 充 分 清洗 后 ，
丙酯（ Ｐ Ｇ ＭＡ） 的环 氧 基 团具 有 很 高 的反 应 活性 ， 环 氧基水 解 产生 的二 醇基 团可 提 高其 生 物 相容 性 ， 用 于生 物 大分 子 的快 速 分 离 与 分 析 。Ｚ ｈ ａ ｏ等 。 ¨ ’ 利 用 无孔 Ｐ Ｇ ＭＡ微 球作 为亲 和 色谱 基 质 ， 用 于 多 肽 的高效 筛选 ， 基 于其 低非 特异 性 吸 附 ， 获得 了高选择 性 的 多肽探 针 。Ｚ ｈ ｏ ｕ等 利 用 反胶 团溶 胀 法 制备 了超 大孔 Ｐ Ｇ ＭＡ微 球 ， 非 常适 于生 物大 分 子 的 快速
化 Ｐ Ｇ ＭＡ — Ｅ Ｄ ＭＡ微 球 。 配制 ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 焦 亚硫 酸 钠 溶 液 ， 用 浓 Ｎａ Ｏ Ｈ 溶液 调 节 ｐ Ｈ至 ５ ． ５ 。将烯 丙基 化 Ｐ ＧＭＡ － Ｅ Ｄ ＭＡ微 球分 散 于焦 亚硫 酸钠 溶 液 中 ， 在 氮 气 保 护 下 于 室温
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用刘吉众;黄嫣嫣;杨博;常建华;刘国诠;赵睿【摘要】Based on the needs of new packing materials for rapid and efficient separation, purification and analysis of biomacromolecules, a novel sulfonic acid-type strong cation exchange resin (SP-G-PGMA SCX resin) was prepared. The porous poly( glycidyl methacrylate) micro-spheres (PGMA) were selected as the matrix and glucose was used as the hydrophilic modifier to block the hydrophobic domains of PGMA beads. Glucose modification on PGMA beads improved the biocompatibility and reduced the non-specific adsorption so as to increase the recoveries of protein. The PGMA beads possess the porous structure and the relatively high specific surface area, which make the PGMA-based resins good permeability and high loading capacity. The application of such SP-G-PGMA SCX resin for the chromatographic separation of biomacromolecules was explored. Four basic proteins were baseline separated within 6 min with the column size of 100 mm × 4. 6 mm. The adsorption capacity of lysozyme on SP-G-PGMA SCX resin was determined as 39. 5 g/L. The results make the material promising for the separation and purification of biomacromolecules.