不同标本前处理方法对血管紧张素测定结果影响论文

不同标本前处理方法对血管紧张素测定结果的影响摘要： [目的] 探讨不同的标本前处理方法对血管紧张素ⅰ、ⅱ（a ⅰ、a ⅱ）测定结果的影响。 [方法] 分别采用3种不同方法对40例病人的静脉血标本进行处理，分离血浆后用化学发光法检测a ⅰ和a ⅱ的水平。方法1为按说明书用血常规真空管采血后立即加入酶抑制剂；方法2为在血常规管中事先加好酶抑制剂再采血；方法3为用血常规管采血后在冰箱放置1 h再加入酶抑制剂。[结果] 方法2检测出的a ⅰ、a ⅱ水平与方法1的检测结果差异无统计学意义，方法3检测的a ⅰ、a ⅱ水平明显低于方法1。 [结论] 加酶抑制剂能抑制a ⅰ、a ⅱ、a ⅲ等转换，先加入酶抑制剂和采血后再加入对检测结果均无明显影响，方法2还可避免漏加抑制剂。

关键词：血管紧张素；检测；酶抑制剂

中图分类号： r 446.11 文献标志码： b

肾素-血管紧张素-醛固酮（raas）系统是人体重要的水电解质平衡调节系统，血管紧张素ⅱ（a ⅱ）是raas中主要的生物活性成分，a ⅱ与血管、平滑肌、肾上腺皮质及其他组织的血管紧张素受体结合产生各种生理效应。其对于心血管疾病＼[1＼]、脑血管疾病＼[2＼]、糖尿病肾病＼[3-4＼]、脓毒症＼[5＼]等的发生都有重大关联，准确测定血管紧张素ⅰa ⅰ、a ⅱ是对疾病正确诊断和治疗的保障。我们采用3种不同的标本前处理方法测定a ⅰ、a ⅱ水平，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集2012年7—8月来我院就诊的门诊患者40例，其中男15例，女25例。

1.2 仪器和试剂

浙江拱东公司的血常规真空采血管。深圳新产业生物医学工程有限公司的maglumi 2000及其配套的a ⅰ、a ⅱ试剂盒。

1.3 方法

采集40例门诊患者的静脉血，每位受试者用一次性无菌注射器抽取静脉血约6 ml，将血液分成3份进行不同的前处理（酶抑制剂与静脉血的比例严格按照试剂说明书）。

方法1：严格按照试剂说明书的加样步骤操作，即2 ml静脉血加入血常规管后立即加入20 μl 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。

方法2：先在血常规管中加入20 μl的8-羟基喹啉硫酸盐，再加入2 ml静脉血混均，离心分离血浆。

方法3：2 ml静脉血加入血常规管后在冰箱放置1 h，再加入20 μl 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。

采用化学发光竞争法检测a ⅰ、a ⅱ。检测原理：标本中的a ⅰ、a ⅱ抗原与6-＼[n-（4-氨基丁基）-n-乙基＼]-氯基-2，3-二氢吩噻嗪-1，4-二酮（abei）标记的a ⅰ、a ⅱ抗原竞争结合包被在磁性微球上的a ⅰ、a ⅱ多克隆抗体，发生免疫反应，外加磁场沉淀，

去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物加入发光底物测定相对光强度。a ⅰ、a ⅱ浓度与光强度成一定比例关系。

1.4 统计学处理

所有检测结果以x-±s表示，采用spss 10.0统计软件，方法1与方法2、方法1与方法3的差异比较采用配对t检验，p≤0.05

表示差异有统计学意义。

2 结果

方法1测得的a ⅰ值和a ⅱ值分别为（1.33±1.92）ng/ml和（142.40±37.07） pg/ml，方法2测得的a ⅰ值和a ⅱ值分别为（1.40±2.95）ng/ml和（137.23±31.66）pg/ml，方法3测得的a ⅰ值和a ⅱ值分别为（0.83±1.01）ng/ml和（115.40±43.74）pg/ml，方法1与方法2的测定结果比较，差异无统计学意义（p 均>0.05），方法1与方法3的测定结果比较，差异有统计学意义（p<0.05）。

