6细胞核和线粒体的分离和观察

合集下载

06实验六--细胞器的分离与观察nj

沉淀
转速x时间
A 150g x 20min
B 1000g x 20min
C 3000g x 6min
D 10000g x20min
E 105000g x120min
F 105000g x 20min
内容物完整细胞细胞核，细胞碎片叶绿体线粒体、溶酶体、微体微粒体 0.26%脱氧胆酸纳核糖体
实验六细胞器的分离与观察一细胞核的分离与观察二线粒体的分离与观察一实验目的了解细胞器的分离原理掌握差速离心和密度梯度离心技术二实验原理细胞器是细胞中维持细胞复杂生命活动的功能性器官为了研究各种细胞器的功能首先就要将这些细胞器从细胞中分离出来
实验六细胞器的分离与观察
一、细胞核的分离与观察二、线粒体的分离与观察
细胞器分离过程中的悬浮介质常使用水溶性的蔗糖溶液，因为它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上，能保持细胞器的结构和功能，保持酶的活性，避免细胞器的聚集。
知识回顾 Knowledge Review
细胞内不同结构的细胞器大小密度存在差异，因此不同细胞器在介质中的沉降系数各不相同。根据这一原理，常用不同转速的离心法来分离不同的细胞器。分级分离的方法有差速离心和密度梯度离心两种。
分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。

细胞生物学实验手册：细胞核与线粒体的分级分离

实验八细胞核与线粒体的分级分离

【实验目的】

通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，以了解其原理及过程。【实验用品】

一、材料和标本小白鼠、冰块。

二、器材和仪器玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25ml 烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、牙签。

三、试剂 0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液、1％甲苯胺兰染液、

0.02％詹纳斯绿B染液、0.9％NaCl溶液。

【实验内容】

一、原理

细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。

分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。

匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。

分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。

细胞核,叶绿体,线粒体的分级分离

实验二细胞核,叶绿体,线粒体的分级分离与观察

一、实验目的：

1、了解细胞器分离的一般原理和方法；

2、掌握分级分离的原理和注意事项;

3、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光.

4、线粒体的分离方法以及詹纳斯绿B超活染色的方法.

二、实验原理：

将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法.

细胞组分的分离在等渗溶液〔0.35mol/L Nacl或0.4mol/L蔗糖溶液〕中进行.

●将匀浆液在1000r/min的条件下离心2 min以全除组织残渣和未破碎的

细胞.

●在3000r/min的条件下离心5 min,即可获得沉淀的叶绿体〔混有部分细

胞核〕.

●上清液在高速冷冻条件下10000rpm/min分离10分钟,所得沉淀即为线

粒体,可反复离心一次.

三、实验步骤：

第一部分细胞核与叶绿体的分离与观察

1、选取新鲜的菠菜叶,洗净搽干后去除叶梗和粗脉,称30g于

150ml0.35mol/L Nacl溶液中,放入组织捣碎机<间歇>；低速匀浆1min；

间歇匀浆.

2、将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中.

3、每小组取滤液4 ml在1000r/min的条件下离心2 min；

4、取上清液在3000r/min的条件下离心5 min；沉淀即为叶绿体〔混有部分

细胞核〕；上清夜转入干净的离心管中用于线粒体分离.

5、叶绿体观察：

➢将沉淀用0.35mol/L Nacl悬浮.〔浓度不要太高,不利于观察〕

➢取叶绿体悬液一滴于载玻片上,加盖玻片即可在普通光学显微镜和荧光显微镜下观察；

➢取叶绿体悬液一滴于载玻片上,再滴加一滴0.01%吖啶橙染料,加盖玻片即可在荧光显微镜下观察.

细胞器线粒体的分离与观察

高熹1120152430（李安一）

（北京理工大学生命学院16121501班）

摘要：差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。离心分离出细胞核与线粒体，进行染色，对细胞核和线粒体的形态进行观察并记录。

关键词：差速离心法；细胞核；线粒体；实验。

1 引言

差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。

线粒体是真核细胞特有的，司能量转换的重要细胞器。细胞种的能源物质——糖、脂肪、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸华生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体的结构和功能的研究通常是在离体线粒体上进行的。

制备线粒体用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法。在一给定的离心场中（对于所使用的离心机，就是选用一定的转速），球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一均匀悬浮介质中离心某一时间内，组织匀降中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉降的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可依次再分离。

悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意样品保持4，避免酶失活。

细胞核与线粒体的分离

②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀；
③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。
9.4 Isolation and Characterization of Cell Organelles (细胞器) Centrifugation can separate many types of oganelles from cell homogenate, 2nd Step: Density-gradient centrifugation
常用介质(高溶解性的惰性物质): 氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖
密度梯度离心（Density-gradient centrifugation）
• 当颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。
• 两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度，离心时，线粒体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部。
(4)将肝组织捣碎液分装在50ml离心管中， 1500rpm 4 °下（位于五楼的实验室）离心 2min (去除大组织块）
注意事项：尽可能先充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。
2. 细胞核与线粒体的分离（两人一组）：
⑴ 先将0.5mL 0.34mol/L蔗糖缓冲液放入1.5ml离心管，然后沿管壁小心地加入0.5mL肝组织匀浆使其覆盖于上层。 2700rpm 4 °下离心10min，沉淀为粗提的细胞核。

细胞核及观察叶绿体与线粒体

细胞核的结构和功能
1、细胞核的结构：、细胞核的结构：核摸核仁染色质核基质 2、染色质与染色体的关系、螺旋化染色体染色质解螺旋（分裂期）分裂间期）分裂期） 3、核仁的功能：（分裂间期）、核仁的功能：与某种RNA的合成及核糖体形成有关。的合成及核糖体形成有关。与某种的合成及核糖体形成有关 4、细胞核的功能：、细胞核的功能：遗传信息库，细胞代谢和遗传的控制中心。遗传信息库，细胞代谢和遗传的控制中心。 5、核质共存的重要性：、核质共存的重要性：没有细胞核的细胞不能长期生存和分裂，如红细胞、没有细胞核的细胞不能长期生存和分裂，如红细胞、去核的体细胞。去核的体细胞。没有细胞质的细胞也不能长期生存和分如精子及单独的细胞核生存的时间都较短。裂，如精子及单独的细胞核生存的时间都较短。
观察叶绿体和粒线体
1、叶绿体的观察：、叶绿体的观察：材料：材料：藓类的叶或黑藻叶等方法步骤：方法步骤：取材制叶片临时装片
↓Leabharlann Baidu
低倍镜找叶肉细胞
↓
高倍镜看叶绿体形态和分布 2、线粒体的观察：、线粒体的观察：在载玻片中央滴健那绿染液→加盖玻片制口腔上皮细在载玻片中央滴健那绿染液加盖玻片制口腔上皮细胞临时装片→在高倍镜下观察显蓝绿色的线粒体胞临时装片在高倍镜下观察显蓝绿色的线粒体

5.细胞核和线粒体的分级分离

实验五细胞核与线粒体的分级分离

一、实验原理

匀浆(homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／l 蔗糖一0.003mol／l氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。

分级分离(fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。

分析分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。

二、实验用品

（一）材料和标本：小白鼠、冰块。

（二）器材和仪器：玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25ml烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、牙签。

（三）试剂：0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液、1％甲苯胺兰染液、0.02％詹纳斯绿B染液、0.9％NaCl溶液。

细胞核和线粒体的分离和观察

12
3、按每克肝加8ml-9ml预冷的0.25mol／L蔗糖－ 0.05m/L Tris-HCI溶液，用高速组织匀浆器匀浆（已完成）
4、取一定量匀浆液，在0℃—4℃冰浴中用玻璃匀浆器将肝再次匀浆（匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨）——（因已事先匀浆，本步骤研磨次数和时间可缩短）
5
二、实验原理
（二）分离纯化的方法根据细胞器的大小、形状、密度等物理特性差异，离心成为亚细胞组分分离过程中最广泛应用的技术离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法主要包括差速离心、密度梯度离心等方法。
6
差速离心法
▪ 根据颗粒大小和密度的不同存在的沉降速度差别，分级增加离心力，从试样中依次分离出不同组分的方法。从低速到高速逐级沉淀分离，一般用于分离沉降系数相差较大（10倍及以上）的颗粒。
方法和步骤
（一）细胞核的分离提取 1、肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛
有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。
2、称取肝组织1 g，剪碎；用预冷的0.25 mol／L 蔗糖-0.05mol／L Tris-HCI缓冲液，pH7.4（0.25mol ／l蔗糖－0.003mol／l氯化钙）溶液洗涤数次。
细胞核与线粒体的分级分离

实验十六细胞核与线粒体的分级分离

接上步
滤液以2500rpm离心15min,上清夜涂片 (2)干燥。用1%甲苯胺兰染色观察余下沉淀用6ml 0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液悬浮沉淀物,以 2500rpm离心15min,弃上清液将沉淀配制成悬液,涂片,（3）干燥。用 1%甲苯胺兰染色观察
结果
（1）（2）（3）用1%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。
高速离心分离提取线粒体
上清液分离线粒体用。以17000rpm离心 20min，弃上清液，留沉淀。加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液1ml，以以17000rpm离心20min，沉淀物加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L 氯化钙溶液,制成悬液. 取上清液和悬液,分别滴片,各滴一滴 0.02%詹纳斯绿B染色20min.
实验原理
分级分离（Fractionation）由低速到高速离心逐渐沉降，先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清夜中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核，线粒体等得以分离。
细胞核的分离提取
步骤：小白鼠肝脏（用生理盐水洗涤）将湿重1g的肝组织放于培养皿中，加入 8ml 预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液剪碎肝组织倒入匀浆器中（冰浴）研磨，过滤，涂片，做好标记，自然干燥。用1%甲苯胺兰染色观察.(1)