%以具有双孔结构的聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球为基质,以葡萄糖进行表面亲水改性,制备了强阳离子交换色谱填料,并将其用于复杂生命体系中生物大分子的快速而高效的分离、分析与纯化.葡萄糖亲水改性增进了填料的生物相容性,提高了蛋白质样品的回收率；双孔结构及较高的比表面积赋予填料良好的柱渗透性和样品负载量.以标准蛋白质为样品,考察了该填料对生物样品的分离性能.以100mm×4.6 mm的色谱柱分离4种蛋白质,在6 min内实现了基线分离；以溶菌酶为样品,填料的吸附容量为39.5 g/L,在蛋白质快速分离纯化分析中显示了良好的应用前景.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)004【总页数】7页(P310-316)【关键词】强阳离子交换;固定相;聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球;葡萄糖改性;蛋白质分析【作者】刘吉众;黄嫣嫣;杨博;常建华;刘国诠;赵睿【作者单位】中国科学院化学研究所,中国科学院活体分析化学重点实验室,北京100190【正文语种】中文【中图分类】O658随着生命科学和生物工程技术的飞速发展，复杂生命体系中活性生物大分子的分离、分析和纯化已成为分析化学和分离科学面临的一个重要任务［1，2］。
一种单分散、均一单核担载的氧化硅包裹疏水纳米晶的制备方法[发明专利]
![一种单分散、均一单核担载的氧化硅包裹疏水纳米晶的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/dc17def7fc4ffe473268ab60.png)
专利名称：一种单分散、均一单核担载的氧化硅包裹疏水纳米晶的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：陈风,步文博,施剑林
申请号：CN200910198408.3
申请日：20091106
公开号：CN102049052A
公开日：
20110511
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提出一种单分散、均一单核担载的氧化硅包裹疏水纳米晶的制备方法。
与已有合成方法相比，本发明(1)通过有效控制SPION的单分散性，获得高产率的单一内核担载SPION @ SiO纳米核壳结构；(2)采用微量注射泵精确控制TEOS的引入速度，不仅有效地避免了SiO的均相形核和颗粒间的团聚问题，而且提高了制备方法的可重复性。
所制备的单分散功能复合纳米核壳结构在核磁共振成像和未来的医药诊治领域将具有良好的应用前景。
申请人：中国科学院上海硅酸盐研究所
地址：200050 上海市定西路1295号
国籍：CN
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原子转移自由基聚合技术用于以单分散树脂为基质的温敏色谱固定相的制备及性能评价
中 ， 温下 反应 １ ， 应结 束 后分 别用 水 、 室 ２ｈ 反 乙醇 和
丙酮 充分洗 涤 ， ５ 在 ０℃真 空干燥 得到 温敏 色谱 固定 相 。合 成路 线见 图 １ 。
验结果 表 明 ， 该填 料 具 有很 好 的 色谱 分 离 性 能 和温
图 １ 温 敏 色 谱 固 定 相 的合 成 路 线
Ｆｉ ｇ．１ Ｓｙ ｔ ｅｓ ｓ ｒ ｕｔ ｈ ｈ ｒ ｏ ｓ ｎ ｉ ｉ ｎ ｈ ｉ ｏ ｅ ｏｆ ｔ ｅ ｔ ｅ ｍ － ｅ ｓ ｔ ｖｅ ｃ ｏ ａ ｏｇ ａ ｉ ｔ ｔ ｏ ｒ ｈａ ｅ ｈｒ ｍ ｔ ｒ ｐｈ ｃ ｓ ａ ｉ ｎａ ｙ ｐ ｓ