3 讨论

raas是肾脏分泌肾素引起的一系列激素构成，a ⅰ是由肝脏合成的血管紧张素原经肾素水解后产生的，再经过肺循环经血管紧张素转化酶的作用下生成a ⅱ＼[6＼]，而后在血浆和组织中经血管紧张素酶a作用成为血管紧张素ⅲ（a ⅲ）。a ⅱ作为效应分子可刺激醛固酮的释放，通过血液循环作用于其他器官，主要功能是调节人体血压、水分、电解质和保持容量内环境的稳定性，在维持血压和体液平衡中起关键作用。目前， a ⅰ和a ⅱ作为重要的实验

室指标在临床观察和医学研究中被广泛地运用。但在实际操作中，因为a ⅰ和a ⅱ的检测操作过程繁琐，影响因素较多，一般医院很少开展，并且相关文献＼[7＼]较少。尽量减少和避免各种血管紧张素间的转换对保证a ⅰ和a ⅱ水平测定的精确性，减少由方法学差异引起的结果不一致是至关重要的。其中加酶抑制剂和采血的顺序，以及是否及时加入酶抑制剂，对结果有较大的影响。

本研究检测raas指标采用化学发光竞争法。a ⅰ、a ⅱ要求用酶抑制剂抗凝管检测。试剂盒提供的酶抑制剂是8-羟基喹啉硫酸盐，是一种金属敖合剂，能使血管紧张素转化酶ace和血管紧张素酶失活从而抑制a ⅰ、a ⅱ和a ⅲ之间的互相转换，以便能够精确测定各值。为避免酶抑制剂和抗凝剂互相反应，方法1严格按照说明书操作，先让血液与抗凝剂混均，再加入酶抑制剂，这样避免了酶抑制剂和抗凝剂的接触。方法2是先把酶抑制剂加入了试管中，与抗凝剂直接接触。但从方法1和方法2的结果看来，在抽血前后加8-羟基喹啉硫酸盐，a ⅰ、a ⅱ的检测结果无明显差异。这可能是因为我们在实验中是把8-羟基喹啉硫酸盐加到了管底，而血常规真空采血管中的抗凝剂是均匀地吸咐在管壁上，试管底部的抗凝剂量较少。再加上本实验加好8-羟基喹啉硫酸盐后0.5 h内就加入静脉血，两者可能未来得及起反应，因此对结果影响不大。如果延长两者混合时间是否会影响结果，还需进一步研究。而方法3是将标本先放入冰箱保存1 h后再加入8-羟基喹啉硫酸盐，所测得的a ⅰ、a ⅱ明显有较大的下降（p<0.05）。这说明如果没有酶抑制剂的作

用，a ⅰ被转化成了a ⅱ，a ⅱ继续向a ⅲ转换，造成a ⅰ和a ⅱ的下降。

实验室的质量控制包括分析前、分析中和分析后3个阶段，而分析前质量控制是潜在影响因素最多，最难控制的环节，已经成为当今实验室保证结果准确的重要核心部分＼[8＼]。我院住院病人一般为早晨6时左右采血，多由护士或临床医生执行，为避免因医护人员培训不足而在采血后漏加酶抑制剂，可将事先加入酶抑制剂的血常规管送到临床备用，但要尽快使用并在冰箱保存。综上所述，临床检验人员要加强与医护人员的沟通，使其了解正确的标本前处理方法，从而使检测结果准确，可靠。

4 参考文献

[1]马宇虹，李广平，刘彤，等.raas激活与急性心肌梗死早期新发房颤的关系＼[j＼].山东医药，2010，50（4）：26-28.

[2]夏青青，李娟娟，郭泽云.血管紧张素ⅱ及其受体在脑血管疾病中作用研究进展＼[j＼].神经解剖学杂志，2012，28（1）：89-92.文章编号：1004-9231（2013）03-0151-02