实验七尿淀粉酶活性测定

实验七尿淀粉酶活性测定

淀粉酶（AMY或AMS在体内的主要作用是水解淀粉，它随机地作用于淀粉分子内的

a—1, 4糖苷键生成葡萄糖、麦芽糖、寡糖及糊精。血清中的淀粉酶主要有胰型（P型）和

唾液型（S型）及其亚型同工酶组成，P型淀粉酶主要来源于胰腺，S型淀粉酶主要来源于唾

液腺。正常淀粉酶因分子量小，故可从肾小球滤过而由尿中排出。

【目的】

1、验证淀粉酶的催化作用。

2、观察淀粉及其水解产物分别与碘反应呈现的颜色变化。

【原理】血清及尿中的淀粉酶来源于胰腺和唾液腺，正常血清与尿中有一定活性。

Winslow 氏法测定尿和血清中淀粉酶活性是将试样作等比稀释，观察一系列试样在规定的

37C、30分钟的条件下，恰好能将0.1%淀粉溶液1ml水解（指加入碘液后不再呈蓝色）的

酶量定为淀粉酶的一个活性单位，乘以尿的稀释倍数，即可得知每项ml 尿液中的淀粉酶活性。

【器材】

试管（10mn X 100mr）、试管架、电热恒温水浴箱、吸管、洗耳球、滴管。

【试剂】

1 、 9%NaCl

2、0.3%碘液

3、0.1%淀粉溶液

【操作】

1 、准备尿液（自备）。

2、取 10支试管，编号，用吸管向管中加入0.9%NaCl 1ml。

3、用1ml吸管（注意应用刻度到头的）向第一管加尿液1ml，混合，再将试管中的液

体吸起，然后任其流回试管，如此重复三次，以便全管混匀，并借此冲洗吸管内壁。吸出此混合液1ml 移入第二管中。

4、用同法处理第二管使之混匀，并取出1ml 置于第三管中。依此类推，如此继续稀释

至第九管后，吸出1ml混合液弃之，这样既可获得分别含原尿液为1/2ml,1/4ml,1/8ml, ... 1/512ml 的不同浓度的尿稀释液。第十管不加尿液作为对照管。

5、从第十管起依次向各管迅速准确加入0.1%淀粉液2ml，迅速摇匀（是否充分混匀往

往是实验成败的关键！）,置37C水浴中，确保 30分钟。

6、取出各管后，立即向各管中加入0.3%碘液 2滴，摇匀后观察各管的颜色。

*注：各管依次出现黄到蓝的色序，黄色表明无淀粉存在，浅红色紫色表明有淀粉的水解中间产物，兰色表明有淀粉存在。

【注意事项】

1、 1-10 号试管顺序勿搞乱。

2、加样速度尽量快。

【结果及计算】

应选择无蓝色管中尿稀释倍数最大的一管来计算。假设无蓝色管中尿液稀释倍数最大的为第5管（而第六管为蓝色），已知在第5管内含尿液1/32ml,既1/32ml尿液能在37C、30 分钟水解 0.1%淀粉 2ml。

求出 1ml 尿液水解 0.1%淀粉 X ml。

1/32 ：2=1 ： x

x=2/1/32=2 X 32=64

即每 ml 尿液中所含淀粉酶的活性为64 单位。

【参考值】（尿）8〜64单位；（血清）4〜32单位。

【临床意义】

胰腺炎、腮腺炎、胆道疾病时尿淀粉酶活性增高。

【思考与分析】

通过本实验，你可以检验自己使用吸管的技术是否熟练、准确。你的操作技术过关了吗？