到一定 的 限制 。 本 文 以 自制 的 ６ ０ ｔ 单分 散 Βιβλιοθήκη 孑 交 联 聚 甲基 ． ｍ ｘ Ｌ
丙 烯 酸 环 氧 丙 酯 一 二 醇 二 甲 基 丙 烯 酸 酯 乙
（ 。Ａ 。 ） Ｐ 厂 微球 为基 质 ， Ｅ 采用 Ａ Ｒ Ｔ Ｐ方 法 制 备 了一
种新 型温 敏色谱 填料 ， 并对 聚合反 应过 程 、 体 的转 单
乙醇 和丙酮 充分洗 涤 ，０℃ 真空 干燥 。 ５ １ ２ ４ 温敏 色谱 固定相 的合 成 ． ． 取 ２ ０ｇＯ 溴异 丁酰 溴和 ３ ５ｇＮＩＡ 加 入三 ． ｔ － ． Ｐ Ｍ 颈瓶 中 ， 通氮 气 进 行 ３次 抽 真 空 除 氧 ， ３ 将 ０ｍＬ除 去氧 的水一 甲基 甲酰 胺 （ ： ，／ ） 入 三 颈瓶 中 ， 二 １ １ｖｖ 注 待搅拌 均 匀 后 ， 把 新 配 制 的 催 化 体 系 （ ． ４ 再 ０ １４ｇ
取 ２ ０ｇ水 解 微 球 加 到 装 有 １ ． ５ｍＬ干 燥 Ｔ Ｆ Ｈ
一种新型两性离子亲水作用色谱固定相的制备及其色谱性能评价
摘 要 ：设计 、合成 了一种新 型两性离 子亲水作用色谱 固定相 ，并采用傅里 叶变换红外分析光谱 和元 素分
析对该 固定 相进行了表征 ，结 果表明该 固定相制备成 功。以典 型极 性化合物糖类化合物 的混合物 为分析物 ，分
别 考察 了流动相 中有机相 乙腈 的含量和柱温 对固定相保 留行 为的影 响 ，结果 表明糖类化合物在本文所制备 的固
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６１０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｎｏｖｅｌ ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＩＬＩＣ）ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ
定 相上的保 留行为符合典型 的 ＨＩＬＩＣ保留特征 。
关 键 词 ：两性 离子固定相 ；亲水作用色谱 ；保留行为 ；糖类化合物
中 图分 类 号 ：０ ６５７
文 献 标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ： １６７１—０４６０ （２０１８）０８—１５４９—０４
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｚｗ ｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ Ｐｈａｓｅ
糖 的分 析 与分 离【２ Ｊ。近 年来 ，由于它对 反 相液 相 色 含量与柱温来考察糖类化合物在该 固定相上的保留
谱 （ＲＰＬＣ）的补 充 作 用 ，其 在 分 离 极 性化 合 物 如 行 为 ，有望 在 极性 物 质 的分离 分析 领域 发 挥潜 在 的
单分散亲水两性离子交换树脂的制备及其在生物大分子分离中的应用
Ｈ ｋ ａ ｏＵ ｉ ｒ ｔ。Ｓｐｏｏ０００ １ ， ａａ ） ｏｋ ｉ ｎｖ ｓｙ ａｐｒ ６ － ０ Ｊｐｎ ｄ ｅｉ ８
摘要
采用分散聚合与溶胀聚合相结合 的方法及 高分子溶液致孔技 术 ， 成功地制备 了粒径为 ５０ ． ｍ大孔和
超大孔结构的单分散亲水性交联 聚甲基丙烯酸 环氧丙酯 树脂 ，并进行 了结 构表征．将 该树脂经胺 化后再 与