细胞生物学lab03

不同的细胞器、大分子和病毒的密度及相应的沉降系数
细胞生物学实验
离心分离技术
速度离心velocity centrifugation
差速离心(differential centrifugation) 移动区带离心(moving-zone centrifugation)如蔗糖密度梯度离心
等密度离心isodensity centrifugation
细胞生物学实验
实验三
线粒体和细胞核的制备与观察
细胞生物学实验
通过对动物细胞核及线粒体的分离,掌握差速离心技术. 掌握细胞核及线粒体活性鉴定.
差速离心技术悬浮介质通常采用缓冲的蔗糖溶液，它较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性. 线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶使詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色，从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色. 詹纳斯绿B是一种活体染料，能对动植物的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色 . Gimesa是一种复合染料，即为酸性染料与碱性染料的结合物。
洗涤（0.25mol/L预冷蔗糖缓冲液10mL洗涤两次）每次10000×g 离心10min
沉淀（线粒体）制一张涂片A
上清液4制一张涂片B
细胞生物学实验
分离物鉴定
细胞核:将干燥后的三张涂片(涂片① ② ③)加入Carnoy固定液15min，晾干。Giemsa染液染10min,蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水，用显微镜（40×）检查，细胞核呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。线粒体：取线粒体沉淀滴在载玻片上，勿太密。滴加 1% 詹纳斯绿溶液染色，10分钟后用光学显微镜观察，线粒体呈蓝绿色，小棒状或哑铃状.注意上清液4制备的涂片B 有何不同

实验六细胞核和线粒体的荧光观察

535/617 红色荧光
特性
嵌入核酸双链间,只能标记死细胞.用于染色体,细胞观察,分辨死活细胞和细胞周期研究
Ethidium bromide(EB)518/605 嵌入核酸双链间,只能标记死细胞.用于电泳
红色荧光
分析,染色体观察
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
DAPI 358/461 蓝色荧光
Hoechst33342 350/461 蓝色荧光
试剂
PBS缓冲液pH7.4 Ho.33342储存液:1mg/mL(溶于PBS) 罗丹明123储存液: 1mg/mL(溶于甲醇)
四、实验步骤
1.将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上 2.配制Ho.33342和罗丹明123 工作液:Ho.33342 (10μg/mL), 罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液， pH7.4） 3.将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次 4.在parafilm 膜上分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作液各10L，将盖玻片上的细胞倒扣在parafilm 膜上室温暗处孵育10min。 5.在parafilm 膜上加PBS缓冲液，待盖玻片被冲起后，再轻轻揭下盖玻片,用PBS缓冲液轻轻漂洗2次。 6.利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体。
实验六细胞核和线粒体的荧光观察
一、实验目的
学习荧光显微镜的工作原理及使用方法了解荧光探针Rhodamine 123 和Hoechst33342 与细胞成分的结合特性和光谱特性

实验七__细胞核、叶绿体、线粒体的分级分离及

精选ppt课件
8
❖ 细胞的各组分在等渗溶液（0.35M NaCl或 0.4M蔗糖溶液）中进行离心可达到被分离开来的母的。
将匀浆液在1000 r/min 条件下离心2 min可去除组织残渣及未破碎的细胞。
在3000 r/min条件下离心5 min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分的细胞核）。
• 上清夜在高速冷冻条件下10000 r/mim 离心10 min,所得沉淀即为线粒精选体ppt课，件可重复离心一次。 3
❖ 取叶绿体悬浮液一滴于载玻片上，加盖玻片即可在普通显微镜下观察叶绿体形态。
❖ 取叶绿体一滴于载玻片上，再滴加一滴
0.01%吖啶橙，加盖玻片即可在荧光显微镜
下观察。
精选ppt课件
6
Ⅱ、线粒体的分级分离及超活染色观察
1）取上一实验步骤5中获ห้องสมุดไป่ตู้的上清夜装入干净的离心管中，在高速冷冻条件下10000 r/min 离心10 min, 沉淀即为线粒体。
2）留适量溶液将沉淀悬浮，即用0.35 M NaCl 溶液。
3）取一滴悬浮液于载玻上，用一滴1%詹纳斯绿B染液，染色时间为5-10 min, 线粒体为蓝绿色圆形颗粒。可在普通显微镜下观察。
精选ppt课件
7
作业
1、绘制在光学显微镜下所观察到细胞核、叶绿体及线粒体的形态结构图。
2、思考为什么要加0.35 M的等渗溶液悬浮细胞器？

