试验考试复习内容(细菌鉴定技术)1精选ppt

【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU 培养基，35ºC，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加 吲哚试剂。
【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红
色为阳性；培养基变红脲酶阳性。
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M：动力 I：吲哚
U：尿酶
大肠埃希菌MIU（＋＋－）
普通变形杆菌MIU整（理 ＋＋＋）
细菌鉴定技术
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常用细菌生化反应
• 糖发酵试验 • 吲哚试验（靛基质试验） • 甲基红试验 • V-P（Voges-Proskauer）试验 • 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验 • 克氏双糖铁（KIA）复合试验 • 动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
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1.糖发酵试验
【原理】：
– 各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖 （苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有 的分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来 鉴别细菌。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水 中，35ºC，24-48h，加入VP试剂甲液和乙液各1滴，充分摇动， 观察。
【结果】：红色为阳性，若为阴性应再培养4h观察，仍无红色者
为阴性。大肠埃希菌阴性，产整理气肠杆菌阳性。
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5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验
【原理】：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸 盐为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬 酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿 色变为深蓝色为阳性，培养基不变色（绿色）为阴性。
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• 请记住：
没产H2S
大肠埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）
上层变黄整理 下层变黄
产气
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I：吲哚，M：甲基红，Vi：VP，C：枸橼酸盐
大肠埃希菌IMViC试验（＋＋－－）
右侧为对照（－－＋＋）
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伤寒沙门菌KIA（K A－＋）MIU（＋－－）
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沙门菌IMViC试验（－＋－－）
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• 血浆凝固酶试验：
• 1）原理：金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶 （凝聚因子），可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为 不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成 凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中的血浆发生 凝固。
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志贺菌KIA（K A－－）MIU（－－－）
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志贺菌IMViC试验（－＋－－）
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肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋）
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肺炎克雷伯菌IMViC试验（－－＋＋）
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产气肠杆菌IMViC试验（－－＋＋）
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变形杆菌KIA（K A+ + ）MIU（+ +/- +）
【结果】：在培养物液面上层呈玫瑰红色为阳性，不
变色者为阴性。大肠埃希菌为阳性，伤寒沙门菌为
阴性。
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3.甲基红试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一 步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下， 加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄 糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH 在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。
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双糖铁培养基
标准管
痢疾杆菌 没产气 KA－ － 斜面：K 红色 没产H2S 底层：A 黄色
产H2S
伤寒杆菌 大肠杆菌 整理KA － ＋ AA＋ －
产气
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7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示 剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加 入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌 能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细 菌沿穿刺线扩散生长。
3）分解糖产酸产气，除培养基顔色变化外，倒管中还有 气泡，以“⊕”表示。大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产 酸产气，伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳 糖。
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2.吲哚试验（靛基质试验）
【原理】：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中 的色氨酸产生吲哚，与吲哚试剂形成红色化合物。
【方法】：大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白 胨水培养基中，35ºC18-24h后，加入吲哚试剂数滴， 静置分层，观察结果。
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6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底 层穿刺，上层斜面划线），35ºC，24h，观察。
【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和 底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不 发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层 变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁 沉淀。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培 养基中，35ºC，24-48h，观察。
【结果】：菌苔出现，培养ຫໍສະໝຸດ Baidu变为深蓝色为阳性。细菌不能 生长，培养基不变色（绿色）为阴性。产气肠肝菌为阳性， 大肠埃希菌为阴性。
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6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【原理】：该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性 时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜 面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳 糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接触空气而 氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是 在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不 被氧化挥发而保持黄色。如细菌分解蛋白产生硫化氢，则 与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。
【方法】：
– 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖 发酵管，35ºC培养18-24h 观察结果。
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1.糖发酵试验
【结果】：
– 首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状：
1）不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示；
2）分解糖产酸不产气，培养基由紫色变为黄色，以“+” 表示；
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨 水培养基中，35ºC18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察 结果。
【结果】：红色为阳性，黄色为阴性。大肠埃希菌为阳性，
产气肠杆菌为阴性。 整理
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4.V-P（Voges-Proskauer）试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙 酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中 的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验 阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌 酐，以加速其反应。