能， 尤其对提高色谱柱效 、 增强 色谱柱 的穿 透性 和保 持生 物大 分子 活性非 常有 利．目前 ，无论 是 Ｕ ｅｓ ｄ】 明的“ 步种 子溶 胀聚合 法 ” ｇｌａ ‘ ｔ 发 两 制备 的各 种类 型 聚 合 物微 球 ¨’Ｊ 还 是 改 进 的 “ 步种 子 溶 ， ＂ 一 胀聚合法” 制备的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球 ， 都采用线性 聚苯 乙烯为种子， 但聚苯乙烯种子 疏水 性强 ， 生 物大 分子会 产 生不 可逆 吸附 ． 对 本文 在对 单 分 散树 脂研 究 ¨ 埔 的基础 上 ， 用 分 散 聚合法 制 备 了亲 水性 聚 甲基 丙 烯 酸环 氧 丙酯 采
种 子 和 “ 步种 子 溶 胀 聚 合 法 ” 备 了 ５０ ｍ 大 孑 单 分 散 亲 水 性 的 交 联 聚 甲基 丙 烯 酸 环 氧 丙 酯 一 制 ． Ｌ （ 。 。 微球 ， 一 步 以该微球 为 基质 并 采 用 新 的 化学 改 性 方 法 制 备 了一 种 强 阴一 阳两性 离 子交 Ｐ ） 进 强 换 色谱 填料 （ ｗｔ ｒｎｃｅｃａｇ ａｋ ｇ） Ｚ ｉｅｉ ｉ ｘｈｎｅｐｃｉ ｓ ．详 细 考察 了该 填料 对 标 准 蛋 白分 离性 能及 流 动 相 中有 机 ｔ ｏ ｎ 溶 剂 、流速 和 ｐ Ｈ对 蛋 白保 留 的影 响 ．实验 结果 表 明 ， 填料 是一 种性 能优 异 的两性 离子 交换 填料 ， 该 适 合 于生 物大分 子 的快速 分离 纯化 ．
亲水作用电色谱用于吡啶类化合物的分离
摘要：采用亲水电色谱对强极性吡啶类化合物进行了分离。以亲水性的强阳离子交换填料作固定相，乙腈#磷酸#三 乙胺缓冲液作流动相，考察了流动相中有机改性剂含量、离子强度及流动相?@ 对吡啶类化合物保留行为的影响。 结果表明，在亲水电色谱模式下，流动相中有机改性剂含量对吡啶类化合物保留有较大影响，随着流动相中乙腈含
#"$ 流动相的离子强度对被测物保留行为的影响 流动相的离子强度对吡啶类化合物保留行为的
影响如图@所示。实验结果表明，吡啶类化合物的 保留随着流动相离子强度的增加而减小。这一方面 是因为流动相离子强度的增加导致电渗流减小，另 一方面的原因是吡啶类化合物与固定相离子交换作 用随着流动相离子强度的增大而减小。 #"% 6; 对吡啶类化合物保留的影响
流动相的制备：将适当体积的乙腈、B-+*储备 液和二次去离子水混合。运行前将流动相超声脱气
@0’E)。 !"$ 电色谱柱的制备
电色谱柱的填充方法参照文献［F］。电色谱柱 总长为@G%’，填充长度@0%’。实验前先用流动相 平衡=0’E)，然后在电泳仪上用电压平衡@<。 !"% 分离条件
若无特殊说明，电色谱实验中分离电压为 /0 &H，进样为电动进样（.&HI.5），温度设为@. J， 检测波长为@.?)’。
流动相的!" 值决定吡啶类化合物是以分子还 是离子化 形 式 存 在，因 而 对 其 保 留 产 生 影 响。 图 = 给出了吡啶类化合物的保留行为随流动相!" 的变 化趋势。由图=可见，随着流动相!" 值的升高，大 多数吡啶类化合物的保留相应增强。这是因为我们 所考察的吡啶类化合物的 !"( 值在?OA"AO.内。 当 流 动 相 的!"值 较 低 时 ，吡 啶 类 化 合 物 处 于 质 子
色谱固定相的制备一
图1 季铵化AGE-ST共聚乳胶的制备
采用种子溶胀聚合法制备PS-DVB微球。取2.5 g PS-DVB微球, 置于烧杯中, 依次加入10 mL无水 乙酸、1 mL二氯甲烷, 溶胀30min, 加入质量分数为92.5%的浓硫酸磺化6 min, 用1 mol/L冰硫酸 溶液终止反应, 抽滤、洗涤至流出液为中性, 烘干。将磺化的PS-DVB微球置于50mL圆底烧瓶中, 加入30 mL；季铵化AGE-ST共聚乳胶, 磁力搅拌4 h, 然后加入150 mL无水乙醇进行沉淀、抽滤、 洗涤, 重复5次;制得季铵化AGE-ST共聚乳胶附聚PS-DVB微球。将附聚后的微球加入100 mL三口烧 瓶中, 分别于60℃与8% (质量分数) BDDGE水溶液和4% (质量分数) MA水溶液反应1 h.