实验二细胞核与线粒体的分离与观察

一、实验目的

1．了解差速离心法分离细胞核与线粒体的原理。

2．掌握差速离心法分离动物与植物细胞的细胞核与线粒体的方法。

二、实验原理

细胞核（nucleus）是细胞中重要的细胞器，细胞的控制中心，在细胞的代谢、生长、分化中起着重要作用，是遗传物质的主要存在部位。线粒体（mitochondria）是真核细胞特有的能量转换的重要细胞器，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动需要。对细胞核和线粒体结构与功能的研究通常是在离体进行的，因而分离细胞核和线粒体是必须的。

差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心分离细胞核和线粒体。在确定的离心场中，球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀悬浮介质中离心一定时间内，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次再分离。

缓冲的蔗糖溶液是常用的悬浮介质，它属于等渗溶液，比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意使样品保持4℃，避免酶失活。线粒体的鉴定用詹纳斯绿B（Janus green B）活染法，对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中染料被还原成无色。

核与线粒体分离提取方案

线虫细胞核和线粒体提取

N2同步化后，转移至培养皿，每皿大约4000条，2 day后到了mid-late L4，day5，day10，day15收集线虫（也有文献选择1、6、12、17day）。初步计划收集10个皿线虫。

1.细胞核分离

细胞核蛋白提取查阅的文献上都没提及是用哪个厂家的试剂盒，只简单说了自己采用的方法，也不是很具体。查到一份Protocol采用蔗糖分离法提取细胞核，此方法开始是用于肝组织(Widnell and Tata 1964)，后来被用于动物软组织(Rickwood et al. 1997)，后来成功用于肌细胞和培养的细胞。

方法如下：

1.在10cm细胞培养皿中培养的细胞系，直到它们达到90％汇合

2.分离当天，吸出培养基，然后用冰冷的PBS清洗细胞。吸出PBS。

3.将培养皿放在冰上，用1 mL PBS将细胞从板上刮掉。转移将细胞加入到冰上的1.5mL离心管中。

4.以10000rpm短暂离心5-10秒。

5.吸掉上清液，并将沉淀物重悬在9个填充细胞体积均质培养基中

6.用Potter-Elvehjem匀浆器将悬浮液均质化，冰上匀6次

7.用棉布过滤匀浆

8.在4℃下以600g离心滤液10分钟。丢弃上清液。用步骤5中一半体积的均匀培养基重悬沉淀。4℃ 600g 离心10分钟。丢弃上清液。

10.将9体积的高渗蔗糖缓冲液加入沉淀。在Potter-Elvehjem匀浆器（5或6冲程）或Dounce均化器在冰上。

11.在4℃下以60,000g-80,000g离心匀浆80分钟。

实验六细胞器的分离与观察

（2）离心：低温离心机中进行。每次离心前一定要在天平（托盘天平）上将两离心管配平。第一次以600g离心10min。将其上清夜移入 Eppendorf管中，盖好盖子置于冰浴中，留待后面使用(分离线粒体)。沉淀使用1ml预冷的 0.25mol/L蔗糖溶液离心洗涤2次，每次 1000g离心10min。
0.34mol/L蔗糖溶液-0.5mmol/Mg（Ac)2溶液、
0.88mol/L蔗糖溶液-0.5mmol/Mg（Ac)2溶液、
95%乙醇溶液、丙酮、PBS液、
甲基绿
-派洛宁染液、中性红-詹纳斯绿染液。
四、实验方法与步骤
1.细胞核的分离
（1）组织匀浆:将饥饿24h的大白鼠处死,立即剪开腹部,迅速取出肝组织浸入预冷的生理盐水,洗去血污,用滤纸吸干。称取0.5g肝组织,在小烧杯中剪碎,用预冷的 0.25mol/L蔗糖溶液洗涤数次。将烧杯中的悬浮肝组织倒入匀浆管中进行匀浆,匀浆过程要在冰浴中进行。匀浆完毕,移入1.5ml离心管中。
(3)分析分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。
Unna染色法（甲基绿-派洛宁染色）
1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁（mehtyl-green-pyronim）染色法。1902年 Unna对这一方法进行了改良。1940年Brachet 研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。核酸是酸性的，它们对于碱性染料甲基绿和派洛宁的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA 被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。