● 2.硅胶整体材料的研磨:调整球磨机的研磨条件, 将打碎的硅胶整体材料研磨2 h后, 收 集硅胶颗粒, 用水、乙醇和甲醇分别离心洗涤2次后在60 ℃真空干燥24 h。
● 3.硅胶颗粒的Tris处理:称取5.4 g Tris溶于150 mL水中, 加入6.0 g研磨离心洗涤干 燥后的硅胶颗粒, 加入乙酸调节溶液的pH为9;然后将其放在155 ℃干燥箱中反应10 h, 待反应完毕后,用水和甲醇分别离心洗涤硅胶颗粒2次, 最后在70 ℃真空干燥8 h。
3.核壳型色谱固定相的制备
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
∗通讯联系人. Ｔｅｌ:(０１０)６２５５７９１０ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｚｈａｏｒｕｉ＠ ｉｃｃａｓ. ａｃ. ｃｎ. 基金项目:国家自然科学基金项目(２１０７５１２５ꎬ２１１０５１０５) . 收稿日期:２０１２ ￣１２ ￣０３
㊀ 第４ 期
刘吉众ꎬ等:高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
刘吉众１ ꎬ㊀ 黄嫣嫣１ ꎬ㊀ 杨㊀ 博２ ꎬ㊀ 常建华２ ꎬ㊀ 刘国诠１ ꎬ㊀ 赵㊀ 睿１∗
(１ . 中国科学院化学研究所ꎬ 中国科学院活体分析化学重点实验室ꎬ 北京 １００１９０ꎻ ２ . 西安交大保赛生物技术股份有限公司ꎬ 陕西 西安 ７１００５４) 摘要:以具有双孔结构的聚甲基丙烯酸环氧丙酯( ＰＧＭＡ) 微球为基质ꎬ以葡萄糖进行表面亲水改性ꎬ制备了强阳离 子交换色谱填料ꎬ并将其用于复杂生命体系中生物大分子的快速而高效的分离㊁ 分析与纯化ꎮ 葡萄糖亲水改性增 进了填料的生物相容性ꎬ提高了蛋白质样品的回收率ꎻ双孔结构及较高的比表面积赋予填料良好的柱渗透性和样 蛋白质ꎬ在 ６ ｍｉｎ 内实现了基线分离ꎻ以溶菌酶为样品ꎬ 填料的吸附容量为 ３９������ ５ ｇ / Ｌꎬ 在蛋白质快速分离纯化分析 中显示了良好的应用前景ꎮ 关键词:强阳离子交换ꎻ固定相ꎻ聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球ꎻ葡萄糖改性ꎻ蛋白质分析 中图分类号:Ｏ６５８㊀ ㊀ ㊀ 文献标识码:Ａ㊀ ㊀ ㊀ 文章编号:１０００ ￣８７１３(２０１３)０４ ￣０３１０ ￣０７ 品负载量ꎮ 以标准蛋白质为样品ꎬ考察了该填料对生物样品的分离性能ꎮ 以 １００ ｍｍ ˑ ４������ ６ ｍｍ 的色谱柱分离 ４ 种
[１７ꎬ１８]
１ . ２㊀ ＰＧＭＡ 基质强阳离子交换填料的制备
丙酯( ＰＧＭＡ) 的环氧基团具有很高的反应活性ꎬ 环 氧基水解产生的二醇基团可提高其生物相容性 用于生物大分子的快速分离与分析ꎮ Ｚｈａｏ 等 性的多肽探针ꎮ Ｚｈｏｕ 等
活性蓝F3GA固载的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯亲和色谱填料的制备与应用
活性蓝F3GA固载的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯亲和色谱填料的制备与应用卜春苗;王有贤;龚波林;阎超【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2008(26)3【摘要】以3.0 μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质,与三嗪染料活性蓝F3GA(Cibacron Blue F3GA)反应,制备出一种固定化染料聚合物高效亲和色谱填料.考察了应用该填料时流动相中的盐离子浓度、有机溶剂及流速等对牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(Lys)保留行为的影响.实验结果表明,该染料亲和填料具有良好的色谱性能.利用前沿色谱法测定了染料与溶菌酶之间的表观解离常数为5.26×10-5 mol/L.使用该填料成功地从鸡蛋清和小牛血清中分别分离纯化了Lys和BSA,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示Lys和BSA的纯度分别为95%和92% .【总页数】6页(P378-383)【作者】卜春苗;王有贤;龚波林;阎超【作者单位】宁夏大学能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;上海通微分析技术有限公司,上海,201203;上海通微分析技术有限公司,上海,201203【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.以单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质的亲水性排阻色谱固定相的合成及其在生物大分子分离中的应用 [J], 龚波林;王超展;王骊丽;耿信笃2.单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的制备及亲合纯化伴刀豆球蛋白-A [J], 龚波林;耿信笃3.单分散非多孔交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球作为亲和色谱载体的研究 [J], 余晓;赵睿;方梅;熊少祥;郭予含;苏天升;刘国诠4.单分散聚甲基丙烯酸环氧丙酯的制备及影响因素研究 [J], 马平;朱鋆珊;田红丽5.辛巴蓝F3G-A固载的交联聚乙烯醇作为亲和色谱填料 [J], 袁璟;阎虎生;程晓辉;何炳林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用
强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用
卜春苗;朱金霞;龚波林
【期刊名称】《宁夏工程技术》
【年(卷),期】2006(005)001
【摘要】为了进一步考察流动相中盐种类、体积流量及有机溶剂等对蛋白质保留的影响,采用新的化学方法将3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂改性为一种新型的强阳离子交换色谱填料;实验分析了该填料对标准蛋白的分离性能,有机溶剂、流动相盐种类和体积流量等对蛋白质保留的影响.实验结果表明:当体积流量为3 mL/min时,在1.5 min线性梯度时间内可快速分离四种标准蛋白质,且蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律.该填料的动力学吸附容量为7.13 mg/mL,将其应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶和猪心中细胞色素-C,可取得较好的效果.
【总页数】5页(P60-64)
【作者】卜春苗;朱金霞;龚波林
【作者单位】宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,生物技术重点实验室,宁夏,银川,750021
【正文语种】中文
【中图分类】TQ323;Q503
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5.无孔单分散亲水性中强阳离子交换树脂的制备及其在蛋白质快速分离中的应用研究 [J], 常璇;朱金霞;杨春霞;卜春苗;龚波林
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亲水单分散聚合物基质强阴离子色谱固定相的制备及应用
亲水单分散聚合物基质强阴离子色谱固定相的制备及应用杨春霞;龚波林【摘要】以自合成6.0μm大孔单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球为基质,采用化学键合法制备了季铵型强阴离子色谱填料,该填料具有良好的色谱性能.选用6.0 mmol/L Na2CO3+5.5mmol/L NaHCO3混合液作淋洗液,在流速为1.0mL/min下,可以很好地分离常见的6种无机阴离子(F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、SO24-)、4种低碳链酸(甲酸、乙酸、一氯乙酸、草酸)以及甲酸、乙酸和一些无机阴离子的混合物.考察了淋洗液种类、pH值和有机溶剂对6种无机阴离子分离的影响.在最佳色谱条件下,6种无机阴离子在一定浓度范围内具有良好的线性关系和低的检出限.采用该方法对本地自来水进行测定,4种离子可在22 min内完全分离,各离子的加标回收率为96.4％～100.6％.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(033)006【总页数】6页(P672-677)【关键词】单分散树脂;强阴离子色谱;无机阴离子;有机酸;自来水【作者】杨春霞;龚波林【作者单位】农业部枸杞产品质量监督检验测试中心,宁夏银川750002;宁夏大学能源化工重点实验室,宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】O657.63;TQ425.222新型阴离子色谱填料的出现，有效解决了长期以来多种痕量阴离子分析的难题，成为阴离子分析的最有效方法。
目前，国外普遍使用的是美国戴安公司生产的AS系列和日本Toyosoda公司生产的TSKIC－Anion－PW及SW等产品，而国内在离子色谱柱填料生产领域相对落后。
因此，开发新型高性能分离柱成为离子色谱领域的研究重点。
阴离子色谱交换填料主要有无机硅胶和有机聚合物基质两种。
常用的键合硅胶基质离子色谱填料的pH值使用范围窄，化学稳定性较差［1］。
Heinemann等［2］将聚乙二胺－丁二烯涂敷于硅胶、氧化铝等基质表面制成强阴离子交换剂并对6种无机阴离子进行了较好的分离，但其制备条件苛刻，聚合产物较难得到。
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少分离时 间 来 保 持 其 生 物 活 性 及 构 型 是 非 常 必 要 的［ & ］， 为此需 要 发 展 快 速 的 高 效 液 相 色 谱 固 定 相。 与多孔型固定相［ ! ］相 比， 无孔型固定相最主要的特 点是， 被分离的生物大分子不会进入颗粒内部， 只在
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可用于蛋 白 质 和 多 肽 等 生 物 大 分 子 的 快 速 分 离 分 。
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& & 目前， 国内外制 备 无 孔 交 联 单 分 散 微 球 的 方 法 仍 然 沿 用 !"#$%&’ 等 发明的 “两步种子溶胀聚 合” 的方法。该 方 法 一 般 是 以 无 乳 聚 合 法 制 备 的 ( （ )* ） 胶乳为种 ! ( 左右粒度 均 匀 的 线 性 聚 苯 乙 烯 子， 首先用不溶于水的有机化合物活化， 然后再用由 单体、 交联剂和稀释 剂 等 组 成 的 乳 液 进 行 第 二 步 溶 胀并聚合。总之， 该方法制备过程较繁琐、 合成条件 苛刻， 由于种球至少需要两步溶胀， 致使最终微球的 粒径控制 较 困 难。 按 照 “ 两步种子溶胀聚合” 法合 成的 无 孔 单 分 散 聚 合 物 微 球 主 要 有 交 联 聚 苯 乙 烯
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无孔单分散亲水性强阳离子交换固定相的制备及其 在蛋白质快速分离中的应用研究
! 朱金霞 & ， , 卜春苗 & ， , 龚波林 & ，
（ & ) 宁夏大学能源化工重点实验室，宁夏 银川 -)""!& ；! ) 宁夏大学生物技术重点实验室，宁夏 银川 -)""!& ） 摘要： 采用分散聚合法制备小颗粒种子及 “ 一步种子溶胀聚合” 法成功地制 备 了 粒 径 为 $. " ! - 的 无 孔 单 分 散 亲 水 性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂， 其表面经水解、 环 氧 化、 再 水 解 后 与 氯 磺 酸 反 应， 制备了一种新型的强阳离子 交换色谱填料 （ :9; ） 。详细考察了该填料对标准蛋白 质 的 分 离 性 能 及 流 动 相 中 盐 的 种 类、 有 机 溶 剂、 流速等对蛋 白 质保留的影响。实验结果表明， 在流速为 % -< = -.0 时， 采用线性梯度洗脱， &. " -.0 内可快速分离 % 种标准蛋白 质， 蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律。将 :9; 应用于 快 速 纯 化 鸡 蛋 清 中 的 溶 菌 酶 和 猪 心 中 的 细 胞 色 素 +9 ， 取得了较好的效果。 关键词： 无孔单分散亲水性聚合物微球； 强阳离子交换色谱； 蛋白质分离 >#)+, , 文献标识码： ? , , 文章编号： &""" ++-&$ （ !""# ） "! +"&!’ +"#, , 栏目类别： 研究论文 中图分类号：
固定相的表面上进 行 传 质 交 换， 消除了停滞流动相 传质带来的 峰 加 宽， 提高了柱效及分离效果 析
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， 分析纯 （ 上海试 四 赫 维 化 工 有 限 公 司 ） ； 腈 （ 1A?B ） 十二烷 基 磺 酸 钠 （ *4* ） ， 化学纯 （汕头光华化工 ， 化 学 纯， 醇 解 度 为 ’’ C （ 天津 厂） ； 聚乙烯醇 （ )>1 ） 大学化工实 验 厂 ） ； 氯 磺 酸， 化学纯 （上海金山亭新 化工试剂厂） ； 其他 试 剂 均 为 分 析 纯， 实验用水为二 次蒸馏水。 肌 红 蛋 白 （ +=/ ， 来源于马心） ； 核糖核 来源于牛红细 胞） ； 细 胞 色 素 85 酸酶 （ DB&E#81 ， （ 5=%85 ， 来源于马心） ； 溶菌酶 （ F=E ） ； 牛 血清 白蛋白 （ ?*1 ） ； （ ! 81(= ） ； 卵清蛋白 （ @>1 ） 均购 !8 淀 粉 酶 自美国 *,"(& 公司。 ! ! #" 分散聚合法 制 备 单 分 散 小 颗 粒 线 性 低 分 子 质 量的聚苯乙烯种子 & & 在 !+* (F 圆 底 烧 瓶 中 加 入 (! (F *% ， 再加入 *, !" " 1A?B 、 (, + " )>) ， 反应介质为无水乙醇和水 （ 体积比为 )- ( ， 总体积为 (#+ (F ） ， 超声混 匀， 溶解 后通氮气除氧， 于 %* G 恒 温 水 浴 中 搅 拌 反 应 !" ; 。 除去溶剂， 用无水乙醇洗涤 数 次， 用 *, ! C *4* 溶 液 将其转移至锥形瓶中。用扫描电子显微镜观察所制 备的线性聚苯乙烯 （ )* ） 种子粒径 为 *, .+ ! ( ， 分散 系数为 *, *! 。 ! ! $" 无孔单分散 交 联 聚 甲 基 丙 烯 酸 环 氧 丙 酯 树 脂 的合成 & & 在含有稳定剂 和 表 面 活 性 剂 的 水 相 介 质 中， 用 34+1 和 ?)@ 于 室 温 下 将 )* 种 被乳化 的 0+1 、 子溶胀 ’ ; ， 并用显微镜观察有机单体是否被种子 吸收完全。当溶胀完毕时， 通氮气 !* (,- 后迅 速升 温至 %* G ， 并于 %* G 下搅拌 反 应 !" ; 。 产 物 用 砂 心漏斗抽滤， 分别用大量热的蒸馏水和甲醇洗涤， 真 空干燥， 即可制得 ) 0+1 2 34+1 。 ! ! %" " #$ % & ’($ % 的化学改性 & & 将 #, * " ) 0+1 2 34+1 （ "） 加至 (** (F 稀酸中， 在 水浴中加 热 搅 拌 反 应 (* ; 。 反 应 产 物 先 用 水 洗 # 遍， 然后浸泡于蒸 馏 水 中 过 夜， 再 用 水 洗 涤， 真空干 燥， 即得水解的微球 （ #） 。将水解的 微球 （ #） 悬浮 于由二甲亚砜和 B&@H 组 成 的 混 合 溶 液 中， 室温下 搅拌 ( ; ， 然后加入 # (F 环氧氯丙烷， 在 %* G 水浴 即得环氧化的微球 （ $） 。将 中加热搅拌反 应 " ; ， 干燥环氧化的微球 （ $） 进 一 步 用 稀 硫 酸 水 解， 即可 得微球 （ %） 。将干燥 的 微 球 （ %） 加 入 到 !( (F 乙 酸乙酯中， 超声分散后， 在 / !* G 冰盐浴条件下， 缓 慢滴加 !( (F 氯磺酸 8 乙酸 乙 酯 （ 体积比为 (- (） 混 合物， 搅 拌反应 ! ; 。产物 用砂 心漏斗 抽滤， 再用 大 量水、 丙酮和乙醇 反 复 洗 涤， 真 空 干 燥， 即可得到新 型的 无 孔 强 阳 离 子 交 换 色 谱 填 料 （微球 （ &） ， *56 ） 。合成路线见图 ( （ 其中 ) 代表聚合物） 。